Name: Immunofluorescenza per Monitorare il Cellular assorbimento di Lattoferrina umana e la sua associata attività antivirale contro il virus dellepatite C (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-10-01T13:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 28 s
Description: Scopri come monitorare l'internalizzazione della lattoferrina umana nelle cellule epatiche mediante immunofluorescenza e valutarne l'attività antivirale contro HCV. Questo metodo rivela il potenziale terapeutico della lattoferrina.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Questo lavoro è stato finanziato sia dagli Istituti Canadesi di Ricerca Sanitaria e Scienze Naturali che dal Consiglio di Ricerca Ingegneristica del Canada. M. Bisaillon è un Chercheur Boursier Senior del Fonds de Recherche en Santé du Québec e anche un membro del Centre de Recherche Clinique du Centre Hospitalier Universitaire de Sherbrooke. Ringraziamo il Dr. Ralf Bartenschlager per il generoso dono del sistema di repliconi HCV. Ringraziamo anche il Dr. Charles Rice e il Dr. Daniel Lamarre per aver gentilmente fornito la linea cellulare epatica. Vogliamo anche ringraziare Guillaume Tremblay per l'assistenza tecnica.

1. Le celle di preparazione e trattamento <ol><li> In una piastra a 24 pozzetti, mettere una copertura in vetro sul fondo dei pozzetti. Lavare ogni pozzetto con tampone fosfato (PBS). </li><li> Seme Huh-7 cellule di supporto HCV replicone subgenomico in ciascun pozzetto ad una densità di 5 × 10 4 cellule / pozzetto. Se non esiste alcun trattamento per fare, le cellule possono essere seminate ad una densità maggiore. Il terreno di coltura è Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) supplementato con 10% siero fetale bovino (FBS), 2 mM L-glutammina, 1 mM sodio piruvato e 250 mg / ml G-418 (per mantenere la replicone). </li><li> Incubare a 37 ° C e 5% CO 2. Il giorno dopo, trattare le cellule con 3 mM di HLF purificata da latte umano. </li></ol> 2. Paraformaldeide / saccarosio Preparazione (12% PAF e il 12% di saccarosio) <ol><li> Mettere 500 ml di PBS in un becher e riscaldarla tra 20 ° C e 30 ° C. Sciogliere 60 g di saccarosio in PBS. Sciogliere 60 g di paraformaldeide (PAF) nel / soluzione di saccarosio PBS. Aggiungere lentamente NaOH 2N (3 a 7 ml) fino a soluzione limpida ottenuta. </li><li> Regolare il pH a 7,4 con HCl. Volume completa a 500 ml con PBS. Filtra per gravità su filtro Whatman. Prima dell&#39;uso, diluire con PBS ad una concentrazione finale di 4% e il 4% PAF saccarosio (memoria 4 ° C per 1 settimana massimo). </li></ol> 3. immunofluorescenza <ol><li> Al tempo desiderato (0 ore, 2 ore o 24 ore di trattamento), lavare le cellule due volte (1 minuto) con PBS e fissare con PBS / 4% PAF / 4% di saccarosio per 20 minuti a temperatura ambiente. Le cellule sono tipicamente a 30-40% di confluenza e sono utilizzati 1,5x10 5 cellule. </li><li> Permeabilize le cellule con 0,15% triton X-100 in PBS per 5 minuti a RT e blocco in siero normale di capra 10% (NGS) in PBS per 20 min. </li><li> Diluire l&#39;anticorpo primario della proteina di interesse in 10% NGS (esempio: principale del mouse anticorpo anti-HLF diluito 1: 1000). Applicare l&#39;anticorpo primario alle cellule. </li><li> Dopo 4 ore a temperatura ambiente o O /N a 4 ° C, lavare le cellule tre volte per 5 min a 10% NGS. Macchiare le cellule con anticorpo secondario marcato con fluorocromo diluito in 10% NGS (esempio: Fluorocromo con lunghezza d&#39;onda di eccitazione di 488 nm legata ad un anticorpo anti-topo 1: 1.000) per 1 ora a RT al buio. </li><li> Lavare le cellule una volta per 5 minuti con PBS e macchiare le cellule con 4 &#39;, 6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) (1 mg / ml) per 15 minuti a RT al buio. </li><li> Lavare le cellule due volte per 5 minuti con PBS. Monte coprire occhiali sul mezzo di montaggio SlowFade prima visualizzazione tramite microscopia. Le cellule sono ora pronti per l&#39;analisi da epifluorescenza o microscopia confocale. </li><li> Utilizzare diversi controlli per assicurare la specificità del rilevamento. Ad esempio, tutti gli anticorpi possono essere omessi per rilevare autofluorescenza. L&#39;anticorpo primario può essere omesso per determinare la colorazione non specifica da parte dell&#39;anticorpo secondario. Infine, se possibile, controllare cellule o tessuti che non lo fannoesprimono la molecola di interesse può anche essere usato. </li><li> Visualizzare i campioni utilizzando appropriati microscopio a fluorescenza (epifluorescenza o confocale) e set di filtri appropriati per l&#39;etichetta fluorescente usato. Le diapositive possono anche essere memorizzati in una scatola di diapositive a &lt;-20 ° C per un esame successivo. </li></ol> 4. microscopia a fluorescenza <ol><li> Conservare i campioni al buio per evitare photobleaching. Accendere la sorgente di luce del microscopio scelta (epifluorescenza o confocale). </li><li> Accendere il microscopio. Accendere la fotocamera per il microscopio. Mettere il vetrino sul microscopio per la visualizzazione. Aggiungere olio per immersione sul vetrino per aumentare l&#39;apertura numerica della lente obiettivo. </li><li> Selezionare i filtri appropriati. Regolare la messa a fuoco e l&#39;obiettivo appropriato. Regolare le imposte, al fine di rilevare il fluorocromo appropriata ma evitare photobleaching. Mantenere luci ambientali per minimizzare sfondo chiaro quando guardando campione. </li><li> Cambia °filtri e di visualizzare diversi fluorocromi (ad esempio DAPI e per una lunghezza d&#39;onda di eccitazione di 488 nm). Scatta foto con la fotocamera. </li></ol>

