Name: Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dellarteria Medio e visualizzazione di Infarct Area (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-02T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Impara a indurre ictus ischemico nei topi mediante occlusione dell'arteria cerebrale media, mantenendo intatta l'arteria cerebrale esterna per infusione diretta dei trattamenti. Questo modello chirurgico consente di studiare meccanismi e terapie dell'ictus.

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Vorremmo ringraziare il Dr. Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY) che per primo ha stabilito questo modello nel nostro laboratorio. Supportato in parte da HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 e NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Il Dr. Luc Bertrand è supportato in parte da una borsa di studio post-dottorato dell'American Heart Association (16POST31170002).

Tutte le procedure sono state approvate dalla University of Miami Istituzionale cura degli animali e del Comitato uso (IACUC) in conformità con i National Institutes of Health (NIH) le linee guida. è richiesto l&#39;uso di materiale sterile e tecniche asettiche. 1. Preparare l&#39;occlusione di sutura <ol><li> Utilizzare una sutura di diametro di 0,21 millimetri per topi tra 20 - 25 g e 0,23 mm per topi tra 25 - 35 g di peso corporeo. La scelta del tipo di suture per la procedura MCAO dipende dal peso degli animali. </li><li> Usando una penna d&#39;argento, segnare la sutura a 9 mm a partire dalla punta rivestito di silicone. Questo servirà come guida per lunghezza di inserimento. </li></ol> 2. Preparazione per la chirurgia <ol><li> Anestetizzare topo con isoflurano mescolato con l&#39;ossigeno, utilizzando un sistema di laboratorio anestesia. Utilizzare isoflurano a creare 5 e il flusso di ossigeno a 2 sulla macchina commerciale (vedi Materiali Tavolo). Trasferire l&#39;animale al Surgersuperficie y e sostenere l&#39;anestesia con un cono (uso impostazione 1,5 isoflurano - 2,5 e ossigeno flusso a 2). <ol><li> Assicurarsi che la frequenza respiratoria del mouse è di circa 1 - 2 respirazione per sec senza boccheggiare. Inoltre, assicurarsi che l&#39;animale non presenta reazione stimolazione baffi e il pedale del riflesso (tep pizzico). Monitorare la frequenza respiratoria e lo sforzo durante l&#39;intervento chirurgico, almeno ogni 5 min. </li></ol></li><li> Mettere una goccia di lubrificante oftalmica su ciascun occhio con un tampone sterile per evitare che si secchi durante la procedura. In alternativa, applicare pomata oftalmica ad occhio da un tubo farmaceutica sterile. </li><li> Capovolgere l&#39;animale sul dorso e radere l&#39;area di incisione. In seguito, accuratamente disinfettare la zona chirurgia utilizzando 70% di etanolo, seguito da clorexidina, e il tampone finale con il 70% di etanolo. Posto l&#39;animale su una superficie chirurgica caldo sotto uno stereomicroscopio. </li></ol> 3. La dissezione della carotide comune e interno / External Branching <ol><li> Usando forbici e pinze chirurgiche, eseguire una incisione mediana superficiale nel collo, da sopra lo sterno al di sotto della ganascia (circa 3 - 4 cm). telo chirurgico deve essere collocato intorno alla zona intervento chirurgico per prevenire strumenti di venire in contatto con superfici non sterili. Il telo chirurgico è stato omesso nel video corrente per facilitare le riprese. </li><li> Utilizzando pinze, grassi accuratamente separato e del tessuto connettivo per esporre la trachea. Tissue dovrebbe facilmente e naturalmente separati per entrambe le parti. </li><li> Posizionare un cuscino (oggetto rotondo, circa 0,5 cm di diametro) sul retro del collo dei topi per estendere il collo, esponendo ulteriormente l&#39;area per la chirurgia. </li><li> Aprire l&#39;incisione utilizzando un divaricatore tissutale o ganci. </li><li> Sul lato sinistro dell&#39;animale della trachea, accuratamente tweeze parte il tessuto connettivo per esporre sinistra arteria carotide comune (CCA). Fare attenzione a non danneggiare i nervi e le vene principali in bundle con il CCA. </li><li> Continuare ad esporre