22 ottobre 2015
Qui presentiamo un protocollo per indurre l'anoressia basata sull'attività (ABA) in topi adolescenti femmine. L'ABA è una condizione di iperattività evocata dall'imposizione di restrizioni alimentari ai roditori con accesso a una ruota da corsa. Questo fenomeno viene utilizzato come modello per studiare la neurobiologia alla base dell'anoressia nervosa.
L'obiettivo generale di questa procedura è indurre l'anoressia basata sull'attività nei topi femmine adolescenti. Ciò si ottiene introducendo prima i topi a una ruota da corsa e monitorando continuamente per almeno tre giorni la loro attività sulla ruota da corsa. Successivamente, gli M vengono sottoposti a un programma limitato di accesso al cibo e vengono registrati i cambiamenti nella loro corsa volontaria delle ruote.
In definitiva, questo modello di anoressia basato sull'attività può dimostrare che i cambiamenti neurobiologici sono associati a cambiamenti nel comportamento di un animale quando gli viene concesso un accesso limitato al cibo. La mia speranza è che questo modello di anoressia basata sull'attività possa aiutare a migliorare la terapia dell'anoressia nervosa perché identificherà discrete differenze individuali nella neurochimica e nella neuroanatomia che sono alla base della resilienza e della vulnerabilità all'anoressia nervosa. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sull'anoressia nervosa, può essere applicato anche ad altre malattie che hanno comorbilità con l'ansia.
Generalmente, la nuità individuale, questo metodo avrà difficoltà perché la vulnerabilità di ogni animale all'attività basata sull'AIA è molto variabile. Pertanto, è necessario un attento monitoraggio della perdita di peso, dell'alimentazione e dell'attività dell'animale, oppure gli animali possono iniziare a configurarsi. Posizionare il computer e l'hub USB nella stanza degli animali, lontano dall'acqua corrente e dal traffico pedonale, ma entro il raggio d'azione delle ruote da corsa.
Utilizzare anche un alimentatore di backup per il computer e l'hub USB utilizzando gli interruttori sull'hub. Impostare i numeri dei canali in modo che corrispondano ai numeri dei canali di tutte le ruote in movimento che monitorerà. Ora avvia il software di gestione delle ruote in esecuzione e verifica che il software riconosca ciascun trasmettitore.
Ogni ruota verrà elencata nella finestra del programma. Sotto la voce sensori ruota. Il software assegnerà automaticamente un numero ID a ciascuna ruota.
Può essere utile annotare questo numero sul volante. Se una ruota non viene riconosciuta, sostituire le batterie della ruota. Quindi, prepara una gabbia per ogni soggetto topo con lettiera, nidi, libero accesso all'acqua e una ruota da corsa.
La ruota di scorrimento deve muoversi liberamente senza toccare le pareti della gabbia, il cestello del cibo o la parte superiore della gabbia. Inoltre, verificare che il software stia aggiornando il conteggio delle ruote. Per acclimatarsi, gli animali ospitano ogni topo individualmente in una gabbia con una ruota da corsa e l'accesso a circa 100 grammi di cibo secco e 50 grammi di cibo umido nella gabbia.
Nel software. Iniziare l'acquisizione e l'archiviazione dei dati selezionando avvia acquisizione. Dal menu file, scegli la directory in cui verranno salvati i dati fino all'arresto.
Il software registrerà continuamente ogni giorno poco prima dell'inizio della fase di buio del ciclo di luce. Pesare l'animale, pesare il cibo umido e pesare il cibo secco. Riempire il contenitore del cibo secco se contiene meno di 50 grammi e sostituire il contenitore del cibo umido.
Se il cibo si secca o si sporca con la lettiera, registrare manualmente il conteggio delle ruote allo stesso tempo. Per eseguire il backup dei dati digitali il primo giorno di restrizione alimentare, rimuovere tutto il cibo umido e secco dalla gabbia a metà della parte del ciclo di luce della giornata. Più tardi, all'inizio del periodo buio, registrare il peso dell'animale e il conteggio delle ruote.
Quindi mettere circa 50 grammi di cibo secco nella tramoggia e fornire cinque grammi di cibo umido in una barca bianca. Successivamente, prepara una nuova gabbia con lettiera e nidi per ogni animale. Dopo due ore con il trasferimento del cibo, la ruota da corsa e qualche manciata di lettiera sporca nella gabbia preparata.
