Name: Rat eterotopico addominale Cuore / Trapianti Single-polmone in una configurazione del volume-caricato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 16 s
Description: Impara la tecnica di trapianto eterotopico addominale di cuore-polmone nel ratto con caricamento dinamico del volume. Questo metodo consente la valutazione funzionale in tempo reale del trapianto mediante catetere a conduttanza pressione-volume.

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Mark J. Kearns riceve sostegno da parte del personale medico del programma UBC Investigator (aggiudicati attraverso il Royal College dei Medici Chirurghi del Canada), e la UBC 4YF Dottorato Fellowship. John H. Boyd è un Sanitorium associazione nazionale e Michael Smith Fondazione per la ricerca sulla salute Scholar. Finanziamenti attraverso CIHR. Gli autori desiderano ringraziare il Dr. M. Allard e Richard Wamboldt per la loro assistenza con l&#39;installazione e manutenzione di apparecchiature di perfusione.

Tutti gli animali sono stati alloggiati e curati in conformità con le linee guida istituzionali per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio nazionale e. Approvazione etica per questo protocollo è stato concesso dalla University of Comitato Animal Care della Columbia Britannica. Maschio, ratti Sprague-Dawley di peso compreso tra 300-450 g sono stati utilizzati per questo protocollo. 1. donatori Operazione <ol><li> Hanno circa 100 ml di cardioplegia (RT) in vaso cilindrico collegato alla (IV) tubi catetere endovenoso lungo da un rubinetto a 3 vie. Utilizzare un supporto per elevare il matraccio a circa 80 centimetri al di sopra della superficie operativa, consente la distribuzione cardioplegia per gravità. </li><li> Per visualizzare in modo adeguato le strutture, utilizzare un paio di occhialini per la chirurgia o un microscopio da dissezione. NOTA: Al momento stiamo utilizzando un microscopio operatorio binocolo con 3.4 - 21.3X ingrandimento. </li><li> Posizionare il donatore in una camera anestetico e indurre l&#39;anestesia con 4-5% isoflurano. </li&gt; <li> Trasferire il topo di una piattaforma operativa e mantenere l&#39;anestesia da naso-cono con 1-2% isoflurano. Applicare veterinario unguento per gli occhi degli animali per prevenire la secchezza. Somministrare midazolam (2 mg / kg) intra-peritoneally con un ago da 25 G. </li><li> Utilizzando tagliatori chirurgici, radere il donatore da xiphisternum a mandibola. Radere una piccola regione inguinale sinistra (per il successivo accesso IV). Applicare un prodotto depilazione per le superfici operative, attendere circa 5 minuti, e rimuovere i capelli con un pezzo di garza. </li><li> Prep i siti chirurgici con una soluzione basata su clorexidina povidone-iodio o (usiamo solo clorexidina). Infiltrati i siti incisionali con 0,1-0,5% lidocaina per via sottocutanea. </li><li> Fissare gli arti anteriori e degli arti posteriori a sinistra per la piattaforma operativa con del nastro adesivo, lasciando il arti posteriori destro libero per il monitoraggio della profondità dell&#39;anestesia e dei segni vitali. </li><li> Dopo aver verificato appropriato profondità dell&#39;anestesia dal pedale pizzico, fare un&#39;incisione nell&#39;inguine piega a sinistra conun bisturi 22-blade. Per via smussa, esporre la vena femorale comune sinistra e ottenere l&#39;accesso IV come segue: <ol><li> Ritrarre delicatamente il tessuto sovrastante la vena femorale, e cannulate la vena con un 24 G IV. Collegare il IV ad un breve tratto di tubo soluzione salina IV, e fissare il tubo in posizione con nastro adesivo. NOTA: La procedura per l&#39;incannulamento venoso femorale nei ratti è descritto altrove da Jespersen e colleghi 14. </li><li> Collegare una siringa da 10 ml di soluzione salina-riempita al tubo IV, e delicatamente aspirare sangue per assicurare il corretto posizionamento del IV. </li><li> Iniettare 300-500 UI di eparina non frazionata attraverso il tubo IV, e successivamente lavare il tubo con 3 - 5 ml di soluzione fisiologica. </li></ol></li><li> Successivamente, tracheotomize il donatore come segue: <ol><li> Eseguire un&#39;incisione mediana nei tessuti molli tra la tacca giugulare e della mandibola utilizzando un bisturi 22 pale. Penetrare la capsula della ghiandola tiroidea sulla linea mediana con Metzenforbici Baum, e separati i suoi lobi utilizzando scollamento. </li><li> Utilizzando smussa, separare i muscoli cinghia del collo sulla linea mediana per esporre la superficie anteriore della trachea. </li><li> Utilizzare una pinza curve per sezionare senza mezzi termini di un piano circonferenziale attorno alla trachea. Circondare la trachea con una cravatta di seta 4-0. </li><li> Usando forbici iris, fare una incisione trasversale nella trachea anteriore, circa 5 millimetri inferiore alla cartilagine tiroidea. Introdurre delicatamente la cannula tracheale (a 14 G IV) e fissarlo con la cravatta di seta 4-0. </li><li> Collegare la cannula tracheale di un ventilatore meccanico. Reindirizzare il flusso di ossigeno e isoflurano attraverso il circuito del ventilatore, e ventilare il donatore ad una velocità e il volume corrente previsto dal suo peso 13. </li></ol></li><li> Fare un&#39;incisione sulla linea mediana del torace (con un bisturi 22-lama), estendendo l&#39;incisione alla giugulare al di sotto del xipisternum. </li><li> Rimanendo sulla linea mediana, Eseguire una sternotomia mediana con