Name: Valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali Utilizzando Serial Imaging endoscopica Live Mice (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Scopri come valutare l'efficacia di nuove terapie per patologie intestinali nei topi mediante endoscopia seriale non invasiva. Questo metodo consente il monitoraggio longitudinale delle risposte individuali ai trattamenti.

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Vorremmo ringraziare CSL Ltd. per aver supportato l'acquisto dell'attrezzatura per endoscopia. La ricerca nel laboratorio di ME è supportata dal Ludwig Institute for Cancer Research, e i laboratori di TP e ME sono supportati dal Victorian State Government Operational Infrastructure Support e dal National Health and Medical Research Council of Australia. ME è un ricercatore senior del NHMRC.

L&#39;Istituto Walter e Eliza Hall of Medical Research commissione etica degli animali approvato ciascuna delle procedure descritte in questi protocolli. 1. Preparazione di topi sperimentale <ol><li> Comporre coorti sperimentali di almeno 4 genere abbinati 6-8 settimane di età C57BL / 6 topi (M. musculus) che vengono allevati e ospitati nello stesso patogeno specifico gratuito (SPF) stabulario / stanza, di un&#39;alimentazione autoclave e acqua. L&#39;uso di topi femmina permetterà co-housing di topi da diverse linee, numeri di casella limite, e ridurre la variazione della gabbia a gabbia. </li><li> Assicurarsi che i topi sono almeno 6 settimane di età per consentire le procedure endoscopiche con guaina di diametro endoscopia 3,0 millimetri. </li><li> Utilizzare topi dello stesso background genetico, e, se possibile, da gabbie memorizzati sul stesso rack per ridurre variazioni associate con la microflora intestinale. Variazioni nella microflora tra strutture di polizia dovrebbero essere presi in considerazione when determinare i pertinenti topi di controllo e genotipi per ogni esperimento 22. </li><li> Mark topi ritagli orecchio / punta, tatuaggi, o simili per consentire una facile identificazione. </li><li> Pesare topi il giorno 0, per determinare i pesi di base sperimentale. </li><li> Eseguire endoscopia (vedi sezione 5) di topi al giorno 0 per registrare fenotipi colon di base. </li></ol> 2. Pre-Trial clinico in un danno epiteliale e acuta Colite Modello <ol><li> Preparare una soluzione dell&#39;agente terapeutico da testare. Per therapeutics forniti da gavage orale (po), preparare soluzioni per un volume massimo di 100 microlitri. Per therapeutics forniti da intraperitoneale (ip) iniezione, preparare soluzioni per un volume massimo di 200 microlitri. NOTA: ripetuta ip o po somministrazione del farmaco per periodi prolungati di tempo può portare a comportamenti alterato mouse. Alternare il sito di iniezione ip per evitare disagi prolungati. Per la somministrazione po, fornire i topi con AUTOCsemi di girasole bagnai come &#39;festa&#39; per ridurre al minimo l&#39;associazione avversa con la procedura di sonda gastrica. </li><li> Il giorno 1, amministrare il terapeutico di interesse (preparata al punto 2.1) e adeguati controlli del veicolo. Nell&#39;esempio fornito (Figura 6A), 5 mg di umana ricombinante (rh) iInterleukin (IL) -11 proteina è stato sciolto in 200 microlitri tampone fosfato (PBS) e somministrato ip </li><li> Determinare i tempi e la frequenza delle amministrazioni, che saranno dipendenti dal profilo farmacocinetico stabilito per il reagente terapeutico che viene testato. Figura 1 delinea trattamento profilattico utilizzando iniezioni ip due volte al giorno nel corso dell&#39;esperimento. </li><li> Monitor, compresi consistenza delle feci e la presenza di sangue, e pesare ciascun topo giornaliera. Nei giorni di trattamento, di peso dovrebbe coincidere con la somministrazione del farmaco terapeutico per minimizzare stress per i topi provocati da manomissione ripetuta. </li&gt; <li> Il giorno 3, preparare 2,5% (2,5 g / 100 ml) soluzione DSS in acqua potabile regolarmente fornito ai topi dal stabulario. Circa 5 ml / mouse / è necessaria giorno di soluzione DSS per l&#39;esperimento. Il consumo dell&#39;acqua DSS può cambiare se la temperatura ambiente del stabulario oscilla. NOTA: DSS è un irritante e devono essere maneggiati secondo le istruzioni MSDS. </li><li> Fornire DSS fresco al topi ad libitum in bottiglie di acqua pulita per 5 giorni consecutivi. La sera del giorno 5, fornire acqua potabile normale in aggiunta a pellet cibo purè e un integratore proteico fornito in piccole capsule di Petri (100 g pellet alimentari / 10 g frullato di proteine ​​/ 10 ml acqua). Questo previene la disidratazione e assiste minimizzando grave perdita di peso. </li><li> Euthanize topi di CO 2 intossicazione e raccogliere i tessuti per la successiva analisi istologica, la mattina del giorno 8, o quando i topi vivono ≥15% perdita di peso per più di tre cgiorni onsecutive, a seconda di quale si verifica prima. NOTA: regolare la dose DSS tra il 1-4% (w / v) a seconda della microflora del stabulario e il lotto DSS. Effettuare, analisi per lotti di routine per stabilire il dosaggio DSS appropriato e variazione aggirare da lotto a lotto. Il dosaggio adeguato dovrebbe essere basata sulla perdita di peso (non superiore al 15% del peso originale) e confermato la colite istopatologia. </li></ol> 3. Pre-Trial clinico in una colite cronica o colite associata Cancer Modello <ol><li> Per il modello colite cronica cominciare dal punto 3.7. </li><li> Per il modello di cancro colite associata (CAC), il giorno 1, iniettare ogni mouse con 10 mg / kg (w / w) azoxymethane (AOM, 250 ml, ip). NOTA: AOM è una sostanza cancerogena e deve essere maneggiato secondo le istruzioni MSDS. </li><li> Le soluzioni madre di OMA sono preparati come 10 mg / ml aliquote e conservati a -20 ° C. Il giorno dell&#39;iniezione, la soluzione madre AOM viene scongelato e diluito a 1 mg / ml in PBS. Congelamenti e scongelamenti ripetuti della soluzione madre AOM dovrebbero essere evitati. </li><li> La dose AOM può essere regolato tra 8-12 mg / kg. Prove per lotto di routine è necessario per stabilire il dosaggio appropriato AOM per aggirare tossicità per topi a causa di variazioni da lotto a lotto. </li><li> Durante i giorni 1-7 seguenti pesi amministrazione AOM saranno stabili e per questo motivo il monitoraggio di peso può essere omessi durante Giorni 1-7 per evitare manipolazione degli animali che espellono metaboliti citotossici nelle loro feci. </li><li> Il giorno 7 tutte le lenzuola deve essere cambiato secondo procedure citotossici. Una volta che il cambio biancheria è completo, gli animali non richiedono più procedure di gestione citotossici, in quanto non saranno più solo eliminando i metaboliti citotossici. </li><li> Il giorno 8, preparare 2,5% (2,5 g / 100 ml) soluzione DSS (come descritto nel passo 2.5) e fornire ai topi ad libitum. </li><li> Pesare topi giornaliera tutto l&#39;esperimento e monitor per segni di malattia, tra cui fu increspator, incurvando, feci sanguinolente e movimento ridotta. </li><li> Il giorno 13, rimuovere la soluzione DSS e fornire i topi con acqua potabile normale fino al giorno 28. Giorni 8-28 costituiscono un &#39;ciclo&#39; del protocollo cronica colite / CAC. </li><li> Nei giorni 13-28, quando i topi sono dati normale acqua potabile, fornire i topi con pellet cibo purè e un integratore proteico fornito in piccole capsule di Petri (100 g pellet cibo / 10 g frullato di proteine ​​/ 10 ml acqua). Questo previene la disidratazione e assiste minimizzando grave perdita di peso. NOTA: Gli integratori di proteine ​​in poltiglia non devono essere fornite quando i topi stanno ricevendo DSS-contenente acqua potabile, al fine di garantire la coerenza dei consumi DSS. </li><li> Il giorno 20 eseguire il secondo esame endoscopico per monitorare la salute individuale del mouse (vedi sezione 5). </li><li> Il giorno 29 la ripetizione del ciclo di DSS (Ciclo 2: 2,5% (w / v) DSS fornito durante giorni 29-33 e acqua potabile normale durante giorni 34-50). </li><li> Il giorno 40 eseguire il Third esame endoscopico per monitorare la salute individuale del mouse e determinare carico tumorale (vedi sezione 5). </li><li> Se