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DOI: 10.3791/51991-v
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This article presents a method for isolating and culturing sensory neurons from chick embryos, providing a controlled environment for studying neuronal cell biology. The procedure is rapid, cost-effective, and reliable, allowing researchers to explore various aspects of neuronal function.
Modelli di coltura cellulare forniscono un controllo dettagliato sulle condizioni ambientali e quindi forniscono una potente piattaforma per chiarire numerosi aspetti della biologia delle cellule neuronali. Descriviamo un metodo rapido, economico e affidabile per isolare, dissociare, e la cultura neuroni sensoriali da embrioni di pollo. Sono forniti anche i dettagli di preparazione substrati e immunocitochimica.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di coltivare una popolazione arricchita di neuroni sensoriali primari dissociati da embrioni di pollo. Ciò si ottiene raccogliendo i gangli della radice dorsale intatti dal giorno embrionale, da sette a 10 embrioni di pollo in un tubo conico, e successivamente rompendoli nella sua sospensione cellulare dissociata. Come seconda fase dissociata, le cellule DRG vengono piastrate su un piatto di coltura per l'incubazione.
Successivamente, il piatto di coltura viene risciacquato delicatamente per rimuovere preferenzialmente i neuroni. La fase finale include la placcatura dei neuroni sensoriali dissociati sui substrati ben definiti, come i vetrini coprioggetti lavati e cotti con acido precodificati con alte o basse concentrazioni di laminina. Una immunocitochimica viene utilizzata per dimostrare la presenza di NCA e integrine beta uno attivate nei corpi cellulari, neuriti e coni di crescita dei neuroni sensoriali di pollo embrionale in coltura dissociata.
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