un cutter osso. Ritrarre i bordi dello sterno con un divaricatore autoritenuta. Inserisci il pericardio e cavità pleuriche. </li><li> Eseguire un timectomia. E &#39;più facile per dividere prima senza mezzi termini il timo sulla linea mediana, e poi separarla dalle strutture circostanti utilizzando una combinazione di scollamento e tagliente. NOTA: L&#39;origine delle arterie toraciche interne può essere ferito quando sezionare il timo dai bordi sternali superiori. Per prevenire il sanguinamento, clip emostatici possono essere applicate prima di rimuovere il timo in questi punti. </li><li> Utilizzando forbici Metzenbaum e / o di un forte Lauer, sezionare peri-cavale grasso dalla vena cava inferiore (IVC). Assicurarsi che la IVC è relativamente priva di grassi e tessuto connettivo dalla giunzione cavo-atriale superiormente, inferiormente al diaframma. </li><li> Utilizzando un forte Lauer, circonferenzialmente libera vena cava superiore (SVC) e circondare con una cravatta 4-0 seta. </li><li> Avanti, sezionare ilsinistra vena cava libera da strutture circostanti, e legare esso prossimale e distale con 4-0 cravatte di seta. Resecare la parte intervenendo di cava per esporre l&#39;arteria succlavia sinistra. </li><li> Circonferenzialmente libera i vasi dell&#39;arco aortico con un forte Lauer. Applicare clips chirurgiche prossimale e distale della arteria anonima, e dividerlo tra i clip. Lasciare l&#39;arteria carotide comune sinistra e succlavia sinistra arteria un-ritagliato. </li><li> Successivamente, cannulate la SVC con un catetere 24 G IV. Fissare il catetere con la precedentemente posizionato 4-0 cravatta di seta. </li><li> Preparati per un raccolto trapianto ripiego, ma gentile. </li><li> Utilizzando forbici affilate, dividere la IVC appena superiore alla superficie diaframmatica. Divide la SVC superiore al suo sito incannulazione, assicurando che le strutture delle vie aeree nei dintorni non sono feriti. </li><li> Spegnere il ventilatore e staccare la cannula tracheale. Transetto la trachea prossimale. </li><li> Afferrare la trachea sezionato con una pinza, e togliere il cuoree polmoni en-bloc. Ciò richiederà una leggera trazione con dissezione tagliente come il trapianto cuore-polmone è stato rimosso. Separare la trachea dall&#39;esofago sottostante. Evitare lesioni dell&#39;aorta discendente, in modo che una porzione lunga di esso rimane intatto dopo la raccolta. </li></ol> 2. Preparazione del cuore-polmoni Graft NOTA: mentre il completamento di questa parte della procedura, un assistente dovrebbe essere anestetizzare il roditore destinatario e la preparazione per trapianto impianto. <ol><li> Posizionare il trapianto cuore-polmoni su garza chirurgica con la superficie anteriore del cuore rivolto verso il basso. Utilizzando dissezione tagliente, rimuovere eventuali residui di esofago, evitando lesioni alle vie respiratorie posteriori. </li><li> Individuare l&#39;aorta toracica discendente e inserire una punta smussata cannula 16 G. Fissare la cannula in posizione con un pareggio 4-0 in seta. </li><li> Individuare i vasi dell&#39;arco aortico, e applicare una clip chirurgico al succlavia sinistra. Lasciare la carotide sinistra un-tagliati per subsequent de-aerazione. </li><li> Somministrare la prima dose di cardioplegia collegando il tubo cardioplegia alla cannula aortica 16 G. L&#39;arteria carotide deve essere occluso temporaneamente con una pinza per garantire un&#39;adeguata fornitura di cardioplegia. NOTA: Un vantaggio di avere la cannula aortica allegato è che cardioplegia può essere somministrato in modo continuo e / o periodicamente, se lo desideri. Per il dosaggio intermittente, di solito consegniamo cardioplegia ogni 10 - 15 minuti in 5 ml boli over 30 - 45 sec. </li><li> Usando forbici Metzenbaum e / o un forte Lauer, sezionare grasso peri-aortico lontano dall&#39;aorta. Assicurarsi che l&#39;aorta è relativamente priva di grassi e tessuto connettivo della succlavia sinistra (arco distale) al suo sito cannulazione. </li><li> Avanti, esporre il bronco principale di sinistra con un forte Lauer, e legare è prossimale con un pareggio 4-0 in seta. Transetto il bronco distale sinistra per la legatura con forbici iris. Eseguire un pneumonectomy lasciato legando polmonare sinistraarteria e vena con 4-0 cravatte di seta. Transect distale alla legatura e rimuovere il polmone sinistro. </li><li> Come sopra, rimuovere tutte le altre lobi polmonari con l&#39;eccezione del diritto lobi superiori e medie. Evitare ferendo la IVC nel processo di esecuzione lobectomie. </li><li> Collegare il tubo cardioplegia alla cannula aortica e amministrare cardioplegia continuo mentre il destinatario è in preparazione. Posizionare il trapianto cuore-polmone in un contenitore sterile (ad esempio, un becher). </li></ol> 3. Destinatario Operazione <ol><li> Anestetizzare il destinatario secondo l&#39;operazione donatore, sopra. Utilizzare veterinario pomata per proteggere gli occhi dell&#39;animale da secchezza. Confermare anestesia spesso a pedale pizzico. </li><li> Posizionare l&#39;animale come per l&#39;operazione del donatore, questa volta lasciando la zampa anteriore destra libera di monitorare i segni vitali e profondità dell&#39;anestesia. </li><li> Radere l&#39;addome da xiphisternum a pene. Radere una piccola regione inguinale sinistra (per il successivo accesso IV). Applicare unaagente depilating le superfici operative, attendere