Name: Legatura permanente dellarteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Scopri la tecnica di legatura permanente dell'arteria coronarica discendente anteriore sinistra nei topi per studiare il rimodellamento cardiaco e l'insufficienza cardiaca post-infarto con misurazioni emodinamiche invasive.

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Questo lavoro è stato sostenuto dalla sovvenzione Onderzoekstoelagen OT/13/090 della KU Leuven e dalla sovvenzione G0A3114N della FWO-Vlaanderen.

NOTA: Tutte le procedure sperimentali descritte in questa sezione sono stati approvati dalla cura degli animali e del Comitato consultivo di ricerca della Katholieke Universiteit Leuven istituzionale (Progetto: 154/2013-B De Geest). 1. permanente legatura dell&#39;arteria coronarica discendente anteriore sinistra <ol><li> Anestetizzare il mouse per somministrazione intraperitoneale di 40 mg / kg a 70 mg / kg di sodio pentobarbital. Assicurarsi che il mouse raggiunge il suo corretto piano di anestesia quando non reagisce più un pizzico punta ditta. Verificare sempre la corretta anestesia questo modo prima di qualsiasi procedura chirurgica o intervento. Utilizzare lubrificante pomata oftalmica per prevenire la secchezza della cornea mentre sotto anestesia. Fornire analgesia preoperatoria 2-4 ore prima dell&#39;inizio della procedura (buprenorfina 0,05 mg / kg SQ). <ol><li> Applicare tecniche asettiche coerenti durante l&#39;intervento chirurgico la sopravvivenza. Implementare procedure che inibiscono un con microbica massimo possibile misuracontaminazione in modo che l&#39;infezione significativo o suppurazione non si verifica. Queste procedure includono l&#39;uso di strumenti sterili e materiali sterili, disinfezione dell&#39;area chirurgica, e la rimozione di pelliccia / capelli sopra il sito chirurgico e la disinfezione di questo sito. </li></ol></li><li> Intubare il mouse con un smussato ago 20-gauge auto-preparata. <ol><li> Ponga il mouse in posizione supina con iperestensione del capo. <ol><li> Focalizzare la luce sulla regione del collo. Sollevare la lingua con un pincet smussata. L&#39;ingresso della laringe può essere visto chiaramente. </li><li> Passare l&#39;ago smussato attraverso la laringe nella trachea sotto visione diretta. Valutare corretta intubazione collegando il mouse per il ventilatore (stroke volume in microlitri: 3 x peso corporeo (g) + 155; Frequenza: 120 colpi al minuto). </li></ol></li><li> In alternativa, migliorare la visualizzazione di intubazione endotracheale esponendo con la massima attenzione la trachea. <ol><li> Fare un 5 millimetri un&#39;incisione mid-collo e ritrarretessuto muscolare appena sopra la trachea. </li><li> Eseguire l&#39;intubazione utilizzando uno stereomicroscopio chirurgica per la visualizzazione diretta della trachea. Sollevare la lingua e inserire la calibro 20 ago auto-preparata smussato nella trachea. Confermare corretta intubazione collegando il mouse per il ventilatore (stroke volume in microlitri: 3 x peso corporeo (g) + 155; Frequenza: 120 colpi al minuto). </li></ol></li></ol></li><li> Tenere il mouse in posizione supina e fissare il mouse con nastro. Eseguire un intervento chirurgico su una piastra elettrica per evitare l&#39;ipotermia. <ol><li> Shave e disinfettare la pelle con Betadine. Assicurarsi che l&#39;arto posteriore sinistra attraversa destra dell&#39;arto posteriore al fine di ottenere una migliore visualizzazione sul ventricolo sinistro durante l&#39;intervento chirurgico. </li></ol></li><li> Fai una piccola incisione cutanea trasversale fino allo sterno e separare la pelle ed i muscoli sottostanti. </li><li> Estrarre da parte la m. piccolo pettorale e m. pettorale con una sutura 5-0 seta. </li><li> Fai