Utilizzando la tecnica di manica in un modello murino di trapianto aortico - un Video didattico

In questa procedura, l'aorta del donatore viene posta in posizione ortopneica e i morsi superficiali vengono prelevati nel vaso di alimentazione. Anestetizzare i topi con una miscela di isoflurano all'1,5% in volume e ossigeno al 100% attraverso una maschera facciale. Appoggiare il mouse su una piattaforma in posizione supina e fissare tutte le gambe al tavolo operatorio.

Metti un unguento oftalmico sugli occhi per prevenire la secchezza durante la procedura. Controlla i riflessi, pizzicando le zampe posteriori per assicurarti che il topo sia sufficientemente anestetizzato. Rimuovi tutti i peli dall'addome.

Applicare una crema depilatoria o utilizzare un rasoio. Eseguire l'operazione in condizioni sterili. Disinfettare l'addome.

Per rimuovere l'aorta del donatore, praticare un'incisione addominale sulla linea mediana e ritrarre manualmente l'intestino verso destra. Riflettere delicatamente manualmente l'intestino di lato utilizzando guanti senza polvere. Metti le budella su un pezzo di garza inumidita con soluzione fisiologica per mantenerle umide.

Sezionare l'aorta addominale con molta attenzione dal tessuto circostante utilizzando una dissezione smussata con una pinzetta. Sezionare il segmento dell'aorta tra l'arteria renale e la biforcazione dalla vena cava con le pinzette. Fissare tutti i piccoli rami di questo segmento utilizzando una sutura singola monofilamento 11-0.

Prima di rimuovere l'aorta, iniettare 0,5 millilitri di soluzione salina contenente 50 unità di eparina nella vena cava inferiore. Lascia dissanguare l'animale donatore prima che il segmento dell'aorta sia stato rimosso. Sciacquare completamente l'innesto con soluzione fisiologica e metterlo immediatamente in un contenitore di soluzione salina ghiacciata.

Per preparare il ricevente, anestetizzare l'animale attraverso una maschera facciale, rimuovere il pelo e disinfettare come sopra, e praticare un'incisione sulla linea mediana dallo xifoide al bacino con un bisturi. Ritrarre le pareti addominali con i divaricatori. Avvolgere l'intestino in una garza inumidita con soluzione salina e spostarlo molto delicatamente verso la destra dell'animale.

Sezionare l'aorta infrarenale libera tra le arterie renali prossimalmente e la biforcazione distalmente con le pinzette. Fissare tutti i piccoli rami di questo segmento utilizzando una sutura singola monofilamento 11-0. Bloccare le porzioni prossimale e distale dell'aorta tramite una sutura di seta singola 6-0.

Dividere l'aorta al centro tra le pinze e irrigare le estremità tagliate con soluzione salina eparinizzata per aprire il lume. Posizionare l'innesto in posizione ortopnoica. Eseguire l'anastomosi utilizzando la tecnica della manica con suture utilizzando il monofilamento 11-0.

Con questo metodo, l'estremità del recipiente di alimentazione viene inserita nel recipiente ricevente. Posizionare l'estremità dell'aorta ricevente infrarenale all'interno dell'estremità prossimale dell'aorta del donatore. Eseguire l'anastomosi distale allo stesso modo.

Posizionare l'estremità distale dell'aorta del donatore all'interno dell'estremità distale dell'aorta ricevente. Fare attenzione ad evitare qualsiasi torsione dell'aorta garantendo il perfetto allineamento dell'aorta donatrice e ricevente. Il momento del rilascio del morsetto è una fase molto importante della procedura e deve essere eseguito con molta attenzione.

Dopo aver verificato che l'anastomosi sia in ordine, rilasciare i morsetti. Rilasciare prima delicatamente la pinza distale, seguita dalla pinza prossimale. In questo modo c'è una bassa pressione per tenere insieme le pareti prima che il lato di alta pressione venga rilasciato.

L'innesto viene immediatamente perfuso ed è visibile un polso. Rimuovere delicatamente i resti della seta. Rimettere il contenuto addominale nella cavità addominale e chiudere la ferita utilizzando una sutura di acido poliglicolico 3-0.

Somministrare buprenorfina 0,05 milligrammi per chilogrammo al topo prima di terminare l'anestesia. Presentiamo gli esempi delle immagini necroscopiche dell'innesto sei settimane dopo il trapianto e la sua vista ecografica tridimensionale e B-mode. Le immagini mostrano la pervietà dell'innesto.

Non ci sono cambiamenti nelle dimensioni del lume mostrate dall'innesto. Inoltre, non abbiamo trovato stenosi o formazioni aneuristiche. Non abbiamo osservato lesioni significative nelle aorte trapiantate mediante colorazione istologica e immunoistochimica.

I nuclei sono stati controcolorati da DAPI. In conclusione, questo metodo di anastomosi molto rapida potrebbe essere utilizzato per studiare le malattie vascolari nei topi geneticamente modificati.