il CCA, facendo attenzione a staccarsi dal tessuto sottostante, ed esporre la parte superiore &quot;Y&quot; ramificazione dell&#39;arteria cerebrale interna (ICA) e dell&#39;arteria cerebrale esterna (ECA). Per aiutare a staccare la CCA, inserire le pinze curve sotto il CCA di perforare il tessuto connettivo e quindi consentire lentamente loro di aprire. </li></ol> 4. Preparazione della CCA per la MCAO sutura Insertion <ol><li> Inserire 3 segmenti di sutura in nylon di circa 4 cm di lunghezza sotto il CCA. Assicurarsi che il CCA non è ritorto in quanto complicherebbe notevolmente l&#39;inserimento della sutura. </li><li> Nel punto più basso possibile, chiudere la sutura fondo utilizzando un nodo permanente. </li><li> Legare la sutura alto appena sotto l&#39;ICA / ECA ramificazione con un nodo scorsoio rimovibile. </li><li> Legare la sutura mezzo utilizzando un nodo scorsoio rimovibile, ma tenerlo spalancata. È importante lasciare molto spazio per non ostacolare l&#39;inserimento di sutura. </li><li> Utilizzando microdissezione primavera scissors, effettuare un&#39;incisione nel CCA tra il fondo e suture medie. Eseguire l&#39;incisione 0,2 millimetri vicino alla sutura fondo. </li></ol> 5. occlusione dell&#39;arteria cerebrale media <ol><li> Utilizzando pinze, inserire la sutura MCAO nell&#39;incisione CCA, guidandolo fino alla cima. Eseguire questo passaggio rapidamente dopo passo 4.5 per prevenire la coagulazione e la chiusura dell&#39;apertura CCA. In caso di inserimento sutura è bloccato, utilizzare la punta delle pinze di riaprire l&#39;incisione. </li><li> tie delicatamente la sutura centrale da parte di sutura silicone MCAO utilizzando un nodo scorsoio per limitare il flusso di sangue intorno ad esso, ma abbastanza largo da permettere di muoversi liberamente. </li><li> svitare con cautela la sutura in alto, facendo in modo che la sutura MCAO non scivoli via. </li><li> Inserire la sutura MCAO nella ICA da un paio di millimetri e quindi richiudere la sutura superiore, nello stesso modo come descritto al punto 5.2. </li><li> Guida la sutura MCAO alla occlusione. Indicazione di inserimento di successo èevidente dalla bassa quantità di riflusso del sangue dall&#39;incisione CCA e che il marchio d&#39;argento 9 millimetri si trova tra l&#39;incisione CCA e la biforcazione ICA / ECA. Un&#39;ulteriore conferma di occlusione successo può essere ottenuta utilizzando metodi di controllo, come un laser Doppler sistema di monitoraggio del flusso di sangue 15, 16. NOTA: Una goccia nel 90% del flusso di sangue alla zona centrale del cervello sul lato dell&#39;area occluso indica occlusione successo. </li><li> Dopo l&#39;occlusione di successo, lega giù la sutura middle e top ermeticamente. Se si esegue l&#39;inserimento farsa, non richiudere punti di sutura, ma invece subito passare al punto 7.3. </li></ol> 6. Incisione di chiusura e di assistenza post-operatoria <ol><li> Tuck nei punti di sutura nella zona di incisione. </li><li> Rimuovere divaricatore o di tessuti ganci e cuscino. </li><li> Pulire l&#39;area di sutura con soluzione fisiologica sterile e un batuffolo di cotone. </li><li> Chiudere l&#39;incisione mediante sutura in nylon / ago e pinza. </li> &lt;li&gt; Somministrare anti-infiammatori (ad esempio, Carprofen 10 mg / kg, sc) ed analgesico (es buprenorfina 0,1 mg / kg sc, due volte al giorno) farmaci per alleviare i disagi post-operatorio. Mettere i topi in una gabbia posta su un tappetino riscaldato per prevenire l&#39;ipotermia e dare ad accesso labbro di acqua e cibo ammorbidito. </li><li> Monitorare il recupero degli animali (5 - 10 minuti) e per i segni di ictus. Essi possono variare da una paralisi laterale lieve e girando a grave contrazione del fianco controlaterale e laminazione. Diversi punti di valutazione sono elencati nella discussione. Animali che presentano segni di insufficienza respiratoria o di crisi epilettiche gravi dovrebbero essere eutanasia. </li><li> A seconda del protocollo di riperfusione ischemia, lasciare la sutura MCAO in atto da 30 minuti a 120 minuti o più. Ridurre il tempo di occlusione previene la mortalità. </li><li> Per l&#39;occlusione permanente, lasciare