circa 5 minuti, e rimuovere i capelli con un pezzo di garza. </li><li> Prep i siti chirurgici con povidone-iodio o soluzione basata clorexidina-. Infiltrati i siti incisionali con 0,1-0,5% lidocaina per via sottocutanea. </li><li> Tracheotomize e ventilare il destinatario come indicato sopra. In alternativa, mantenere il destinatario in anestesia naso-cono. </li><li> Introdurre un catetere nella vena femorale come descritto sopra. Iniettare 300-500 UI di eparina non frazionata attraverso il tubo IV, e successivamente lavare il tubo con 3 - 5 ml di soluzione fisiologica. </li><li> Eseguire una laparotomia facendo una incisione addominale mediana con un bisturi a lama da 22 xiphisternum a pene. Ritrarre la parete addominale con un divaricatore di auto-mantenimento. Avanti, ritrarre le viscere superiormente e per il lato sinistro del topo. Avvolgere in caldo, garza imbevuta di soluzione salina. </li><li> Esporre l&#39;aorta addominale IVC e da forte dissezione attraverso la sovrastante regrasso tro-peritoneale. </li><li> Avere un morsetto nave curvo disponibili e pronti. </li><li> Circonferenzialmente liberare l&#39;IVC e dell&#39;aorta prossimale e distale e circondare con 4-0 cravatte di seta. Ci dovrebbe essere di circa 2-3 cm di spazio tra questi siti. </li><li> Applicare con cura il morsetto nave curvo, in modo che una porzione sufficiente sia IVC e dell&#39;aorta sono esposti sopra le ganasce del morsetto. </li><li> Fare un&#39;incisione nella parete anteriore della IVC con un ago 25 G collegato ad una siringa di soluzione salina 1 ml. Estendere l&#39;incisione con le forbici Potts in base alla lunghezza del donatore IVC orifizio. </li><li> Rimuovere il trapianto cuore-polmone dal suo contenitore e scollegarlo dalla cardioplegia. Posizionare l&#39;innesto nell&#39;addome del destinatario in una posizione ottimale per eseguire l&#39;anastomosi venosa. NOTA: L&#39;innesto cuore-polmone alla fine sarà orientata leggermente obliquo, con la punta apice verso l&#39;addome di sinistra quadrante inferiore. </li><li> Fissare il taccoe punta estremità della anastomosi con 9-0 sutura in nylon. Fare un nodo sicuro ad ogni estremità, lasciando l&#39;ago di un lungo braccio di sutura, e una breve fine di sutura per essere legato a un secondo momento. Somministrare una dose di cardioplegia. </li><li> In modo esecuzione, completa la metà della linea di sutura e cravatta al braccio di sutura breve opposte. Somministrare una dose di cardioplegia. </li><li> Completa l&#39;altra metà della linea di sutura e legarlo giù. L&#39;anastomosi venosa è completo. Somministrare una dose di cardioplegia </li><li> Orientare il trapianto cuore-polmone con puntamento apice del cuore verso l&#39;addome di sinistra quadrante inferiore. Assicurarsi che l&#39;anastomosi venosa non sia piegato o attorcigliato. </li><li> Valutare la lunghezza dell&#39;aorta donatore che sarà richiesto per raggiungere l&#39;aorta destinatario, mantenendo sia IVC e anastomosi aortica in configurazioni tension-free e non-piegati. </li><li> Dividete l&#39;aorta discendente (distale succlavia sinistra) con una forbici iris. </li><li> Fai incision nella parete anteriore dell&#39;aorta destinatario con un ago da 25 G collegato ad una siringa di soluzione salina 1 ml. Estendere l&#39;incisione con le forbici Potts in base alla lunghezza dell&#39;orifizio aortico donatore. </li><li> Ancorare la punta (aspetto superiore) dell&#39;aorta donatore al ricevente aorta usando una sutura 9-0 nylon. Quindi, passare l&#39;ago al mediale dell&#39;aorta e completare la metà delle anastomosi in esecuzione moda. </li><li> Al tallone del anastomosi aortica, invertire l&#39;orientamento della linea di sutura (una transizione nella direzione di cucitura), e completare la metà laterale della anastomosi in esecuzione moda. </li><li> Rimuovere lentamente il catetere IV nel SVC, e legare l&#39;SVC con una clip chirurgica. </li><li> De-air l&#39;aorta individuando il non-ritagliato sinistra arteria carotide comune. Tenere aperta l&#39;arteria, in posizione verticale che permetterà all&#39;aria di essere liberamente evacuato. </li><li> Brevemente aprire le ganasce della pinza vaso curvo e consentire l&#39;arteria carotide sanguinare (de-air) per 2-3 sec. Riapplicare il morsetto nave. </li><li> Applicare una clip chirurgica alla carotide. Rimuovere la fascetta vaso curvo. </li><li> Verificare la presenza di emorragie alle linee di sutura. Se presente, applicare lieve compressione con garza o riparazione con una lunghezza di 9-0 sutura di nylon (a seconda della gravità del sanguinamento). </li><li> Il cuore del donatore dovrebbe riprendere battendo in pochi minuti. </li><li> Prestare particolare attenzione ai segni vitali del destinatario, profondità dell&#39;anestesia, e amministrare il volume rianimazione, se necessario. </li><li> A seconda dei punti finali sperimentali, o chiudere l&#39;addome dell&#39;animale e farlo recuperare da anestesia, o prepara l&#39;animale per la valutazione cardiovascolare. NOTA: Gli esempi di valutazione del trapianto sono in misure in vivo di emodinamica in funzione del carico e indipendente dal carico, misure in vitro della funzione in Langendorff e modalità di lavoro, e il cuore (in chirurgia sopravvivenza) ecocardiografici o indagini di risonanza magnetica. </li><li> Alfine degli esperimenti terminali acuti, gli animali sono eutanasia per dissanguamento. </li></ol>

