Name: Murine tutto spessore trapianto della pelle (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-01-02T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Impara il trapianto di pelle a tutto spessore nel topo per studiare le risposte immunitarie e il rigetto del trapianto. Questo metodo riproducibile consente di monitorare facilmente l'evoluzione del rigetto.

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Questo lavoro è stato finanziato dal NIH concedere R01AI077610.

Tutte le procedure sono state condotte in conformità con la guida per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio del National Institute of Health (NIH) e sono stati approvati dal Comitato Johns Hopkins University Animal Care e Usa (JHUACUC). Le procedure specifiche sono state eseguite sotto la protocolli ACUC approvato MO13M292 e MO13M370. 1. donatore Harvest pelle <ol><li> Anestetizzare il mouse donatore con isoflurano (vaporizzatore induzione a 4%, manutenzione a 1 - 2% attraverso il cono del mouse). Utilizzare la punta pizzico di ritiro reflex per monitorare la profondità dell&#39;anestesia. </li><li> Usando un rasoio elettrico, radere dorso dell&#39;animale e disinfettare con 10% di iodio povidone (ad esempio, Betadine). </li><li> Utilizzando forbici sterili, guanti e tecnica asettica, pelle di nuovo raccolto donatore dal fianco al collo, con scollamento a livello del tessuto connettivo areolare. </li><li> Eutanasia dell&#39;animale da dislocazione cervicale dopo la raccolta delinnesto di pelle. </li><li> Sotto un microscopio, separare il tessuto connettivo, tessuto adiposo, e pannicolo carnosus dalla pelle indietro con le forbici tenotomy sottili. Il carnosus pannicolo è un sottile, trasparente muscoli responsabili dei movimenti contrazioni della pelle. </li><li> Usando una tecnica strumenti sterili, tagliare innesti 15 mm x 15 mm dalla pelle indietro per un 10 mm x 10 mm per 15 mm letto trapianto x 15 mm. </li><li> Conservare gli innesti su garze imbevute con sterile tampone fosfato salino (PBS) in una capsula di Petri sul ghiaccio. NOTA: 8 - 10 innesti può essere ottenuta da un topo donatore. </li></ol> 2. trapianto di pelle <ol><li> Anestetizzare il mouse destinatario con isoflurano (vaporizzatore induzione a 4%, manutenzione a 1 - 2% attraverso il cono del mouse). Utilizzare la punta pizzico di ritiro reflex per monitorare la profondità dell&#39;anestesia. </li><li> Somministrare 0,02 mg / kg di peso corporeo di buprenorfina per alleviare il dolore post-operatorio. </li><li> Shave lato del dorso dell&#39;animale in cui l&#39;innesto will essere inserito e disinfettare con il 10% di iodio povidone. </li><li> Utilizzando le forbici, tagliare un 10 mm x 10 mm per 15 mm x 15 mm quadrato di pelle. La dimensione difetti dovrebbe essere leggermente più grande (10%) rispetto al trapianto. Tagliare come superficialmente possibile. Fare attenzione a preservare la carnosus pannicolo e vasi. La carnosus pannicolo può essere distinto dal fascia sottostante per la sua mobilità e dei vasi sanguigni che corrono superficiale ad esso. </li><li> Posizionare l&#39;innesto sul letto graft, evitando pieghe lungo i bordi. </li><li> Mettere 8 punti di sutura sugli angoli e sul centro di ciascun bordo. Per ciascuna di sutura, passare l&#39;ago attraverso l&#39;innesto e poi attraverso la carnosus pannicolo dell&#39;innesto letto sotto la pelle del destinatario circostante. </li><li> Rimuovere la maschera anestetico e lasciare che l&#39;animale recupera parzialmente da anestesia prima di applicare il cerotto. </li><li> Avvolgere il mouse destinatario in un bendaggio adesivo con garza piegata sopra l&#39;innesto. Effettuare la benda dalla combinazione di due bende, tagliola parte adesiva di uno e posizionare i due tamponi assorbenti insieme. </li><li> Monitorare il mouse da vicino durante il recupero per garantire che il bendaggio non sta limitando torace escursione e la respirazione. Togliere la benda se la frequenza respiratoria diminuisce o l&#39;animale comincia a boccheggiare o alito superficialmente. </li></ol> 3. Cura postoperatoria <ol><li> Somministrare enrofloxacina 5 mg / kg dopo l&#39;intervento chirurgico per la profilassi delle infezioni. </li><li> Posizionare il mouse trapiantato in una gabbia pulita su una piastra elettrica per microonde fino a quando non recupera completamente dall&#39;anestesia. </li><li> Osservare il mouse per 1 ora dopo l&#39;intervento prima di ritornare alla struttura alloggiativa. </li><li> Sette giorni dopo l&#39;intervento, anestetizzare il mouse come al punto 2.1. Rimuovere il bendaggio tagliando solo attraverso il lato ventrale della benda. </li><li> Osservare e palpare il trapianto il giorno successivo per i segni di formazione di croste, la contrazione, o la durezza. Se presente, l&#39;innesto può non aver raggiunto la corretta vascularizazione e deve essere considerato un guasto tecnico. </li><li> Daily Monitor per i segni di rigetto. Considerare innesti respinto quando ≥90% del tessuto trapianto diventa necrotico. </li><li> Eutanasia gli animali rifiutati e li raccolto per l&#39;analisi. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Dalla sua introduzione da Medawar, prima in studi sull&#39;uomo e poi nei conigli e topi, il trapianto di pelle è stato un modello prezioso per lo studio delle risposte immunitarie allogeniche 6,7. In questo manoscritto, vi presentiamo un modello di grandi dimensioni, non vascolarizzato, il trapianto a tutto spessore della pelle con la pelle posteriore superiore e inferiore. Vari metodi alternativi, tra cui l&#39;uso della pelle coda o la pelle dell&#39;orecchio del mouse come fonte innesto di tessuto, sono s...

