Name: Intravitale Microscopia e Trombo induzione nel lobo di un mouse Hairless (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-04-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 1 s
Description: Scopri la microscopia intravitale e l'induzione fototossica del trombo nel lobo dell'orecchio del topo SKH1-Hrhr. Questo metodo permette di studiare la formazione del trombo microvascolare in vivo senza preparazione chirurgica preliminare.

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Gli autori non hanno riconoscimenti.

Tutti gli esperimenti in vivo (7221.3-1-006 / 15) sono state condotte in conformità con la legislazione tedesca in materia di protezione degli animali e la Guida NIH per la cura e l&#39;uso di animali da laboratorio (Istituto di laboratorio risorse animali, Consiglio Nazionale delle Ricerche). 1. Mantenere generale degli animali <ol><li> Eseguire gli esperimenti con i topi hr SKH1-Hr maschi di età compresa tra 4 a 6 settimane. Utilizzare gli animali con un peso compreso tra 20 e 25 g. </li><li> Tenere gli animali in un impianto privo di patogeni e in condizioni standardizzate di 24 a 26 ° C e circa il 60% di umidità relativa, con accesso costante ad acqua e cibo ad libitum. </li><li> Mantenere fino a cinque animali di sesso maschile in una gabbia. Fornire materiale per lettiere e arricchimento durante la custodia degli animali per il loro benessere. </li></ol> 2. Predisposizione degli Animali <ol><li> Pesare un mouse e caricare il rispettivo farmaco (ad esempio, il cannabinoide, 5 mg / kg di peso corporeo (pc)) in una siringa da insulina. Somministrare il farmaco 30 minuti prima dell&#39;induzione trombo. </li><li> Mantenendo il collo del mouse tra il pollice e il dito indice e la coda del topo con il mignolo, allungare l&#39;animale e iniettare il farmaco per via intraperitoneale (ip) nel quadrante inferiore sinistro dell&#39;addome. Mettere l&#39;animale nella gabbia per 15 min. </li><li> Preparare anestesia con ketamina (90 mg / kg di peso corporeo) e xilazina (25 mg / kg di peso corporeo). 15 min prima dell&#39;induzione trombo, anestetizzare il mouse. Mettere il mouse nella gabbia, tirare un po &#39;la coda, e iniettare l&#39;ip anestetici con una siringa da insulina. </li><li> Mettere il mouse avanti nella gabbia fino a quando l&#39;induzione dell&#39;anestesia. Per verificare anestesia sufficiente, pizzicare la coda con una pinza. </li><li> Carico 0,05 ml di fluoresceina destrano scongelato isotiocianato-marcato (FITC-destrano, 5%, 150 kDa) in una siringa da insulina. Durante il riempimento della siringa, assicurarsi che non rimangano bolle d&#39;aria, in quanto anche piccole intravenously (iv) bolle d&#39;aria -administered può essere letale per l&#39;animale. </li><li> Posizionare il mouse anestetizzato su una piastra di riscaldamento nella posizione a faccia in giù. Regolare la piastra riscaldante a 37 ° C. </li><li> Mettere pomata oculare sulla cornea del mouse. Disinfettare la pelle e utilizzare strumenti sterili. </li><li> Stitch due punti di sutura di polipropilene 7/0 nel bordo craniale e caudale l&#39;orecchio destro. Posizionare i punti più vicino al bordo e come prossimale alla base possibile (Figura 1B). </li><li> Spostare il mouse per posizione dorsale. Fissare tutte le gambe alla piattaforma acrylglass utilizzando strisce adesive. Agganciare una sutura sotto i denti anteriori e posizionare la testa in dorsiflessione attaccando la sutura al acrylglass con strisce adesive. </li><li> Traslocare l&#39;animale sulla piattaforma con lo stereomicroscopio operazione. Utilizzare 16X di ingrandimento. </li></ol> 3. Preparazione della sinistra Vena giugulare e Iniezione di FITC-destrano Nota: Per microscopy dell&#39;orecchio destro, preparare la vena giugulare sinistra. <ol><li> Usando un bisturi, creare un&#39;incisione 5 mm nella pelle sul lato sinistro del collo in una direzione cranio-caudale. Sezionare il tessuto sottocutaneo con microforceps e microscissors. Entrambi navi attraversamento legare con poliestere 8/0 suture o con elettrocoagulazione. </li><li> Liberare la vena dalla sua avventizia utilizzando microforceps e microscissors senza