<ol><li>Odell, I. D., Cook, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescence+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Derm%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescence techniques.</a> J Invest Derm. 133 (1), e4(2013).</li>
<li>Portugal, J., Waring, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assignment+of+DNA+binding+sites+for+4%E2%80%99%2C6-diamidine-2-phenylindole+and+bisbenzimide+%28Hoechst+33258%29.+A+comparative+footprinting+study%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta%22%5BJournal%5D)">Assignment of DNA binding sites for 4’,6-diamidine-2-phenylindole and bisbenzimide (Hoechst 33258). A comparative footprinting study.</a> Biochim Biophys Acta. 949 (2), 158-168 (1988).</li>
<li>Lichtman, J. W., Conchello, J. -A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Fluorescence microscopy.</a> Nat Methods. 2 (12), 910-919 (2005).</li>
<li>St Croix, C. M., Shand, S. H., Watkins, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Confocal+microscopy%3A+comparisons%2C+applications%2C+and+problems%5BTitle%5D)+AND+%22BioTechniques%22%5BJournal%5D)">Confocal microscopy: comparisons, applications, and problems.</a> BioTechniques. 39, Suppl 6. S2-S5 (2005).</li>
<li>Yi, M., Kaneko, S., Yu, D. Y., Murakami, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepatitis+C+virus+envelope+proteins+bind+lactoferrin%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+virology%22%5BJournal%5D)">Hepatitis C virus envelope proteins bind lactoferrin.</a> Journal of virology. 71, 5997-6002 (1997).</li>
<li>Wakabayashi, H., Oda, H., Yamauchi, K., Abe, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactoferrin+for+prevention+of+common+viral+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J+Inf+Chem%22%5BJournal%5D)">Lactoferrin for prevention of common viral infections.</a> J Inf Chem. 20 (11), 666-671 (2014).</li>
<li>Picard-Jean, F., Bouchard, S., Larivée, G., Bisaillon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intracellular+inhibition+of+HCV+replication+represents+a+novel+mechanism+of+action+by+the+innate+immune+Lactoferrin+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+research%22%5BJournal%5D)">The intracellular inhibition of HCV replication represents a novel mechanism of action by the innate immune Lactoferrin protein.</a> Antiviral research. 111, 13-22 (2014).</li>
<li>Johnson, G. D., Davidson, R. S., McNamee, K. C., Russell, G., Goodwin, D., Holborow, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fading+of+immunofluorescence+during+microscopy%3A+a+study+of+the+phenomenon+and+its+remedy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Fading of immunofluorescence during microscopy: a study of the phenomenon and its remedy.</a> J Immunol Methods. 55 (2), 231-242 (1982).</li>
<li>Green Remington, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((fluorescent+protein%3A+a+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Sci%22%5BJournal%5D)">fluorescent protein: a perspective.</a> Protein Sci. 20 (9), 1509-1519 (2011).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