la sutura MCAO sul posto per 24 ore, tuttavia significativo tasso di mortalità è da aspettarselo. Dopo questo lasso di tempo, procedere alla step 7. <ol><li> Se si utilizza il modello di occlusione permanente, tenere i topi in gabbia fino punto finale. A quel tempo, rimuovere le suture (passi 7,1-7,8). Questa procedura può essere eseguita dopo l&#39;eutanasia. </li></ol></li></ol> 7. riperfusione <ol><li> Anestetizzare l&#39;animale di nuovo (seguire le istruzioni in 2.1) e rimuovere punti di sutura chiusura della ferita. </li><li> Utilizzando pinze e separatori di tessuto, riaprire l&#39;incisione ed esporre il CCA. </li><li> Rimuovere con attenzione la sutura superiore e tirare delicatamente la sutura MCAO fino a quando la parte rivestito di silicone è situato al nodo centrale. </li><li> Ripeti il ​​nodo superiore sulla sutura per evitare che il sangue scorra passare la sutura (non deve essere un nodo di slittamento). </li><li> disfare con attenzione il nodo centrale e tirare la sutura passato, il nodo in alto, ma tenerlo all&#39;interno del CCA. </li><li> Strettamente chiudere il nodo in alto per bloccare il flusso di sangue dell&#39;arteria. </li><li> Estrarre completamente la sutura MCAO e chiudere ermeticamente il nodo centrale. </li><li> La sutura MCAO può essereriutilizzato più volte. Dopo ogni utilizzo, pulire accuratamente la sutura nel 70% di etanolo per rimuovere i contaminanti (ad esempio, sangue o tessuti) utilizzando una garza sterile. Successivamente, posizionare la sutura in un sacchetto sterilizzatrice e sterilizzarlo. </li><li> Ripetere i passaggi 6,1-6,4 e monitorare il recupero degli animali. </li></ol> Analisi 8. Tissue <ol><li> Per monitorare gittata sistolica, sezionare il cervello. <ol><li> Euthanize il mouse usando un processo a due fasi. In primo luogo, esporre l&#39;animale a una dose eccessiva di isoflurano fino smette di respirare. Per la colorazione TTC, decapitare il mouse immediatamente e procedere all&#39;estrazione del cervello. Per il cervello sezionamento (ad esempio, per le analisi immunostaining), eseguire perfusione attraverso una puntura cardiaca prima di decapitazione. </li><li> Cut-off testa alla base del cranio e tagliare il cuoio capelluto dall&#39;apertura collo alla parte superiore del cranio fino a tra gli occhi. Con il cranio esposto, tagliare l&#39;osso lungo entrambi i lati a partire dall&#39;apertura base cranicafino alla cavità oculare. Rendere questo taglio lungo l&#39;ampia parte del cranio. Fare attenzione a non arrivare troppo in profondità con le forbici per evitare di danneggiare il cervello. </li><li> Successivamente, tagliare l&#39;osso tra le due orbite. </li></ol></li><li> Utilizzando pinze, sollevare la parte superiore del cranio per esporre il cervello. Ci dovrebbe essere solo una piccola resistenza. Se non si solleva con facilità, incisioni cranio possono essere incomplete. Facendo leva, togliere il cervello delicatamente con pinze curve smussate. Il cervello potrebbe essere ancora attaccato da diversi nervi. Procedete lentamente, rimuovere gli allegati lungo la strada. </li><li> Posizionare il cervello fresco in una matrice cerebrale 1 mm aggiungere un paio di gocce di PBS, e tagliare lungo la matrice utilizzando una lametta o lama criostato. </li><li> Trasferire il cervello di un piatto 100 mm e aggiungere soluzione colorante (2% di cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio [TTC] disciolto in PBS) per coprire il fondo del piatto. Utilizzando due pinze, separata tutti fettine cerebrali (rivolto verso il basso) e metterli in ordine al fondo del piatto. NOTA: La colorazione diventerà tessuto vitale rosso, con i tessuti non vitali restante bianco. Il riscaldamento della soluzione a 37 ° C accelererà colorazione. Segni di zona corsa (bianco) possono essere visti nel più breve tempo 90 minuti dopo ictus e rimangono visibili per più di 7 giorni. Imaging dovrebbe essere fatto con un righello per consentire il calcolo della gittata sistolica. </li><li> Cervelli di processo sezionato per sezionamento, immuno-colorazione, isolamento delle proteine, o una varietà di altre procedure di 17, 18, 19. </li></ol>

