Name: Il BM12 inducibile modello di Lupus Eritematoso Sistemico (LES) in C57BL / 6 Mice (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Scopri il modello BM12 di Lupus Eritematoso Sistemico in topi C57BL/6 per caratterizzare le cellule T follicolari helper, le cellule B del centro germinativo e i plasmacellule mediante citometria a flusso. Questo metodo consente di studiare la progressione della malattia e valutare nuove terapie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato sostenuto in parte dal Lupus Research Institute, dalla sovvenzione NCI CA138617, dalla sovvenzione NIDDK DK090978, dal Charlotte Schmidlapp Award (a E.M.J.) e dalla Albert J. Ryan Fellowship (a J.K.). Siamo grati per il supporto e la strumentazione forniti dal Research Flow Cytometry Core nella Divisione di Reumatologia del Cincinnati Children's Hospital Medical Center, supportato in parte da NIH AR-47363, NIH DK78392 e NIH DK90971.

<ol><li>Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Part+I.+Arthritis+Rheum%5BTitle%5D)+AND+%22Estimates+of+the+prevalence+of+arthritis+and+other+rheumatic+conditions+in+the+United+States%22%5BJournal%5D)">Part I. Arthritis Rheum.</a> Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).</li>
<li>Lupus Foundation of America Web Site. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus">http://www.lupus.org/answers/entry/what-is-lupus</a> (2015).</li>
<li>Somers, E. C., Marder, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population-based+incidence+and+prevalence+of+systemic+lupus+erythematosus%3A+The+Michigan+lupus+epidemiology+and+surveillance+program%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+and+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Population-based incidence and prevalence of systemic lupus erythematosus: The Michigan lupus epidemiology and surveillance program.</a> Arthritis and Rheumatol. 66, 369-378 (2014).</li>
<li>Perry, D., Sang, A., Yin, Y., Zheng, Y. -Y., Morel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+models+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Murine models of systemic lupus erythematosus.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 271694(2011).</li>
<li>Lindholm, L., Rydberg, L., Strannegård, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+host+plasma+cells+during+graft-versus-host+reactions+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of host plasma cells during graft-versus-host reactions in mice.</a> Eur J Immunol. 3 (8), 511-515 (1973).</li>
<li>Fialkow, P. J., Gilchrist, C., Allison, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoimmunity+in+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Autoimmunity in chronic graft-versus-host disease.</a> Clin Exp Immunol. 13, 479-486 (1973).</li>
<li>Streilein, J. W., Stone, M. J., Duncan, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+the+Specificity+of+Autoantibodies+Produced+in+Systemic+Graft-vs-Host+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Studies on the Specificity of Autoantibodies Produced in Systemic Graft-vs-Host Disease.</a> J Immunol. 114 (1), 255-260 (1975).</li>
<li>Gleichmann, E., Gleichmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diseases+caused+by+reactions+of+T+lymphocytes+to+in+compatible+structures+of+the+major+histocompatibility+complex.+I.+Autoimmune+hemolytic+anemia%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Diseases caused by reactions of T lymphocytes to in compatible structures of the major histocompatibility complex. I. Autoimmune hemolytic anemia.</a> Eur J Immunol. 6 (12), 899(1976).</li>