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<li>Habertheuer, A., Kocher, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovative%2C+simplified+orthotopic+lung+transplantation+in+rats%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Innovative, simplified orthotopic lung transplantation in rats).</a> J Surg Res. 185 (1), 419-425 (2013).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il successo con la tecnica descritta qui basarsi su diversi fattori. Key tra i quali sarà garantire la stabilità di entrambi i donatori e riceventi, adottando meticolosa tecnica operatoria che è sicuro e associata con una minima perdita di sangue, garantendo completo arresto cardioplegico con raffreddamento trapianto uniforme, riducendo al minimo il tempo ischemico totale, e adeguatamente de-onda l&#39;innesto. Come riconosciuto in precedenza, la complessità tecnica della tecnica è il suo limite principale. <p class...

Il primo modello di roditore di trapianto di cuore addominale eterotopico (HAHT) è stato descritto da Abbott e colleghi nel 19641. Questa tecnica, e le successive modifiche, sono state ampiamente applicate per caratterizzare la funzione dell'innesto di trapianto e lo stato immunologico. La maggior parte delle tecniche HAHT descritte coinvolge un cuore non carico di volume2,3. Sono stati descritti modelli di HAHT che coinvolgono ventricoli carichi di volume, ma sono spesso limitati in uno o più aspetti.
Il trapianto eterotopico di cuore-polmone addominale (HAHLT) con un ventricolo sinistro (LV) carico di volume è stato descritto in precedenza. Chen e colleghi4, e successivamente Ibrahim e colleghi5 hanno descritto HAHLT con una singola anastomosi aorto-aortica (donatore che sale all'aorta addominale ricevente). L'unico carico di volume presentato al ventricolo in questa circolazione è il ritorno venoso coronarico. Asfour e colleghi hanno descritto una tecnica HAHT in cui il circuito polmonare è stato eliminato anastomizzando l'arteria polmonare del donatore (PA) nell'atrio sinistro del donatore (LA)6. In questa circolazione, l'afflusso venoso al ventricolo destro (RV) avviene attraverso un'anastomosi da SVC donatrice a IVC ricevente e il successivo carico LV viene espulso nell'anastomosi aorto-aortica. La funzione cardiaca è stata parzialmente valutata in vivo e anche in vitro utilizzando un rig Langendorff. Figueiredo e colleghi hanno descritto un modello HAHLT simile al nostro7, ma nei topi. L'afflusso venoso al ventricolo destro avviene tramite l'anastomosi da SVC donatrice a IVC ricevente. Il sangue passa successivamente attraverso la singola circolazione polmonare e il carico ventricolare sinistro viene espulso nell'anastomosi aorto-aortica. La funzione cardiaca nel loro studio è stata valutata mediante risonanza magnetica (MRI). Wen e colleghi hanno descritto una tecnica HAHT unica in cui il ventricolo sinistro viene caricato per mezzo di un'aorta ricevente per anastomosi LA8 del donatore. Il LV, quindi, si riempie a pressioni sistemiche. La funzione cardiaca e se la gittata sistolica del ventricolo sinistro viene espulsa anterogradamente nel loro modello non sono state valutate.
Molte delle tecniche citate sopra coinvolgono condizioni di carico ventricolare sinistro non fisiologiche, comprese le tecniche il cui carico ventricolare sinistro parziale è rappresentato solo dal ritorno venoso coronarico. D'altra parte, molte tecniche si avvicinano al carico fisiologico del ventricolo sinistro. La maggior parte di queste tecniche, come con la tecnica di Asfour e colleghi, omettono la circolazione polmonare e utilizzano un PA da donatore ad anastomosi LA da donatore6,9. La circolazione descritta da Galinanes e colleghi10 impiega una cava ricevente diretta per l'anastomosi LA del donatore, omettendo la circolazione polmonare e il cuore destro. Yokoyama e colleghi ottengono lo stesso effetto legando il PA del donatore e creando una comunicazione interatriale nel cuore del donatore (omettendo il polmone del donatore e la circolazione del cuore destro)11. La circolazione di Maruyama e colleghi12 comporta un'anastomosi tra il PA sinistro del donatore e l'Ao del ricevente, che consente il riempimento del ventricolo sinistro attraverso la circolazione polmonare come condotto, ma esclude efficacemente il cuore destro.
Nei casi in cui sono state soddisfatte condizioni di carico quasi fisiologiche, abbiamo migliorato la tecnica di HAHLT in 2 aspetti principali. Innanzitutto, per quanto ne sappiamo, l'esatta configurazione che riportiamo non è stata descritta nei ratti. È forse la circolazione più versatile per i ricercatori che desiderano studiare la fisiologia, la struttura e l'immunologia dell'innesto cuore-polmone trapiantato. In secondo luogo, descriviamo come la funzione dell'innesto di trapianto possa essere caratterizzata direttamente in vivo. Per questa applicazione, i cateteri di conduttanza pressione-volume possono essere introdotti direttamente nell'apice LV dell'innesto trapianto, il che consente una completa caratterizzazione funzionale cardiaca. 
La tecnica qui descritta può essere applicata sia a studi acuti che cronici sulla funzione del trapianto di trapianto, mentre la valutazione funzionale può essere eseguita sia in vivo che in vitro. Presentiamo un modello in cui le condizioni di carico possono essere quasi fisiologiche, tuttavia il grado di carico ventricolare può essere manipolato sia acutamente che cronicamente deviando il ritorno venoso verso o lontano dall'innesto. Anche le condizioni di postcarico possono essere manipolate. Poiché il polmone e le sue vie aeree sono trattenuti in questa configurazione di trapianto, gli investigatori possono riventilare il polmone del donatore in modo acuto. In modo univoco, la riventilazione polmonare modifica la composizione del sangue che perfonde le arterie coronarie del trapianto. In condizioni non ventilate, il sangue espulso dall'aorta del donatore viene deossigenato e si mescola con il sangue ossigenato nell'aorta ricevente. In condizioni di ventilazione acuta, il sangue espulso diventa ossigenato. Pertanto, la funzione dell'innesto del trapianto può essere confrontata in condizioni ventilate e non ventilate e anche in condizioni di carico variabile.
Il protocollo seguente descrive importanti modifiche alle operazioni di donatore e ricevente HAHLT precedentemente descritte. Descrive inoltre una tecnica ottimale per proteggere l'innesto del trapianto durante il periodo di ischemia (tempo tra l'espianto del donatore e l'impianto del ricevente). I vantaggi di questa tecnica includono condizioni fisiologiche potenzialmente vicine a quelle di un innesto trapiantato ortotopicamente e un'ampia gamma di applicazioni investigative. Un limite importante è la sua complessità tecnica. Con un tutoraggio e una pratica adeguati, i vantaggi di questa tecnica probabilmente supereranno le sfide nell'adottarla.