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Gli autori non hanno concorrenti o conflitti di interesse.

L&#39;utilizzo efficace del metodo MCAO descritto è fortemente dipendente dalla comprensione dei cerebrale dell&#39;anatomia flusso sanguigno. Poiché il corretto posizionamento della sutura è difficile distinguere a causa della mancanza di indizi visivi diretti, pratica ripetuta è importante avere il procedimento prima di utilizzarlo per studi investigativi. gittata sistolica dovrebbe essere analizzato per garantire risultati coerenti. L&#39;aggiunta di un sistema laser Doppler può aiutare a determinare l&#39;occlusione...

Lo studio di malattie cardiovascolari, come ictus, si basa sull&#39;utilizzo di modelli in vivo. Per comprendere la possibile implicazione di ischemia, tossicità del farmaco, e / o il trattamento, vi è la necessità di utilizzare un modello adatto, standardizzata, affidabile e riproducibile della malattia, che consente studi comparativi tra i gruppi di trattamento. In questo manoscritto, stiamo usando i topi, data la disponibilità di un gran numero di topi transgenici e modelli di valutazione standardizzati. Rastrellando i punteggi per valutare a motore e il comportamento deficit seguenti ictus ischemico sperimentale e il successivo recupero sono stati sviluppati 1, 2. Diversi modelli con ictus ischemico sono disponibili, come ad esempio completo ischemia globale cerebrale, ischemia incompleta globale, multifocale ischemia cerebrale e ischemia cerebrale focale. Quest&#39;ultimo gruppo è anche la categoria di ictus prevalente nei pazienti. La maggior parte di Evanti vengono avviate dalla formazione di un&#39;occlusione embolica o trombotica o in prossimità dell&#39;arteria cerebrale media (MCA). Alla luce di questi parametri, il modello presentato da vicino imita malattia eziologia della corsa umana e rende i risultati ottenuti altamente pertinenti 3. Tuttavia, la traduzione di scoperte da modelli animali per il trattamento della malattia negli esseri umani ha dimostrato di essere una sfida. Fino ad ora, solo l&#39;uso di tessuto trombolitica del plasminogeno è stato approvato per il trattamento dell&#39;ictus ischemico acuto 4. Tra i modelli di ischemia cerebrale focale nel topo, posteriore modello di ictus circolazione cerebrale e cerebrale modello trombosi venosa sono altamente invasiva, diminuendo la loro applicabilità e limitando la gamma di analisi che possono essere eseguite. Tuttavia, altre tecniche, come ad esempio il modello embolico, il modello photothrombosis, modello di ictus endotelina-1 indotta, e endoluminale sutura dell&#39;arteria cerebrale media di occlusione (MCAO modello), sono disponibili per l&#39;uso, senza tali limitazioni. Il modello MCAO è una tecnica descritta in questo protocollo. Offre un metodo affidabile per indurre ischemia cerebrale focale che possono essere facilmente riperfuso ed eseguito in maniera high-throughput. Ci sono due approcci per questo modello, vale a dire, i metodi di Zea-Longa e Koizumi. Essi differiscono leggermente in modo sutura occlusione viene inserito nel sistema vascolare. Nella tecnica Zea-Longa, la sutura viene inserito attraverso la carotide esterna 5. La tecnica qui presentata viene modificato dal metodo Koizumi in cui è inserita la sutura occlusione attraverso l&#39;arteria carotide comune 6. Il modello MCAO è stato applicato con successo per valutare diversi eventi che si verificano durante l&#39;ictus ischemico. A seguito di riperfusione, edema cerebrale può essere osservata con la rottura della barriera emato-encefalica. morte neuronale picco si osserva di solito a 24 ore; tuttavia, risi rivolge a livelli basali dopo 7 giorni 7. Negli esseri umani, il sesso e l&#39;età sono variabili importanti nel determinare il risultato ictus, questo si osserva anche in topi e ratti 8, 9, 10. Diverse pubblicazioni hanno utilizzato il modello MCAO dimostrare efficienza di trattamento 11, 12, 13, 14.