<li>Morris, S., Cohen, P. L., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+induction+of+systemic+lupus+erythematosus+by+recognition+of+foreign+Ia%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Experimental induction of systemic lupus erythematosus by recognition of foreign Ia.</a> Clin Immunol Immunopathol. 57 (2), 263-273 (1990).</li>
<li>Chen, F., Maldonado, M., Madaio, M., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Host+%28Endogenous%29+T+Cells+in+Chronic+Graft-Versus-Host+Autoimmune+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Role of Host (Endogenous) T Cells in Chronic Graft-Versus-Host Autoimmune Disease.</a> J Immunol. 161 (11), 5880-5885 (1998).</li>
<li>Klarquist, J., Hennies, C. M., Lehn, M. A., Reboulet, R. A., Feau, S., Janssen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((STING-Mediated+DNA+Sensing+Promotes+Antitumor+and+Autoimmune+Responses+to+Dying+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">STING-Mediated DNA Sensing Promotes Antitumor and Autoimmune Responses to Dying Cells.</a> J Immunol. 193, 6124-6134 (2014).</li>
<li>Petri, M., Orbai, A. -M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+validation+of+systemic+lupus+international+collaborating+clinics+classification+criteria+for+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Derivation and validation of systemic lupus international collaborating clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 64 (8), 2677-2686 (2012).</li>
<li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+genomic+DNA+from+mouse+tails%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of genomic DNA from mouse tails.</a> J Vis Exp. (6), e246(2007).</li>
<li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polymerase+Chain+Reaction%3A+Basic+Protocol+Plus+Troubleshooting+and+Optimization+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies.</a> J Vis Exp. (63), e3998(2012).</li>
<li>Product information: Thermo Scientific FastDigest PsuI. , Thermo Scientific. Available from: 
 <a target="_blank" href="https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf">https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf</a> (2012).</li>
<li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissection+and+2-photon+imaging+of+peripheral+lymph+nodes+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dissection and 2-photon imaging of peripheral lymph nodes in mice.</a> J Vis Exp. (7), e265(2007).</li>
<li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymph+node+mapping+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li>
<li>Covelli, V. Chapter 3, Internal examination. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aCovelli%2C+V+%22Guide+to+the+necroscopy+of+the+mouse%22">Guide to the necroscopy of the mouse</a>. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html">http://eulep.pdn.cam.ac.uk/Necropsy_of_the_Mouse/index.php?file=Chapter_3.html</a> (2009).</li>
<li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+%28CFSE%29+to+monitor+lymphocyte+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. (44), e2259(2010).</li>
<li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+CD4%2B+T+cells+from+mouse+lymph+nodes+using+Miltenyi+MACS+purification%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of CD4+ T cells from mouse lymph nodes using Miltenyi MACS purification.</a> J Vis Exp. (9), e53319(2007).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), e2771(2012).</li>
<li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Animal%22%5BJournal%5D)">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li>
<li>Cohen, M., Varki, N. M., Jankowski, M. D., Gagneux, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Unfixed%2C+Frozen+Tissues+to+Study+Natural+Mucin+Distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution.</a> J Vis Exp. (67), e3928(2012).</li>
