Name: Isolamento e Trapianto di diversi invecchiato murini del timo innesti. (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-05-13T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 47 s
Description: Impara l'isolamento e il trapianto del timo murino di diverse età in topi immunodeficienti per analizzare lo sviluppo dei linfociti T in vivo. Questo metodo consente di studiare la selezione timica e la maturazione cellulare.

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Questo lavoro è stato supportato da finanziamenti ricevuti dal National Institutes of Health (1R01AI083269).

Gli studi murini sono stati approvati dalla cura e l&#39;uso Comitato Istituzionale Animal (IACUC) della University of North Carolina a Chapel Hill e tutte le cure degli animali era in conformità con le linee guida IACUC. 1. Preparazione del neonato e Adult Thymi <ol><li> Preparare tutti i reagenti e le attrezzature prima di eutanasia topi donatori. </li><li> Sterilizzare gli strumenti chirurgici in autoclave o altri metodi appropriati. Tutte le procedure chirurgiche sono svolte sotto una cappa a flusso laminare per mantenere condizioni sterili ed evitare la contaminazione. Montare gli strumenti necessari per l&#39;estrazione di thymi da topi donatori. </li><li> Riempire piastre da 60 mm sterile 1x PBS (pH 7.4) e disporli sul ghiaccio all&#39;interno della cappa. Questo verrà utilizzato per memorizzare brevemente thymi asportato da topi donatori prima del trapianto. </li><li> Come da orientamenti etici, eutanasia topi donatori neonati per decapitazione e donatori adulti topi da CO 2 asfissia seguita da dislocazione cervicale. </li><li> Per removal del timo: Appoggiare il mouse in una posizione reclinata dorsale su un tovagliolo di carta assorbente sterile e spruzzare con il 70% di etanolo prima di effettuare una incisione. </li><li> Esporre la cavità addominale e toracica facendo un&#39;incisione mediana attraverso la pelle. Piegare la pelle sul petto e zampe anteriori per rivelare la cavità toracica. </li><li> Fare due incisioni laterali attraverso il diaframma e gabbia toracica per esporre il mediastino superiore e anteriore cavità toracica. Il timo deve essere visibile come due lobi bianche immediatamente sopra e adiacente al cuore. </li><li> Tease a parte il tessuto connettivo circostante il timo con una pinza sottile, facendo attenzione a non interrompere la capsula. Mentre trattenendo la gabbia toracica con una pinza, utilizzare una seconda coppia di pinze per estrarre i due lobi del timo posizionando pinze curve sotto l&#39;organo e tirando verticalmente. Questo può essere fatto utilizzando un ambito dissezione per estrarre thymi da topi appena nati. </li><li> Posizionare il timo in 60 millimetri dish contenente sterile 1x PBS (pH 7.4) su ghiaccio e lobi del timo separati tagliando attraverso l&#39;istmo connettivo. Rimuovere eventuali detriti dai lobi del timo facendo attenzione a non danneggiare la capsula, e tagliare il timo nel numero appropriato di sezioni per il trapianto. </li><li> Non manipolare il thymi ottenuto da topi appena nati. NOTA: Utilizzato per un massimo di due topi riceventi (1 lobo per destinatario). </li><li> Transplant il thymi ottenuto da topi adulti in un massimo di 4-6 topi riceventi. Utilizzando un paio di pinze, afferrare accuratamente un adulto lobo timico, come mostrato nella Figura 1, tagliare il timo in tre sezioni uguali utilizzando forbici chirurgiche. </li><li> Ripetere i passaggi 1,3-1,4 per ogni mouse donatore. Al fine di limitare il tempo thymi sono esposti, preparare timo 1 donatore alla volta. </li></ol> 2. Timo impianto sotto la capsula renale <ol><li> Montare l&#39;apparecchiatura pre-sterilizzato elencati nella Tabella 1. Asettica Propertecnica dovrebbe essere utilizzata nel corso della procedura per evitare l&#39;esposizione trapianto destinatari di strumenti o reagenti contaminati. </li><li> Prima del trapianto, pesare ed etichettare ogni mouse destinatario. </li><li> Impostare il microscopio da dissezione e circuito di anestesia nella cappa a flusso laminare. </li><li> Usando un rasoio elettrico, radere il lato sinistro del mouse destinatario e non assicurano capelli rimangono intorno