<table><tbody><tr><td>Sutura MCAO 0,23 mm</td><td>Doccol</td><td>702345PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Sutura MCAO 0,21 mm</td><td>Doccol</td><td>702145PK5Re</td><td></td></tr><tr><td>Penne d'argento</td><td></td><td>graffette 503205</td><td></td></tr><tr><td>Macchina per anestesia</td><td>Vetequip</td><td>901806</td><td></td></tr><tr><td>Forbici chirurgiche</td><td>Strumento per scienze fini</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>Pinze chirurgiche Punta dritta</td><td>Fine strumento scientifico</td><td>00108-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinze chirurgiche punta angolata</td><td>Strumento scientifico fine</td><td>00109-11</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla</td><td>Strumento scientifico fine</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>Sutura in nylon</td><td>Braintree scintific</td><td>SUT-S 104</td><td></td></tr><tr><td>Sutura di chiusura</td><td>VWR</td><td>95057-036</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Piramal</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5- Cloruro di trifeniltetrazolio</td><td>FisherSci</td><td>50-121-8005</td><td></td></tr><tr><td>Blocco cerebrale</td><td>Braintree scintific</td><td>BS-A 5000C</td><td></td></tr><tr><td>Lama criostato</td><td>VWR</td><td>89202-606</td><td></td></tr><tr><td>Opzionale:</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sistema doppler laser Periflux</td><td>Perimed</td><td>Periflux 5000</td><td></td></tr><tr><td>Unità di monitoraggio</td><td>Perimed</td><td>PF 5010 - LDPM</td><td></td></tr></tbody></table>

induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria medio e visualizzazione di infarct area

Induction of Ischemic Stroke and Ischemia-reperfusion in Mice Using the Middle Artery Occlusion Technique and Visualization of Infarct Area

La malattia cerebrovascolare è molto diffusa nella popolazione globale e comprende diversi tipi di condizioni, tra cui l'ictus. Per studiare l'impatto dell'ictus sul danno tissutale e per valutare l'efficacia degli interventi terapeutici, sono stati sviluppati diversi modelli sperimentali in una varietà di specie. Includono l'ischemia cerebrale globale completa, l'ischemia globale incompleta, l'ischemia cerebrale focale e l'ischemia cerebrale multifocale. Il modello descritto in questo protocollo si basa sull'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) ed è correlato alla categoria dell'ischemia focale. Questa tecnica produce un'ischemia focale costante in una regione rigorosamente definita dell'emisfero ed è meno invasiva di altri metodi. La procedura descritta viene eseguita sui topi, data la disponibilità di diverse varianti genetiche e l'elevato numero di test standardizzati per i topi per aiutare nella valutazione comportamentale e del neurodeficit.

Il percorso di inserimento per la sutura occlusione viene mostrato in Figura 1. La sutura MCAO deve essere instradato verso l'area di occlusione, biforcano in ICA. l'occlusione di successo del MCA porterà a lesioni dei tessuti, visibile attraverso la colorazione TTC. La figura 2 presenta le immagini di colorazione da sham trattati animale (Figura 2A) e da un 60 min MCAO ischemia riperfusione animale (colorazione a 90 minuti o 24 ore dopo...