<li>Cohen, P. L., Maldonado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+SLE%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol.%22%5BJournal%5D)">Animal models for SLE.</a> Curr Protoc Immunol.. Chapter 15, Unit 15.20(2003).</li>
<li>Seavey, M. M., Lu, L. D., Stump, K. L. Animal models of systemic lupus erythematosus (SLE) and ex vivo assay design for drug discovery. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeavey%2C+MM+%22Curr+Protoc+Pharmacol%22">Curr Protoc Pharmacol</a>. Chapter 5, Unit 5(2011).</li>
<li>McKenna, K. C., Vicetti Miguel, R. D., Beatty, K. M., Bilonick, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+caveat+for+T+cell+transfer+studies%3A+generation+of+cytotoxic+anti-Thy1.2+antibodies+in+Thy1.1+congenic+mice+given+Thy1.2%2B+tumors+or+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">A caveat for T cell transfer studies: generation of cytotoxic anti-Thy1.2 antibodies in Thy1.1 congenic mice given Thy1.2+ tumors or T cells.</a> J Leukoc Biol. 89 (2), 291-300 (2011).</li>
<li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+mouse+male-specific+transplantation+antigen+H-Y.%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Identification of a mouse male-specific transplantation antigen H-Y.</a> Nature. 376, 695-698 (1995).</li>
<li>Joly, E., Hudrisier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+is+trogocytosis+and+what+is+its+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">What is trogocytosis and what is its purpose.</a> Nat Immunol. 4 (9), 815(2003).</li>
<li>Brown, D. R., Calpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+edge%3A+an+NK+cell-independent+role+for+Slamf4+in+controlling+humoral+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Cutting edge: an NK cell-independent role for Slamf4 in controlling humoral autoimmunity.</a> J Immunol. 187 (1), 21-25 (2011).</li>
<li>Morris, S. C., Cheek, R. L., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allotype-specific+immunoregulation+of+autoantibody+production+by+host+B+cells+in+chronic+graft-versus+host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Allotype-specific immunoregulation of autoantibody production by host B cells in chronic graft-versus host disease.</a> J Immunol. 144 (3), 916-922 (1990).</li>
<li>Choudhury, A., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B+cells+require+%E2%80%9Cnurturing%E2%80%9D+by+CD4+T+cells+during+development+in+order+to+respond+in+chronic+graft-versus-host+model+of+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Immunol%22%5BJournal%5D)">B cells require “nurturing” by CD4 T cells during development in order to respond in chronic graft-versus-host model of systemic lupus erythematosus.</a> Clin Immunol. 136 (1), 105-115 (2010).</li>
<li>Slifka, M. K., Antia, R., Whitmire, J. K., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humoral+immunity+due+to+long-lived+plasma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Humoral immunity due to long-lived plasma cells.</a> Immunity. 8 (3), 363-372 (1998).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il modello inducibile BM12 è un modo relativamente semplice ed efficace per studiare i processi cellulari e molecolari del LES. Attivazione cronica di adoptively trasferiti cellule T CD4 diretti contro antigeni auto porta all&#39;accumulo di Tfh, cellule GC B, e le plasmacellule che può essere misurato mediante citometria di flusso, come descritto qui. Futuri studi che utilizzano questo modello può interrogare rapidamente e facilmente il ruolo dei geni candidati e nuove terapie nei processi centro germinale autoimmuni c...