Il trapianto di organi è il trattamento di scelta per i pazienti con insufficienza terminale d&#39;organo, ed i risultati hanno migliorato notevolmente con i progressi nelle procedure chirurgiche e protocolli immunosoppressione. Tuttavia, immunosoppressione a lungo termine è associato ad effetti collaterali significativi, e lo sviluppo di nuove strategie che promuovano la tolleranza rimane l&#39;obiettivo della ricerca trapianti moderna. Numerosi modelli animali sono stati sviluppati per la ricerca di base nel trapianto, per studiare i meccanismi di rigetto e per testare immunosoppressione approcci per prevenire il rigetto del trapianto e per promuovere la tolleranza a lungo termine 1-3. modelli di topo sono diventati il ​​cardine della ricerca immunologica grazie alla disponibilità esclusiva e vasta di anticorpi diagnostici e terapeutici e ceppi inbred e transgenici ben definiti. Il trapianto della pelle è una procedura semplice che non richiede particolari competenze di microchirurgia e puòessere facilmente monitorati dopo l&#39;intervento. Nel loro insieme, il trapianto di pelle del mouse è stato uno strumento eccezionale per studiare molti aspetti coinvolti nella risposta alloimmune, tra cui la consegna antigene, il traffico delle cellule, e la distruzione dei tessuti durante rigetto del trapianto 4,5. Qui, vi mostriamo la procedura passo-passo per il trapianto a tutto spessore della pelle utilizzando il modello di topo, e descriviamo i passi importanti necessari per un attecchimento di successo della pelle trapiantata.

<table><tbody><tr><td>Micro pinze dritte</td><td>Sigma</td><td>F4017</td><td></td></tr><tr><td>Micro pinze curve</td><td>Aesculap</td><td>BD333R</td><td></td></tr><tr><td>Forbici per tenotomia curve Stevens</td><td>Aesculap</td><td>BC905R</td><td></td></tr><tr><td>Forbici da dissezione Mayo</td><td>Sigma</td><td>S3146</td><td></td></tr><tr><td>Micro porta aghi</td><td>Aesculap</td><td>BM563R</td><td></td></tr><tr><td>Garza sterile</td><td>Covidien</td><td></td><td></td>441218</tr><tr><td>6-0 Sutura in nylon</td><td>MWI</td><td>31849</td><td></td></tr><tr><td>Strisce di plastica Band&#45; Aiuto</td><td>Johnson & </td><td></td> Johnson <td>Ottenuto dalla farmacia</td></tr><tr><td>Piastra di Petri da 10 cm</td><td>Fisherbrand</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Qualità Biologica 119069131</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td></td><td></td><td>DEA Numero richiesto; Ottenuto dalla farmacia ospedaliera</td></tr><tr><td>Enrofloxacin</td><td>Bayer Health Care</td><td>186599</td><td></td></tr></tbody></table>