L&#39;epidemia HCV rimane una minaccia globale, con l&#39;80% dei pazienti contagiati in via di sviluppo una infezione cronica, mettendoli a rischio di cirrosi, insufficienza epatica o epatocarcinoma. Azione diretta agenti antivirali mirati replicazione di HCV e la maturazione rappresentano agenti anti-HCV primi, come recentemente dimostrato dalla approvazione di regolamentazione di due inibitori della proteasi NS3 N-terminale (boceprevir e telaprevir). L&#39;attività anti-HCV HLF è attualmente crede di comportarsi come...

L'immunofluorescenza è una tecnica che utilizza un microscopio a fluorescenza per visualizzare la distribuzione e/o la localizzazione di una molecola bersaglio in un campione biologico. L'immunofluorescenza si basa sulla specificità degli anticorpi marcati con fluorescenza contro i loro antigeni corrispondenti all'interno di una cellula1. Viene tipicamente utilizzato su sezioni di tessuto e linee cellulari in coltura al fine di analizzare la distribuzione/localizzazione di varie molecole biologiche come proteine, acidi nucleici e glicani. Va notato che l'immunofluorescenza è spesso utilizzata in combinazione con altri metodi non anticorpali di colorazione fluorescente, come le colorazioni 4',6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) che sono tipicamente utilizzate per marcare il DNA2. Inoltre, questa tecnica prevede la fissazione delle cellule che consente l'analisi delle cellule in un momento specifico.
Diversi tipi di microscopi possono essere utilizzati per analizzare campioni di immunofluorescenza. Il più semplice è il microscopio a epifluorescenza (Figura 1) per il quale l'eccitazione del fluorocromo e la rilevazione della fluorescenza vengono effettuate attraverso lo stesso percorso luminoso3. Poiché la maggior parte della luce di eccitazione viene trasmessa attraverso il campione, solo la luce eccitatoria riflessa può raggiungere l'obiettivo insieme alla luce emessa. Questo approccio purtroppo porta a un frequente elevato rapporto segnale/rumore. Al contrario, la microscopia confocale (Figura 2) offre un netto vantaggio per aumentare la risoluzione ottica e il contrasto mediante l'aggiunta di un foro stenopeico spaziale posizionato sul piano confocale della lente per eliminare la luce sfocata4. Questo approccio consente la ricostruzione di strutture tridimensionali a partire dalle immagini ottenute. Tuttavia, poiché una frazione importante della luce del campione è bloccata nel foro stenopeico, sono spesso necessarie lunghe esposizioni.
Ci sono due classi di tecniche di immunofluorescenza, primaria (o diretta) e secondaria (o indiretta). L'immunofluorescenza diretta coinvolge un anticorpo primario legato a un fluorocromo (Figura 3). Questo metodo è utilizzato meno frequentemente perché fornisce un segnale inferiore, comporta costi più elevati e meno flessibilità1. Inoltre, tali anticorpi sono generalmente più difficili da trovare in commercio. D'altra parte, l'attacco diretto del fluorocromo all'anticorpo riduce significativamente il numero di passaggi della procedura, risparmiando tempo e riducendo frequentemente il segnale di fondo non specifico. Ciò limita anche la possibilità di reattività crociata degli anticorpi.
L'immunofluorescenza indiretta coinvolge un anticorpo primario non marcato che è specifico per l'epitopo di interesse1. Un anticorpo secondario che trasporta il fluorocromo riconosce quindi l'anticorpo primario e si lega ad esso (Figura 3). Sebbene l'immunofluorescenza indiretta sia più complessa e richieda più tempo rispetto all'immunofluorescenza diretta, viene spesso utilizzata a causa della sua elevata sensibilità e fornisce anche un segnale amplificato poiché più di un anticorpo secondario può legarsi a ciascun anticorpo primario. Inoltre, è disponibile una vasta gamma di anticorpi secondari commerciali a prezzi accessibili.
Il virus dell'epatite C (HCV) è un grave problema di salute pubblica con 130-170 milioni di individui cronicamente infetti in tutto il mondo. Al fine di fermare l'epidemia, la terapia contro l'HCV dovrà essere efficace e ampiamente disponibile. Gli studi incentrati su un prodotto naturale sicuro ed economico attivo contro l'HCV hanno rivelato l'attività antivirale della proteina lattoferrina umana (hLF) che lega e neutralizza il virione circolante5. Nel presente studio, l'indagine sull'attività di hLF sul sistema subgenomico dei repliconi dell'HCV, che è indipendente dall'ingresso e dalla diffusione virale, ha rivelato una distinta attività antireplicativa di hLF contro l'HCV. Questo manoscritto presenta uno studio in cui sono stati eseguiti saggi di immunofluorescenza per monitorare l'internalizzazione di hLF, un componente importante del sistema immunitario6, nelle cellule epatiche. Inoltre, abbiamo monitorato il potenziale inibitorio dell'hLF sulla replicazione intracellulare del virus dell'epatite C (HCV).

