Un metodo per infliggere Chiuso Testa trauma cranico in Drosophila

L'obiettivo generale di questa procedura è infliggere una lesione cerebrale traumatica alla testa chiusa. Nelle mosche. Ciò si ottiene posizionando prima le mosche in una fiala a un pollice dal fondo.

Il secondo passo consiste nel collegare la fiala al dispositivo HIIT. Successivamente, la molla viene deviata in un angolo particolare e la fiala viene rilasciata e lasciata riposare completamente. In definitiva, una varietà di saggi morfologici e molecolari comportamentali può essere utilizzata per caratterizzare le conseguenze della lesione cerebrale traumatica risultante.

Il vantaggio principale di questo metodo rispetto ai metodi esistenti, come il metodo della caduta del peso dei roditori, è che molti animali possono essere studiati in un breve periodo di tempo. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in un campo di lesione cerebrale traumatica, ad esempio perché le conseguenze della lesione cerebrale traumatica variano in individui diversi. Per iniziare, assemblare le materie prime elencate nella tabella uno del protocollo di testo allegato.

Piegare i morsetti con un paio di pinze in modo che aderiscano perfettamente alla molla. Quindi centrare i morsetti rispetto alla larghezza della tavola e appoggiarli l'uno contro l'altro con il morsetto esterno a filo con il bordo della tavola. Regolare la molla in modo che sia parallela alla lunghezza della tavola, quindi fissare i morsetti sopra la molla e sulla tavola utilizzando quattro viti.

Quindi, avvolgi una striscia di nastro adesivo in Velcro. Una volta intorno all'estremità libera della molla, il bordo esterno del velcro dovrebbe essere a filo con l'estremità della molla. Posiziona il coperchio del secchiello del ghiaccio capovolto, centrato e stretto contro la tavola di legno.

Orientare la regione rialzata del coperchio del secchiello del ghiaccio in modo che il bordo lungo sia parallelo alla larghezza della tavola. Far scorrere l'intero dispositivo contro un oggetto fisso come una parete in modo che il coperchio del secchiello del ghiaccio sia incastrato tra la tavola e l'oggetto e non si muova. Quindi fissare il goniometro di carta al fondo di un cartone, far volare il vassoio della fiala e posizionarlo sul bordo contro la lunghezza del pannello in modo che il segno di 90 gradi sia allineato con la molla.

Quando viene tirato indietro in una posizione perfettamente verticale, posizionare da una a 60 mosche anestetizzate con anidride carbonica in una fiala vuota e tappare la fiala con un batuffolo di cotone aderente. Quindi disegna una linea sulla fiala a un pollice dalla sua base, fai cadere le mosche dai lati della fiala e spingi il batuffolo di cotone finché non corrisponde a una linea appena tracciata. Attendi cinque minuti affinché le mosche recuperino la mobilità dall'anidride carbonica.

Quindi, inserire l'estremità della molla nella fiala fino a quando il bordo interno del Velcro non è a filo con la parte superiore della fiala. In questo modo la fiala si fissa alla molla creando un raccordo a compressione stretto con la molla in piano. Assicurarsi che un pollice della fiala si sovrapponga alla regione rialzata del coperchio del secchio del ghiaccio in questo momento.

Applicare una protezione per l'udito perché l'impatto della fiala contro il coperchio del secchiello del ghiaccio produce un forte rumore. Quindi, tieni la fiala nella regione del Velcro usando il pollice e l'indice della mano sinistra con la mano destra, tieni la tavola ben stretta alla parte superiore del banco. Quindi, tirare la molla perfettamente dritta all'angolazione desiderata, quindi rilasciare la molla.

Attendere che la molla si fermi completamente, quindi rimuovere la fiala dalla molla. Posizionare la fiala sul piano di lavoro e lasciare che le mosche si riprendano per almeno cinque minuti. Durante questo periodo, le mosche riacquisteranno lentamente il loro normale movimento.

Successivamente, trasferisci le mosche in una fiala con cibo per mosche per un'analisi successiva o sottoponi le mosche a un altro colpo, le fiale possono essere riutilizzate molte volte. Lo scopo dell'esperimento era quello di determinare l'effetto della gravità delle lesioni sull'indice di mortalità a 24 ore. La gravità del trauma è stata determinata dall'angolo di deflessione della molla da zero a 90 gradi prima del rilascio.

L'esperimento è stato eseguito su mosche di due età diverse, mosche da zero a sette giorni e mosche da 20 a 27 giorni. I risultati mostrano che le lesioni più gravi causano un indice di mortalità più elevato. I moscerini più vecchi avevano un indice di mortalità maggiore rispetto ai moscerini più giovani quando la deflessione primaverile era di 50 gradi o superiore.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come infliggere lesioni cerebrali traumatiche usando le mosche.