Name: Luso della Ex Vivo Chandler Loop Apparecchio per valutare la biocompatibilità di Modificati Condotti sangue Polimerici (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-20T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 15 s
Description: Scopri come valutare la biocompatibilità di polimeri modificati con CD47 ricombinante usando il modello Chandler Loop. Questo metodo riduce l'adesione cellulare e migliora la compatibilità dei dispositivi medici impiantabili.

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1. Modifica polimerici Superfici con recCD47 NOTA:. Il protocollo è riassunta schematicamente in Figura 1 Figura 1A illustra generazione di superfici polimeriche tiolo reattivo Figura 1B illustra generazione di tiolo reattivo recCD47.. <ol><li> Giorno 1 <ol><li> Preparare una soluzione di PDT-BzPh (1 mg / ml) e bicarbonato di potassio (KHCO 3) (0,7 mg / ml) in acqua sterile. Mescolare notte a 4 ° C (riparo dalla luce). </li></ol></li><li> Giorno 2 <ol><li> Tagliare il tubo polimerico a 40 centimetri pezzi lunghi (abbastanza a lungo per adattarsi intorno ruote girevoli). </li><li> Bagnare i tubi in una soluzione acquosa 0,1% di hexacylpyridinium per 90 minuti a temperatura ambiente su un agitatore o su Chandler Loop Apparecchiatura. Sciacquare le provette con 3x acqua sterile dopo l&#39;90 min ammollo. </li><li> Acidificare la soluzione di PDT-BzPh dal 1 ° giorno aggiungendo il 15% di potassio fosfato monobasico acquosa (KH 2 </sub&gt; PO 4). Aggiungere 50 ml KH 2 PO 4 per ml di PDT-BzPh, formando una soluzione micellare nuvoloso. </li><li> Bagnare i tubi nella soluzione PDT-BzPh acidificato per 40 minuti a temperatura ambiente su un agitatore o apparato. </li><li> Sciacquare le provette con acido acetico diluito (1: 1.000) una volta. </li><li> Esporre i tubi per irradiazione UV per una durata complessiva di 60 min. Ruotare i tubi ¼ di giro ogni 15 minuti per irradiare l&#39;intera superficie. </li><li> Bagnare i tubi in una soluzione di bicarbonato di potassio / ml 20 mg (KHCO 3) per 20 minuti a temperatura ambiente su un agitatore o apparato. </li><li> Sciacquare le provette con 3x acqua sterile e conservare a 4 ° C in acqua sterile. </li></ol></li><li> Giorno 3 <ol><li> Disciogliere 5 mg solfo-SMCC in 200 microlitri dimetilformammide (DMF) (Attenzione: Eseguire in cappa). </li><li> Aggiungere 50 ml della soluzione di solfo-SMCC preparata al punto 1 a 0,1 mg / ml di soluzione di poli-lisina recCD47, e mescolare per 60 min a rotemperatura om. </li><li> Durante 60 min mescolare, degas sterilizzato Dulbecco Phosphate Buffered Saline (DPBS) e mettere da parte. </li><li> Purificare solfo-SMCC reagito recCD47 utilizzando un 7K peso molecolare di cut-off di spin dissalazione colonna secondo le istruzioni del produttore. Raccogliere finale a flusso continuo (alta qualità tiolo reattivo recCD47) e portare a volume necessario per rivestire l&#39;interno del tubo con DPBS. </li><li> Sciacquare i tubi dal giorno 2 con sterile, degassata DPBS 3x. </li><li> React superficie modificata dei tubi con una soluzione di 20 mg / ml di tris (2-carbossietil) fosfina cloridrato (TCEP) in DPBS degassati per meno di 2 min. Sciacquare le provette con sterili degassificato DPBS 4x. </li><li> Aggiungere il recCD47 Sulfo-SMCC-reagito