non tumori sono visibili mediante endoscopia il giorno 40, iniziare un terzo ciclo DSS nei giorni 50-72 (Ciclo 3: 2,5% (w / v) DSS fornito durante giorni 50-55 e acqua potabile normale durante giorni 56-72). Generalmente, i tumori sono visibili dal giorno 40 e quindi il terzo ciclo di DSS può essere omesso. </li><li> Una volta che i tumori diventano visibili con l&#39;esame endoscopico, assegnare ogni mouse un punteggio tumore endoscopica (vedi sezione 5) e assegnare singoli topi coorti con simili massa tumorale di base. </li><li> Il giorno 42 (o quando i tumori sono visibili), gestire il composto terapeutico o controllo del veicolo in questione (vedi sezione 2.2). La tempistica delle dosi dipenderà dal profilo farmacocinetico della terapeutica. Un esempio di un trattamento di intervento iniettato ip tre volte alla settimana in topi con tumori stabiliti sono fornite (Figura 2). </li><li> Eseguire eesami ndoscopic una volta a settimana per la durata del trattamento terapeutico di monitorare il carico tumorale. Generalmente, 4 settimane di un trattamento terapeutico è sufficiente osservare una risposta al trattamento obiettiva. Dopo la cessazione del trattamento, una coorte di topi può anche essere controllato da endoscopia per recidiva del tumore. </li><li> Euthanize topi di CO 2 intossicazione e raccogliere i tessuti per l&#39;analisi biochimica e / o istologico, la mattina del giorno 72 o quando i topi vivono ≥15% perdita di peso per più di tre giorni consecutivi, a seconda di quale si verifica prima. </li></ol> 4. Pre-Trial clinico in una sporadica cancro colorettale Modello <ol><li> Il giorno 1, iniettare ogni ip mouse con 10 mg / kg AOM (vedi punto 3.2). La dose AOM può essere regolato tra 8-12 mg / kg. Prove per lotto di routine è necessario per stabilire il dosaggio appropriato AOM per aggirare tossicità per topi a causa di variazioni da lotto a lotto. </li><li> Ripetere l&#39;iniezione il primo giorno di ogni settimanaper i seguenti 5 settimane (Figura 3). I topi devono essere trattati secondo le procedure di sicurezza citotossici per l&#39;intero 6 settimane. </li><li> Pesare ogni mouse sul giorno dell&#39;iniezione AOM per ridurre al minimo disagio per i topi causati da un utilizzo ripetuto. NOTA: AOM è una sostanza cancerogena e deve essere maneggiato secondo le istruzioni MSDS. </li><li> Tutti gli animali devono essere trattati secondo le procedure di sicurezza citotossici per le 6 settimane di AOM iniezioni ip necessari per questo protocollo. </li><li> Durante la settimana 8 eseguire un esame endoscopico per monitorare i tumori emergenti (vedi sezione 5). L&#39;esame endoscopico dovrebbe essere effettuata ogni due settimane fino a quando i tumori diventano visibili. In generale, wild-type C57Bl / 6 animali cominciano a sviluppare tumori di circa 40 settimane dopo la somministrazione iniziale di OMA. </li><li> Una volta che i tumori diventano visibili con l&#39;esame endoscopico, assegnare ogni mouse un punteggio tumore endoscopica (vedi sezione 5) e assegnare topi individuo a una coorte di simile<html> massa tumorale prima dell&#39;inizio del trattamento terapeutico. </li><li> Durante la settimana 40 (o quando i tumori sono la prima visibile), gestire il composto terapeutico o il controllo del veicolo in questione. </li><li> La tempistica delle dosi dipenderà dal profilo farmacocinetico della terapeutica (vedere la fase 2.1). Un esempio di un trattamento di intervento iniettato ip 3 volte alla settimana in topi con tumori stabiliti sono fornite (Figura 3). </li><li> Eseguire endoscopica esame settimanale per la durata dei periodi di trattamento terapeutico per monitorare il carico tumorale. Generalmente, 4 settimane di un trattamento terapeutico è sufficiente per una risposta trattamento obiettivo. Dopo la sospensione del trattamento, una coorte di topi può anche essere controllato da endoscopia per recidiva del tumore. </li><li> Euthanize topi di CO 2 intossicazione e raccogliere i tessuti per l&#39;analisi biochimica e / o istologico del colon e tumori durante la settimana 45, oa seguito di 4 settimane di terapia. </li></ol>ve_title &quot;&gt; 5. esami endoscopici <ol><li> L&#39;apparecchiatura endoscopia deve essere montato secondo le procedure standard 16. </li><li> Sterilizzare e pulire la sonda dell&#39;endoscopio con il 70% di etanolo o un lubrificante antibatterico. </li><li> I video possono essere registrati con un computer portatile o desktop e il software multimediale standard, come iMovie. Un monitor di computer standard, piuttosto che un monitor grado medico, è sufficiente a visualizzare il colon durante la procedura endoscopica (Figura 4). </li><li> Anestetizzare gruppi di 5-6 topi simultaneamente in una camera con 3% isoflurano in 100% O 2 ad una velocità di 0,2-0,4 L / min. Una volta che i topi sono anestetizzati, che è confermato da pizzico punta; i livelli di isoflurano dovrebbero essere modificate per 0,5-2% per la manutenzione. </li><li> Rimuovere un individuo del mouse dalla camera, e posizionarlo lato ventrale con la testa fissata in un naso-cono. Anestesia complete devono essere monitorati e le zampe posteriori devono essere regolati in modo che siano stretched dietro il mouse. </li><li> Mettere una pomata veterinario sugli occhi dei topi per prevenire la secchezza. </li><li> Tenere la coda del topo dove incontra la colonna vertebrale inferiore a rivelare chiaramente l&#39;ano. Inserire la guaina endoscopio rigido in un bicchiere di acqua e regolare il flusso d&#39;aria per consentire lo svincolo di una piccola bolla alla volta. </li><li> Il flusso d&#39;aria permetterà colon per gonfiare. Se il flusso d&#39;aria è troppo forte, l&#39;aria viene pompata nello stomaco del mouse. Non è necessaria alcuna ulteriore lubrificazione. </li><li> Inserire con cautela la guaina endoscopio rigido nel retto. In generale, l&#39;endoscopio può essere inserito fino a 3 cm, a quel punto i due punti in curve topi e non è accessibile al endoscopio rigido. </li><li> Una difficoltà comune durante le procedure di endoscopia è il blocco di accesso al lume del colon a causa di materia fecale. Evitare questo delicatamente massaggiare la pancia di topi prima della procedura per incoraggiare la defecazione, o accuratamente manovrando l&#39;endoscopio intorno al Fecaquestione l durante la procedura. Peristalsi può anche verificare, durante la quale l&#39;endoscopio deve essere tenuto in posizione fino muscolatura colon rilassa. </li><li> Avviare la registrazione video in qualsiasi fase della procedura di endoscopia. Punteggio malattia può essere registrato da un assistente esperto durante la procedura, o in un punto secondo momento dai file video. </li><li> Dopo l&#39;esame endoscopico, restituire i topi alla loro gabbia e monitorarli durante il recupero dall&#39;anestesia. Gli animali sono generalmente svegli e mobili entro 2 minuti dopo la rimozione dal isoflurane amministrare naso cono. </li><li> Assicurarsi che queste procedure sono eseguite da uno scienziato esperto. Ogni procedura di endoscopia dura circa 2 min per mouse. </li></ol> 6. Malattia Scoring <ol><li> Per monitorare la colite, segnare video per la murino endoscopica Indice di colite Gravità (MEICS) 16, che documenta i cambiamenti nel (i) lo spessore della parete del colon indicato dalla trasparenza, (Ii) la consistenza delle feci, (iii) l&#39;integrità dei vasi sanguigni e la presenza, (iv) ulcere e aree di rigenerazione che presentano in modo granulare, (v) sanguinamento indicati da fibrina depositi (figura 5a). </li><li> Per monitorare il carico tumorale, segnare video per incidenza di tumori e le dimensioni. La dimensione del tumore è determinata dal diametro del lume del colon occupati dal tumore 16 (figura 5b). E &#39;comune usare entrambi i parametri colite e tumore punteggio per un singolo mouse. Utilizzando l&#39;endoscopia, tumori individuali e la salute della mucosa del colon può essere monitorata nel tempo, fornendo una lettura-out per il successo di nuove terapie in un singolo animale. </li><li> (Opzionale) I fermi immagine possono essere estratti dal video per la generazione di figure rappresentative (Figura 6). </li></ol>

