Manipolazione del Cotton Rat in studi per la valutazione pre-clinica di oncolitici virus
24 novembre 2014
I ratti di cotone sono estremamente eccitabili e hanno una forte risposta di fuga o lotta. Viene descritto un metodo di manipolazione ottimizzato per ridurre lo stress degli animali che renderà i ratti di cotone più accessibili come modello preclinico.
L'obiettivo generale di questa procedura è dimostrare la manipolazione e la cattura sicura dei ratti del cotone utilizzando un metodo specifico volto a ridurre lo stress vissuto dall'animale. Ciò si ottiene posizionando prima un tubo di arricchimento contro l'estremità di una gabbia per topi e un cestello in acciaio sicuro sulla parte superiore. Nella seconda fase, viene indossato l'adeguato equipaggiamento di protezione individuale e il marmocchio di cotone viene lasciato strisciare nel tubo di arricchimento.
Il tubo viene quindi tenuto contro il lato della gabbia e l'animale intrappolato viene rapidamente trasferito in un contenitore di plastica con fori per l'aria per il trasporto alla camera di induzione dell'anestetico. Nella fase finale, uno speciale cono nasale appositamente adattato al muso di marmocchio di cotone viene posizionato sull'animale per facilitare la sedazione completa. In definitiva, questa procedura di cattura può essere utilizzata per maneggiare in sicurezza i marmocchi di cotone in modo da ridurre il loro stress e aumentare la loro sicurezza.
Quando si utilizzano questi roditori altamente eccitabili negli studi preclinici, generalmente gli individui nuovi a questo metodo avranno difficoltà a causa delle discrepanze nella letteratura per quanto riguarda la manipolazione, l'alloggio e il comportamento del ratto di cotone. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale per completare i resoconti scritti per preparare i ricercatori alle sfide comportamentali nel lavorare con i ratti del cotone. A dimostrare la procedura saranno Brianne Cuttington, una studentessa laureata, e Meganer, una borsista post-dottorato del mio laboratorio Per ridurre i combattimenti, hanno ospitato i ratti di cotone individualmente in gabbie rack in policarbonato contenenti una lettiera di pannocchie di mais da un ottavo di pollice, una sezione di tubo in PVC non più lunga di otto pollici e nidi per l'arricchimento per consentire la cattura sicura e facile degli animali.
Posiziona il tubo di arricchimento contro l'estremità della gabbia e poi posiziona un cestino raffermo sicuro sopra la parte superiore della gabbia contenente cibo per roditori e una bottiglia d'acqua. Ora raccogli un grande contenitore di plastica trasparente con fori per l'aria e un coperchio e una camera di induzione dell'anestetico, abbastanza grande da contenere il contenitore e un cono montato sul tubo di uscita del gas. Si noti che il marmocchio di cotone ha un muso allungato che richiede una forma diversa per erogare il gas anestetico, come raffigurato in questa immagine di un cono nasale, progettato per adattarsi correttamente a un ratto di cotone che lavora in coppia.
I ricercatori dovrebbero indossare guanti di pelle spessa per proteggersi durante tutte le parti della procedura. Quando entrambi i ricercatori sono pronti, posiziona la gabbia dell'animale su una superficie piana e rimuovi il coperchio esterno. Quindi, quando l'animale è all'interno del tubo di arricchimento, sollevare leggermente la vaschetta di alimentazione in acciaio e manovrare lentamente il tubo fino a quando non è parallelo ai lati della gabbia e contro la parte posteriore.
Successivamente, sollevare lentamente e deliberatamente il bordo del coperchio in acciaio più lontano dal tubo di arricchimento, mantenendo l'altra estremità a contatto con la gabbia. Chiedi al secondo ricercatore di creare uno spazio abbastanza grande per il contenitore di plastica. Quindi, con un movimento rapido e fluido, spingere la plastica e il contenitore sopra il tubo di arricchimento.
Mantenere il contatto del contenitore con il lato della gabbia che intrappola l'animale nel tubo. Quando si maneggiano i ratti di cotone, è importante essere pazienti e usare una mano ferma poiché gli animali hanno una forte risposta di volo o di lotta, e cercherà di evitare la cattura correndo e saltando fuori dalla gabbia. Se un animale scappa, evita di maneggiarlo per la coda.
Poiché può verificarsi lo sganciamento, rimuovere il vassoio di alimentazione in acciaio e dare il coperchio del contenitore di plastica all'altro ricercatore. Quindi far scorrere il coperchio di plastica tra il lato della gabbia e il contenitore. Prestare attenzione alle appendici dell'animale intrappolato durante il processo e chiudere, ma non sigillare il contenitore, assicurandosi che il contenitore rimanga chiuso.