all&#39;area utilizzata per effettuare l&#39;incisione. </li><li> Accendere vaporizzatore isofluorane e anestetizzare il mouse utilizzando una dose compresa tra 1-2%. Accertare corretta anesthetization prima di avviare la procedura chirurgica verificando l&#39;assenza di riflesso seguente pinch punta. </li><li> Dopo il mouse viene adeguatamente anestetizzato, applicare una pomata veterinaria agli occhi del mouse per prevenire la secchezza e preparare il mouse per il trapianto come segue: </li><li> Posizionare il mouse sotto il microscopio da dissezione in una posizione reclinata laterale destro in modo che il lato rasata è rivolto verso l&#39;alto. Starting nel centro della zona chirurgica, dispensare in un movimento circolare utilizzando una pipetta di trasferimento monouso 70% etanolo, seguito da povidone-iodio (Betadine). Ripetere il trattamento di etanolo / betadine 3 volte prima di effettuare una incisione. </li><li> Con le forbici dissezione fanno un 1-2 cm un&#39;incisione fianco direttamente sopra il rene. </li><li> Utilizzando pinze medie afferrare tessuto connettivo adiacente al rene e sollevare delicatamente il rene in modo che si trova in cima alla muscolatura. Per mantenere il rene esposta e in posizione sopra la muscolatura, inserire un braccio di pinze medie sotto il rene, con particolare attenzione a non disturbare il ileo renale. </li><li> Al fine di prevenire l&#39;essiccamento del tessuto, irrigare il rene con sterile 1x PBS (pH 7.4) durante ogni passaggio finché manipolazione della capsula renale e rene è completo. </li><li> Utilizzando una pinza sottile pizzicare e sollevare la capsula vicino al bordo del rene più distale alle ghiandole surrenali per separarlo dal rene. </li><li> Utilizzare un calibro 18ago per fare una incisione abbastanza grande per inserire il pezzo preparato del timo donatore (Figura 2A). Assicurarsi di mantenere l&#39;incisione capsulare più piccolo possibile per impedire la dislocazione dell&#39;innesto nel tempo. </li><li> Pur mantenendo la capsula tirato via dal rene, utilizzare una seconda coppia di pinza sottile per inserire l&#39;innesto sotto la capsula e spingere il timo il più avanti dall&#39;incisione capsulare possibile (Figura 2B). </li><li> Rimuovere le pinze da sotto il rene, e restituire delicatamente il rene al suo posto attraverso l&#39;incisione. </li><li> Chiudere la muscolatura da sutura alla parete peritoneale e l&#39;applicazione di betadine una volta chiusa. Dopo sutura, applicare la clip ferita per chiudere il derma e applicare betadine alla zona circostante. </li><li> Ritorna il mouse in una gabbia che si è riscaldato con una lampada di calore. </li><li> Monitorare ogni mouse post-operatorio fino a quando non riprende piena consapevolezza e la mobilità e non posizionare i topi that non hanno recuperato dopo anestesia in una gabbia con altri animali. </li><li> Trattare topi con post-operatorie farmaci di gestione del dolore, se necessario. Fornire topi con analgesici post-operatorie, come paracetamolo in acqua potabile ad una concentrazione di 1,6 mg / ml. </li><li> Ripetere i passaggi 2,3-2,9 per ogni mouse destinatario. </li><li> Assicurarsi che il ritorno topi alla normale attività entro post-operatorio 1 ora. Monitorare peso post-operatorio, capacità motorie, nonché l&#39;acqua e mangime attività di ciascuna mouse per determinare complicazioni derivanti della procedura di trapianto. NOTA: la perdita di peso post-operatorio, rispetto al peso pre-operatoria, nonché la mobilità alterato o mancata mangiare o bere può indicare complicazioni. </li><li> Monitorare la ricostituzione delle cellule T del sangue periferico da sanguinamento topi con coda nick seguita dalla separazione dei linfociti che utilizzano mezzi di separazione cellulare Lympholyte secondo le specifiche del costruttore. Realizzare characteriza cellule Tzione mediante colorazione con anticorpi coniugati linfociti fluorescenza specifici per i marcatori di cellule T CD3, CD4, CD8, e così come un discriminatore morti vivono come un estere attivato 8 succinimidile fluorescente. Analisi come mostrato in Figura 3 può essere realizzato mediante gating su singlets, cellule vive e cellule positive CD3. </li></ol>