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<li>Viennois, E., Chen, F., Laroui, H., Baker, M. T., Merlin, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+inhibits+the+activities+of+both+polymerase+and+reverse+transcriptase%3A+lithium+chloride+purification%2C+a+rapid+and+efficient+technique+to+purify+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Res+Notes%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate inhibits the activities of both polymerase and reverse transcriptase: lithium chloride purification, a rapid and efficient technique to purify RNA.</a> BMC Res Notes. 6, 350(2013).</li>
<li>Kerr, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dextran+sodium+sulfate+inhibition+of+real-time+polymerase+chain+reaction+amplification%3A+a+poly-A+purification+solution%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Dextran sodium sulfate inhibition of real-time polymerase chain reaction amplification: a poly-A purification solution.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 344-348 (2012).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I tre protocolli descritti metodi contorno di induzione affidabile e riproducibile di colon patologia malattia nei topi. In combinazione con il controllo endoscopico di routine e le strategie di intervento delineate qui, questi protocolli forniranno potente visione pre-clinico sull&#39;efficacia di terapie. I nostri laboratori di routine usano tutti questi protocolli per monitorare il successo delle nuove terapie 10,23,24. Ci sono una serie di considerazioni per la scelta di un modello animale preclinico per testare nuove terapie. Questi includono pertinenza del modello per la malattia umana, e il contributo del microambiente tumorale all&#39;azione proposta del bersaglio terapeutico. Qui forniamo tre protocolli per un intervento terapeutico in modelli di malattia intestinale stabiliti. Questi modelli sono riproducibili e la consegna dei reagenti per indurre la malattia è facile da gestire. È importante sottolineare che i modelli sono molto importantia più sfaccettature e le fasi di colite insorgenza, e di iniziazione e la progressione tumorale. I ricercatori dovrebbero prendere in considerazione la background genetico dei ceppi di topi utilizzati nella progettazione di esperimenti, come la suscettibilità alla malattia indotta da DSS e / o AOM può variare notevolmente 25. Inoltre, diverse comunità microbiche possono avere capacità metaboliche differenti nel contesto di AOM, che viene metabolizzato dai batteri. Si avverte di non usare diverse coorti di topi che sono nati in diverse strutture di animali (compresi i fornitori commerciali) in un singolo esperimento. Allo stesso modo, la diversa microflora nei topi utilizzati da strutture diverse può suscitare diverse reazioni host DSS-indotta danni barriera epiteliale 11. Inoltre, l&#39;analisi del caso di tessuto (per esempio la purificazione RNA) dovrebbe essere considerato, in quanto la capacità di DSS di inibire la trascrittasi inversa avrà un impatto sulla successiva analisi molecolare 26,27. <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; endoscopia Mouse è una tecnica all&#39;avanguardia per monitorare ripetutamente l&#39;insorgenza della malattia e la progressione in un individuo mouse. La possibilità di registrare video e estrarre le immagini ancora permette un facile monitoraggio di molteplici parametri di malattia e tumori. Oltre a migliorare il benessere degli animali, controllo endoscopico riduce anche la necessità di più coorti di topi sperimentali, che tradizionalmente sono stati abbattuti a diversi punti temporali per monitorare esito della malattia. Il sistema di punteggio MEICS non è un sostituto per l&#39;analisi istopatologica, ma fornisce un mezzo alternativo per monitorare danni alla salute degli animali e delle mucose in topi vivi. Endoscopia Mouse è una tecnica di laboratorio specializzato, e tutte le procedure deve essere eseguita da personale specializzato per garantire manipolazione e di trattare i topi, così da fornire una qualità costante nelle immagini utilizzate per il punteggio malattia. Nelle mani di personale qualificato, abbiamo scoperto che l&#39;endoscopia induce poco o nessun danno al Tumors che causerebbero emorragia intra-tumorale. Per i protocolli terapeutici delineati, consideriamo endoscopia molto vantaggioso, in quanto fornisce un modo per determinare il carico tumorale iniziale, e ci permette di coorti di gruppo di animali con massa tumorale simili prima della somministrazione di un farmaco terapeutico. Monitoraggio sequenziale dei topi consente ai ricercatori di determinare l&#39;efficacia di nuove terapie presto, con la possibilità di terminazione esperimenti falliti in modo tempestivo. Come la nostra comprensione della malattia infiammatoria intestinale e tumori del colon-retto anticipo, saranno individuati nuovi bersagli per la terapia. Modelli animali appropriati saranno parte integrante di garantire che i nuovi più promettenti terapie sono spostati verso le sperimentazioni cliniche.