Descriviamo un modello murino di ictus indotto dall'occlusione dell'arteria cerebrale media utilizzando una sutura rivestita di silicone. Il protocollo può essere applicato per indurre un'occlusione permanente o un'ischemia temporanea, seguita da riperfusione.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell&#39;arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

Cerebrovascular disease is highly prevalent in the global population and encompasses several types of conditions, including stroke. To study the impact of ...

L'obiettivo generale di questa procedura chirurgica è quello di indurre ufficialmente e in modo affidabile l'ictus ischemico lasciando intatta l'arteria cerebrale esterna. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca sull'ictus, come l'impatto del trattamento sulla gravità dell'ictus. Il vantaggio principale di questa tecnica è che dopo l'induzione dell'ictus, l'arteria cerebrale esterna rimane disponibile per infondere il trattamento direttamente nell'emisfero interessato.Posizionare un topo anestetizzato con isoflurano sulla superficie chirurgica preparata e inserire un cono nasale per somministrare isoflurano miscelato con ossigeno. Assicurarsi che la frequenza respiratoria sia di circa una o due respire al secondo senza ansimare. Inoltre, assicurarsi che l'animale non mostri una reazione alla stimolazione dei baffi o al riflesso del pedale.Metti una goccia di lubrificante oftalmico su ciascun occhio, utilizzando un tampone sterile per evitare che si secchino durante la procedura. Dopo aver rasato l'area dell'incisione, disinfettare accuratamente l'area chirurgica utilizzando etanolo al 70% e una soluzione a base di clorexidina. Tenere l'animale su una superficie chirurgica calda sotto uno stereomicroscopio.Successivamente, utilizzando forbici chirurgiche e pinze, eseguire un'incisione superficiale della linea mediana nel collo da sopra lo sterno a sotto la mascella. Usando una pinza, separa accuratamente i tessuti adiposi e connettivi per esporre la trachea. I tessuti dovrebbero separarsi facilmente e naturalmente su entrambi i lati.Quindi posizionare un cuscino o un altro oggetto rotondo di circa 0,5 centimetri di diametro sotto la parte posteriore del collo per estendere il collo ed esporre ulteriormente l'area per l'intervento chirurgico. Aprire l'incisione utilizzando un divaricatore di tessuto o ganci. Quindi, sul lato sinistro della trachea, separare con cura il tessuto connettivo per esporre l'arteria carotide comune sinistra senza danneggiare i nervi vicini e le vene principali.Quindi, inserisci le pinze curve sotto il CCA per perforare il tessuto connettivo e poi lasciale aprire lentamente per rilasciare il CCA. Staccare il CCA dal tessuto sottostante ed esporre la ramificazione superiore y dell'arteria cerebrale interna e dell'arteria cerebrale esterna. Una volta che il CCA è esposto, inserire tre segmenti di sutura di nylon sotto il CCA.Assicurarsi che il CCA non sia attorcigliato, poiché ciò complicherebbe drasticamente l'inserimento della sutura. Quindi, nel punto più basso possibile, chiudere la sutura inferiore con un nodo permanente. Legare la sutura superiore appena sotto la ramificazione dell'ICA e dell'ECA utilizzando un nodo scorsoio rimovibile.Quindi, lega la sutura centrale usando un nodo scorsoio rimovibile, ma tienila ben aperta. Quindi, utilizzando le forbici a molla per micro dissezione, creare una CCA di 0,2 millimetri tra le suture inferiore e centrale più vicine alla sutura inferiore. Usando una pinza, inserire la sutura MCAO nell'incisione CCA, guidandola verso la sutura superiore.Quindi stringere delicatamente il nodo scorsoio della sutura centrale sul CCA in modo che limiti il flusso sanguigno attorno alla sutura MCAO, ma sia abbastanza largo da consentire alla sutura MCAO di muoversi liberamente. Ora svitare con cura la sutura superiore, assicurandosi che la