Trasportare l'animale nella camera di induzione. Quindi chiedi a un ricercatore di posizionare rapidamente l'animale nella camera e di rimuovere il coperchio del contenitore con un movimento fluido mentre l'altro si apre e sostituisce immediatamente il coperchio della camera di induzione. Infine, dopo la somministrazione dell'anestesia, riportare il ratto nella sua gabbia con monitoraggio fino a quando l'animale non riacquista la piena mobilità e si ricompone sternale.
L'iniezione di cellule tumorali vitali è importante per la corretta formazione del tumore. In questa immagine, viene mostrato un monostrato sano di cellule LCRT che possono essere preparate per l'iniezione nei marmocchi di cotone. Al contrario, queste cellule LCRT hanno una bassa vitalità e non devono essere utilizzate per iniezioni.
I tumori formati dalle cellule LCRT sono in rapida crescita e, di conseguenza, i centri necrotici spesso si formano come tali, la formazione del tumore deve essere monitorata attentamente per evitare ulcerazioni. Se si verifica un'ulcerazione, l'animale deve essere sacrificato per evitare l'infezione e la possibile morte per sepsi. Il mantenimento dell'integrità del tessuto tumorale dopo l'escissione si tradurrà in un campione che è una rappresentazione più accurata del tumore in vivo.
Ad esempio, qui, viene mostrata una tecnica di escissione mediante la quale il tumore viene accuratamente separato dal tessuto circostante utilizzando un bisturi e una pinzetta, come mostrato in questa immagine finale. La struttura densa e altamente vascolarizzata del tumore viene mantenuta da questa tecnica di escissione, che è importante per l'analisi dei trattamenti che interessano la vascolarizzazione tumorale. Come nel caso di molti virus oncolitici Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di mantenere la calma e di eseguire ogni passaggio lentamente e deliberatamente per evitare di agitare i ratti di cotone.
Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come catturare e gestire in sicurezza i ratti del cotone.
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici
Panoramica
In questo articolo viene descritto un metodo di manipolazione dei ratti del cotone che ne minimizza lo stress durante il prelievo. Ottimizzando la procedura, i ricercatori possono migliorare la disponibilità dei ratti del cotone come modello preclinico.
Componenti Chiave dello Studio
Ambito Scientifico
- Manipolazione degli animali
- Modelli preclinici
- Tecniche di riduzione dello stress
Sfondo
- I ratti di cotone mostrano un'elevata eccitabilità e una forte risposta di lotta o fuga.
- Lo stress durante la manipolazione può influenzare l'affidabilità degli studi preclinici.
- Metodi di manipolazione efficaci sono essenziali per una ricerca animale di successo.
- La riduzione dello stress può migliorare il benessere degli animali e la qualità dei risultati della ricerca.
Scopo dello studio
- Dimostrare un metodo sicuro per la manipolazione e il prelievo dei ratti di cotone.
- Ridurre lo stress provato dagli animali durante il processo di cattura.
- Favorire l'utilizzo dei ratti di cotone nella ricerca preclinica.
Metodi Utilizzati
- Posizionamento di un tubo di arricchimento nella gabbia del ratto.
- Utilizzo di un cestello in acciaio chiudibile per un trasferimento sicuro.
- Indossare dispositivi di protezione individuale durante la manipolazione.
- Trasporto dell'animale in un contenitore in plastica ventilato.
Risultati principali
- Il metodo permette ai ratti muschiati di entrare volontariamente in un tubo arricchito.
- Il trasferimento rapido in un contenitore di trasporto riduce al minimo lo stress.
- L'uso di un cono nasale appositamente adattato facilita la sedazione.
- La procedura migliora la sicurezza e il benessere dei ratti muschiati.
Conclusioni
- Il metodo di manipolazione descritto riduce efficacemente lo stress nei ratti di cotone.
- Tecniche di manipolazione migliorate possono portare a risultati di ricerca migliori.
- Una manipolazione sicura è fondamentale per il trattamento etico degli animali da ricerca.
Domande frequenti
Rilevanza Industriale del Progetto
L'efficacia del virus oncolitico dipende da modelli preclinici immunocompetenti che riflettono le interazioni immunitarie-tumorali cliniche. Il ratto di cotone, come modello sinnogeno per carcinoma mammario e osteosarcoma, consente una riduzione meccanicistica dei rischi associati ai candidati alla viroterapia mantenendo l'immunocompetenza dell'ospite. Una corretta manipolazione riduce la variabilità indotta dallo stress, migliorando l'affidabilità dei dati per decisioni di avanzamento o interruzione nella valutazione precoce del percorso oncologico.