<ol><li>Kappler, J. W., Roehm, N., Marrack, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+cell+tolerance+by+clonal+elimination+in+the+thymus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">T cell tolerance by clonal elimination in the thymus.</a> Cell. 49 (2), 273-280 (1987).</li>
<li>Takahama, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Journey+through+the+thymus%3A+stromal+guides+for+T-cell+development+and+selection%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Journey through the thymus: stromal guides for T-cell development and selection.</a> Nat. Rev. Immunol. 6, 127-135 (2006).</li>
<li>Klein, L., Kyewski, B., Allen, P. M., Hogquist, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+and+negative+selection+of+the+T+cell+repertoire%3A+what+thymocytes+see+%28and+don%E2%80%99t+see%29%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Positive and negative selection of the T cell repertoire: what thymocytes see (and don’t see).</a> Nat. Rev. Immunol. 14 (6), 377-391 (2014).</li>
<li>Schwartz, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquisition+of+immunologic+self-tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Acquisition of immunologic self-tolerance.</a> Cell. 57 (7), 1073-1081 (1989).</li>
<li>Kishimoto, H., Sprent, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+defect+in+central+tolerance+in+NOD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A defect in central tolerance in NOD mice.</a> Nat. Immunol. 2 (11), 1025-1031 (2001).</li>
<li>Anderson, G., Jenkinson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigating+central+tolerance+with+reaggregate+thymus+organ+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Investigating central tolerance with reaggregate thymus organ cultures.</a> Methods. Mol. Biol. 380, 185-196 (2007).</li>
<li>He, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+development+of+autoreactive+T+cells+in+NOD+mice+is+regulated+in+an+age-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymic development of autoreactive T cells in NOD mice is regulated in an age-dependent manner.</a> J. Immunol. 191 (12), 5858-5866 (2013).</li>
<li>Stewart, C. C., Stewart, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chapter+6.+Immunophenotyping%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cytometry%22%5BJournal%5D)">Chapter 6. Immunophenotyping.</a> Current Protocols in Cytometry. , John Wiley & Sons, Inc. (2001).</li>
<li>Rice, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymic+transplantation+for+complete+DiGeorge+syndrome%3A+medical+and+surgical+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pediatr.+Surg%22%5BJournal%5D)">Thymic transplantation for complete DiGeorge syndrome: medical and surgical considerations.</a> J. Pediatr. Surg. 39 (11), 1607-1615 (2004).</li>
<li>Markert, M. L., et al. Transplantation of thymus tissue in complete DiGeorge Syndrome. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMarkert%2C+ML+%22N.+Engl.+J.+Med%22">N. Engl. J. Med</a>. 341, 1180-1189 (1999).</li>
<li>Market, M. L., Devlin, B. H., McCarthy, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymus+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymus transplantation.</a> Clin. Immunol. 135 (2), 236-246 (2010).</li>
<li>Wells, A. D., Li, X., Strom, T. B., Turka, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+peripheral+T-cell+depletion+in+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Philos.+Trans.+R.+Soc.+Lond.+B.+Biol.+Sci%22%5BJournal%5D)">The role of peripheral T-cell depletion in transplantation tolerance.</a> Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 356 (1409), 617-623 (2001).</li>
<li>Albuquerque, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+FOXN1-Deficiency+is+associated+with+ab+double-negative+and+FoxP3%2B+T-cell+expansions+that+are+distinctly+modulated+upon+thymic+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Human FOXN1-Deficiency is associated with ab double-negative and FoxP3+ T-cell expansions that are distinctly modulated upon thymic transplantation.</a> PLoS One. 7 (5), e37042(2012).</li>
<li>Chinn, I. K., Milner, J. D., Scheinberg, P., Douek, D. C., Markert, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thymus+transplantation+restores+the+repertoires+of+forkhead+box+protein+3+%28FoxP3%29%2B+and+FoxP3-+T+cells+in+complete+DiGeorge+anomaly%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Thymus transplantation restores the repertoires of forkhead box protein 3 (FoxP3)+ and FoxP3- T cells in complete DiGeorge anomaly.</a> Clin Exp Immunol. 173 (1), 140-149 (2013).</li>
<li>Savino, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thymus+is+a+common+target+organ+in+infectious+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">The thymus is a common target organ in infectious diseases.</a> PLoS Pathog. 2 (6), e62(2006).</li>
</ol>

Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti da rivelare.