Trasferisci i topi nelle nuove gabbie senza cibo. Al termine del periodo di accesso al cibo, registrare il peso degli alimenti UNE e il conteggio delle ruote. Ripeti questo processo ogni giorno per tutta la durata dell'esperimento.
Se in qualsiasi momento un animale scende al di sotto del 75% del suo peso iniziale, rimuovilo dall'esperimento. Altre indicazioni di un'eccessiva fame che indicherebbero che l'animale dovrebbe essere rimosso dall'esperimento includono una postura curva e l'incapacità di muoversi nella gabbia. L'animale può essere freddo al tatto e non riuscire a mangiare durante le due ore di accesso al cibo.
Dopo tre giorni di restrizione alimentare, terminare l'esperimento. Sopprimere l'animale per raccogliere i tessuti o consentire agli animali di riprendersi. Per ulteriori test comportamentali nel software, fare clic sull'opzione di fine acquisizione nel menu file.
I dati sono ora salvati in un file WLS nella directory scelta All'inizio dell'esperimento, rimuovere le ruote in movimento dalle gabbie e quindi rimuovere le batterie. Il recupero degli animali dovrebbe essere consentito ad libido, l'accesso al cibo. Ora, esporta i dati in un foglio di calcolo.
Scegliere l'opzione di esportazione nel menu file e selezionare i file WLS desiderati nell'opzione del file di dati di origine. Quindi, seleziona la data e l'ora di inizio e fine e infine seleziona ciascun sensore ruota per l'esportazione. Nell'elenco dei sensori delle ruote, i dati possono quindi essere analizzati secondo necessità per studiare l'effetto di a b.
In una popolazione simile all'anoressia nervosa umana, le femmine di topi adolescenti sono state acclimatate alla ruota a P 36. Subito dopo l'inizio della pubertà, la privazione del cibo è iniziata a P 40 e il loro peso corporeo è diminuito drasticamente, gli animali di controllo non avevano ruote da corsa o restrizioni alimentari. Gli animali affamati correvano eccessivamente dopo l'inizio della restrizione alimentare.
L'analisi dettagliata dell'attività della ruota ha mostrato un andamento circadiano. Curiosamente, anche durante l'accesso al cibo, gli animali affamati sceglievano di usare la ruota da corsa. Dopo l'inizio della restrizione alimentare, alcuni animali hanno mostrato un aumento dell'attività appena prima del momento dell'alimentazione, che può essere chiamato cibo Attività anticipatoria Uno maestro per creare una coorte per sottoporsi a uno scenario basato sull'attività può essere raggiunto in un paio d'ore se viene eseguito correttamente.
Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di registrare manualmente il conteggio delle ruote almeno una volta al giorno. L'interruzione imprevista della linea di alimentazione o l'esaurimento delle batterie possono interrompere il conteggio delle ruote generato dal computer Seguendo questa procedura. Altri metodi come l'immunocitochimica, l'elettrofisiologia e i test comportamentali possono essere eseguiti per rispondere a ulteriori domande, come ad esempio il modo in cui l'induzione dell'anoressia basata sull'attività influisce sull'anatomia del cervello, sulle proprietà biofisiche e sul comportamento.
Questo articolo presenta un protocollo per indurre l'anoressia basata sull'attività (ABA) in topi adolescenti femmine, un modello per studiare la neurobiologia dell'anoressia nervosa. Il protocollo prevede la restrizione alimentare e il monitoraggio dell'attività della ruota per osservare i cambiamenti comportamentali.
The activity-based anorexia (ABA) rodent model provides a translationally relevant system for dissecting the neurobiological mechanisms underlying anorexia nervosa, a disorder with high mortality and limited therapeutic options. By enabling controlled manipulation of food access and activity, this model supports mechanistic de-risking and target validation at the intersection of behavioral neuroscience and psychiatric disease. Its quantitative outputs and individual variability inform predictive confidence and portfolio triage in early-stage neuropsychiatric drug discovery.
The ABA model integrates into the neuropsychiatric discovery continuum from early mechanistic studies to preclinical candidate evaluation.