Il cancro colorettale (CRC) è la 4 ° causa più comune di tumore maligno in tutto il mondo 1. Nonostante i significativi progressi nella nostra comprensione della base familiare di questa malattia, predisposizione genetica contribuisce solo al ~ 20% dei casi CRC 2. Il resto sono attribuiti a numerosi fattori estrinseci e ambientali, tra cui l&#39;infiammazione cronica. Negli esseri umani, il legame tra infiammazione cronica e il cancro del colon è evidente nella colite ulcerosa (UC) pazienti, che hanno un rischio maggiore di sviluppare il cancro del colon-colite associata (CAC), a seconda della durata, l&#39;estensione e la gravità della malattia infiammatoria 3 -5. Di conseguenza, nuove terapie sono in sviluppo per controllare la risposta immunitaria e la produzione di fattori di crescita associato promuovere dal tumore microambiente infiammatorio 6-8. Vi è una richiesta crescente di appropriati modelli animali pre-clinici per caratterizzare l&#39;efficacia terapeutica diquesti farmaci contro lo sviluppo e la progressione della malattia. Modelli murini hanno inequivocabilmente dimostrato che il microambiente infiammatorio contribuisce CRC progressione, anche in assenza di infiammazione palese 9,10. Questi modelli includono l&#39;uso di sodio polisaccaride destrano solfato (DSS), disponibile in acqua potabile di topi, per modellare danno epiteliale e malattia acuta e cronica infiammatoria intestinale (IBD) 11,12. Anche se il meccanismo con cui DSS induce danno della mucosa e colite non è completamente noto, alcuni studi suggeriscono che DSS inibisce le attività della trascrittasi inversa e ribonucleasi cellulari all&#39;interno delle cellule, o promuove la formazione di complessi nano-lipidico, che si fondono con la membrana del colon che porta al danno epiteliale 13,14. Le modifiche al modello di serie DSS hanno inoltre fornito informazioni significative sui meccanismi con cui le cellule epiteliali del colon mantenere l&#39;omeostasi tissutale e regolaritàritardo mucose risposte immunitarie 15. La somministrazione intraperitoneale di azoxymethane (AOM) da solo, o in combinazione con DSS, fornisce un modello per l&#39;esame l&#39;interazione tra mutazioni somatiche nella mucosa epiteliale e il microambiente infiammatorio e stromale 16,17. AOM è un metabolita della sostanza cancerogena 1,2-dimetilidrazina (DMH) che non derivano direttamente in mutazioni del DNA. Invece, AOM è idrolizzato a methylazoxymethanol (MAM) dalla isoforma citocromo CYP2E1 nel fegato, dove MAM è coniugato con acido glucuronico e poi trasportato nell&#39;intestino attraverso le secrezioni biliari 18. Si pensa che il batterica β-glucuronidasi contribuisce al degrado della MAM conseguente alchilazione DNA e l&#39;accumulo di mutazioni in cellule epiteliali 19. La maggior parte dei tumori del colon-AOM indotta porto mutazioni missense nel gene codificante β-catenina, rendendo la proteina resistente alla degradati proteasomail che si traduce in aberrante attivazione del pathway Wnt canonica di segnalazione 20. Quando l&#39;attività di AOM è combinata con il danno della mucosa suscitato dal DSS, la guarigione della ferita conseguente risposta crea un microambiente che favorisce la crescita e l&#39;espansione dell&#39;epitelio mutagenizzato. In una variante di questo modello, la somministrazione ripetuta di AOM solo per un periodo di diverse settimane può essere usata per modellare cancro colorettale sporadica, in assenza di DSS-indotta colite 10,17. Questi due modelli gratuiti forniscono impostazioni sperimentali per studiare rispettivamente CAC e sporadici CRC, entrambi associati a un microambiente tumorale pro-infiammatoria 10. L&#39;uso dell&#39;endoscopia seriale nei topi è stato lanciato da Becker e colleghi 21, e consente il monitoraggio longitudinale della colite e la progressione tumorale. Qui forniamo tre protocolli pre-clinici sulla base di DSS-indotta danno della mucosa e / o AOM-mediata tumor induzione per indurre riproducibile specifiche patologie del colon. Il primo protocollo descrive indurre danno della mucosa acuta in risposta alla somministrazione DSS a suscitare molte delle caratteristiche istopatologiche associate a IBD. Il secondo protocollo si basa su tre cicli consecutivi di somministrazione DSS per imitare i razzi di infiammazione comunemente osservato nei pazienti IBD, e può essere eseguito in combinazione con mutazioni AOM-indotta. Il protocollo finale si basa su sporadiche mutazioni epiteliali AOM-indotta. Per ciascuno di questi protocolli, espandiamo sulle procedure standard rilevanti per comprendere i metodi di intervento profilattici e terapeutici che abbiamo sviluppato per monitorare l&#39;efficacia di nuovi farmaci.