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Wisent</td><td>319-005-CL</td><td></td></tr><tr><td>PAF</td><td>BioShop</td><td>PAR070.1</td><td>Solido infiammabile, irritante per la pelle, polmoni e occhi&nbsp;</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Wisent</td><td>311-425-CL</td><td>Senza Ca2+ & Mg2+</td></tr><tr><td>NGS</td><td>Wisent</td><td>053-150</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 488-marcato anti-topo</td><td>Invitrogen</td><td>A11017</td><td></td></tr><tr><td>AlexaFluor 568-marcato anti-coniglio</td><td>Invitrogeb</td><td>A21069</td><td></td></tr><tr><td>Germe di grano agglutinina Alexa Fluor 488 coniugato (WGA)</td><td>Invitrogen</td><td>W11261</td><td>Potenzialmente mutageno</td></tr><tr><td>Anti-NS5A coniglio</td><td>Abcam</td><td>ab2594</td><td></td></tr><tr><td>Topo anti-hLF</td><td>Abcam</td><td>ab10110</td><td></td></tr><tr><td>SlowFade</td><td>Invitrogen</td><td>S36937</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst macchia</td><td>Life Techn.</td><td>H1399</td><td>Potenzialmente&nbsp; mutageno&nbsp;
e cancerogeno</td></tr><tr><td>hLF</td><td>Sigma</td><td>L0520</td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse microscopio visibile/epifluorescenza</td><td>Nikon</td><td>TE2000-E</td><td></td></tr><tr><td>microscopio epifluorescenza/confocale</td><td>Olympus</td><td>FV1000</td><td></td></tr></tbody></table>

immunofluorescenza per monitorare il cellular assorbimento di lattoferrina umana e la sua associata attività antivirale contro il virus dell&#39;epatite c

Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus

Immunofluorescenza è una tecnica di laboratorio comunemente usata per studiare molti aspetti della biologia. Esso è tipicamente usato per visualizzare la distribuzione e / o la localizzazione di una molecola bersaglio in cellule e tessuti. Immunofluorescenza basa sulla specificità degli anticorpi fluorescenti marcati contro loro antigeni corrispondenti all&#39;interno di una cella. Entrambi gli approcci diretti e indiretti immunofluorescenza possono essere utilizzati che si basano sull&#39;uso di anticorpi legati con un fluorocromo. Immunofluorescenza diretta è meno frequentemente utilizzato perché fornisce il segnale più bassa, comporta costi più elevati e meno flessibilità. Al contrario, immunofluorescenza indiretta è più comunemente utilizzato per la sua elevata sensibilità e fornisce un segnale amplificato da più di un anticorpo secondario può collegare a ciascun anticorpo primario. In questo manoscritto, sia epifluorescenza e microscopia confocale sono stati usati per monitorare l&#39;internalizzazione di lattoferrina umana, una componente importante del sistema immunitariosistema, nelle cellule epatiche. Inoltre, abbiamo monitorato il potenziale inibitorio del HLF sulla replica intracellulare del virus dell&#39;epatite C mediante immunofluorescenza. Entrambi i vantaggi e gli svantaggi associati a questi approcci sono discussi.

La capacità del epatica linea cellulare Huh-7 di internalizzare esogena amministrato HLF è stata monitorata mediante immunofluorescenza su una miscroscope confocale. HLF è stato aggiunto al mezzo di coltura e l&#39;internalizzazione stato consentito per 24 ore, dopo di che, extracellulare HLF è stato lavato con PBS e membrana residuo legato HLF stato degradato con un 5 min trattamento tripsina (1 ml). Le cellule sono state reseeded e ha permesso di ri-aderire per 18 ore prima di immunofluorescenza. Al fine di delineare ...

La lattoferrina umana (hLF) è un componente del sistema immunitario. In questo studio, i saggi di immunofluorescenza sono stati utilizzati per dimostrare sia l'assorbimento epatocellulare di hLF che una riduzione qualitativa della replicazione del virus dell'epatite C dopo il trattamento con hLF.

Immunofluorescenza per Monitorare il Cellular assorbimento di Lattoferrina umana e la sua associata attività antivirale contro il virus dell&#39;epatite C

Immunofluorescence is a laboratory technique commonly used to study many aspects of biology. It is typically used to visualize the distribution and/or ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è monitorare l'internalizzazione della lactoferrina umana in cellule epatiche utilizzando sia la microscopia in epifluorescenza che quella confocale, e valutarne il potenziale inibitorio sulla replicazione intracellulare del virus dell'epatite C, o HCV. Questo viene realizzato coltivando cellule HUH7, che ospitano il replicone subgenomico di HCV. Successivamente, si aggiunge la lactoferrina umana alle cellule in crescita, consentendo così alla proteina di entrare nelle cellule.Quindi le cellule vengono fissate e visualizzate mediante microscopia a fluorescenza. I risultati mostrano che gli epatociti hanno la capacità di acquisire HLF dal loro ambiente extracellulare e che la colorazione del replicone subgenomico dell'HCV è ridotta nelle cellule trattate con HLF, come evidenziato dalla microscopia a fluorescenza. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo del virus EB C, come ad esempio il meccanismo molecolare attraverso il quale la rina inibisce la replicazione del virus.Per iniziare, posizionare un vetrino circolare sul fondo di ogni pozzetto di una piastra a 24 pozzetti e utilizzare PBS per lavare i p

immunofluorescence-to-monitor-cellular-uptake-human-lactoferrin-its

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Rilevamento di RNA virale per fluorescenza<em&gt; In situ</em&gt; Hybridization (FISH)

Due metodi di Formazione Heterokaryon per scoprire fattori di restrizione HCV

Source: Allaire, A., et al. Immunofluorescence to Monitor the Cellular Uptake of Human Lactoferrin and its Associated Antiviral Activity Against the Hepatitis C Virus. J. Vis. Exp. (2015).The video demonstrates the procedure for preparing cells to assess the intracellular uptake and activity of an antiviral agent against the hepatitis C virus.

Preparing Cells to Analyze Intracellular Uptake and Activity of an Antiviral Agent

Fonte: Shah, R., et al. Imaging fluorescente multiplexato a singola cellula per visualizzare acidi nucleici e proteine virali e monitorare l'infezione da HIV, HTLV, HBV, HCV, virus Zika e influenza. J. Vis. Exp. (2020)Questo video dimostra la visualizzazione simultanea del DNA, dell'RNA e della proteina del capside dell'HIV-1 in linfociti umani infetti mediante ibridazione con DNA ramificato e immunofluorescenza, consentendo un'analisi dettagliata delle fasi di replicazione virale all'interno...