Gli eventi che regolano la selezione timica sono poco conosciuti. Studi recenti hanno dimostrato cambiamenti ontogenici nell'efficienza della selezione. L'accoppiamento di questo approccio con diversi topi donatori e riceventi di timo transgenico faciliterà ulteriormente gli studi per identificare gli eventi e i parametri che regolano la selezione timica. In particolare, il trapianto di timo viene utilizzato per il trattamento e la gestione delle malattie delle cellule T e del timo osservate, ad esempio, nei neonati atim...

Il timo è un organo in cui gli eventi critici nello sviluppo delle cellule T si verificano 1. Timociti residente sul riarrangiamento del recettore delle cellule T (TCR) α e β geni, subiscono una serie di interazioni con lymphostromal e cellule presentanti l&#39;antigene (APC) nelle regioni corticali e midollari del timo 2. Thymic selezione positiva è mediata da cellule epiteliali corticali timici (TEC) per produrre timociti che riconoscono peptidi antigenici nell&#39;ambito dell&#39;ospite classe complesso maggiore di istocompatibilità (MHC) I e II molecole 2-3. Successivamente timica selezione negativa comporta spurgo dei timociti autoreattivi, guidato da un&#39;interazione con TEC midollare o cellule dendritiche (DC) che presentano peptidi derivati ​​da auto-proteine ​​legate da MHC di classe I e II molecole 3. Il risultato finale di questi processi è la creazione di un pool di cellule mature CD4 + e CD8 + T in grado di rispondere ad un ampio spettrodi antigeni estranei mentre esibendo reattività minima auto-proteine ​​4. L&#39;efficienza di eventi di selezione timici è influenzata da una serie di fattori, tra cui la maturazione timica, frequenza midollare e TEC corticale, composizione sottoinsieme di timico DC, e la fonte di precursori timici 3. In particolare, la selezione del timo aberranti può provocare autoimmuni 5 o immunodeficienza patologie che derivano da alterazioni selezione negativa o positiva, rispettivamente. Gli eventi molecolari che regolano la selezione del timo, tuttavia, sono poco conosciuti. In vitro approcci come reaggregate colture d&#39;organo del timo (RTOC) 6, hanno dimostrato di essere utile per analizzare gli eventi di base associate con la selezione del timo, ma non riescono a riassumere pienamente le dinamiche del corso negli eventi vivo. Di conseguenza, questo approccio basato trapianto-timico è stato stabilito a migliori eventi di selezione thymocyte studio in vivo 7 </sup&gt;. Questo protocollo descrive trapianto thymi da topi donatori neonati e per adulti in immunodeficienti topi riceventi SCID. Questa tecnica permette lo studio dei meccanismi che regolano la selezione timica positiva e negativa, nonché uscita timica di vari sottogruppi di cellule T durante l&#39;ontogenesi. Recentemente, questo approccio è stato utilizzato per dimostrare che l&#39;efficienza della selezione timica è limitato subito dopo la nascita in topi con conseguente aumento sviluppo di cellule T autoreattive e una ridotta repertorio cellule T specifiche per antigeni estranei 7.

<table><tbody><tr><td>Etanolo&nbsp;</td><td>Decon Laboratories</td><td>2705HC</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>GIBCO</td><td>14190-144</td><td>pH 7.4</td></tr><tr><td>Soluzione di betadina</td><td>Prodotti Purdue</td><td>67618-150-17</td><td></td></tr><tr><td>Ago calibro 18</td><td>BD</td><td>305195</td><td></td></tr><tr><td>Suture (1.0 metrico)</td><td>Ethicon</td><td>J493G</td><td>18" (45cm)</td></tr><tr><td>AUTOCLIP Clip per ferite (9mm)</td><td>Clay Adams&reg; Pipetta di</td> trasferimento <td>427631</td><td></td></tr><tr><td></td><td>marca Fisher Scientific</td><td>13-711-20</td><td>Mouse</td></tr><tr><td>anti-CD3 Ab</td><td>eBioscience</td><td>11-0031-85</td><td>Clone: 1452C11</td></tr><tr><td>Topo anti-CD4 Ab</td><td>eBioscience</td><td>48-0042-82</td><td>Clone: RM4-5</td></tr><tr><td>Topo anti-CD8 Ab</td><td>eBioscience</td><td>25-0081-82</td><td>Clone: 53-6.7</td></tr><tr><td>Lancetta</td><td>Medipoint</td><td>Goldenrod 4mm</td><td></td></tr><tr><td>Pacific Orange Succinimidyl Ester, sale di trietilammonio</td><td>Invitrogen</td><td>P30253</td><td></td></tr><tr><td>Piastre in polipropilene a 96 pozzetti con fondo rotondo</td><td>Corning</td><td>3365</td><td></td></tr><tr><td>Provette a grappolo in polipropilene da 1,2 ml</td><td>Corning</td><td>4401</td><td></td></tr><tr><td>Provette in polipropilene da 5 ml</td><td></td> BD <td>352002</td><td></td></tr><tr><td>40uM Nylon Cell Filtro</td><td>Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di paraformaldeide al 16%,</td><td>servizi di microscopia elettronica</td> di grado EM <td>15710</td><td></td></tr><tr><td>Unguento ottico Puralube</td> pericoloso Fisher <td>Scientific</td><td>NC0138063</td><td></td></tr><tr><td>Linfolita</td><td>Cedarlano</td><td>CL5030</td><td></td></tr><tr><td>Piatto per colture cellulari da 60 mm</td><td>Corning</td><td>430196</td><td>60 mm x 15 mm, sterile</td></tr></tbody></table>