<table><tbody><tr><td>Destrano solfato di sodio (MW 36.000-50.000)</td><td>MP Biochemicals</td><td>160110</td><td>Richiede test in lotti.</td></tr><tr><td>Azoxymethane</td><td>Sigma</td><td>A5486-100MG</td><td>Richiede il test in batch.</td></tr><tr><td>Frullato proteico alla vaniglia</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Disponibile nelle farmacie ospedaliere.</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>PPC</td><td>M60303</td><td>Questo è un reagente limitato, che deve essere conservato sotto chiave.</td></tr><tr><td>70% etanolo</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Reagente standard da laboratorio.</td></tr><tr>Sistema <td></td><td></td><td></td><td>miniendoscopico Coloview</td></tr><tr><td>Endovision Tricam</td><td>Karl Storz</td><td>20212001-020</td><td></td></tr><tr><td>Sorgente luminosa Xenon 175 con pompa antiappannamento</td><td>Karl Storz</td><td>20134001</td><td></td></tr><tr><td>HOPKINS Straight Forward Telescope</td><td>Karl Storz</td><td>64301AA</td><td></td></tr><tr><td>Guaina endoscopica (diametro totale 3 mm)</td><td>Kalr Stroz</td><td>61029C</td><td></td></tr><tr><td>Cavo luce in fibra ottica</td><td>Kalr Stroz</td><td>69495ND</td><td></td></tr><tr><td>Software per computer e lettore multimediale</td><td>Apple</td><td></td><td>iMovie</td></tr><tr><td>Scale</td><td>Any</td><td></td><td>Qualsiasi bilancia adatta per pesare i topi.</td></tr></tbody></table>

valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali utilizzando serial imaging endoscopica live mice

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

I modelli animali di malattia infiammatoria intestinale (IBD) e cancro del colon-retto (CRC) hanno fornito informazioni significative sui meccanismi intrinseci ed estrinseci delle cellule che contribuiscono all'insorgenza e alla progressione delle malattie intestinali. L'identificazione di nuove molecole che promuovono queste patologie ha portato a una raffica di attività focalizzata sullo sviluppo di potenziali nuove terapie per inibirne la funzione. Di conseguenza, vari modelli murini preclinici con un sistema immunitario intatto e un microambiente stromale sono ora ampiamente utilizzati. Qui descriviamo tre protocolli sperimentali per testare l'efficacia di nuove terapie in modelli preclinici di (1) danno acuto alla mucosa, (2) colite cronica e/o cancro del colon associato a colite e (3) cancro colorettale sporadico. Delineiamo anche le procedure per l'esame endoscopico seriale che possono essere utilizzate per documentare la risposta terapeutica di un singolo tumore e per monitorare la salute dei singoli topi. Questi protocolli forniscono piattaforme sperimentali complementari per testare l'efficacia di composti terapeutici che si sono dimostrati ben tollerati dai topi.

