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DOI: 10.3791/51863-v
Ji-Yoen Kim*1, Stacy D. Grunke*1, Yona Levites2, Todd E. Golde2, Joanna L. Jankowsky1,3
1Department of Neuroscience,Baylor College of Medicine, 2Department of Neuroscience, Center for Translational Research in Neurodegenerative Disease,University of Florida, 3Department of Neurology and Department of Neurosurgery,Baylor College of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Qui dimostriamo una tecnica per la trasduzione neuronale diffusa mediante iniezione intraventricolare di virus adeno-associato nel cervello del topo neonatale. Questo metodo fornisce un modo rapido e semplice per ottenere l'espressione permanente dei transgeni veicolati viralmente.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di trasdurre viralmente i neuroni in tutto il cervello. Ciò si ottiene mediante crioanestesia dei cuccioli appena nati, seguita dal trasferimento del neonato allo stadio raffreddato per l'iniezione. Successivamente, identificare il sito di iniezione per colpire i ventricoli laterali tra la sutura Lambda e ciascun occhio o lateralmente dalla sutura sagittale a metà strada tra Lambda e Bgma.
Il passaggio finale consiste nell'inserire l'ago alla profondità corretta e infondere lentamente fino a due microlitri di soluzione virale nel ventricolo laterale di ciascun emisfero. In definitiva, viene utilizzato un tag fluorescente o un'immunofluorescenza per il gene di interesse per mostrare il modello di espressione del transgene risultante dall'iniezione intraventricolare. In generale, gli individui che non conoscono questa tecnica avranno difficoltà a mirare con precisione ai ventricoli laterali.
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