Un modello murino di irreversibile e reversibile unilaterale Ureteric Ostruzione

Questo video presenta un modello murino di neuropatia ostruttiva indotta da ostruzione unilaterale dell'uretere, che può essere irreversibile o reversibile; vengono mostrati dati istologici che evidenziano il danno strutturale risultante e il suo recupero successivo alla reversione. Questa illustrazione schematica mostra i passaggi principali di questo modello. Qui osserviamo il rene sinistro, l'uretere e la vescica.

Un'occlusione ureterale unilaterale standard viene indotta mediante legatura dell'uretere. L'uretere diventa dilatato e il rene diventa idronefrotico nel tempo. Per eseguire un'occlusione ureterale unilaterale reversibile, l'uretere viene legato vicino alla vescica e un tubo di plastica a parete morbida, mostrato in grigio, viene applicato attorno all'uretere nel punto di ostruzione.

Per limitare un'eccessiva dilatazione ureterale, il rene diventa idronefrotico nel tempo e viene quindi desostruito in un momento appropriato per lo studio. In questo esperimento dopo sette giorni, il tubo a parete morbida viene rimosso e l'uretere viene reciso appena al di sopra del livello della legatura. L'uretere non ostruito viene anastomizzato nella vescica per consentire il flusso urinario, e il rene si decomprime tipicamente nell'arco di diversi giorni.

Il modello di ostruzione unilaterale dell'uretere noto come UUO può essere utilizzato per studiare lo sviluppo di lesioni tissutali e fibrosi in seguito a nefropatia ostruttiva. Il modello di ostruzione ureterale reversibile abbreviato in RUUO può essere impiegato per ottenere informazioni sul rimodellamento tissutale che può seguire una lesione. Di seguito è riportata la rappresentazione di un esperimento tipico che incorpora sia le procedure UUL che le nostre procedure UUL.

I topi vengono sottoposti a UUL al giorno zero e sette giorni dopo. I topi vengono sacrificati per valutare il grado di danno oppure i ureteri vengono desostacolati per eseguire un RUUR. I reni vengono quindi lasciati decomprimere per sette giorni prima del prelievo del tessuto.

Il tessuto può essere valutato per individuare lesioni strutturali, infiltrazione di macrofagi, accumulo di miofibroblasti e fibrosi. Ecco un tipico allestimento chirurgico. La procedura viene eseguita utilizzando strumenti e materiali monouso sterili posizionati all'interno di un campo chirurgico sterile.

Se si interviene su più animali, gli strumenti devono essere sterilizzati tra una procedura e l'altra mediante un sterilizzatore a perline o utilizzando un set nuovo di strumenti per ciascuna procedura. L'operatore indossa una camice sterile, mascherina, cuffia e guanti. Questo topo maschio di otto settimane della linea C57 Black Six è stato anestetizzato mediante iniezione intraperitoneale di cloridrato di chetamina e meine.

La profondità dell'anestesia è stata confermata dalla mancanza di reazione a una compressione del dito del piede. L'area chirurgica è stata rasata e disinfettata utilizzando una soluzione diluita di clorexidina. È stata applicata una lubrificazione oculare per prevenire l'essiccazione della cornea.

Il cloridrato di buprenorfina analgesico è stato somministrato mediante iniezione sottocutanea. La bocca è stata posizionata su un tappetino chirurgico sterile riscaldato e ricoperto con un telo, e gli arti sono stati immobilizzati utilizzando forbici separa tessuti; quindi è stata eseguita una laparotomia mediana e praticata un'incisione lungo la linea avascolare dell'elbow. Questo prossimo capitolo illustrerà come eseguire una UUOA irreversibile; un retraettore calibra viene inserito nell'incisione e il topo viene ricoperto con teli sterili.

Gli intestini vengono spostati e coperti con garza sterile inumidita per esporre l'uretere sinistro. L'uretere viene esposto e isolato utilizzando pinze angolate per indurre ostruzione. L'uretere viene legato due volte utilizzando un filo di seta nera intrecciata 6-0.

L'uretere può essere ostruito in qualsiasi punto tra la vescica e il bacinetto renale. L'uretere viene quindi diviso tra i punti di sutura. Il prossimo capitolo illustrerà come eseguire un'ostruzione ureterale reversibile.