<table><tbody><tr><td>Celsior Cardioplegic Soution</td><td>Genzyme</td><td></td><td>La soluzione viene mantenuta in ghiaccio durante tutta la procedura. Prepariamo la nostra soluzione, con lievi modifiche.</td></tr><tr><td>Ventilatore per roditori</td><td>Apparecchio Harvard</td><td>modello 683</td><td></td></tr><tr><td>Monitor dei segni vitali</td><td>Nonin</td><td>modello 9847V</td><td>Visualizza SpO2 e frequenza cardiaca.</td></tr><tr><td>Cannule IV</td><td>Jelco</td><td>3063</td><td>24 - 26 G x 3/4" cannule.</td></tr><tr><td>Tubo IV</td><td>CareFusion</td><td>MP9259-C</td><td>Tubo di collegamento di lunghezza corta (18 cm).</td></tr><tr><td>Clip chirurgiche</td><td>Teleflex Medical</td><td>001204</td><td>Clip di legatura in titanio Horizon.</td></tr><tr><td>Suture</td><td>Ethicon, Sharpoint</td><td>LA54G, AK-0107</td><td>bobina di seta 3-0 e sutura 9-0 in prolene (a braccio singolo, ago DR5).</td></tr><tr><td>Strumenti chirurgici</td><td>Non applicabile</td><td>Non applicabile</td><td>Gli strumenti utilizzati sono generici e possono essere acquistati da qualsiasi azienda di forniture chirurgiche.</td></tr></tbody></table>