Il lupus eritematoso sistemico (LES) è una malattia autoimmune complessa caratterizzata prototipicamente da anticorpi anti-nucleo (ANA) la produzione e la glomerulonefrite. Numerose altre sequele, tra cui dermico, cardio-polmonare e lesioni epatiche sono associati con la malattia in alcuni individui. Le stime sulla prevalenza negli Stati Uniti variano ampiamente, da 150,000-1,500,000 1,2, con incidenza particolarmente elevata nelle donne e le minoranze 3. Sebbene l&#39;eziologia del LES è stato difficile da discernere, si pensa a sorgere dall&#39;interazione di diversi fattori genetici e ambientali, che culminano in autoimmunità sistemica. Numerosi modelli animali sono stati impiegati per studiare i fattori di insorgenza della malattia e la progressione. Modelli classici murini di SLE includono ceppi di topi geneticamente predisposti, tra cui il modello di X NZB NZW F1 e suoi derivati ​​di potenza NZM, il ceppo / lpr MLR, e il ceppo BXSB / Yaa, e sistemi inducibili, come il pristane e malattia cronica del trapianto contro l&#39;ospite (GVHD cronica) modelli 4. I primi rapporti di produzione di autoanticorpi nei modelli GVHD usati diversi ceppi di topi o ceppi criceto per genitore in trasferimenti F1 5 - 8; metodi più comuni utilizzati per studiare le malattie simil-lupus attualmente includono il genitore DBA / 2 → (C57BL / 6 x DBA / 2) F1, ed il modello di trasferimento BM12 descritto qui. Ogni modello ha i suoi avvertimenti, ma in genere condividono un set comune di funzioni che sono correlate alle caratteristiche cliniche della malattia umana. I parametri più spesso segnalati in modelli murini includono splenomegalia, linfoadenopatia, nefrite, la produzione ANA, e a livello cellulare, l&#39;espansione delle cellule T helper follicolari (TFH), le cellule B germinali centro (GC), e le cellule del plasma. Il modello BM12 inducibile si ottiene il trasferimento adottivo di linfociti da IA BM12 B6 (C) - H2 - Ab1 BM12 / KhEgJ (BM12) topo, un ceppo identical a C57BL / 6 ad eccezione di 3 aminoacidi sostituzioni su MHC di classe II, in IA b C57BL / 6 (B6) topi. Alloactivation di donatori cellule T CD4 di destinatario APC porta a cGVHD con sintomi molto simili LES. In particolare, questi includono l&#39;espansione di Tfh donatore-derivati, espansione delle cellule B GC destinatario di derivazione e plasmacellule, e la produzione di ANA tra cui anti-dsDNA, anti-ssDNA, anti-cromatina, e gli anticorpi anti-RBC 9. Nel corso del tempo, topi riceventi sviluppano glomerulonefrite associata a depositi di IgG nel glomerulare, interstiziale e regioni vascolari dei reni 10. Abbiamo recentemente dimostrato che, simile alla malattia umana, c&#39;è anche un ruolo critico per tipo IFN in questo modello 11. In particolare, i criteri di definizione per il LES umano includono lo sviluppo di nefrite compatibile con SLE ​​in presenza di anticorpi anti-dsDNA anticorpi 12, entrambi i quali sono caratteristiche importanti di questo modello di topo. Ci sono sevantaggi Veral del modello BM12 rispetto ai modelli spontanee. Modelli classici che sviluppano segni SLE-come spontaneamente si basano su entrambi i ceppi di topi ibridi, ceppi inbred di topo non sullo sfondo B6, o grande loci genetici sullo sfondo B6, che rendono attraversando a knockout o topi geneticamente modificati altrimenti difficile e richiede tempo. Con il modello inducibile BM12, topi geneticamente modificati possono servire sia come donatore o ricevente, consentendo più rapida identificazione del compartimento cellulare in cui alcuni geni possono essere importanti per la malattia. Inoltre, lo sviluppo della malattia nel modello BM12 è molto più veloce, che richiede solo 2 settimane fino alla comparsa di ANA, rispetto a diversi mesi per i modelli più spontanee. Inoltre, a differenza dei modelli spontanei che sviluppano la malattia in diversi momenti, l&#39;insorgenza e la progressione della malattia nel modello B6 BM12 → è altamente sincronizzati. Questo permette la generazione di coorti di dimensioni appropriate che possono Be utilizzato per strategie di intervento o terapeutici in qualsiasi fase della sviluppo della malattia. Quello che segue è un protocollo dettagliato per l&#39;avvio SLE-come autoimmunità dal trasferimento adottivo di linfociti BM12 in topi C57BL / 6, o varianti genetiche sullo sfondo B6. Inoltre, si descrive un protocollo di colorazione citometria a flusso per l&#39;enumerazione Tfh, cellule GC B, e tipi di cellule del plasma-cella associata con la malattia umana. È importante sottolineare che questi protocolli possono anche essere utilizzati per caratterizzare la malattia nella maggior parte dei modelli murini di LES e identificare Tfh, cellule GC B le plasmacellule in altri modelli di malattia.