ai tubi e incubare una notte a 4 ° C su un agitatore o apparati. </li></ol></li></ol> 2 Immunoassay Quantificazione dei recCD47 su superfici modificate <ol><li> Sciacquare i tubi modificati per essere quantificato dal Day 3 with DPBS 3x. Conservare le provette non utilizzate per la quantificazione in DPBS a 4 ° C. </li><li> Utilizzare una biopsia 4 mm e fare i campioni del tubo duplicati e inserire pugni biopsia in pozzetti di una piastra a 96 pozzetti. </li><li> Preparare un controllo negativo costituito da un tubo campione non modificato non trattato con l&#39;anticorpo di rilevazione. Preparare un controllo dell&#39;anticorpo costituito da un tubo campione non modificato trattati con l&#39;anticorpo di rilevamento. Preparare i campioni di prova dei tubi modificati trattati con l&#39;anticorpo di rilevazione. </li><li> Campioni di blocco con albumina sierica bovina 0,4% (BSA) in DPBS per 60 minuti a temperatura ambiente su un agitatore. </li><li> Dopo il blocco, aspirare BSA e sciacquare con tris-buffered saline più l&#39;1% Tween-20 (TBST) 3x, 10 minuti ciascuna su un agitatore. </li><li> Preparare una diluizione di lavoro degli anticorpi nel 0,4% di BSA secondo la diluizione raccomandata dal produttore per saggi immunologici. Diluire CD47 anticorpi umani B6H12-FITC 1: 100 in 0,4% di BSA. </li><li> Aggiungere 200 ml di diluizione anticorpo per pozzetti. Incubate controlli negativi con il 0,4% solo BSA. Incubare a temperatura ambiente per 60 minuti su un agitatore (riparo dalla luce). </li><li> Risciacquare con TBST 3x, 10 minuti ciascuna su un agitatore. Aspirare l&#39;ultimo risciacquo TBST e aggiungere 200 microlitri di DPBS pozzetti del campione del tubo. </li><li> Raccogliere il flow-through finale, che è di alta qualità tiolo-reattiva CD47 ricombinante e portare a un volume necessario per rivestire l&#39;interno dei tubi con DPBS. </li><li> Leggi intensità del segnale FITC utilizzando un lettore di micropiastre con FITC di eccitazione (485 nm) e di emissione impostazioni (538 nm). </li><li> Calcola recCD47 destinato a superficie polimerica sulla base di valori standard, che rappresentano per auto-fluorescenza e non specifico vincolante dal campione di controllo dell&#39;anticorpo. </li></ol> 3. Chandler Loop Apparato protocollo Cercate Institutional Review Board (IRB) approvazione del protocollo di raccolta del sangue e informato consenso scartoffie prima di iniziare la raccolta dei campioni di sangue umano. Ottenere informazionirmed consenso da un donatore di sangue umano. NOTA: Un diagramma raffigurante l&#39;apparato è mostrato nella Figura 2. <ol><li> Riempire bagnomaria con acqua distillata fino a circa mezzo delle ruote di diametro sono sommerso. Aggiungere abbastanza candeggina al bagnomaria per ottenere una soluzione di candeggina al 10%. Set bagno d&#39;acqua a 37 ° C e che la temperatura equilibrare. </li><li> Raccogliere adattatori in metallo (indicati nella Figura 1B), tubi senza modifiche e tubi modificati, e assemblare attorno alle ruote apparecchi, come mostrato nella Figura 1C. Assicurarsi che il tubo si adatta snuggly intorno alla ruota con l&#39;adattatore in metallo posto. </li><li> Ottenere 30 ml di campione di sangue usando un protocollo IRB-approvato, in un flaconcino preriempita con 