Misura di Smooth funzione muscolare nei isolato carta igienica-applicazioni Farmacologia Research

L'obiettivo generale di questa procedura è misurare il tono della muscolatura liscia. Ciò si ottiene sezionando e preparando prima i tessuti. Il secondo passo consiste nel montare il tessuto in un bagno di tessuto isolato.

Quindi viene testata la vitalità del tessuto e vengono effettuate misurazioni isometriche della contrazione. In definitiva, la preparazione del bagno tissutale isolato viene utilizzata per testare la funzione del recettore, la segnalazione del recettore e la reattività della muscolatura liscia. In generale, i principali vantaggi di questa tecnica sono la flessibilità del sistema, la rapidità di raggiungimento dei risultati e il mantenimento dell'integrità dell'intero tessuto.

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave In qualsiasi campo che utilizza farmaci per interferire con la segnalazione dei recettori o l'anima muscolare liscia, ci sono alcuni preparati che devono essere sottolineati. È fondamentale preriscaldare il sistema del bagno di tessuti a 37 gradi Celsius attivando il bagno d'acqua riscaldato a ricircolo. L'acqua deve fluire in ciascun componente all'attacco spinato più basso e defluire all'attacco spinato più alto.

Ogni componente deve essere collegato. I trasduttori di forza devono essere calibrati e devono anche essere accesi almeno 15 minuti prima dell'esperimento per portare la loro temperatura a un equilibrio. Successivamente, quando si collega il gas, verificare la presenza di perdite, quindi pressurizzare il sistema.

Dopo aver riempito il sistema con la soluzione, assicurarsi di adescarlo e rimuovere eventuali bolle d'aria. È inoltre necessario testare gli aeratori del bagno di tessuto. Una buona aerazione distribuirà i farmaci in modo efficace, ma non destabilizzerà il tessuto immediatamente prima dell'esperimento.

Sezionare il tessuto. Dopo aver anestetizzato il ratto, creare uno pneumotorace usando le forbici. Imprecare lungo il diaframma nella parte inferiore della gabbia toracica.

Quindi tagliare dal fondo della gabbia toracica allo sterno e dividere in due il tessuto. Elimina gli organi sopra la colonna vertebrale per localizzare l'aorta, che si trova direttamente lungo la colonna vertebrale. Ora recidi tutte le connessioni all'aorta e taglia l'aorta perpendicolarmente alla colonna vertebrale a livello del diaframma.

Quindi, tieni delicatamente l'aorta e seziona l'aorta dalla colonna vertebrale. Inizia nell'area del diaframma inferiore adiacente alla colonna vertebrale e procedi verso il cuore. Fai solo attenzione a non tirare o tirare il tessuto aortico perché ciò può danneggiarlo immediatamente.

Posizionare l'aorta in una capsula di dissezione contenente PSS. Ora prendi un filo e fai un piccolo angolo di 90 gradi. A un'estremità, ancorare l'estremità angolata del filo alla base del piatto di dissezione.

Quindi infilare con cautela il filo guida nel lume dell'aorta e far scorrere l'aorta sul filo. Quando l'estremità libera del filo diventa visibile, piegarla delicatamente e spingerla nella fondazione, stabilizzando così il tessuto. Ora, usando piccole forbici e pinze Venus, rimuovi il tessuto adiposo perivascolare e altri tessuti estranei fino a quando l'aorta toracica appare bianca e in qualche modo fibrosa.

Una volta ripulito dai tessuti in eccesso, rimuovere con cura l'aorta pulita dal filo. Termina questa sezione tagliando l'aorta in anelli larghi da tre a cinque millimetri. Un anello aortico a portata di mano.

Avere preparato due ganci di tessuto con suture per fissarlo nella camera del bagno. Un amo dovrebbe avere una sutura con un piccolo anello annodato per il fissaggio a un'asta. L'altro gancio necessita di un pezzo di sutura lungo da 10 a 14 centimetri.

Per fare un nodo, attacca con cura un paio di questi ganci in tessuto a ciascun anello aortico. Fare attenzione a non aggrovigliare i ganci. Quindi, trasferisci ogni pezzo di tessuto in una piastra di PSS a temperatura ambiente con un supporto per fazzoletti fissato a un supporto per anelli.

Quindi, infila l'anello annodato sul piolo dell'asta e usa il lungo pezzo di sutura per tenere sollevato il tessuto. Quindi inserire l'asta nella camera e assicurarsi che l'asta sia ben fissata. Ora, lega la sutura dal gancio rimanente al trasduttore di forza.

Lasciare abbastanza gioco nella sutura, in modo che la tensione tra il trasduttore di forza e il tessuto possa essere regolata con il micrometro. Ripeti questo processo per ogni anello in ogni camera. Ora, imposta la tensione passiva.

Usa il micrometro per aumentare la tensione a due grammi e attendi che la tensione sul tessuto smetta di aumentare. Quindi aumenta la tensione di altri due grammi e, di nuovo, attendi il cambiamento della tensione. Per finire.

La tensione dovrebbe ora essere di circa 3,2 grammi. Ripeti questo processo su ogni anello in ogni camera. Dopo aver impostato tutte le tensioni passive, lasciare che i tessuti si equilibrino per un'ora.

Durante questo periodo, sostituire il PSS ogni 15 minuti e fare altri preparativi per l'esperimento, come la preparazione dei farmaci alla fine del periodo di equilibrio. Lavare il fazzoletto un'ultima volta, salvare i dati e ripristinare tutti gli input. Quindi, seguendo i dettagli nel protocollo di testo, fai la sfida iniziale.

Assicurati di documentare queste azioni nel software. Dopo la sfida iniziale, il cambiamento di tensione si stabilizzerà. Quindi lavare via il farmaco di provocazione in modo che il tono del tessuto raggiunga una linea di base.

Lasciare riposare il tessuto a questo tono di base per circa 10 minuti ora per un bagno al veicolo in questo caso, acqua nell'altro. Aggiungere una quantità sufficiente di prazocina per una concentrazione di cinque nanomolari nella vasca da bagno. Lasciare incubare i bagni di tessuto per un'ora senza lavarli.

Nel frattempo, riparare la fenolicina a un'ampia gamma di concentrazioni lungo una curva logaritmica. Dopo un'ora, aggiungere l'agonista della fenilrina in concentrazioni crescenti al bagno per generare una risposta di concentrazione cumulativa. Dopo ogni aggiunta, attendere che la risposta tissutale si stabilizzi prima di aggiungere la concentrazione successiva.

Continuate a fare aggiunte fino a quando non cambiano più il tono del tessuto o fino a quando l'intera curva di risposta non si è stabilizzata. Piuttosto, l'aorta toracica è stata incubata nell'antagonista del recettore adrenergico alfa uno POZ sim per un'ora prima di aggiungere l'agonista adrenergico alfa uno fenilrina al bagno tissutale e generare curve di risposta cumulativa alla contrazione le contrazioni massime e metà massime della fenilrina. Sul solo veicolo i tessuti di controllo sono contrassegnati in verde.

La metà massima identifica la concentrazione efficace per il farmaco. Le stesse misure per il tessuto trattato con razina si vedono in nero. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come misurare la funzione della muscolatura liscia in un bagno di tessuto isolato.