rat eterotopico addominale cuore / trapianti single-polmone in una configurazione del volume-caricato

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Qui, descriviamo una nuova tecnica per il trapianto addominale eterotopico cuore-polmone (HAHLT) nei ratti. La configurazione dell'innesto di trapianto prevede l'anastomosi della vena cava inferiore (IVC) del donatore rispetto all'IVC ricevente e dell'aorta ascendente (Ao) del donatore all'Ao addominale del ricevente. I lobi polmonari superiori e medi destri sono conservati e funzionano come condotti per il flusso sanguigno dal cuore destro al cuore sinistro.
Ci sono diversi vantaggi nell'usare questa tecnica, e si presta a una vasta gamma di applicazioni. Poiché l'innesto viene trapiantato in una configurazione che consente il carico di volume diamico, la funzione cardiaca può essere valutata direttamente in vivo. L'uso di cateteri di conduttanza pressione-volume consente la caratterizzazione dei parametri emodinamici dipendenti dal carico e indipendenti dal carico. L'innesto può essere convertito in una configurazione caricata applicando un morsetto all'IVC infraepatico del ricevente. Descriviamo tecniche chirurgiche modificate sia per le operazioni del donatore che per quelle del ricevente e una strategia ideale di protezione del miocardio. A seconda dell'obiettivo sperimentale, questo modello può essere adattato per l'uso in studi sia acuti che cronici sulla funzione del trapianto, sullo stato immunologico e sulle condizioni di carico ventricolare variabili. Le vie aeree che conducono al polmone trapiantato sono preservate e consentono la riventilazione polmonare acuta. Ciò facilita l'analisi degli effetti del sangue misto venoso e arterioso che fornisce perfusione coronarica al trapianto.
Un limite di questo modello è la sua complessità tecnica. C'è una curva di apprendimento significativa per i nuovi operatori, che idealmente dovrebbero essere guidati nella tecnica. Un background di formazione chirurgica è vantaggioso per coloro che desiderano applicare questo modello. Nonostante la sua complessità, miriamo a presentare il modello in un formato chiaro e facilmente applicabile. A causa della somiglianza fisiologica di questo modello con il trapianto ortotopico e della sua vasta gamma di applicazioni di studio, è probabile che lo sforzo investito nell'apprendimento della tecnica valga la pena.