2 ml di citrato o altro anticoagulante, e mescolare per inversione per prevenire la coagulazione una volta che il campione è stato raccolto. </li><li> Aggiungere circa 10 ml di sangue per ciascun tubo con la valvola di metallo e la siringa, lasciando un po &#39;d&#39;aria nel tubo. Fissare il tappo della valvola e rotate per 3 ore. </li><li> Drenare il sangue in un bicchiere reflue trattate con una soluzione di candeggina al 10% (o come richiesto dalla politica istituzionale). </li><li> Lavare delicatamente il tubo interno con DPBS per rimuovere tutte le tracce di sangue. Raccogliere flusso continuo nel becher rifiuti. Smaltire sangue in conformità con la politica istituzionale. </li><li> Disinfettare l&#39;apparato e il sangue di contattare superfici utilizzando una soluzione di candeggina al 10% o in base alla politica istituzionale. </li><li> Campioni di processo per microscopia a fluorescenza o la scansione microscopia elettronica come descritto di seguito. </li></ol> 4. fluorescente Microscopia e conteggio delle cellule <ol><li> Preparare una soluzione al 4% paraformaldeide (PFA) (Attenzione: Eseguire in cappa). </li><li> Incubare il tubo in una soluzione PFA 4% per una notte a 4 ° C. </li><li> Dopo incubazione overnight, rimuovere 4% PFA e risciacquare film molto delicatamente con DPBS. </li><li> Tagliare il tubo in sezioni per esporre la superficie del lume per la colorazione. </li><li> Stainuna sezione del tubo con alcune gocce di mezzo di montaggio con 4 &#39;, 6-diamino-2-fenilindolo (DAPI) per 30 minuti a temperatura ambiente (proteggere dalla luce). Dopo la colorazione, sciacquare il tubo molto delicatamente con DPBS per ridurre il segnale DAPI sfondo. </li><li> Immagine utilizzando un microscopio a fluorescenza dotato di un filtro DAPI e fotocamera digitale per contare il numero di cellule in 9 settori ciecamente selezionati di vista sotto 200 ingrandimenti. </li><li> Cella Record conta per campo visivo ed eseguire appropriate analisi statistiche per determinare la significatività statistica dei risultati. </li></ol> 5. Microscopia Elettronica a Scansione <ol><li> Preparare una soluzione di glutaraldeide al 2% (Attenzione: Eseguire in cappa). </li><li> Incubare il tubo in una soluzione di glutaraldeide al 2% notte a 4 ° C. </li><li> Dopo incubazione overnight, lavare delicatamente la 3x tubi con DPBS. </li><li> Preparare una soluzione all&#39;1% di tetrossido di osmio (Attenzione: pericolo di inalazione grave! Utilizzare in cappa). </li><li> Incubare il tubo in una soluzione all&#39;1% di tetrossido di osmio per 15 min a temperatura ambiente. </li><li> Lavare delicatamente il tubo 3x con DPBS. </li><li> Preparare una serie di concentrazioni di etanolo (25%, 50%, 75%, 95% e 100% etanolo). </li><li> Disidratare il tubo mediante incubazione nella serie di concentrazioni di etanolo. Incubare a 25%, 50%, 75% e 95% di etanolo per 20 minuti ciascuno. Incubare a 100% di etanolo per 30 min. </li><li> Punto supercritico asciugare il tubo con CO 2 per 45 minuti per rimuovere tutta l&#39;umidità. </li><li> Sezioni del tubo Montare su un stub campione con pasta d&#39;argento o grafite. </li><li> Sezioni del tubo cappotto con 12,5 nm di oro-palladio. </li><li> Esaminate in un microscopio elettronico a scansione. </li></ol>