sutura MCAO non scivoli fuori. Inserire la sutura MCAO di un paio di millimetri nell'ICA e poi richiudere la sutura superiore con un nodo scorsoio come prima.Successivamente, guidare la sutura MCAO verso l'area di occlusione, prima instradandola nell'ICA oltre l'ECA, quindi assicurandosi che la sutura rimanga nell'ICA, bypassando l'arteria pterigopalatina. L'inserimento ha successo se c'è poco riflusso di sangue dall'incisione CCA e se il segno d'argento di nove millimetri si trova tra l'incisione CCA e la biforcazione dell'ICA e dell'ECA. Dopo l'occlusione riuscita, legare saldamente la sutura centrale e superiore, quindi infilare le suture nell'area dell'incisione.Dopo aver rimosso il divaricatore o i ganci in tessuto e il cuscino, pulire l'area della sutura utilizzando soluzione fisiologica sterile su un batuffolo di cotone. Quindi chiudere la pelle con sutura di nylon. Posizionare il mouse in una gabbia pulita situata su un tappetino riscaldato per prevenire l'ipotermia e consentire l'accesso ad libitum all'acqua e al cibo ammorbidito.Monitorare l'animale per segni di ictus per almeno 5-10 minuti. A seconda del protocollo di riperfusione ischemica, lasciare la sutura MCAO in posizione da 30 minuti a 120 minuti o più. Dopo aver anestetizzato l'animale come prima e rimosso i punti di sutura di chiusura della ferita, utilizzare una pinza e separatori di tessuti per riaprire l'incisione ed esporre il CCA.Quindi rimuovere con cautela la sutura superiore e tirare delicatamente la sutura MCAO fino a quando la parte rivestita di silicone non si trova in corrispondenza del nodo centrale. Rifare la sutura del nodo superiore per evitare che il sangue scorra attraverso la sutura MCAO. Quindi sciogliere con cura il nodo centrale e tirare la sutura MCAO oltre il nodo superiore, mantenendola all'interno del CCA.Chiudere ermeticamente il nodo superiore per bloccare il flusso sanguigno dell'arteria. Quindi, estrarre completamente la sutura MCAO e chiudere saldamente il nodo centrale. Chiudere la ferita e somministrare le cure post-operatorie come prima.Questo schema mostra in blu l'area di occlusione risultante dalla procedura illustrata in questo video. L'area chirurgica si trova nella parte inferiore della figura, indicata dalla forma ovale, e il posizionamento della sutura è indicato da linee nere. Le immagini seguenti mostrano la posizione TTC delle sezioni cerebrali.Questa immagine rappresenta la colorazione tipica dopo l'inserimento di sham. L'immagine è rappresentativa del danno tissutale causato da un MCAO di 60 minuti, seguito da 90 minuti di riperfusione. Un danno tissutale maggiore si osserva dopo 24 ore di riperfusione, dopo un MCAO di 60 minuti.La colorazione immunofluorescente per il marcatore neuronale MAP2 consente la perdita neuronale a partire da 60 minuti di occlusione, seguita da 23 ore di riperfusione, da visualizzare chiaramente nell'immagine a destra. L'astrogliosi è visibile dopo colorazione immunofluorescente con GFAP. Nell'immagine a destra, le astroglia sono concentrate nell'area adiacente al danno tissutale nel cervello di riperfusione per ischemia, mentre un picchiettio diffuso di colorazione è visibile nel controllo operato dalla vergogna.Durante il tentativo di questa procedura, è importante monitorare il benessere dell'animale e il tempo di occlusione. Dopo questa procedura, è possibile eseguire altre tecniche come l'analisi del comportamento strano e l'immunofluorescenza per rispondere a ulteriori domande sul danno tissutale e sul recupero.

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Induzione chirurgica del danno ischemico cerebrale nel ratto è un modello ampiamente utilizzato per la ricerca ictus. Qui mostriamo l'induzione di ischemia cerebrale focale da occlusione dell'arteria cerebrale media. Visualizzazione delle infarto risultante dalla colorazione istologica e la risonanza magnetica è anche mostrato.