murine tutto spessore trapianto della pelle

Murine Full-thickness Skin Transplantation

Murino di trapianto a tutto spessore della pelle è un modello in vivo consolidata per studiare alloimmune risposta e rigetto del trapianto. Nonostante la sua limitata applicazione per gli esseri umani, il trapianto di pelle nei topi è stato ampiamente impiegato per la ricerca sui trapianti. La procedura è facile da imparare ed eseguire, e non richiede tecniche microchirurgiche delicate né una formazione completa. Inoltre, il rigetto in questo modello si verifica in una reazione immunologica molto riproducibili ed è facilmente monitorato mediante ispezione diretta e palpazione. Inoltre, il trapianto di pelle secondario con innesti donatore corrispondenza o pelle di terze parti può essere eseguita su più modelli di trapianto complessi come un metodo alternativo e semplice per valutare la tolleranza specifici per donatore. Le complicazioni sono bassi e sono in genere limitati a overdose anestesia o distress respiratorio dopo la procedura. fallimento Graft, invece, si verifica comunemente come a causa della scarsa preparazione del gra poppa, errato posizionamento nel letto trapianto, o il posizionamento inadeguato del bendaggio. In questo articolo, vi presentiamo un protocollo per il trapianto di pelle a tutto spessore nei topi e descrivere i passi importanti necessari per una procedura di successo.

Il posizionamento del bendaggio sul mouse destinatario è un importante passo della procedura. L&#39;innesto di pelle è posizionato sul tronco destinatario, tra la spalla, anca e colonna vertebrale (Figura 1). La benda è realizzata con garza piegata e la combinazione di due bende adesive plastica. Il mouse destinatario è posizionato con l&#39;innesto giù sopra la garza sul centro della benda. Utilizzando due micro pinze curve, l&#39;estremità inferiore della benda è tirat...

Murino di trapianto a tutto spessore della pelle è un modello consolidato per studiare il rifiuto in un ambiente alloimmune. Qui, mettiamo a disposizione un tutorial di ogni passo coinvolti in esecuzione di un BALB / c -&gt; C57BL / 6 a tutto spessore trapianto di pelle.

Murine tutto spessore trapianto della pelle

Murine full-thickness skin transplantation is a well-established in vivo model to study alloimmune response and graft rejection. Despite its limited ...

L'obiettivo generale di questo articolo video è eseguire un trapianto di cute a spessore completo e descrivere i passaggi fondamentali necessari per un intervento di successo. Il trapianto di cute a spessore completo nei topi è un modello ben consolidato per lo studio delle risposte alloimmunitarie e del rigetto del trapianto. La procedura è semplice da eseguire e non richiede tecniche microchirurgiche delicate.Il rigetto del trapianto, in questo modello, avviene attraverso una reazione immunologica molto riproducibile e può essere facilmente monitorato mediante ispezione diretta e palpazione. Inoltre, è possibile eseguire un trapianto cutaneo secondario con innesti di pelle provenienti dallo stesso donatore o da un terzo soggetto, al fine di realizzare modelli di trapianto più complessi, come metodo alternativo e semplice per valutare la tolleranza specifica verso il donatore. Dopo aver anestetizzato un topo donatore seguendo il protocollo descritto nel testo, utilizzare un rasoio elettrico per rasare la schiena dell'animale.E, con povidone-iodio al 10%, disinfettare la cute. Utilizzando forbici e dissezione ottusa, prelevare la cute dorsale del donatore dall'anca al collo a livel

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Immunologia e Infezioni

Trapianto allogenico pelle è un modello standard per le risposte T test della cellula ospite per diversi antigeni MHC-donatore. Questo video-articolo fornisce un tutorial visivo di ogni passo coinvolti in esecuzione di un trapianto di BALB/c--&gt; C57BL / 6 della pelle.