La perdita di peso viene utilizzato come parametro standard per monitorare malattia associata con colite, che viene normalmente utilizzato per monitorare la salute generale dei topi. Gli animali in genere mantengono il loro peso, mentre DSS-contenente acqua viene somministrato, e cominciano solo a perdere peso quando sono restituiti ad acqua potabile normale. Parametri accettabili di perdita di peso devono essere fissati secondo comitato etico animali dell&#39;istituzione. Per evitare disidratazione associata a diarrea prolungata, utilizzare la fornitura di routine di mash (pellets alimentari schiacciate e mescolato con acqua potabile) integrato con un frullato di proteine ​​in aggiunta alla normale acqua potabile. Come si possono utilizzare una anestesia alternativa, ketamina / xylazina o agenti similari, se l&#39;apparecchiatura isoflurano non è disponibile. A causa della natura rigida dell&#39;endoscopio, queste procedure consentono solo per la visualizzazione dei più distali 3 cm di colon mouse. Endoscopi più recenti con<html> capacità (inclusi flessibilità e fluorescenza) sono disponibili a seconda delle esigenze dell&#39;esperimento. Tuttavia, dato che gli effetti deleteri di DSS sono limitati principalmente al colon distale di topi, con lieve patologia osservata nel colon mezzo, l&#39;endoscopio rigida non ostacoli controllo della salute mucosa dei singoli topi. Anche se si descrive un protocollo per il trattamento profilattico di acuta colite DSS-indotta, questo protocollo può essere facilmente modificato per testare strategie di trattamento di intervento. L&#39;efficacia di un farmaco progettato per alleviare danno epiteliale e colite può essere monitorato longitudinalmente in singoli topi e quantificati in base ai parametri descritti punteggio (Figura 5). Questo è vantaggioso rispetto ai modelli tradizionali sperimentali, che richiedono abbattimento dei topi in punti temporali specifici durante il protocollo sperimentale, e non consente la caratterizzazione della risposta malattia ad un trattamento nel tempo. <html> t &quot;&gt; studi clinici sull&#39;uomo hanno evidenziato una notevole variabilità come diversi tumori in un singolo paziente rispondere ai trattamenti. Le procedure descritte qui forniscono un mezzo per controllare il carico tumorale complessiva, nonché la risposta al trattamento di tumori individuali nel corso di un esperimento. E &#39;importante considerare che i protocolli di intervento che si descrivono per i modelli di cancro non tengono conto degli effetti di una terapia su tumore iniziazione. protocolli di profilassi, con il trattamento previsto prima di quando i tumori diventano visibili mediante endoscopia, sono necessarie per ottenere tali informazioni. I protocolli descritti qui forniscono informazioni sugli effetti terapeutici sul sulla progressione (misurati dimensione del tumore) di singoli tumori. Tumor regressione può essere indicato anche da una riduzione del numero di tumori visibili. g &quot;/&gt; Figura 1:. Monitorare l&#39;efficacia di una terapia trattamento profilattico in un modello di danno acuta del colon Il protocollo sperimentale (a) richiede otto giorni dall&#39;inizio alla fine. Therapeutics vengono somministrati (b) dal giorno 1 per i trattamenti profilattici. DSS è fornita in acqua potabile (c) dal giorno 3 del protocollo sperimentale. Endoscopia viene eseguita (d) per monitorare la progressione della malattia negli animali. Timepoints suggerite includono Giorno 0 (non trattato) e 2 ° giorno (sorveglianza sanitaria), giorno 5 e 8 (per determinare il carico di malattia). L&#39;esperimento viene terminato (e) al mattino del giorno 8. In un topo wild-type (f) la progressione della malattia aumenta nel tempo. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig2highres.jpg" /> Figura 2: Monitoraggio l&#39;efficacia della terapia di intervento in un modello of colite associato cancro. Il protocollo sperimentale (a) richiede 72 giorni dall&#39;inizio alla fine. Therapeutics (B) vengono somministrati a topi con tumori stabiliti dal Day 46 per i trattamenti di intervento. AOM (c) viene iniettato il giorno 1 e DSS è fornito in acqua potabile nel corso di tre cicli del protocollo sperimentale, iniziando il giorno 8. endoscopia (d) viene eseguita per monitorare la progressione della malattia in animali. Timepoints suggerite includono Giorno 0 (non trattato), Day 20 (sorveglianza sanitaria), e il giorno 40 (per gli animali del gruppo secondo il carico tumorale). Endoscopia viene eseguita settimanale nel corso del trattamento terapeutico per monitorare esiti della malattia. L&#39;esperimento (e) termina la mattina del giorno 72. In una wild-tipo di mouse (f) il carico tumorale aumenta dal giorno 40 in poi. <img alt="Figura 3"src = &quot;/ files / ftp_upload / 52.383 / 52383fig3highres.jpg&quot; /&gt; Figura 3:. Monitorare l&#39;efficacia della terapia di intervento in un modello di cancro colorettale spontanea Il protocollo sperimentale (a) richiede&gt; 50 settimane dall&#39;inizio alla fine. Therapeutics (B) vengono somministrati a topi con tumori stabiliti per i trattamenti di intervento. AOM (c) viene iniettato il Giorno 1, e poi settimanalmente per 6 iniezioni consecutive nel corso del protocollo sperimentale. Endoscopia (d) viene eseguita per monitorare la progressione della malattia in animali. Timepoints suggerite includono Giorno 0 (non trattato) e Settimana 8 (monitoraggio del tumore) e bisettimanale lì dopo (per stabilire il carico tumorale). Endoscopia viene eseguita settimanale nel corso del trattamento per monitorare risultati terapeutici. L&#39;esperimento (e) termina in settimana 50. In una wild-tipo di mouse (f) il carico tumorale aumenta da Settimana 40 in poi. </<html> p&gt; <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" width="650" /> Figura 4:. Attrezzatura set-up The (a) set-up sperimentale per l&#39;unità endoscopica, con i singoli pezzi di attrezzature indicati. L&#39;endoscopio rigido (b), con i singoli componenti indicati. Scala bar = 2,5 centimetri. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig4highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a> <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig5highres.jpg" width="650" /> Figura 5:. Punteggio parametri di malattia di endoscopia Un profilo (a) del Murine endoscopica Indice di colite Gravità (MEICS). Cenni (b) dei singoli parametri del tumore di punteggio.es / ftp_upload / 52.383 / 52383fig5highres.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura. <img alt="Figura 6" src="/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" width="650" /> Figura 6: trattamenti terapeutici Rappresentante Rappresentante di perdita di peso, immagini endoscopiche e spartiti per:. (A) Acute DSS-indotta danno della mucosa (b) I tumori che si sono sviluppate seguendo il protocollo / DSS AOM (c) I tumori che si sono sviluppate in seguito alla sequenziale.. protocollo AOM. N = 3 topi per gruppo. * P &lt;0.05, *** P &lt;0,001 (T-test di Student). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52383/52383fig6highres.jpg" target="_blank">Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.</a>

Descriviamo metodi per il monitoraggio longitudinale dell'efficacia delle terapie per il trattamento delle patologie del colon nei topi utilizzando un endoscopio rigido. Questo protocollo può essere facilmente utilizzato per la caratterizzazione della risposta terapeutica di un singolo tumore in topi vivi e anche per il monitoraggio di potenziali recidive di malattia.

Valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali Utilizzando Serial Imaging endoscopica Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è testare l'efficacia di nuove terapie in modelli di colite e cancro inducendo la malattia nei topi per studiare trattamenti in grado di inibire la patologia indotta. Il trattamento terapeutico viene somministrato in modo profilattico. In questo video, viene utilizzata la proteina ricombinante umana dell'interleuchina 11; successivamente, il sodio dextrano solfato (DSS) viene somministrato nell'acqua da bere per indurre danni acuti alla mucosa e molte delle caratteristiche istopatologiche associate alla malattia infiammatoria intestinale.In seguito, i cambiamenti della malattia vengono monitorati mediante endoscopia al fine di determinare l'efficacia terapeutica. In definitiva, i risultati mostrano una riduzione del carico patologico sulla base del monitoraggio endoscopico e del punteggio attribuito dopo il trattamento terapeutico di topi con patologia indotta. Il vantaggio principale di questa tecnica è la possibilità di monitorare un singolo topo nel corso dell'esperimento, a differenza delle tecniche standard di tipo istologico.È necessario esaminare diversi gruppi di animali. Questa metodologia può aiutarci a porre e rispondere a domande fondamentali riguardo l'infiammazione e il cancro del colon, e in particolare a cercare di stabilire se una migliore manipolazione della segnalazione delle citochine possa influenzare il decorso della malattia. È importante utilizzare questi modelli preclinici per valutare l'efficacia di farmaci e composti, il che ci permette effettivamente di sottoporre lo stesso topo a test in diversi momenti e verificare se tali composti presentano un'attività. Dimostrerò questa procedura insieme a Giovanni CI Ciano, un tecnico animalista del nostro istituto. Nel primo giorno, somministrare il trattamento di interesse e i relativi controlli con veicolo appropriato. In questa dimostrazione, cinque microgrammi di proteina ricombinante umana di interleuchina 11 sono stati sciolti in 200 microlitri di soluzione salina tamponata al fosfato e somministrati per via intraperitoneale. Determinare i tempi e la frequenza delle somministrazioni, che dipenderanno dal profilo farmacocinetico stabilito per il reagente terapeutico in esame. Qui viene mostrato un schema di trattamento profilattico mediante iniezioni intraperitoneali due volte al giorno per tutta la durata dell'esperimento.Monitorare la consistenza delle feci e la presenza di sangue e pesare ogni topo quotidianamente. Nei giorni del trattamento, la pesatura dovrebbe coincidere con la somministrazione del farmaco terapeutico per minimizzare lo stress nei topi causato da manipolazioni ripetute. Al terzo giorno, preparare una soluzione di sodio dextran solfato (DSS) al 2,5% nell'acqua da bere normalmente fornita ai topi dal laboratorio animali.Sono necessari circa cinque millilitri per topo al giorno di soluzione DSS per l'esperimento. Il consumo dell'acqua con DSS può variare se la temperatura ambiente del ricovero per animali subisce fluttuazioni. Somministrare ai topi una soluzione DSS fresca.Aggiungere Liam in bottiglie d'acqua pulite per cinque giorni consecutivi alla sera del quinto giorno. Fornire acqua potabile normale insieme a pellet alimentari sminuzzati e un integratore proteico fornito in piccole capsule di Petri. Al mattino dell'ottavo giorno.Procedere con l'eutanasia del topo come descritto nel protocollo testuale per raccogliere tessuti da sottoporre successivamente ad analisi istologica. Eseguire test di routine su ogni lotto per determinare la dose appropriata di DSS ed evitare variazioni tra un lotto e l'altro. La dose appropriata deve essere basata sulla perdita di peso e confermata da istopatologia del colon.Regolare la dose di DSS tra l'1% e il 4% peso/volume, in base alla microflora dell'animale e al lotto di DSS. L'attrezzatura per endoscopia deve essere assemblata secondo le procedure standard.Sterilizzare e pulire la sonda dell'endoscopio con etanolo al 70% o con un lubrificante antibatterico. I video possono essere registrati utilizzando un computer portatile o fisso e un software multimediale standard come iMovie. Per visualizzare il colon durante la procedura endoscopica, è sufficiente un monitor informatico standard anziché un monitor di qualità medica.Anestetizzare contemporaneamente gruppi di cinque-sei topi in una camera con il 3% di fluorurano in ossigeno al 100% a un flusso di 0,2-0,4 litri al minuto. Una volta che i topi sono anestetizzati, condizione confermata dal pizzicamento dell’alluce, i livelli di fluorurano devono essere regolati tra lo 0,5 e il 2% per il mantenimento dell’anestesia. Rimuovere un topo singolo dalla camera e posizionarlo in posizione supina con la testa fissata in un cono nasale; si deve monitorare costantemente l’anestesia profonda e le zampe posteriori devono essere posizionate in modo che siano distese dietro il topo. Applicare un unguento oftalmico sugli occhi dei topi per prevenire l’essiccamento.Tenere la coda del topo nel punto in cui si congiunge alla colonna vertebrale inferiore per evidenziare chiaramente l'ano. Se il flusso d'aria è troppo intenso, consentirà al colon di gonfiarsi. L'aria verrà pompata nello stomaco del topo.Inserire con attenzione la guida dell'endoscopio rigido nel retto. In generale, l'endoscopio può essere inserito fino a tre centimetri, punto in cui il colon nei topi presenta una curvatura e non è più accessibile all'endoscopio rigido. Una difficoltà comune durante le procedure endoscopiche è l'ostruzione dell'accesso alla luz del colon a causa di materiale fecale.Evitare ciò massaggiando delicatamente l'addome dei topi prima della procedura per favorire la defecazione. Iniziare la registrazione video in qualsiasi fase della procedura di endoscopia. La valutazione del grado di malattia può essere registrata da un assistente esperto durante la procedura o in un momento successivo a partire dai file video; assicurarsi che queste procedure siano eseguite da un ricercatore esperto.Ogni procedura endoscopica richiederà circa due minuti per topo dopo l'esame endoscopico. Rimettere i topi nella loro gabbia e monitorarli durante il risveglio dall'anestesia. Gli animali in genere riprendono coscienza e mobilità entro due minuti dalla rimozione dal cono nasale per l'amministrazione di isoflurano. I risultati qui mostrati sono rappresentativi di topi esposti al DSS per modellare una malattia infiammatoria intestinale acuta.All'ottavo giorno del protocollo senza trattamento. I topi di tipo selvaggio presentano colite con perdita di peso come previsto, immagini endoscopiche e punteggi endoscopici della colite nei topi di controllo e in quelli sottoposti a trattamento con proteina ricombinante umana interleuchina 11 sono mostrati. La perdita di peso viene utilizzata come parametro standard per monitorare la malattia associata alla colite, che è comunemente impiegata per valutare lo stato di salute generale dei topi, come evidenziato dal ridotto punteggio endoscopico della colite.Una riduzione della malattia è evidente dopo il trattamento terapeutico di topi con patologia di malattia indotta. Pertanto, una volta padroneggiata questa tecnica, dovreste essere in grado di valutare il topo in circa due minuti. In generale, essa vi permette di verificare in modo molto efficace se tali trattamenti abbiano o meno un effetto sull'infiammazione e sul cancro in un modello preclinico rilevante.