Applicazioni Strategiche nella Ricerca e Sviluppo in Biopharma
Scoperta Precoce e Validazione del Target
- Valore scientifico: Permette la validazione funzionale del bersaglio in sistemi immunocompetenti, chiarificando i meccanismi mediati dal sistema immunitario nell'azione dei virus oncolitici.
- Valore operativo: Riduce lo stress negli animali e gli artefatti legati alla manipolazione, aumentando la riproducibilità delle valutazioni dell'innesto tumorale e della risposta al trattamento.
Sviluppo di screening e saggi
- Valore scientifico: Consente una formazione tumorale sottocutanea costante a partire da cellule LCRT, fornendo una piattaforma standardizzata per la somministrazione intratumorale e intraperitoneale di composti.
- Valore operativo: Favorisce tassi di attecchimento tumorale e cinetiche di crescita affidabili, essenziali per la prontezza del saggio nei test antivirali e nei test di screening citotossici.
Ricerca Translazionale e Preclinica
- Valore scientifico: Mantiene l'integrità del tessuto tumorale dopo l'escissione, consentendo un'analisi ex vivo accurata degli agenti mirati al sistema vascolare e degli infiltrati immunitari.
- Valore operativo: Minimizza ulcerazione e necrosi mediante un attento monitoraggio, riducendo la perdita di animali e migliorando la coerenza del gruppo negli studi longitudinali di efficacia.
Integrazione di Pipeline e Flusso di Lavoro
Questo metodo di manipolazione si inserisce nel percorso dalla scoperta alla fase preclinica, consentendo l'utilizzo di modelli immunocompetenti affidabili, dall'instaurazione iniziale del tumore fino alla valutazione del trattamento e al prelievo dei tessuti.
- Biologia della scoperta: Supporta la verifica di ipotesi sui meccanismi antitumorali dipendenti dal sistema immunitario, riducendo al minimo i fattori confondenti legati all'immunosoppressione indotta da stress.
- Screening: Garantisce modelli tumorali riproducibili per letture quantitative della replicazione virale, della lisi tumorale e dell'attivazione immunitaria.
- Analisi: Permette un campionamento tissutale costante per analisi immunoprofiling, analisi delle citochine e valutazione istopatologica.
- Ricerca traslazionale: Mantiene la rilevanza clinica preservando le interazioni intatte tra tumore e stroma e l'architettura vascolare nei tumori escissi.
- Riutilizzo aziendale: Stabilisce un'operatività standardizzata scalabile e a basso stress, condivisibile tra gruppi di oncologia e virologia per una preparazione costante dei modelli.
Impatto Operativo ed Aziendale
- Valore scientifico: Maggiore affidabilità predittiva nella validazione degli obiettivi grazie alla riduzione del rumore biologico e a una chiarezza meccanicistica migliorata degli effetti della viroterapia.
- Valore operativo: Procedure standardizzate di cattura, anestesia e iniezione migliorano l'affidabilità tra osservatori e favoriscono l'adozione in tutta la struttura.
- Valore strategico: Decisioni più accurate su prosegui/non prosegui grazie alla riduzione di falsi negativi derivanti dall'insorgenza tumorale influenzata dallo stress o da una disregolazione immunitaria.
- Impatto sul portafoglio: Prioritizzazione dei candidati ai virus oncolitici aggiustata per il rischio, basata su dati riproducibili ottenuti da modelli immunocompetenti.
Considerazioni sull'implementazione
- Richiede una formazione nel maneggio calmo e deliberato degli animali per evitare di innescare risposte di fuga o lotta nei ratti del cotone altamente eccitabili.
- È dipendente da attrezzature specializzate, tra cui tubi arricchiti, cestelli in acciaio fissabili, contenitori di trasporto ventilati e coni nasali anestetici specifici per la specie.
- Necessita di una standardizzazione intersettoriale delle condizioni di alloggio (gabbie individuali in policarbonato, lettiera in pannocchia, tubi in PVC, nidini) per garantire un comportamento di base costante.
- Limitato dalla necessità di una coordinazione tra ricercatori durante le fasi di trasferimento, al fine di mantenere l'integrità del contenitore e prevenire lesioni agli animali.
- Limitazione pratica: una dimostrazione visiva è essenziale per raggiungere competenza, a causa delle discrepanze presenti nella letteratura scritta riguardo al comportamento e alle sfumature di manipolazione dei ratti del cotone.