Questa è la prima fase di un RUUL. L'uretere viene esposto e isolato utilizzando pinze angolate per indurre un'ostruzione. L'uretere viene legato due volte utilizzando un filo di seta nero intrecciato 6.0.

L'uretere deve essere ostruito vicino alla vescica al fine di preservare una lunghezza adeguata di uretere per l'anastomosi alla vescica. Durante la procedura di inversione, i punti di sutura vengono tagliati, ma uno viene lasciato lungo per un uso successivo, e viene tagliato un tratto di tubo di plastica a parete morbida lungo circa cinque millimetri. Viene quindi praticata un'incisione longitudinale in modo che possa essere aperta a ventaglio, consentendo di applicarla attorno all'uretere.

Il tubo di plastica a pareti morbide deve avere un diametro interno di un millimetro e un diametro esterno di due millimetri. Il tubo di plastica a pareti morbide viene quindi posizionato con attenzione attorno all'uretere, assicurandosi che, una volta chiuso, il filo lungo esca dal centro della fessura. Successivamente, un tratto di filo di seta nera intrecciata di calibro sei viene passato attorno al tubo e annodato.

Una volta che il lungo punto di sutura che emerge dal centro del tubo viene quindi incorporato nel nodo successivo. Questa manovra viene eseguita per fissare in modo sicuro l'uretere e il tubo in posizione. Il tubo posizionato attorno all'uretere impedirà un'eccessiva dilatazione ureterale al termine delle procedure UUO e RUUO.

Gli intestini vengono rimessi al loro posto e il peritoneo viene suturato, mentre la cute viene chiusa con clip metalliche. Viene inoltre applicato iodio sulla zona chirurgica. L'anestesia viene parzialmente invertita mediante un'iniezione sottocutanea di aamaz.

Idrocloruro e liquidi vengono somministrati mediante iniezione sottocutanea di un mililitro di soluzione salina riscaldata. I topi vengono monitorati fino al recupero della coscienza e successivamente lasciati riprendere in una scatola riscaldata mantenuta a 29 gradi per 24 ore. I reni diventano idronefrotici nei giorni successivi all'ostruzione uterina.

I topi possono essere sacrificati in diversi momenti durante la fase di lesione o dopo il ripristino dell'ostruzione. Il prossimo capitolo descrive come eseguire un ripristino, che costituisce la seconda fase della procedura RUUO. Il topo viene anestetizzato e preparato come descritto in precedenza.

I clip metallici cutanei vengono rimossi ed eseguita una laparotomia. I punti di sutura sul peritoneo vengono rimossi e il peritoneo può essere aperto delicatamente con pinze a dente di ratto. Il topo viene quindi preparato e l'uretere sinistro viene esposto come precedentemente descritto, utilizzando pinze angolate.

L'uretere e il tubo di plastica a parete morbida vengono isolati dal tessuto circostante. I punti di sutura che fissano il tubo a parete morbida vengono tagliati con il bisturi e quindi rimossi. Il tubo di plastica a parete morbida viene quindi rimosso con attenzione, rivelando un uretere dilatato.

L'uretere è fragile nel punto di ostruzione e potrebbe rompersi al di sopra dell'ostruzione, come accaduto in questo filmato. Tuttavia, i punti di sutura precedentemente posizionati vicino alla vescica durante la prima fase dell'UUO rimarranno integri, garantendo che nessuna urina fuoriesca dalla vescica nella cavità peritoneale. Un pezzo di garza sterile viene posizionato sotto l'uretere per raccogliere qualsiasi sedimento urinario che dreni dall'uretere precedentemente ostruito.

La lunghezza residua dell'uretere ostruito deve essere lasciata libera di drenare fino a quando non viene prodotta urina limpida, per garantire che il lume dell'uretere sia completamente privo di detriti. Una volta drenati l'uretere e il bacinetto renale, si applica un lungo punto di sutura in seta nera intrecciata 6-0 all'estremità dell'uretere. Questo viene utilizzato per facilitare la successiva anastomosi tra uretere e vescica.

L'uretere viene quindi ruotato in modo che si trovi anteriormente rispetto alla sua posizione originale e si disponga sopra il rene. Un singolo punto di sutura nano in poliammide monofilamento TAing viene posizionato all'estremità dell'uretere. Si presta attenzione affinché il punto di sutura rimanga nello strato muscolare e non entri nella lume ureterale.