incision nel terzo spazio intercostale inserendo un pincet smussata. </li><li> Spostare il pincet sotto i muscoli intercostali da laterale a mediale fino a raggiungere lo sterno. Perforare la parete toracica spingendo la pincet dall&#39;interno alla pelle. Completare la toracotomia tagliando attentamente il muscolo intercostale appena sopra il pincet con una piccola forbice. Utilizzare questa tecnica per impedire punzonamento dei polmoni. </li><li> Mettere una spugna immersa in 0,9% NaCl nella cavità per proteggere i polmoni. Introdurre un spreader ferita (riavvolgitore petto) nello spazio intercostale per ottenere esposizione del lato sinistro del cuore. A partire da ora, l&#39;atrio sinistro, il ventricolo sinistro, e la discendente anteriore sinistra coronarica sono visibili con lo stereomicroscopio. </li><li> Eseguire una legatura della discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria con un&#39;unica 6-0 prolene legatura di circa 1 mm sotto la punta dell&#39;atrio sinistro. Questo è distale dal primo ramo diagonale. NOTA: In alternativa, 7-0 (0Possono essere utilizzati .05 mm di diametro) o 8-0 fili (0,04 mm di diametro della). L&#39;ago è un cerchio Taper Point ago C-1 13 millimetri 3/8. Legatura successo della discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria induce scolorimento immediata, risultando in un miocardio appare pallida nel territorio interessato. </li><li> Rimuovere la spreader ferita (divaricatore petto). <ol><li> Mettere tre 6-0 suture Ti-Cron intorno spazio intercostale. Prima di serrare le suture, rimuovere la spugna dalla cavità toracica e ri-expand polmoni bloccando il deflusso del ventilatore. In questo modo, i polmoni riconnettersi con la pleura parietale. </li><li> Successivamente, tirare le suture stretto e ripetere riespansione premendo sul petto. Conferma la chiusura successo del torace utilizzando una piccola quantità di soluzione salina (bolle d&#39;aria devono essere considerate quando si applica pressione sul torace). </li><li> Guardare attraverso il muscolo intercostale per confermare normale dilatazione dei polmoni. Riposizionare entrambi i muscoli pettorali, che serve come unulteriore ostacolo per la prevenzione di un pneumotorace. </li></ol></li><li> Chiudere la pelle con 5-0 seta-suture. </li><li> Scollegare il mouse dal ventilatore e consentire il recupero sulla piastra elettrica. Non lasciare un animale incustodito fino a quando non ha ripreso conoscenza sufficiente per mantenere decubito sternale. Non restituire un animale che ha subito un intervento chirurgico per la compagnia di altri animali fino alla completa guarigione. </li><li> Coerentemente fornire analgesia postoperatoria (buprenorfina 0,05 mg / kg SQ BID per almeno 48 ore dopo l&#39;intervento chirurgico). </li></ol> 2. In vivo Misure Invasive emodinamici nei topi <ol><li> Prima della procedura, immergere Francese Millar catetere pressione 1,0 in acqua sterile a 37 ° C per almeno 30 minuti per ridurre la deriva del segnale. Elettronicamente calibrare il sensore di pressione a 0 mmHg e 100 mmHg e registrare i dati a 2.000 Hz. </li><li> Eseguire anestesia mediante somministrazione intraperitoneale di 1,4 g / kg uretano. Controllare cheil mouse raggiunge il suo corretto piano di anestesia quando non reagisce più un pizzico punta ditta. </li><li> Posizionare il mouse anestetizzato in posizione supina. Fissare le sue membra con nastro adesivo. Mantenere la temperatura corporea con una piastra elettrica e monitorare con una sonda rettale. Shave regione del collo e fare una incisione mediana nella regione del collo per esporre la ghiandola tiroidea. </li><li> Fissare il collo con aghi piegati. </li><li> Estrarre da parte delle ghiandole salivari