Trapianto di pelle murina

In questo rapporto, descriviamo tridimensionale pelle ricostruire modello che imita la pelle umana in architettura e composizione. Fisiologia melanociti, la progressione del melanoma e il destino delle cellule staminali cutanee sono state studiate utilizzando il modello di ricostruire la pelle. Il modello è anche utile come strumento di pre-clinici per la valutazione dei farmaci.

Tridimensionale pelle umana Ricostruire Modello: uno strumento per studiare la pelle normale e progressione Melanoma

Questo video mostra un metodo per innestare pelle umana su un topo immunodeficiente con una risposta neutrofila soppressa. Il metodo prevede l'applicazione di pelle umana a spessore diviso sul letto di innesto del topo, sigillandolo e coprendolo per il recupero. Alla fine, la pelle umana aderisce alla pelle del topo, stabilendo la vascolarizzazione e la circolazione, con conseguente xenotrapianto cutaneo di successo.

Una tecnica per l'innesto di pelle umana in un modello murino

Vascolarizzazione è la chiave per approcci in ingegneria dei tessuti successo. Pertanto, tecnologie affidabili sono necessari per valutare lo sviluppo di reti vascolari in tessuto-costrutti. Qui vi presentiamo un metodo semplice e conveniente per visualizzare e quantificare vascolarizzazione in vivo.

Una pelle piena Difetto modello per valutare Vascolarizzazione di Biomateriali<em&gt; In Vivo</em

Il trapianto di pelle di coda è un potente modello per studiare il rigetto dipendente dalle cellule T e l'induzione della tolleranza durante le risposte immunitarie allogeniche nei topi. I vantaggi di questo protocollo sono la chirurgia invasiva minore e la facilità di monitoraggio senza la necessità di sacrificare il topo ricevente.

Il trapianto di coda della pelle per studiare allogenico di cellule T CD4 risposte in topi

Durante lo sviluppo dei mammiferi, le ferite cutanee gestazionali precoci guariscono senza cicatrici. Qui descriviamo in dettaglio un modello affidabile e riproducibile di guarigione fetale delle ferite senza cicatrici nel dorso cutaneo di embrioni di topo E16.5 (senza cicatrici) e E18.5 (cicatriziali).

Un Mouse fetale Modello Skin of Wound Repair scarless

Lo scopo di questo studio era quello di sviluppare un modello murino di guarigione delle ferite da ustione. Un'ustione termica è stata indotta sulla pelle dorsale dei topi utilizzando un modello di ottone preriscaldato. Il tessuto bruciato è stato disretto e sovrapposto con un innesto cutaneo raccolto dalla coda di un topo donatore geneticamente simile.

Un modello Murine di una ferita da ustione ricostruita con un innesto di pelle allogenica

Il presente protocollo descrive come innestare la pelle umana su topi del recettore della catena gamma (NSG) diabetici non obesi (NOD)-scid. Una descrizione dettagliata della preparazione della pelle umana per il trapianto, la preparazione di topi per il trapianto, il trapianto di pelle umana a spessore diviso e la procedura di recupero post-trapianto sono inclusi nella relazione.

Modello cutaneo di xenotrapianto per manipolare le risposte immunitarie umane in vivo

Il presente articolo descrive una tecnica modificata per il trapianto cardiaco vascolarizzato eterotopico con tecnica asettica, analgesia e anestesia aggiornate.

Un protocollo di trapianto di cuore eterotopico murino modificato che corrisponde agli standard contemporanei di tecnica asettica, anestesia e analgesia

Presentiamo un modello murino riproducibile di allotrapianto composito vascolarizzato eterotopo da arto posteriore a collo. Questo protocollo supermicrochirurgico, che prevede anastomosi vasali da 0,3-0,5 mm, integra la guida del filamento di nylon e la cuffia venosa. Fornisce una piattaforma affidabile per studi traslazionali su tolleranza, lesioni ischemiche-reperfusione e meccanismi immunologici nell'allotrapiante composito vascolarizato.

Trapianto eterotopico da arto posteriore a collo nel topo: un modello supermicrochirurgico di allotrapianto composito vascolarizzato

Impara il trapianto di pelle a tutto spessore nel topo per studiare le risposte immunitarie e il rigetto del trapianto. Questo metodo riproducibile consente di monitorare facilmente l'evoluzione del rigetto.

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