Modello di ischemia cerebrale focale da occlusione endovascolare Sutura della arteria cerebrale media nel ratto

Occlusione filamentosa dell'arteria cerebrale media è un modello comune per lo studio di ictus ischemico nei topi.

Corsa di modellazione in Mouse - Medio occlusione dell&#39;arteria cerebrale con il Modello Filament

Dimostriamo nel video un metodo per produrre una occlusione dell'arteria cerebrale media in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Mostriamo anche come valutare il grado di infarto cerebrale da 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione.

Modello murino di Mezzo occlusione dell&#39;arteria cerebrale

Il intraluminale occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) modello è il modello più frequente tra i modelli sperimentali utilizzati ictus ischemico. Qui dimostrerà tutto il modello in dettaglio con la guida di flussimetria laser Doppler, ed i suoi risultati rappresentativi.

Intraluminali occlusione dell&#39;arteria cerebrale media (MCAO) Modello per l&#39;ictus ischemico con la guida flussimetria laser Doppler in topi

Il modello intraluminale occlusione cerebrale nei topi viene qui presentato. Il grado di infarto cerebrale viene valutata da un punteggio neurologico e colorazione violetto cresolo, una colorazione alternativa alla TTC, che offre il grande vantaggio di testare in parallelo molti marcatori di interesse.

Modello murino di MCAO intraluminale: valutazione infarto cerebrale da colorazione viola cresile

Per comprendere la fisiopatologia di ictus, è importante utilizzare modelli affidabili. Questo documento descrive uno dei modelli di ictus più frequentemente utilizzati nei topi, chiamato il modello cerebrale media occlusione dell'arteria (MCAO) (anche chiamato il filamento intraluminale o modello di sutura) con riperfusione.

Approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

L'occlusione di filamento intraluminal dell'arteria cerebrale centrale è il modello più utilizzato in vivo di colpo sperimentale nei roditori. Approccio chirurgico alternativo per consentire la riparazione dell'arteria carotica comune avviene qui, che permette la riperfusione dell'arteria carotica comune e un completo riperfusione nel territorio dell'arteria cerebrale media.

Occlusione dell'arteria cerebrale centrale consentendo di riperfusione tramite riparazione dell'arteria carotica comune nei topi

Un modello murino di ischemia-riperfusione cerebrale è istituito per studiare la patofisiologia del colpo. Abbiamo distalmente legare l'arteria cerebrale centrale di destra e l'arteria carotica comune di destra e ripristinare il flusso sanguigno dopo 10 o 40 min di ischemia.

Occlusione del vaso due Mouse modello di Ischemia-riperfusione cerebrale

Qui descriviamo un metodo semplice e riproducibile che può indurre infarto miocardico o danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi mediante legatura di precisione dell'arteria coronaria discendente anteriore sinistra attraverso la micromanipolazione.

Induzione di infarto miocardico e danno da ischemia-riperfusione miocardica nei topi

Questo protocollo descrive il modello di ischemia cerebrale focale transitoria nei topi attraverso l'occlusione intraluminale dell'arteria cerebrale media. Inoltre, vengono mostrati esempi di valutazione dei risultati utilizzando la risonanza magnetica per immagini e test comportamentali.

Modello transitorio di occlusione dell'arteria cerebrale media dell'ictus

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6J e valutare il successivo comportamento neurologico e le caratteristiche istopatologiche.

Induzione di ictus ischemico acuto nei topi utilizzando la tecnica di occlusione dell'arteria media distale

Impara a indurre ictus ischemico nei topi mediante occlusione dell'arteria cerebrale media, mantenendo intatta l'arteria cerebrale esterna per infusione diretta dei trattamenti. Questo modello chirurgico consente di studiare meccanismi e terapie dell'ictus.

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dellarteria Medio e visualizzazione di Infarct Area (Video) | JoVE Journal

Induzione di ictus ischemico e di ischemia-riperfusione nei topi mediante la tecnica di occlusione dell'arteria Medio e visualizzazione di Infarct Area

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