e esporre il diritto carotide comune. Il nervo vago, che assomiglia a un filo bianco, si trova lungo l&#39;arteria. Separare con cautela la carotide dal nervo vago con una pinza curva. </li><li> Passare una pinza curvo sotto il diritto carotide comune per separarla da altri tessuti. Rimuovere tessuto connettivo attorno l&#39;arteria. </li><li> Passare due 6-0 fili di seta sotto il diritto carotide comune. Fare un nodo stretto sul filo superiore, che si trova verso la testa, stretta, e fissare con un Kocher (occlusiva legatura distale). Passare il Proxifilo mal due volte da sinistra a destra e fissare con 2 Kochers (fili non occlusiva prossimale). </li><li> Mantenere la carotide umido facendo cadere sterile 0,9% NaCl. Asciugare il liquido in eccesso con bastoncini di cotone. </li><li> Fare un&#39;incisione nella giusta carotide comune con un ago calibro 26 tra la legatura distale e il filo non-occlusiva prossimale. </li><li> Introdurre il sensore di pressione nell&#39;arteria. Verificare che non vi è alcuna perdita di sangue. Spingere delicatamente Francese Millar catetere pressione 1.0 avanti e regolare il filo non-occlusiva prossimale in modo tale che il catetere può passare attentamente il cavo sotto la clavicola. <ol><li> Ridurre al minimo la perdita di sangue durante la regolazione del filo non occlusiva prossimale. Non comprimere il sensore di pressione troppo mentre avanza poiché è molto fragile. Poiché il filo prossimale non deve occludere l&#39;arteria, la nave deve rimanere pieno di sangue. </li></ol></li><li> Avviare la registrazione del segnale di pressione. Un segnale di pressione arteriosa Fluctuates in un sano mouse tra una pressione diastolica a 60 - 70 mmHg e una pressione sistolica di 100 - 120 mm Hg. </li><li> Dirigere il catetere attraverso l&#39;arteria anonima e tramite l&#39;aorta nel ventricolo sinistro. La pressione ventricolare oscilla tra 0 mm Hg e 100 - 120 mm Hg. Lasciare il catetere per stabilizzare all&#39;interno del ventricolo sinistro. Registrare il segnale per 30 min a 60 min a seconda delle esigenze sperimentali. </li><li> Dopo il completamento dell&#39;esperimento, immergere il catetere in Alconox 1% per 30 min. Lavare il catetere con acqua Milli-Q. Conservare il catetere in un blocco di schiuma. </li><li> Recuperare i dati del software di registrazione per ulteriori analisi. <ol><li> Per l&#39;analisi dei dati, si consideri un intervallo di tempo in cui il segnale di pressione è stabile. Scegli almeno 10 cicli cardiaci consecutivi dei dati registrati di interesse. </li><li> Utilizzare LabChart software versione 8.0 o simile per analizzare la frequenza cardiaca, la massima sistolica sinistra pressione ventricolare, il minimo ventr diastolica sinistraicular pressione, la velocità di picco di isovolumica contrazione ventricolare sinistra (dP / dt max), la velocità di picco di isovolumica rilassamento ventricolare sinistra (dP / dt min), la pressione ventricolare sinistra telediastolica, e la costante di tempo del ventricolo sinistro isovolumica caduta di pressione (tau) 7. NOTA: La pressione telediastolica corrisponde alla pressione al momento punto immediatamente prima l&#39;aumento della pressione indotta dalla contrazione isovolumica. Il calcolo di tau è basato sul montaggio della pressione ventricolare sinistra in una curva di decadimento monoesponenziale, espressa come P (t) = p 0 e -t / tau + b, In questa formula, P (t) è la pressione ventricolare sinistra al momento t dopo il valore negativo massimo di dP / dt è stato raggiunto. Il parametro b corrisponde al asintoto teorica, che in un approccio semplificato può essere assunto pari a zero. Maggiore relax isovolumica traduce in un valore più piccolo di tau. </li></ol></li></ol&gt;