La tecnica HAHLT sopra descritta è molto tecnico e richiede grande attenzione ai dettagli. Tabella 1 evidenzia alcuni dei fattori chiave associati con successo contro le procedure fallimentari, e può essere utilizzato come una guida per la risoluzione di problemi tecnici. Dopo l&#39;aorta destinatario è sbloccata, l&#39;innesto arterie coronarie dovrebbero essere considerati a riempirsi di sangue ossigenato. Di conseguenza, il miocardio dovrebbe diventare rosa e ben irrorato...

Descriviamo una nuova tecnica per il trapianto addominale eterotopico cuore-polmone (HAHLT) nei ratti. La configurazione del trapianto si traduce in una circolazione dell'innesto parzialmente caricata, consentendo una valutazione funzionale diretta. Questo modello può essere impiegato per studi acuti o cronici sulla funzione e sullo stato immunologico del trapianto trapiantato.

Rat eterotopico addominale Cuore / Trapianti Single-polmone in una configurazione del volume-caricato

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

L'obiettivo generale di questa procedura è trapiantare eterotopicamente un innesto di cuore e un singolo polmone in una configurazione che consenta il caricamento volumetrico. Questo viene ottenuto innanzitutto prelevando l'innesto cardiopolmonare del donatore. Successivamente, il ricevente viene preparato e quindi il tessuto del donatore viene impiantato.Infine, il tessuto dell'innesto donatore viene desaerato e riportato in perfusione. In ultima analisi, un catetere conduttivo pressione-volume può essere utilizzato per valutare in tempo reale la funzione dell'innesto. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come il trapianto cardiaco eterotopico addominale, è che l'aggiunta dell'innesto polmonare permette un flusso ematico anterogrado attraverso un circuito nativo, facilitando il caricamento dinamico del volume dell'innesto cuore-polmone, nonché la valutazione cardiovascolare post-trapianto.Per preparare la vena cava inferiore o IVC per l'anastomosi successiva, iniziare rimuovendo il tessuto adiposo pericavale dell'animale donatore, partendo dalla giunzione cavo-atriale e procedendo inferiormente fino al diaframma. Successivamente, utilizzando un bisturi affilato, liberare circonferenzialmente la vena cava superiore o SVC e circondarla con un legaccio di seta 4-0. Disseticare la vena cava sinistra dalle strutture circostanti e legarla in posizione prossimale e distale.Quindi resecare la porzione interposta della vena cava, esponendo circonferenzialmente l'arteria subclavia sinistra, liberare le arterie innominata e carotidea comune sinistra, applicando clip prossimali e distali all'arteria innominata. Successivamente dividere il tratto di arteria compreso tra le clip utilizzando un catetere endovenoso da 26 gauge, cannullare la VCS e fissarla in posizione con un legaccio di seta preesistente quattro zero. Quindi, per prelevare il graft cuore-polmone, dividere la VCI immediatamente al di sopra del diaframma e la VCS al di sopra del sito di cannullazione, avendo cura di evitare lesioni alla trachea.Quindi sezionare trasversalmente la trachea in senso prossimale. Afferrarla con una pinzetta ed esercitare una trazione delicata e una dissezione precisa per separare la trachea dall'esofago sottostante. Rimuovere il cuore e il tessuto polmonare in blocco.Quindi posizionare la superficie anteriore del cuore rivolta verso il basso. Canulare l'aorta discendente con una cannula ottusa da 16 gauge e infondere il tessuto con cinque-dieci millilitri di cardioplegia utilizzando un ago tagliente. Successivamente, esporre il tronco bronchiale principale sinistro, legarlo con un legaccio in seta quattro zero e dividere il bronchio a valle del legame.Quindi rimuovere tutti i lobi polmonari tranne quelli superiore e medio destro e posizionare il trapianto in un apposito contenitore fino all'innesto del tessuto donatore. Liberare circolarmente la VCI e l'aorta del ricevente in senso prossimale e distale. Successivamente, circondare ciascun sito con quattro legature di seta numero zero, lasciando uno spazio di circa due-tre centimetri tra i punti di clampaggio.Quando i vasi sono liberi, applicare una singola pinza curva alla vena cava inferiore e all'aorta, assicurandosi che sia disponibile una porzione sufficiente di ciascun vaso per l'anastomosi. Successivamente, utilizzando un ago da 25 gauge collegato a una siringa da un millilitro riempita di soluzione salina, praticare una venotomia nella parete anteriore della vena cava inferiore. Quindi usare forbici a punta per estendere l'incisione in modo da corrispondere alla lunghezza dell'orifizio della vena cava inferiore del donatore e fissare le estremità dell'anastomosi con un punto di sutura in nylon 9-0, lasciando un breve tratto di sutura libero in ciascun punto di ancoraggio oppure fissando l'anastomosi in modo continuo.Completare una metà della linea di sutura e annodarla al braccio di sutura corto opposto. Quindi completare e annodare l'altra metà della sutura. Iniziare l'anastomosi aortica fissando l'aspetto superiore dell'autotomia AOR con una sutura in nylon 9-0.Quindi, in modo continuo, iniziare una linea di sutura sul lato mediale e terminare sul lato laterale dell'anastomosi. Annodare la sutura al lembo corto residuo e successivamente legare la VCS con una clip chirurgica. A questo punto, rimuovere lentamente e con attenzione la molletta vascolare curva, permettendo all'aorta di sanguinare attraverso l'arteria carotidea.Dopo alcuni secondi, legare l'arteria carotidea con una clip chirurgica ed osservare l'innesto per verificare l'emostasi, una corretta riperfusione e il ritorno dell'attività cardiaca spontanea. Qui, vengono mostrati dati rappresentativi in vitro di pressione e volume alla baseline ottenuti da una valutazione del cuore funzionante in vitro della funzione cardiaca dopo il trapianto eterotopico addominale di cuore e polmone, come illustrato nella figura relativa all'occlusione del pre-carico. I dati di pressione e volume possono essere ottenuti anche in modo acuto con questo metodo, fornendo ai ricercatori una varietà di informazioni relative alla gittata cardiaca. A seguito di questa procedura, è possibile effettuare ulteriori analisi, come lo studio degli effetti di alterazioni acute e croniche.È possibile eseguire condizioni di carico sulla funzione dell'impianto in vivo.