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La ricerca riportata in questa pubblicazione è stato sostenuto dal National Institute of Biomedical Imaging e Bioingegneria, con il numero premio R21 EB015612 (SJS), e il National Heart, Lung, and Blood Institute, con il numero premio T32 HL007915 (JBS e RJL), della Nazionale Istituto Superiore di Sanità.

La chimica fotoattivazione (riassunto nella Figura 1) consente la modifica di qualsiasi superficie polimerica che ha idrocarburi sufficienti per facilitare il fissaggio PDT-BzPh e la successiva irradiazione UV per foto-attivare il PDT-BzPh. Funzionalizzare la superficie polimerica con gruppi tiolici reattivi consente la successiva collocazione di una serie di molecole di interesse testabili. Nei nostri studi particolari abbiamo scelto ricombinante CD47 11-13. La particolare coniugazione chimi...

Molte procedure cliniche, come bypass cardiopolmonare e dialisi renale, richiedono l&#39;uso di condotti sangue polimerici e sono spesso associati a complicanze post-procedurali 1. Quando perfusi con sangue, questi polimeri illeciti la reazione da corpo estraneo (FBR), con conseguente assorbimento di proteine ​​del sangue e piastrine, monociti / macrofagi adesione, e il rilascio di citochine pro-infiammatorie, tutti che contribuiscono complicanze post-procedurali e / o guasto del dispositivo 2,3. Pertanto, le strategie per affrontare la questione rimane un settore importante e costante della ricerca biomateriali. Gli investigatori hanno cercato di affrontare questo problema modificando superfici sangue contatto con bioattivi o bioinerte molecole 4-6. La ricerca nel nostro laboratorio si è concentrata sulla aggiungendo CD47 ricombinante (recCD47) per biomateriali polimerici come strategia per mitigare la FBR e aumentare l&#39;efficacia di questi materiali. CD47 è una transmembr ubiquitariamente espressaane proteina con un ruolo conosciuto in evasione immune, riconoscere il carattere &quot;self&quot; su cellule che esprimono 7-10 e mostra la promessa di conferire biocompatibilità quando aggiunto alle superfici polimeriche 11-13. Signal-normativo proteina alfa (SIRPα), il recettore affine per CD47, e un membro del motivo inibitorio a base di tirosina immunoreceptor (ITIM) -contenenti famiglia di proteine ​​transmembrana, è espresso sulle cellule di origine mieloide 14. Abbiamo precedentemente dimostrato che CD47, tramite segnalazione cellulare SIRPα-mediata, down-regola le risposte immunitarie a poliuretano (PU) e polivinilcloruro (PVC) in in vitro, ex vivo e in modelli in vivo 11-13. Centrale per le nostre indagini è una chimica fotoattivazione relativamente nuovo, qui descritto, in cui i gruppi tiolici chimicamente reattivi sono covalentemente aggiunti a tubo polimerico facendo reagire il tubo con un polimero multifunzionale (PDT-BzPh), composto da 2-pyridyldithio (PDT), il benzofenone fotoreattivo (BzPh) e un polyallylamine carbossi-modificata 11-13. Ridurre i gruppi PDT covalentemente allegati con tris (2-carbossietil) fosfina cloridrato (TCEP) 11 produce una superficie tiolati che può essere successivamente fatto reagire con porzioni terapeutiche. Particolareggiata in questa sede e in precedenza 12,13, recCD47, ulteriormente modificato con l&#39;aggiunta di una poli-lisina coda C-terminale 12,13, viene fatto reagire con Sulfosuccinimidyl-4-[N -maleimidomethyl] cicloesano-1-carbossilato (solfo-SMCC) per 1 ora a generare gruppi tiolici-reattiva, consentendo una formazione di legami monosulfide tra il tubo e il recCD47 11. La capacità anti-infiammatoria delle superfici funzionalizzate CD47 è stato testato, ex viv o, utilizzando l&#39;Apparato Chandler Loop con tutto il sangue umano, che è stato originariamente descritto nel 1958 come un modello in vitro della coagulazione trombotica 15. L&#39;apparato si basa su unSistema di tubo chiuso parzialmente riempito di aria e un motore rotativo per far circolare il sangue attraverso il tubo 15. Questo modello sperimentale fornisce l&#39;opportunità di esaminare l&#39;effetto dell&#39;esposizione sangue su superfici modificate e non modificate così come l&#39;effetto di tali modificazioni superficiali sulla fisiologia delle cellule del sangue. recCD47 può essere aggiunto a una varietà di superfici polimeriche utilizzando questa chimica fotoattivazione, e la sua capacità anti-infiammatoria può essere valutata utilizzando un modello clinicamente rilevante ex vivo imitando la perfusione di sangue sulle superfici polimeriche 11,12. Grade clinici condotti sanguigni modificati con recCD47 mostrano molto meno piastrinica e l&#39;adesione delle cellule infiammatorie rispetto a polimeri modificati se esposti a sangue umano nell&#39;apparato. Una descrizione step-by-step di questo processo di modifica è descritto di seguito.

