Un metodo computerizzato riproducibile per la quantificazione della densità capillare con letto ungueale Capillaroscopia

L'obiettivo generale di questa procedura è quantificare il numero di capillari per millimetro quadrato nell'area della pelle direttamente sotto la cuticola dell'unghia. Ciò si ottiene scattando prima una foto monocromatica del letto ungueale sotto la cuticola. Il secondo passo consiste nell'importare l'immagine in un programma di imaging per computer.

Successivamente, le immagini vengono manipolate Per visualizzare meglio i capillari, il passaggio finale consiste nell'identificare e contare tutti i capillari entro un millimetro quadrato. In definitiva, la manipolazione delle immagini viene utilizzata per mostrare la quantità e la morfologia dei capillari di un individuo. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave in campo cardiovascolare, come ad esempio come l'ipertensione, il diabete e altre malattie possono influire sulla microcircolazione.

Utilizzando una fotocamera digitale monocromatica, ottenere immagini capillari come descritto in precedenza. Quindi scattare immagini di calibrazione di un ridicolo con segni millimetrici utilizzando la stessa fotocamera e le stesse condizioni di imaging di ingrandimento utilizzate per ottenere le immagini capillari. Importa l'immagine del ridicolo nel programma di imaging del computer e misura il numero di pixel in una linea di un millimetro sulla fotografia del righello.

Annota questo numero e calcola il numero di pixel che si trovano in una regione di un millimetro per un millimetro. Quindi, apri una delle immagini capillari, scurisci i capillari e schiarisci lo sfondo regolando l'immagine utilizzando un istogramma più adatto. Quindi utilizza il comando crea ROI nel menu a discesa per creare una regione di interesse di un millimetro per un millimetro nella parte superiore dello schermo.

Trascinare e posizionare la regione di interesse nella posizione con gli anelli capillari più chiari. Assicurarsi che la regione di interesse sia posizionata in modo che l'apice delle anse capillari si trovi nella parte superiore della regione. La chiave per la riproducibilità e la standardizzazione di questa fase del protocollo è il corretto posizionamento della casella di interesse della regione quadrata di un millimetro.

Una buona regola empirica per mantenere la standardizzazione è posizionare la scatola all'apice o sulla punta degli anelli capillari dell'immagine. Una volta posizionato correttamente, fai clic su ROI e quindi fai clic su ritaglia dal menu a discesa che appare, quindi appiattisci l'immagine in modo che tutte le future regolazioni dell'immagine vengano applicate uniformemente all'immagine. Quindi, aumentare il contrasto dell'immagine a 75 in modo che i capillari siano visualizzati al massimo.

Smacchiare anche l'immagine per levigare i bordi dei capillari. Finalizza il contrasto dell'immagine regolando l'istogramma sul modello più adatto in modo che i capillari siano neri e lo sfondo sia bianco. Su ogni immagine, selezionare manualmente una parte di un capillare ben definito utilizzando la funzione dell'oggetto target da riconoscere come oggetti da contare dal programma.

Quindi seleziona una piccola parte dello sfondo utilizzando la funzione di sfondo come riferimento per le aree che devono essere ignorate dall'algoritmo di conteggio. Impostate il diametro minimo degli oggetti contati su cinque pixel per evitare di contare il rumore di fondo come capillari. Quindi utilizzare la funzione di conteggio per contare istantaneamente tutti i capillari nell'immagine per ogni individuo.

Conta la media da tre a quattro immagini per ottenere una valutazione più affidabile. Per risparmiare tempo, creare una macro per eseguire automaticamente una sequenza specifica di processi su una o più immagini selezionando prima registra macro per assegnare un nome alla macro in base ai passaggi e ai processi eseguiti e descritti in questo video. Quindi eseguire i passaggi di manipolazione dell'immagine mentre la macro sta registrando.

Quando si utilizza la macro su immagini future, è sufficiente fare clic su Esegui macro e il programma applicherà automaticamente i miglioramenti registrati alle immagini desiderate. L'unico passaggio che richiede l'input dell'utente è la scelta della posizione in cui ritagliare l'immagine. Un'immagine elaborata in modo ottimale può essere contata in 30 secondi e distingue chiaramente i capillari dallo sfondo e i singoli capillari l'uno dall'altro.

L'immagine finale migliorata è mostrata qui. Il conteggio totale determinato per questa immagine è stato di 54 capillari per millimetro quadrato Una volta masterizzato. Questa tecnica può essere utilizzata per quantificare e manipolare 12 immagini in 20 minuti.