Il punto viene utilizzato per ancorare l'uretere nella vescica in un secondo momento, al fine di preparare la vescica all'anastomosi; un canale viene creato attraverso la vescica facendo passare un ago da 21 gauge diagonalmente attraverso la parete vescicale. L'ago da 21 gauge viene quindi utilizzato per guidare un ago con occhiello attraverso la vescica. Il punto Nino precedentemente posizionato sull'uretere viene quindi fatto passare attraverso la prima incisione nella vescica ed uscire attraverso la parete vescicale adiacente al punto di ingresso, in modo da far passare l'uretere attraverso la vescica.

Il filo lungo di numero 6-0 posizionato all'estremità dell'uretere viene fatto passare attraverso l'occhiello dell'ago. Successivamente, l'ago con occhiello viene lentamente ritirato attraverso la vescica, assicurandosi che anche l'uretere venga trascinato all'interno della vescica. Una volta posizionato l'uretere all'interno della vescica, i punti nano posti nella parete dell'uretere e della vescica vengono annodati per fissare saldamente l'uretere in sede.

Viene posizionato un secondo punto otax. Questo viene nuovamente passato attraverso l'uretere, assicurandosi che rimanga all'interno della tonaca muscolare, quindi attraverso l'incisione vescicale ed esce attraverso la parete vescicale. Successivamente viene annodato in modo analogo.

Un terzo punto di sutura nano tax viene anche posizionato nella parte posteriore della vescica. Successivamente, i dorsi delle forbici aperte vengono utilizzati per spingere leggermente all'indietro la parete della vescica ed esporre l'intera lunghezza dell'uretere. L'uretere viene quindi sezionato al di sopra del punto di sutura polmonare.

L'uretere colorato si ritrarrà quindi in posizione obliqua all'interno della vescica. Vengono utilizzati quattro punti per assicurarsi che l'uretere si sia completamente ritratto all'interno della vescica. Infine, l'orifizio di uscita nella vescica viene chiuso con una sutura in poliammide monofilamento da nove zero prima della chiusura; assicurarsi che l'uretere sia saldamente ancorato all'interno della vescica, in prossimità.

Il peritoneo e la cute, come precedentemente descritto, forniscono le cure postoperatorie come precedentemente descritto. In questo studio, a tutti i topi UUO è consentito un periodo di recupero di sette giorni, al fine di permettere al rene deostruito di decomprimersi, sebbene possano essere analizzati anche punti temporali precedenti o successivi. Di seguito sono presentati i dati che illustrano l'aspetto dei reni ostruiti e deostruiti e il danno conseguente.

Questa figura illustra l'aspetto dei reni U-U-L-U-U-O nativi, del bacinetto renale e degli ureteri in confronto al rene nativo. Il rene UUO ostruito per sette giorni appare idronefrotico e di colore pallido. Dopo sette giorni di deostruzione, il rene RUO si è decompresso con il bacinetto renale e l'uretere che sono tornati a una dimensione e a un colore simili a quelli del rene nativo.

Si noti che l'uretere IUO è più corto rispetto agli ureteri dei reni UUO e nativi a causa della tecnica di disstrutturazione e dell'anastomosi nella vescica. Questa figura mostra immagini rappresentative di sezioni renali colorate con ematossilina ed eosina provenienti da reni nativi, UUO e RUUO. L'interstizio sano del rene normale è composto da sezioni trasversali di tubuli sani e compatti.

Un certo numero di tubuli indicati dalle frecce nere mostra un'evidente dilatazione al settimo giorno. Dopo il QUL nel tubo di contrasto, la dilatazione è notevolmente ridotta a sette giorni dal Rilascio dell'UUL. Il modello murino di nefropatia ostruttiva presentato in questo studio è indotto da ostruzione unilaterale dell'uretere, che può essere irreversibile o reversibile.

Il modello reversibile descritto in questo articolo consente la rimozione dell'ostruzione ureterale e l'anastomosi dell'uretere alla vescica per ripristinare completamente il flusso urinario. La conseguente decompressione renale permette lo studio del rimodellamento del tessuto in esperimenti post-danno. L'integrazione di modelli di nefropatia ostruttiva sia irreversibile che reversibile fornisce ai ricercatori un'analisi approfondita dei processi patologici e del modo in cui gli interventi terapeutici modulano sia lo sviluppo del danno sia il successivo rimodellamento del tessuto.