<table><tbody><tr><td>16% Paraformaldeide (PFA)</td><td>Thermo Scientific</td><td>58906</td><td>Attenzione! Utilizzo in cappa aspirante</td></tr><tr><td>25% glutaraldeide</td><td>VWR</td><td>AAA17876-AP&nbsp;</td><td>cautela! Utilizzare in cappa aspirante</td></tr><tr><td>2-piridilditio, benzofenone (PDT-BzPH)</td> <td>Sintetizzato in laboratorio</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sierica bovina (BSA)</td> <td>Sigma</td><td>A3059-100G</td><td></td></tr><tr><td>Citrato</td><td>Sigma</td><td>S5770-50ML</td><td></td></tr><tr><td>Fotocamera digitale</td><td>Leica</td><td>DC500</td><td>Fuori produzione</td></tr><tr><td>Dimetilformammide (DMF)</td> <td>Sigma</td><td>270547-100ML</td><td>Attenzione! Utilizzo in cappa aspirante</td></tr><tr><td>Dulbecco' s Soluzione salina tamponata con fosfato (DPBS)</td><td>Gibco/Life Technologies</td><td>14190-136</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio fluorescente</td><td>Nikon</td><td>TE300</td><td></td></tr><tr><td>Acido acetico glaciale</td><td>Fisher Scientific</td><td>A38-212</td><td>Attenzione! Utilizzo in cappa aspirante</td></tr><tr><td>Human CD47 (B6H12) FITC Anticorpo</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>SC-12730</td><td></td></tr><tr><td>Osmio Tetrossido</td><td>Acros Organics</td><td>197450050</td><td>Attenzione! Utilizzo in cappa aspirante</td></tr><tr><td>Bicarbonato di potassio (KHCO3)</td><td>Sigma</td><td>237205-100G</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio monobasico (KH2PO4)</td><td>Sigma</td><td>P5655-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tubo in PVC (kit per procedure cardiovascolari)</td><td>Terumo Cardiovascular Systems</td><td>60050</td><td>La maggior parte dei tubi di livello clinico funzionerà</td></tr><tr><td>Scansione elettronica Microscopio</td><td>JEOL</td><td>JSM-T330A</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-212</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di micropiastre</td><td>Dispositivi molecolari</td><td>Spectramax Gemini EM&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sulfo-SMCC</td><td>Sigma</td><td>M6035-10MG</td><td>Sensibile all'umidità!</td></tr><tr><td>tris (2-carbossietil) fosfina (TCEP-HCl)</td><td>Thermo Scientific</td><td>20491</td><td></td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Bio-Rad</td><td>170-6531</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield con DAPI</td><td>Fisher Scientific</td><td>H-1200</td><td>Sensibile alla luce!</td></tr><tr><td>Colonne di desalinizzazione Zeba Spin &ndash; 7 K MWCO</td><td>Thermo Scientific</td><td>89891</td><td></td></tr></tbody></table>

l'uso della ex vivo chandler loop apparecchio per valutare la biocompatibilità di modificati condotti sangue polimerici

The Use of the Ex Vivo Chandler Loop Apparatus to Assess the Biocompatibility of Modified Polymeric Blood Conduits