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Nessuno degli autori riporta interessi finanziari concorrenti.

Cambiamenti cronici nella struttura e funzione miocardica, lo sviluppo di disfunzione ventricolare sinistra, e la progressione di insufficienza cardiaca possono essere studiati in diversi modelli murini 12. Rimodellamento cardiaco e disfunzione può essere indotta da un danno miocardico o da pressioni sovraccaricare secondaria trasversale costrizione aortica, o possono essere studiati in modelli genetici di cardiomiopatia dilatativa 12. Ovviamente, il beneficio più pronunciato dei modelli murini è l...

L'insufficienza cardiaca è una sindrome in cui il cuore non riesce a pompare il sangue a una velocità commisurata al fabbisogno di ossigeno cellulare a riposo o durante lo stress. È caratterizzato da ritenzione di liquidi, mancanza di respiro e affaticamento, in particolare durante lo sforzo. L'insufficienza cardiaca è un problema di salute pubblica in crescita, la principale causa di ospedalizzazione e una delle principali cause di mortalità. La cardiopatia ischemica è la principale causa di insufficienza cardiaca1.
Il rimodellamento ventricolare si riferisce a cambiamenti nella struttura, nelle dimensioni e nella forma del ventricolo sinistro. In altre parole, il rimodellamento ventricolare riguarda un'alterazione dell'architettura ventricolare sinistra. Questo rimodellamento architettonico del ventricolo sinistro è indotto da lesioni (ad esempio, infarto del miocardio), da sovraccarico di pressione (ad esempio, ipertensione arteriosa sistemica o stenosi aortica) o da sovraccarico di volume (ad esempio, insufficienza mitralica). Poiché il rimodellamento ventricolare influisce sullo stress della parete, ha un profondo impatto sulla funzione cardiaca e sullo sviluppo dell'insufficienza cardiaca.
La perdita di tessuto miocardico a seguito di infarto miocardico acuto determina una diminuzione dell'eiezione sistolica e un aumento del volume e della pressione telediastolica del ventricolo sinistro. Il meccanismo di Frank-Starling, che implica che un aumento del volume telediastolico provoca un aumento della pressione sviluppata durante la sistole, può aiutare a ripristinare la gittata cardiaca. Tuttavia, il concomitante aumento dello stress della parete può indurre ipertrofia regionale nel segmento non infartuato, mentre nell'area infartuata possono verificarsi espansione e assottigliamento. Studi sperimentali sugli animali mostrano che il ventricolo infartuato è ipertrofico e che il grado di ipertrofia dipende dalla taglia2 dell'infarto. 
La perdita di tessuto miocardico a seguito di infarto miocardico acuto provoca un improvviso aumento delle condizioni di carico. Il rimodellamento post-infartuale si verifica nel contesto di sovraccarico di volume, poiché il tessuto infartuato allungato e dilatato aumenta il volume ventricolare sinistro. Un aumento del volume ventricolare non implica solo un aumento del precarico (stress passivo della parete ventricolare alla fine della diastole), ma anche un aumento del postcarico (stress totale della parete miocardica durante l'eiezione sistolica). Il postcarico è aumentato poiché il radio sistolico è aumentato. Pertanto, il rimodellamento ventricolare post-infarto del miocardio è caratterizzato da caratteristiche miste di sovraccarico di volume e sovraccarico di pressione.
Il miocardio è costituito da 3 componenti integrati: cardiomiociti, matrice extracellulare e microcircolazione capillare. Tutti e 3 i componenti sono coinvolti nel processo di rimodellamento. Le metalloproteinasi della matrice prodotte dalle cellule infiammatorie inducono la degradazione dei montanti del collagene intermiocitario e lo slittamento dei cardiomiociti. Ciò porta all'espansione dell'infarto caratterizzata dall'assottigliamento e dalla dilatazione sproporzionati del segmento3 dell'infarto. Nelle fasi successive del rimodellamento, viene indotta la fibrosi interstiziale, che influisce negativamente sulle proprietà diastoliche del cuore. 
Il compartimento vascolare e cardiomiocitario nel miocardio dovrebbe rimanere bilanciato nel processo di rimodellamento ventricolare per evitare l'ipossia tissutale4,5. Il fatto che l'ipertrofia progredisca o meno verso l'insufficienza cardiaca può dipendere in modo critico da questo equilibrio tra il compartimento vascolare e quello dei cardiomiociti nel miocardio. 
Un modello di legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra nei topi viene utilizzato per studiare il rimodellamento ventricolare e la funzione cardiaca dopo l'infarto del miocardio. Questo modello è fondamentalmente diverso in termini di obiettivi e rilevanza fisiopatologica rispetto al modello di legatura transitoria dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. In quest'ultimo modello di danno da ischemia/riperfusione, l'estensione iniziale dell'infarto può essere modulata da fattori che influenzano il salvataggio miocardico dopo riperfusione6. Al contrario, l'area dell'infarto a 24 ore dopo la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra è fissa. La funzione cardiaca in questo modello sarà influenzata da 1) il processo di espansione dell'infarto, la guarigione dell'infarto e la formazione di cicatrici; e 2) lo sviluppo concomitante di dilatazione ventricolare sinistra, ipertrofia cardiaca e rimodellamento ventricolare.