Imaging a fluorescenza multiplex di acidi nucleici virali e proteine in linfociti umani infetti

Source: Ren, S., et al. A Protocol for Analyzing Hepatitis C Virus Replication. J. Vis. Exp. (2014).This video demonstrates an immunofluorescence-based method to detect Hepatitis C virus replication in infected hepatoma cells. The protocol involves cell fixation, antibody staining for viral protein and double-stranded RNA, and visualization using fluorophore-tagged secondary antibodies. Dual signal detection under a fluorescence microscope confirms active viral replication within the host cells.

Immunofluorescence Assay to Detect Hepatitis C Virus Replication Complexes in Infected Cells

Fonte: Ren, S., et al. Un protocollo per l'analisi della replicazione del virus dell'epatite C. J. Vis. Exp. (2014)Questo video illustra il saggio di focolai fluorescenti utilizzato per quantificare il virus dell'epatite C infettivo in coltura cellulare. Viene mostrata la diluizione seriale del supernatante virale, l'infezione di cellule di epatoma e la rilevazione dei siti di replicazione virale mediante microscopia a fluorescenza basata su anticorpi.

Quantificazione del virus dell'epatite C infettivo mediante microscopia a fluorescenza

Questo video mostra un test di attaccamento virale per lo screening di composti antivirali. Utilizzando il virus dell'epatite C geneticamente modificato e la luciferasi, valuta gli effetti inibitori sull'attaccamento virale, come indicato dalla minore intensità della luce nei pozzetti co-trattati rispetto ai pozzetti trattati con il solo virus.

Un test di attacco virale per lo screening di composti antivirali

Questo video mostra un test per valutare agenti antivirali che mirano a fasi specifiche dell'ingresso virale nelle cellule ospiti e della fusione con l'endosoma. Le cellule vengono incubate a bassa temperatura e quindi infettate con l'HCV. La bassa temperatura consente il legame virale con le cellule ospiti, ma inibisce l'internalizzazione tramite endocitosi. Viene aggiunto il composto antivirale in esame e le cellule vengono incubate a temperatura fisiologica. Questo passaggio a una...

Un test per valutare l'effetto dei composti in esame sull'ingresso e la fusione virale nelle cellule ospiti

Questo video mostra un test di immunofluorescenza progettato per misurare la neutralizzazione del citomegalovirus umano (HCMV). Gli anticorpi specifici del virus vengono mescolati con il virus e incubati con cellule di fibroblasti umani. Gli anticorpi neutralizzano il virus, rendendolo incapace di infettare le cellule ospiti, mentre i virus non neutralizzati infettano le cellule. Dopo l'incubazione, l'entità della neutralizzazione viene determinata quantificando le cellule infettate dal virus...

Un metodo di immunofluorescenza per misurare la neutralizzazione del citomegalovirus umano

Presentato qui un protocollo per un approccio di imaging a fluorescenza, multiplex immunofluorescent cell-based detection of DNA, RNA, and protein (MICDDRP), un metodo in grado di visualizzare simultaneamente fluorescenza singola cellula di proteine virali e acidi nucleici di diverso tipo e filamento. Questo approccio può essere applicato a una vasta gamma di sistemi.

Imaging a fluorescenza multiplexata a singola cellula per visualizzare acidi nucleici e proteine virali e monitorare HIV, HTLV, HBV, HCV, virus Zika e infezione influenzale

Scopri come monitorare l'internalizzazione della lattoferrina umana nelle cellule epatiche mediante immunofluorescenza e valutarne l'attività antivirale contro HCV. Questo metodo rivela il potenziale terapeutico della lattoferrina.

Immunofluorescenza per Monitorare il Cellular assorbimento di Lattoferrina umana e la sua associata attività antivirale contro il virus dellepatite C (Video) | JoVE Journal

Immunofluorescenza per Monitorare il Cellular assorbimento di Lattoferrina umana e la sua associata attività antivirale contro il virus dell'epatite C

Esplora altri video