La reazione corpo estraneo si verifica quando una superficie sintetica viene introdotto al corpo. Essa è caratterizzata da adsorbimento di proteine ​​del sangue e la conseguente attaccamento e l&#39;attivazione delle piastrine, monociti / macrofagi adesione, e gli eventi di segnalazione cellulare infiammatori, portando a complicazioni post-procedurali. L&#39;Apparato Chandler Loop è un sistema sperimentale che permette ai ricercatori di studiare le interazioni molecolari e cellulari che si verificano quando grandi volumi di sangue sono perfusi su condotti polimerici. A tal fine, questo apparato è stato usato come modello ex vivo che consentano di valutare le proprietà anti-infiammatorie di varie modificazioni superficiali polimeriche. Il nostro laboratorio ha dimostrato che i condotti del sangue, covalentemente modificati via chimica fotoattivazione con CD47 ricombinante, possono conferire biocompatibilità alle superfici polimeriche. Aggiunta di CD47 alle superfici polimeriche potrebbe essere un mezzo efficace per promuovere l&#39;efficacia dei condotti di sangue polimerici. Leiein è la metodologia in dettaglio la chimica fotoattivazione utilizzato per aggiungere CD47 ricombinante per clinicamente rilevanti condotti sanguigni polimerici e l&#39;uso del Chandler Loop come modello sperimentale ex vivo per esaminare le interazioni di sangue con le CD47 modificato e controllo condotti.

Generazione di superfici polimeriche tiolo reattivo attraverso l'uso di PDT-BzPh e TCEP insieme tiolo reattivo recCD47 poli-lisina utilizzando SMCC permette il fissaggio di recCD47 a superfici polimeriche. Il processo di modifica è riassunta schematicamente in figura 1. La comodità di questo processo di modifica è che può essere applicato a molte proteine ​​differenti e molteplici superfici polimeriche, assumendo la proteina può essere modificato con sufficienti gruppi chimicamente reattivi come lisine-...

L'esposizione del sangue ai condotti polimerici del sangue avvia la reazione del corpo estraneo che è stata implicata nelle complicanze cliniche. Qui viene descritto il Chandler Loop Apparatus, uno strumento sperimentale che imita la perfusione sanguigna attraverso questi condotti. L'appendice del CD47 ricombinante determina una diminuzione dell'evidenza della reazione da corpo estraneo su questi condotti.

L'uso della Ex Vivo Chandler Loop Apparecchio per valutare la biocompatibilità di Modificati Condotti sangue Polimerici

The foreign body reaction occurs when a synthetic surface is introduced to the body. It is characterized by adsorption of blood proteins and the ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di valutare la biocompatibilità di polimeri modificati con CD 47 ricombinante utilizzando il modello di Chandler Loop della profusione ematica. Ciò si ottiene modificando prima i polimeri con CD 47 ricombinante. Utilizzando la chimica di fotoattivazione come seconda fase, i polimeri modificati vengono esposti al sangue umano nel Chandler Loop per imitare la perfusione sanguigna sui materiali impiantati.Successivamente, le cellule attaccate vengono fissate e colorate per contare il numero di cellule aderenti come misura della biocompatibilità. I risultati mostrano che il CD 47 ricombinante promuove la biocompatibilità dei polimeri e diminuisce il rigetto del corpo estraneo sulla base dell'osservazione che un numero significativamente inferiore di cellule aderisce ai polimeri modificati CD 47 ricombinanti rispetto ai polimeri non modificati. Questo metodo può rispondere a domande chiave nel campo dei biomateriali, come ad esempio come prevenire il rigetto dei dispositivi medici impiantati.Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la prevenzione del fallimento del dispositivo impiantabile perché il CD 47 ricombinante si

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Un metodo per il titanio semina sangue a contatto con le cellule autologhe biomateriali e biocompatibilità test è descritta. Questo metodo utilizza cellule progenitrici endoteliali e tubi in titanio, teste di serie in pochi minuti di impianto chirurgico nelle cave cavae suina. Questa tecnica è adattabile a molti altri dispositivi biomedici impiantabili.