<table><tbody><tr><td>Buprenorfina (Buprenex)</td><td>Bedford Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital di sodio (Nembutal)</td><td>Ceva</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>VWR internationals</td><td>200065-400</td><td></td></tr><tr><td>5 - 0 sutura di seta</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson Medical</td><td>K890H</td><td></td></tr><tr><td>6 - 0 sutura in prolene&nbsp;</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson Medical</td><td>F1832</td><td></td></tr><tr><td>6 - 0 Sutura Ti- Cron</td><td>Ethicon, Johnson & Johnson Medical</td><td>F1823</td><td></td></tr><tr><td>Uretano&nbsp;</td><td>Sigma</td><td>94300</td><td></td></tr><tr><td>Alconox Alconox</td><td>Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ventilatore, MiniVent Modello 845</td><td>Hugo Sachs</td><td>73-0043</td><td></td></tr><tr><td>Divaricatore toracico o divaricatore toracico</td><td>Kent Scientific corporation</td><td>INS600240</td><td>ALM Autoritenente, seghettato, lungo 7 cm, 4 x 4 rebbi a forma di "L", 3 mm x 3 mm</td></tr><tr><td>Catetere a pressione Millar francese da 1,0 mm...</td><td>Strumenti Millar&nbsp;</td><td>SPR - 1000/NR</td><td></td></tr><tr><td>Powerlab</td><td>ADInstruments Pty Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>LabChart&reg; software</td><td>ADInstruments Pty Ltd.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonda rettale</td><td>ADInstruments Pty Ltd.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

legatura permanente dell&#39;arteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

L&#39;insufficienza cardiaca è una sindrome in cui il cuore non riesce a pompare il sangue ad una velocità al fabbisogno di ossigeno cellulari a riposo o durante lo stress. E &#39;caratterizzata da ritenzione di liquidi, mancanza di respiro, e la fatica, in particolare da sforzo. Lo scompenso cardiaco è un problema crescente di salute pubblica, la principale causa di ospedalizzazione, e una delle principali cause di mortalità. Cardiopatia ischemica è la principale causa di insufficienza cardiaca. Rimodellamento ventricolare riferisce alle variazioni di struttura, la dimensione e la forma del ventricolo sinistro. Questo rimodellamento architettonica del ventricolo sinistro è indotta da lesioni (es, infarto del miocardio), da sovraccarico di pressione (per esempio, ipertensione arteriosa sistemica o stenosi aortica), o da sovraccarico di volume. Dal rimodellamento ventricolare colpisce stress di parete, ha un profondo impatto sulla funzione cardiaca e sullo sviluppo di insufficienza cardiaca. Un modello di legatura permanente del descendin anteriore sinistrag coronarica nei topi è utilizzato per studiare il rimodellamento ventricolare e della funzione cardiaca dopo infarto miocardico. Questo modello è fondamentalmente diverso in termini di obiettivi e di rilevanza fisiopatologica rispetto al modello di legatura transitoria della discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria. In questo secondo modello di danno da ischemia / riperfusione, la portata iniziale dell&#39;infarto può essere modulata da fattori che influenzano salvataggio miocardico seguente riperfusione. Al contrario, l&#39;area infartuata a 24 ore dopo la legatura permanente della discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria è fisso. La funzione cardiaca in questo modello sarà influenzato dal 1) il processo di espansione infarto, infarto guarigione, e la formazione di cicatrici; e 2) lo sviluppo concomitante di dilatazione del ventricolo sinistro, ipertrofia cardiaca, e rimodellamento ventricolare. Oltre il modello di legatura permanente della discendente anteriore dell&#39;arteria coronaria, la tecnica invasiva emodinamico meamisura- nei topi è presentato in dettaglio.