<table><tbody><tr><td>B6. SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>CD45.1+ BoyJ ceppo di topo</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>Ceppo di topo Bm12</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Enzima digest di restrizione per la genotipizzazione</td></tr><tr><td>1X RBC Lysis Buffer</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per la separazione del plasma (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>Provetta per la raccolta del sangue con EDTA dipotassico</td></tr><tr><td>Provetta per la separazione del siero (SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>Provetta per la raccolta del sangue con attivatore del coagulo / SST Gel</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&nbsp;</td><td>Soluzione di separazione cellulare ad alta densità</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>Soluzione di separazione cellulare ad alta densità</td></tr><tr><td>GL-7-biotina</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidina-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Colorante di vitalità fissabile ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>inserti per provette FACS da 1,2 ml, travasato</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&trade; Tubi a fondo tondo</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

il bm12 inducibile modello di lupus eritematoso sistemico (les) in c57bl / 6 mice

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

Il lupus eritematoso sistemico (LES) è una malattia autoimmune con diverse manifestazioni cliniche e immunologiche. Diversi modelli animali spontanei e inducibili rispecchiano componenti comuni della malattia umana, incluso il modello di trasferimento bm12. Dopo il trasferimento di splenociti bm12 o cellule T CD4 purificate, i topi C57BL/6 sviluppano rapidamente grandi frequenze di cellule T helper follicolari (Tfh), cellule B del centro germinale (GC) e plasmacellule seguite da alti livelli di anticorpi anti-nucleo circolanti. Poiché questo modello utilizza topi su un background C57BL/6 puro, i ricercatori possono studiare rapidamente e facilmente la progressione della malattia in ceppi di topi transgenici o knockout in un periodo di tempo relativamente breve. Qui descriviamo i protocolli per l'induzione del modello e la quantificazione di Tfh, cellule GC B e plasmacellule mediante citometria a flusso multicolore. È importante sottolineare che questi protocolli possono essere utilizzati anche per caratterizzare la malattia nella maggior parte dei modelli murini di LES e identificare le cellule Tfh, GC B e plasmacellule in altri modelli di malattia.

Topi malati sviluppano splenomegalia in appena 14 giorni, esibendo milza 2-3 volte le dimensioni di topi sani in termini di massa e cellularità (Figura 2). Splenociti sono sequenzialmente gate sulla dispersione della luce (FSC-A da SSC-A), l&#39;eliminazione di doppiette (FSC-W o -H da FSC-A), cellule vitali (basso colorazione della vitalità tintura) e CD4 + TCRβ + (Figura 3A). Cellule del donatore si distinguono dalle cellule riceventi...

Il trasferimento di linfociti bm12 in un ricevente C57BL/6 è un modello consolidato di lupus eritematoso sistemico. Qui descriviamo come iniziare la malattia utilizzando questo modello e come caratterizzare le cellule T follicolari helper, le cellule B del centro germinale e le plasmacellule mediante citometria a flusso.

Il BM12 inducibile modello di Lupus Eritematoso Sistemico (LES) in C57BL / 6 Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

L'obiettivo generale di questa procedura è caratterizzare l'espansione delle cellule T follicolari helper, delle cellule B del centro germinale e delle cellule plasmatiche mediante citometria a flusso nel modello BM 12 di lupus eritematoso sistemico con ptosi, o LES. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo del lupus, come ad esempio se il targeting di specifici percorsi molecolari mediante terapie possa arrestare o rallentare la progressione della malattia. Il principale vantaggio di questo modello di LES è che utilizza topi con un background genetico puramente CPD sette nero sei, consentendo ai ricercatori di studiare rapidamente e facilmente la progressione della malattia in ceppi di topi transgenici o knockout in un periodo di tempo relativamente breve.Dopo aver isolato e iniettato le cellule donatrici BM 12 nei topi, determinato l'efficienza dell'innesto ed eutanasia dei topi secondo il protocollo descritto nel testo, spruzzare leggermente etanolo al 70% per inumidire l'addome del topo con una forbice chirurgica. Praticare una piccola incisione superficiale di circa un centimetro sopra i genitali, tirare indietro la pelle dell'addome verso lo

the-bm12-inducible-model-systemic-lupus-erythematosus-sle-c57bl6

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Questo video mostra come per indurre ipofisite autoimmune in topi SJL e come valutare la sua gravità per via istopatologica.

Induzione di ipofisite autoimmune sperimentale nei topi SJL

Il video dimostra l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino iniettando una combinazione di glicoproteine oligodendrocitarie mieliniche e Mycobacterium tuberculosis inattivato. Il modello consente ai ricercatori di studiare i meccanismi della malattia e testare gli interventi terapeutici.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

In questo video, un modello murino di sclerosi multipla viene stabilito utilizzando l'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE). Al topo viene iniettata un'emulsione contenente un peptide neuronale e un adiuvante, innescando una risposta immunitaria che attiva le cellule T autoreattive. Questo è seguito da un'iniezione di tossina della pertosse (PTX) per aumentare la permeabilità della barriera emato-encefalica, consentendo alle cellule T autoreattive di infiltrarsi nel cervello. Questa...

Encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) è un modello animale di sclerosi multipla. C57BL / 6 topi sono immunizzati con mielina oligodendrociti glicoproteina (MOG) peptide 35-55 (MOG 35-55), con un conseguente paralisi flaccida ascendente causata da cellule immunitarie autoreattive nel sistema nervoso centrale. Saranno discussi protocolli per l'induzione della malattia e monitoraggio.

Mielina Oligodendrocyte glicoproteina (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Indotta encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) in C57BL / 6 Mice

Questo manoscritto descrive i metodi per l'induzione e il punteggio del modello sperimentale di encefalomielite autoimmune (EAE), insieme alla valutazione della distribuzione delle cellule immunitarie e dei livelli di citochine mRNA nei linfonodi, nella milza, nel sangue e nel midollo spinale utilizzando la citometria a flusso e la PCR quantitativa, rispettivamente, in varie fasi della malattia.

Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale nei topi e valutazione della distribuzione delle malattie-dipendente delle cellule immunitarie in vari tessuti

Questo protocollo descrive come determinare se i trattamenti farmacologici per l'encefalomielite autoimmune sperimentale mostrano protezione del SNC come conseguenza della soppressione dell'infiltrazione delle cellule immunitarie o sono neuroprotettivi durante l'assalto dell'infiltrazione delle cellule immunitarie.

La determinazione di soppressione del sistema immunitario contro il sistema nervoso centrale di protezione per farmacologici Interventi a demielinizzazione autoimmune

Qui presentiamo un metodo efficace per studiare l'attività antifibrotica delle cellule manomalifonde umane infuso infuso ottenuto da tutto il cordone ombelicale in seguito all'induzione della lesione polmonare da un'iniezione endotracheale di bleomycina nel C57BL /6 topi. Questo protocollo può essere facilmente esteso ai test preclinici di altre terapie.

Induzione di lesioni polmonari del topo da Iniezione endotracheale di Bleomycin

Il presente protocollo descrive un metodo per monitorare la progressione del lupus nei topi. Vengono presentate due procedure aggiuntive per caratterizzare la nefrite da lupus basate sull'infiltrazione cellulare e sulla deposizione di proteine nei reni.

Analisi della proteinuria, infiltrazione renale dei leucociti e deposizione renale di proteine in topi MRL/lpr inclini al lupus

Il presente protocollo descrive l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino utilizzando glicoproteina oligodendrocitaria mielinica e monitorando il processo della malattia utilizzando un sistema di punteggio clinico. I sintomi sperimentali correlati all'encefalomielite autoimmune vengono analizzati utilizzando l'analisi della tomografia microcomputerizzata del femore di topo e il test in campo aperto per valutare il processo della malattia in modo completo.

Induzione e diversi indicatori di valutazione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale

L'encefalomielite autoimmune sperimentale è uno dei modelli murini più utilizzati di sclerosi multipla. Nel protocollo attuale, i topi C57BL/6J di entrambi i sessi sono immunizzati con il peptide glicoproteico oligodendrocitario della mielina, con conseguente paresi ascendente della coda e degli arti. Qui discutiamo il protocollo di induzione e valutazione dell'EAE.

Modellazione della sclerosi multipla nei due sessi: encefalomielite autoimmune sperimentale indotta da MOG35-55

Qui, riportiamo un protocollo che stabilisce un modello murino di artrite reumatoide (RA) attraverso il trasferimento adottivo di cellule T CD4+ da topi SKG, fornendo uno strumento sperimentale rapido e affidabile per studiare i meccanismi immunologici, la progressione patologica e lo sviluppo di nuovi trattamenti per l'artrite reumatoide.

Un modello di trasferimento adottivo dell'artrite reumatoide nei topi

Scopri il modello BM12 di Lupus Eritematoso Sistemico in topi C57BL/6 per caratterizzare le cellule T follicolari helper, le cellule B del centro germinativo e i plasmacellule mediante citometria a flusso. Questo metodo consente di studiare la progressione della malattia e valutare nuove terapie.

Il BM12 inducibile modello di Lupus Eritematoso Sistemico (LES) in C57BL / 6 Mice

Esplora altri video