Autologo di cellule progenitrici endoteliali-Seeding Tecnologie e test di biocompatibilità per dispositivi cardiovascolari in un modello animale di grandi dimensioni

Un metodo per la cultura un monostrato di cellule endoteliali durante l'intera superficie interna 3D di un dispositivo a microfluidi con microvascolare canali di dimensioni (&lt;30 micron) è descritta.

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Camere di flusso Microfluidic incisi da fotolitografia e fabbricati da PDMS sono applicate per sondare gli esiti funzionali associati alla disfunzione CE e l'infiammazione. In un esperimento rappresentativo, la capacità di sforzo di taglio differenziale di modulare l'adesione cellulare monocitica di citochina attivato CE monostrati è dimostrata.

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Qui, presentiamo un protocollo che permette al ricercatore di valutare dinamiche reclutamento di leucociti ex vivo collegando una camera rivestita con molecole di adesione endoteliali derivate al sistema circolatorio di un topo. Questo metodo offre notevoli vantaggi, in quanto permette di valutazione leucociti in condizioni biologiche relative.

Valutare interazioni leucociti-endotelio in condizioni di flusso in un Ex Vivo Assay Autoperfused Microflow Camera

Vi presentiamo un modello in vitro che permette lo studio e l'analisi di coagulazione in intero, anticoagulato. L'anticoagulazione nel sistema dipende l'effetto anticoagulante naturale delle cellule endoteliali sane e attivazione endoteliale delle cellule si tradurrà nella coagulazione.

Valutazione delle proprietà anticoagulanti e anti-infiammatori delle cellule endoteliali mediante coltura cellulare 3D e Non intero anticoagulato

Descriviamo un interno progettato in vitro camera modello di flusso, che permette l'indagine di aderenza batterica all'innesto di tessuti.

Un modello In Vitro di un sistema di perfusione di piatti paralleli per studiare l'aderenza batterica per l'innesto di tessuti

Questo protocollo descrive una valutazione completa dell'emocompatibilità dei dispositivi di contatto con il sangue utilizzando impianti neurovascolari tagliati al laser. Un modello di ciclo di flusso con sangue umano fresco ed eparinizzato viene applicato per imitare il flusso sanguigno. Dopo la perfusione, vari marcatori ematologici vengono analizzati e confrontati con i valori ottenuti direttamente dopo la raccolta del sangue per la valutazione dell'emocompatibilità dei dispositivi testati.

Test di emocompatibilità degli impianti che si contattono con il sangue in un modello di flusso a ciclo continuo che imita il flusso sanguigno umano

Presentato qui è un protocollo per un modello standardizzato di loop emodinamico in vitro. Questo modello consente di testare l'emocompatibilità di tubi perfusione o stent vascolari per essere conforme allo standard ISO (International Organization for Standardization) 10993-4.

Un modello di loop emodinamico in vitro per indagare l'emocitocompatibilità e l'attivazione delle cellule ospiti dei dispositivi medici vascolari

L'obiettivo di questo protocollo è quello di eseguire una co-coltura dinamica di macrofagi e miofibroblasti umani in scaffold elettrofilari tubolari per studiare la rigenerazione tissutale guidata dal materiale, utilizzando un bioreattore che consente il disaccoppiamento dello stress da taglio e dell'allungamento ciclico.

Un bioreattore multi-cue per valutare la capacità infiammatoria e rigenerativa dei biomateriali sotto flusso e allungamento

Questo protocollo consente la quantificazione in vivo della compliance venosa e della distensibilità utilizzando il cateterismo e l'angiografia 3D come procedura di sopravvivenza, consentendo una varietà di potenziali applicazioni.

Quantificazione della compliance e della distensibilità della vena cava inferiore in un modello ovino in vivo mediante angiografia 3D

Scopri come valutare la biocompatibilità di polimeri modificati con CD47 ricombinante usando il modello Chandler Loop. Questo metodo riduce l'adesione cellulare e migliora la compatibilità dei dispositivi medici impiantabili.

L'uso della Ex Vivo Chandler Loop Apparecchio per valutare la biocompatibilità di Modificati Condotti sangue Polimerici

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