L'estensione di infarto del miocardio può essere valutata Evans blue / cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC) doppia colorazione. TTC è un indicatore redox, che viene convertito in rosso scuro 1,3,5-triphenylformazan nei tessuti a causa della attività di vari deidrogenasi in presenza di NADH 8 vivente. La Figura 1 mostra una sezione rappresentativa del cuore a 24 ore dopo legatura del discendente anteriore dell'arteria coronaria. Aree blu macchiato indicano regioni non-ischemiche / normali...

L'insufficienza cardiaca è la principale causa di ospedalizzazione e una delle principali cause di mortalità. Un modello di legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra nei topi è stato applicato per studiare il rimodellamento ventricolare e la disfunzione cardiaca post-infarto del miocardio. Viene presentata la tecnica delle misurazioni emodinamiche invasive nei topi.

Legatura permanente dell&#39;arteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

L'obiettivo generale dei seguenti esperimenti è quello di presentare la tecnica di legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra nei topi. Questo modello viene applicato per studiare il rimodellamento cardiaco e lo sviluppo dell'insufficienza cardiaca dopo l'infarto del miocardio. Nella prima parte del video verrà dimostrata la procedura di legatura permanente, mentre nella seconda parte verrà mostrata la valutazione della funzione cardiaca, utilizzando misure emodinamiche invasive in vivo nei topi.Il modello di legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra sarà dimostrato da Marlin Locks, tecnico animale senior del centro di biologia vascolare molecolare. Il dottorando Eja del micro gruppo presenterà la tecnica delle misure emodinamiche invasive nei topi. Inizia concentrando una luce sulla regione del collo di un topo sedato.Quindi sollevare la lingua dell'animale con un perno smussato in modo che l'ingresso della laringe possa essere chiaramente visualizzato. Passare un ago smussato calibro 20 auto-preparato attraverso la laringe nella trachea, quindi collegare il mouse al ventilatore per verificare che l'intubazione sia stata posizionata correttamente. Fissare il mouse a un termoforo per evitare l'ipotermia.Fare attenzione che l'arto posteriore sinistro incroci l'arto posteriore destro per una migliore visione del ventricolo sinistro durante l'intervento chirurgico. Quindi praticare una piccola incisione cutanea trasversale fino allo sterno e separare la pelle e i muscoli sottostanti. Utilizzare una sutura di seta a cinque zero per tirare da parte i muscoli pettorali e quindi inserire un perno smussato per praticare un'incisione nel terzo spazio intercostale.Spostare il perno posizionato sotto i muscoli intercostali dal lato laterale a quello mediale fino a raggiungere lo sterno. Quindi spingere il perno dall'interno fino alla pelle per perforare la parete toracica. Infine, tagliare con cura il muscolo intercostale appena sopra il perno per completare la toracotomia.Facendo attenzione a non perforare i polmoni, posizionare una spugna imbevuta di cloruro di sodio allo 0,9% nella cavità per proteggere i polmoni, quindi introdurre un divaricatore toracico nello spazio intercostale per esporre l'atrio sinistro, il ventricolo sinistro e l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. Ora legare l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra con una singola legatura prolina a sei zeri circa un millimetro sotto la punta dell'atrio sinistro e distale al primo ramo diagonale. Una legatura riuscita indurrà uno scolorimento immediato con conseguente comparsa di un miocardio pallido all'interno del territorio interessato.Ora posiziona 3 6 0 punti di sutura tron attorno allo spazio intercostale e rimuovi la spugna dalla cavità toracica. Ri-espandere i polmoni bloccando il deflusso del ventilatore, quindi tirare le suture e premere sul torace per ripetere la riespansione. Utilizzare una piccola quantità di soluzione salina per confermare la mancanza di bolle d'aria e la chiusura riuscita del torace.Quindi guarda attraverso il muscolo intercostale per confermare la normale espansione dei polmoni. Riposizionare entrambi i muscoli pettorali in modo che fungano da barriera aggiuntiva per la prevenzione di uno pneumotorace e utilizzare cinque punti di sutura di seta zero per