isolamento e trapianto di diversi invecchiato murini del timo innesti.

Isolation and Transplantation of Different Aged Murine Thymic Grafts.

I meccanismi che regolano l&#39;efficacia della selezione timica restano mal definiti. Il metodo qui presentato permette in vivo analisi dello sviluppo e selezione di cellule T specifiche per sé e antigeni estranei. L&#39;approccio prevede l&#39;impianto di innesti timici derivate da diversi topi anziani in riceventi SCID immunodeficienti. Nel corso di un periodo relativamente breve di tempo i destinatari sono completamente ricostituiti con cellule T derivate dal trapianto del timo impiantata. Solo timociti semina timo al momento della selezione subiscono isolamento e svilupparsi in cellule T mature. Come tali, i cambiamenti nella natura e la specificità delle cellule T trapiantate in funzione di eventi timici dipendenti dall&#39;età possono essere valutate. Anche se è richiesta competenza tecnica per il trapianto timica successo, questo metodo fornisce una strategia unica di studiare in vivo una vasta gamma di patologie che sono causa o il risultato di aberrant funzione e / o homeostas timicoè.

Il successo di questa procedura dipende trauma chirurgico minimo nonché il posizionamento accurato del graft sotto la capsula renale. L&#39;innesto timica deve essere tagliato per assicurare dimensioni appropriate sezioni timici per il successivo trapianto, come mostrato in Figura 1. Seguendo lo schema di figura 1, thymi da topi neonati o adulti può essere usato per il trapianto subcapsular successo con risultati costanti e riproducibili attecchimento delle cellule T. Come accennato, ad...

Questo rapporto fornisce una descrizione dettagliata del trapianto di timo murino da diversi topi donatori anziani sotto la capsula renale di riceventi di topi immunodeficienti. L'obiettivo di questo approccio è quello di modellare lo sviluppo delle cellule T e gli eventi di selezione timica in vivo.

Isolamento e Trapianto di diversi invecchiato murini del timo innesti.

The mechanisms that regulate the efficacy of thymic selection remain ill-defined. The method presented here allows in vivo analyses of the development and ...

L'obiettivo generale di questa procedura è consentire l'analisi in vivo della selezione negativa dei linfociti T in un determinato punto temporale durante l'ontogenesi dei linfociti T. Questo risultato si ottiene innanzitutto prelevando il timo da un topo donatore all'età specifica di interesse. Nel secondo passaggio, viene esposta la rene di un topo ricevente di ceppo skid e il timo del donatore viene impiantato chirurgicamente sotto la capsula renale.Nell'ultimo passaggio, il ricevente viene chiuso. Alla fine, il successo del ripristino del compartimento dei linfociti T periferici può essere valutato mediante citometria a flusso. Questo metodo consente lo studio temporale della selezione timica e della produzione di linfociti T, fornendo essenzialmente un'istantanea della produzione di linfociti T in un particolare momento di interesse durante l'antigene dei linfociti T. Per rimuovere il timo da un topo adulto o neonato, posizionare l'animale in posizione supina su un foglio di carta assorbente sterile e spruzzare i peli con etanolo al 70%.Quindi effettuare un'incisione mediana attraverso la cute per esporre le cavità addominale e toracica e ripiegare la cute sul torace e sugli a

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Abbiamo sviluppato strumenti di laboratorio nuovi e protocolli per l'acquisizione di immagini intravitale del timo. La nostra tecnica dovrebbe aiutare nell'identificazione di "nicchie" all'interno del timo in cui lo sviluppo delle cellule T si verifica.