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Ileo postoperatorio (POI) è una complicanza della chirurgia addominale che porta a un aumento della morbilità e degenza prolungata. Poiché le strategie profilattiche o terapeutiche mancano intensificazione della ricerca è necessaria. Pertanto abbiamo stabilito un modello di topo standardizzata e possibile esaminare la fisiopatologia di POI e di studiare i potenziali opzioni terapeutiche.

Valutazione funzionale della motilità intestinale e Wall infiammazione intestinale nei roditori: Analisi in un modello standardizzato di manipolazione intestinale

Negli ultimi anni, endoscopi di nuova generazione sono emersi come importanti ausili di ricerca diagnostici per la valutazione colite murina e tumori colorettali. Presentiamo qui un protocollo dettagliato per la valutazione endoscopica di infiammazione e tumori colorettali nei topi, nonché un sistema di punteggio romanzo che utilizza gli identificatori decimali per documentare la gravità endoscopica di colite e tumori colorettali.

La colonscopia flessibile in topi per valutare la gravità della colite e colon-retto Tumori Utilizzo di un sistema Validated endoscopica Scoring

Piccole tecniche di imaging consentono di animali esami diagnostici seriali e interventi terapeutici in vivo. Recentemente, l'ambito di applicazione è notevolmente ampliato e comprende attualmente la valutazione dello sviluppo del tumore del colon, la guarigione delle ferite e il monitoraggio di infiammazione. Questo protocollo illustra le diverse potenziali applicazioni di endoscopia murino.

Murino Endoscopia per In Vivo Guarigione Imaging Multimodale di Cancerogenesi e valutazione della ferita intestinale e infiammazione

Utilizzando topi reporter transgenici ed etichette fluorescenti iniettabili, la microscopia confocale a disco rotante intravitale a lungo termine consente la visualizzazione diretta del comportamento delle cellule mieloidi nell'adenoma intestinale nel modello di cancro colorettale ApcMin/+.

In tempo reale Imaging di cellule mieloidi Dynamics in Apc Min / + Intestinale tumori da Spinning Disk Microscopia confocale

Questo articolo descrive una tecnica di imaging video e una mappatura spazio-temporale ad alta risoluzione per identificare i cambiamenti nella regolazione neurale della motilità del colon nei topi adulti. Effetti sottili sulla funzione gastrointestinale (GI) possono essere rilevati utilizzando questo approccio in preparati tissutali isolati per migliorare la nostra comprensione della malattia gastrointestinale.

Video Imaging e mappe spazio-temporale per analizzare la motilità gastrointestinale nei topi

Qui, presentiamo un protocollo che descrive il trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche e consente valutazioni ripetitivi mini-endoscopica del colon distale in situ per la presenza, caratteristiche e la severità di infiammazione colica all'interno dal vivo topi affetti da malattia intestinale graft - versus - host.

Induzione di intestinale Graft - versus - host Disease e sua valutazione endoscopica Mini in topi dal vivo

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire importanti endpoint e marcatori proliferativi di piccole lesioni intestinali e iperproliferazione compensativa utilizzando un modello di mucotisi indotta dalla chemioterapia. Dimostriamo il rilevamento di cellule che proliferano usando un marcatore specifico del ciclo cellulare e usando un piccolo peso intestinale, la profondità della cripta e l'altezza del villus come endpoint.

Endpoint importanti e marcatori proliferativi per valutare piccole lesioni intestinali e adattamento utilizzando un modello murino di mucosite indotta dalla chemioterapia

Descriviamo un metodo per visualizzare gli IEL con etichettatura GFP utilizzando l'imaging intravitale dell'intestino piccolo murino mediante microscopia confocale del disco rotante invertita. Questa tecnica consente il monitoraggio delle cellule vive all'interno della mucosa fino a 4 h e può essere utilizzata per studiare una varietà di interazioni immuno-epiteliali intestinali.

Imaging intravitale dei linfociti intraettali a Murine Small Intestine

Sfruttando la microscopia intravitale, il metodo qui presentato consente la visualizzazione in tempo reale dello spargimento di cellule epiteliali intestinali negli animali viventi. Pertanto, la mucosa intestinale macchiata localmente (acriflavina e rodiamminaB-dextran) dei topi anestetizzati viene imageizzata fino alla risoluzione a singola cellula utilizzando la microscopia confocale.

Un approccio intravitale basato sulla microscopia per valutare la permeabilità intestinale e le prestazioni di spargimento di cellule epiteliali

Qui, forniamo una descrizione dettagliata della procedura per indurre biopsie di pizzico guidate dal colonscopico nei topi e tracciare la chiusura delle ferite in tempo reale. Inoltre, vengono forniti metodi per la preparazione di tessuti per analisi istologiche, immunoistochimiche e molecolari del letto della ferita.

Esecuzione di biopsie di avvicinamento delle dita guidate dal colonscopico nei topi e valutazione dei successivi cambiamenti tissutali

La funzione di barriera epiteliale intestinale disregolata e le risposte immunitarie sono segni distintivi della malattia infiammatoria intestinale che rimangono scarsamente studiate a causa della mancanza di modelli fisiologici. Qui descriviamo un modello di loop intestinale del topo che impiega un segmento intestinale ben vascolarizzato ed esteriore per studiare la permeabilità della mucosa e il reclutamento di leucociti in vivo.

Valutazione funzionale della permeabilità intestinale e della migrazione transepiteliale neutrofila nei topi utilizzando un modello standardizzato di loop intestinale

Scopri come valutare l'efficacia di nuove terapie per patologie intestinali nei topi mediante endoscopia seriale non invasiva. Questo metodo consente il monitoraggio longitudinale delle risposte individuali ai trattamenti.

Valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali Utilizzando Serial Imaging endoscopica Live Mice (Video) | JoVE Journal

Valutazione non invasiva della efficacia di nuove terapie per patologie intestinali Utilizzando Serial Imaging endoscopica Live Mice

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