chiudere la pelle. Quindi scollegare il mouse dal ventilatore, riscaldando l'animale sul termoforo fino a quando non si è completamente ripreso.Prima di iniziare le misurazioni emodinamiche immergere un catetere a pressione French Miller 1.0 in acqua sterile a 37 gradi Celsius per ridurre al minimo la deriva del segnale Dopo almeno 30 minuti, elettronicamente, calibrare il sensore di pressione a zero e 100 millimetri di mercurio e registrare i dati di base a 2000 hertz. Quindi fissare il topo anestetizzante in posizione supina su un termoforo, monitorando la temperatura dell'animale con una sonda rettale. Radere la regione del collo e poi praticare un'incisione sulla linea mediana per esporre la ghiandola tiroidea.Quindi fissare il collo con aghi piegati e tirare da parte la ghiandola salivare per esporre l'arteria carotide comune destra. Ora identifica il nervo vago, che assomiglia a un filo bianco e si trova lungo l'arteria, e usa una pinza curva per separare accuratamente l'arteria dal nervo. Passare la pinza curva sotto l'arteria carotide comune destra per separarla dagli altri tessuti, rimuovendo qualsiasi tessuto connettivo intorno all'arteria.Quindi passare 2 6 0 fili di seta sotto l'arteria carotide comune destra e fare un nodo stretto sul filo superiore. Posizionare il filo verso la testa, chiuderlo e fissarlo con una legatura distale. Quindi, passa il filo prossimale due volte da sinistra a destra e fissalo con due fili prossimali non occlusivi anche in questo momento.Mantenere umida l'arteria carotide gocciolando cloruro di sodio sterile allo 0,9% sull'arteria. Quindi utilizzare un ago calibro 26 per praticare un'incisione nell'arteria carotide comune destra tra la legatura distale e il filo prossimale non occlusivo. Introdurre il sensore di pressione nell'arteria.Quindi spingere delicatamente in avanti il catetere a pressione e regolare il filo prossimale non occlusivo in modo tale che il catetere possa passare con cautela attraverso il filo, sotto la clavicola, e in modo che il vaso rimanga pieno di sangue. Ora inizia a registrare il segnale di pressione. In un topo sano, il segnale della pressione arteriosa oscilla tra una pressione diastolica di 60-70 millimetri di mercurio e una pressione sistolica di 100-120 millimetri di mercurio.Dirigere il catetere attraverso l'arteria anonima e l'aorta nel ventricolo sinistro. La pressione ventricolare oscillerà tra zero e 100-120 millimetri di mercurio. Infine, dopo aver permesso al catetere di stabilizzarsi all'interno del ventricolo sinistro, registrare il segnale per 30-60 minuti.A seconda dei requisiti sperimentali, l'estensione dell'infarto miocardico può essere valutata mediante la doppia colorazione Blue TTC di Evan. Qui vengono mostrate sezioni rappresentative del cuore a 24 ore dalla legatura dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. Le aree colorate di blu indicano le regioni normali non ischemiche.Le aree macchiate di rosso intenso indicano le regioni ischemiche ma vitali. Cioè le aree non infartuate a rischio. Mentre le aree rosso pallido, colorate negativamente, indicano le regioni infartuate, che in genere comprendono tra il 50 e il 60% dell'area totale della parete ventricolare sinistra.L'espansione dell'infarto può essere quantificata valutando l'andamento temporale della lunghezza e dello spessore dell'infarto. Qui, in questa sezione trasversale viene mostrata una sezione trasversale rappresentativa e seria colorata di rosso di un cuore al giorno 28 dopo la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra. L'espansione dell'infarto sostanzialmente allungato corrisponde ad un aumento della lunghezza assoluta dell'infarto e ad una diminuzione dello spessore dell'infarto.In questi grafici viene mostrato un registro rappresentativo della pressione arteriosa e ventricolare. L'ovvia differenza tra i segnali arteriosi e i segnali ventricolari è che il segnale della scala scende a circa zero millimetri di mercurio durante la diastole. Utilizzando questo modello, è importante notare che la funzione cardiaca dipenderà non solo dalla perdita di tessuto miocardico, ma anche nel processo di espansione dell'infarto, nella guarigione delle scoregge e nella formazione di cicatrici e dallo sviluppo concomitante di dilatazione ventricolare sinistra, ipertrofia cardiaca e rimodellamento ventricolare.