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Ricerca

JoVE Journal

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Medicina

Il modello di topo eterotopica trapianto di cuore è stato provato da molti ricercatori ad essere un metodo importante per lo studio dei meccanismi di rifiuto e di risposta immunitaria. Tuttavia, i metodi impiegati sono ancora difficili. Modificando le tecniche standard che abbiamo avuto successo con più di 1000 trapianti.

Il trapianto cardiaco eterotopico nel Mice

Trapianto di fegato ausiliario fornisce un supporto temporaneo in insufficienza epatica acuta, fino a quando la rigenerazione del fegato fallire. Il trapianto eterotopico ausiliario di fegato (HALT) con arterialization vena porta (PVA) rende del fegato è sufficiente. Abbiamo sviluppato una tecnica analoga nel ratto, di esaminare l'influenza del arterialization vena porta sulla morfologia e la funzione del trapianto.

Eterotopica ausiliario Ratto trapianto di fegato con flusso regolato Portal Vein arterialization in acuta insufficienza epatica

Il manoscritto descrive i passaggi necessari per eseguire il trapianto di cuore eterotopico nel topo.

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Descriviamo un modello di trapianto di cuore addominale eterotopico nei ratti, implicando modifiche delle strategie attuali, che portano a un approccio chirurgico semplificato. Inoltre, descriviamo un nuovo modello di rigetto mediante iniezione in-ear di cellule muscolari cardiache vitali, consentendo ulteriori analisi immunologiche dei trapianti nei ratti.

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Viene dimostrata una nuova tecnica per la ricostruzione del circuito sanguigno in un modello eterotopico di trapianto di cuore di topo addominale.

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Questo studio dimostra una tecnica di trapianto di cuore addominale eterotopico riproducibile nei ratti che i principianti possono imparare ed eseguire. Inoltre, un nuovo modello di rigurgito aortico nei ratti viene generato eseguendo un trapianto di cuore addominale eterotopico e danneggiando la valvola aortica del donatore utilizzando un filo guida dopo la raccolta.

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