Imaging intravitale del Timo mouse utilizzando 2-Photon Microscopy

Questo video dimostra l'induzione della malattia intestinale del trapianto contro l'ospite, GvHD, in un topo ricevente irradiato letalmente utilizzando cellule staminali ematopoietiche allogeniche e linfociti T alloreattivi splenici che inducono GvHD. Questo protocollo aiuta a stabilire un modello di GvHD intestinale acuta grave per comprendere il meccanismo della malattia e sviluppare opzioni terapeutiche innovative.

Induzione della malattia del trapianto contro l'ospite in modelli murini tramite trapianto allogenico di midollo osseo e cellule spleniche

Il trapianto di pelle di coda è un potente modello per studiare il rigetto dipendente dalle cellule T e l'induzione della tolleranza durante le risposte immunitarie allogeniche nei topi. I vantaggi di questo protocollo sono la chirurgia invasiva minore e la facilità di monitoraggio senza la necessità di sacrificare il topo ricevente.

Il trapianto di coda della pelle per studiare allogenico di cellule T CD4 risposte in topi

Qui si descrive un metodo efficace per l'isolamento, l'identificazione e la purificazione delle cellule epiteliali del timo topo (TEC). Il protocollo può essere utilizzato per gli studi di funzione del timo per il normale sviluppo delle cellule T, la disfunzione del timo, e la ricostituzione delle cellule T.

Isolamento, identificazione e purificazione di cellule murine timica epiteliali

Questo articolo descrive la metodologia in vivo e in vitro per caratterizzare i progenitori di sedimentazione timica mediante l'analisi della cinetica di generazione, fenotipo e numero della loro progenie di cellule T.

Caratterizzazione di timica assestamento Progenitori nell&#39;embrione mouse Uso<em&gt; In Vivo</em&gt; E<em&gt; In Vitro</em&gt; Saggi

Per studiare l'allotrapianto combinato di organi solidi e composito vascolarizzato, descriviamo un nuovo modello eterotopico di trapianto di parete toracica, timo e cuore nei topi utilizzando una tecnica di cuffia cervicale senza sutura.

A Novel microchirurgica modello per eterotopica, in blocco parete toracica, Timo, e trapianto cardiaco nei topi

Murino di trapianto a tutto spessore della pelle è un modello consolidato per studiare il rifiuto in un ambiente alloimmune. Qui, mettiamo a disposizione un tutorial di ogni passo coinvolti in esecuzione di un BALB / c -&gt; C57BL / 6 a tutto spessore trapianto di pelle.

Murine tutto spessore trapianto della pelle

L'obiettivo del protocollo è di mostrare longitudinale videomicroscopia tracking in tempo reale dei timociti di scansione microscopia in impianti timici nell'alloggiamento anteriore dell'occhio del mouse laser. La trasparenza della cornea e la vascolarizzazione dell'innesto permette di registrare continuamente reclutamento di cellule progenitrici e l'uscita di cellula T maturo.

Inseguimento In Vivo dei timociti nell'alloggiamento anteriore dell'occhio di microscopia a scansione Laser in tempo reale

Forniamo un metodo semplice ed efficiente per trapiantare 2'-deossiguanosina trattata E18.5 tiromusnella capsula renale di un topo nudo. Questo metodo dovrebbe aiutare nello studio sia della funzione epiteliale timica che della maturazione delle cellule T.

Trapianto di subcapsulare renale di 2'-Deoxyguanosine-Treated Murine Embryonic Thymus in Topi Nudi

Qui presentiamo protocolli che consentono l'isolamento di cellule stromali da osso murino, midollo osseo, timo e tessuto timico umano compatibile con la multiomica a singola cellula.

Isolamento delle cellule stromali da organi ematopoietici

Questo protocollo presenta una tecnica semplificata di anastomosi per suture end-to-side per il trapianto di cuore cervicale murino, fornendo un modello robusto e riproducibile per lo studio dell'immunologia dei trapianti.

Trapianto cardiaco eterotopico cervicale usando la tecnica dell'anastomosi end-to-side per studiare l'immunologia del trapianto

Impara l'isolamento e il trapianto del timo murino di diverse età in topi immunodeficienti per analizzare lo sviluppo dei linfociti T in vivo. Questo metodo consente di studiare la selezione timica e la maturazione cellulare.

Isolamento e Trapianto di diversi invecchiato murini del timo innesti.

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