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Questo video illustra come utilizzare un modello veloce e affidabile per lo studio dei processi fisiopatologici pathobiological e di ischemia miocardica.

LAD-Legatura: un modello murino di infarto miocardico

La procedura chirurgica utilizzata per indurre infarto miocardico sperimentale in topi inizia con toracotomia sinistra tra il terzo e il quarto nervature per visualizzare la superficie anteriore del cuore e polmone sinistro. Coronaria sinistra viene ligato, il torace è chiuso e il mouse viene consentito di recuperare spontaneamente.

Tecnica modificata di legatura dell&#39;arteria coronarica in Mouse

In questo video, descriviamo una procedura chirurgica per generare un modello murino di infarto del miocardio legando in modo permanente l'arteria coronaria discendente anteriore sinistra.

Generazione di un modello murino di infarto del miocardio: una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra in un modello murino

Si introduce un metodo chirurgico per indurre sperimentale ischemia / riperfusione (I / R) pregiudizio per simulare infarto del miocardio (MI) in modelli murini che consente una maggiore chiarezza posizionamento della legatura sulla discendente anteriore sinistra (LAD) per migliorare la riproducibilità di esperimenti MI nei topi.

Un modello murino di ischemia miocardica e riperfusione lesioni da legatura della arteria discendente anteriore sinistra

Forniamo un metodo affidabile per la legatura dell'arteria discendente anteriore sinistra (LAD) in un modello murino. Questo metodo è relativamente meno invasivo di altri metodi, che coinvolgono l'intubazione endotracheale, un approccio di toracotomia sul lato sinistro e la toracentesi. Questo metodo può essere utilizzato come modello per l'infarto miocardico acuto e cronico.

Murino discendente anteriore sinistra (LAD) Coronary legatura dell&#39;arteria: una migliore e semplificata del modello di infarto miocardico

Qui descriviamo una procedura chirurgica che mostra come ottenere una legatura permanente dell'arteria coronaria discendente sinistra-anteriore nei topi. Questo modello è di grande rilevanza per studiare la fisiofisiologia dell'infarto miocardico e i processi biologici concomitanti.

Modello di infarto miocardico Murine utilizzando la legatura permanente dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra

Qui descriviamo un metodo semplice e riproducibile che può indurre infarto miocardico o danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Ci sono diverse differenze tra i ventricoli destro e sinistro. Tuttavia, la fisiopatologia dell'infarto ventricolare destro (RVI) non è stata chiarita. Nel presente protocollo viene introdotto un metodo riproducibile per la generazione di modelli murini RVI, che può fornire un mezzo per spiegare il meccanismo di RVI.

Generazione e caratterizzazione dell'infarto miocardico ventricolare destro indotto dalla legatura permanente dell'arteria coronaria destra nei topi

Presentato qui è una procedura chirurgica per la legatura permanente dell'arteria coronaria sinistra nei topi. Questo modello può essere utilizzato per studiare la fisiopatologia e la risposta infiammatoria associata dopo infarto miocardico.

Legatura coronaria sinistra: un modello chirurgico murino di infarto miocardico

Numerose manipolazioni genetiche e / o iniezioni intramiocardiche di geni, proteine, cellule e / o biomateriali si sovrappongono la dimensione del tempo negli studi di acuta ischemia / riperfusione e rimodellamento cronica nel topo. Questo video illustra le procedure di microchirurgia per ischemia / riperfusione, permanente legatura delle arterie coronarie, e gli studi di iniezione intramiocardico.

Legatura dell&#39;arteria coronarica e di iniezione intramiocardico in un modello murino di infarto

Scopri la tecnica di legatura permanente dell'arteria coronarica discendente anteriore sinistra nei topi per studiare il rimodellamento cardiaco e l'insufficienza cardiaca post-infarto con misurazioni emodinamiche invasive.

Legatura permanente dellarteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca (Video) | JoVE Journal

Legatura permanente dell'arteria discendente anteriore sinistra coronarica nei topi: un modello di post-infarto rimodellante miocardico e insufficienza cardiaca

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