toccare il vaso. </li><li> Utilizzare la siringa di insulina preparata per l&#39;iniezione del colorante fluorescente. afferrare con cautela la parete del vaso con le microforceps, senza perforare la vena. Penetrare la parete del vaso disteso con la siringa e iniettare iv FITC-destrano. </li><li> Fermare l&#39;emorragia dopo il ritiro della siringa usando tamponi di cotone. Evitare la contaminazione del sangue e tingere dell&#39;orecchio. </li></ol> 4. Posizionamento dell&#39;orecchio destro per intravitale microscopia a fluorescenza <ol><li> Trasferire l&#39;animale sulla piastra di riscaldamento a un acrylglass construction con uno slot per la piastra di riscaldamento e lle 0.5 cm di altezza aereo per posizionare l&#39;orecchio. </li><li> Fissare l&#39;animale faccia sulla piastra di riscaldamento mediante strisce adesive. Posizionare la cartilagine relativamente forte e convessa alla base dell&#39;orecchio accanto 0,5 cm di altezza aereo per l&#39;orecchio (Figura 1B) in modo che la parte apicale dell&#39;orecchio può essere posizionato piatto sul piano. </li><li> Aggiungere una goccia di temperatura ambiente 0,9% di NaCl al piano acrylglass al fine di posizionare l&#39;orecchio. Mettere l&#39;orecchio destro, con i punti di sutura predisposti sul suo lato ventrale concava rivolta verso il basso, sul calo del 0,9% NaCl. Utilizzando tamponi di cotone, di assorbire il calo di NaCl e lasciare che le forze capillari attaccano il piano orecchio al acrylglass. </li><li> Nastro i punti di sutura al acrylglass per fissare la posizione dell&#39;orecchio. </li><li> Aggiungere una goccia di 0,9% di NaCl temperatura ambiente al lato dorsale convesso dell&#39;orecchio. Attentamente mettere un coprioggetto (0,5 cm di diametro) sull&#39;orecchio senza comprimere i vasi basali entrano the orecchio. Utilizzando tamponi di cotone, rimuovere il più NaCl possibile da sotto il vetrino al fine di minimizzare la distanza fra il vetrino ei vasi bersaglio orecchio. </li></ol> 5. intravitale microscopia a fluorescenza e trombo induzione dell&#39;orecchio destro <ol><li> Regolare il microscopio a fluorescenza intravitale per la visualizzazione FITC-destrano (450 - 490 nm; FT: 510; LP: 520). Utilizzare una lampada a mercurio da 100 W variabile come fonte di luce. Collegare ad alta risoluzione, fotocamera CCD in bianco e nero per un registratore DVD. </li><li> Trasferire l&#39;animale sulla acrylglass contenente la piastra di riscaldamento con l&#39;orecchio rapito fissato alla scrivania del microscopio a fluorescenza intravitale. </li><li> Utilizzando 20X (20X / 0,95 apertura numerica) e l&#39;intensità luminosa 20%, cercare un vaso venoso 50 - 60 micron di diametro e con un flusso sanguigno anterogrado 400 - 600 _M / s. </li><li> Aggiungere una goccia di acqua a temperatura ambiente al vetrino per immersione in acqua del 63x magnificatioobiettivo n (63X / 0,95 apertura numerica). Utilizzare una siringa con una cannula del diametro di 1 mm e posizionare la goccia sull&#39;obiettivo del microscopio. Aggiungere acqua quanto basta per contattare il vetrino e l&#39;obiettivo con la goccia d&#39;acqua. </li><li> Immediatamente dopo l&#39;applicazione della goccia d&#39;acqua, iniziare la registrazione del recipiente per 20 s con intensità luminosa 20% per la misura in linea del flusso diametro e sangue. </li><li> Inizia trombo induzione 5 minuti dopo l&#39;iniezione di FITC-destrano. A tale scopo, aumentare l&#39;intensità luminosa al 100%. </li><li> Durante l&#39;induzione trombo, chiudere l&#39;apertura del microscopio per 2 s entro un periodo di 30 s per controllare il flusso di sangue. In caso di ulteriore flusso di sangue, aprire nuovamente il diaframma. In caso di flusso sanguigno fermato, osservare la nave per 30 s. NOTA: Il vaso è classificato come occlusa se il flusso si è fermato per 30 s o più, o se il sangue scorre retrograda. Se il flusso di sangue orthograde ricomincia, aprire completamente l&#39;apertura e Contin<html> ue l&#39;induzione trombo fino occlusione di vasi avviene come descritto sopra. Durante la prima induzione trombo, assicurano che i tempi in cui il diaframma è stato chiuso per controllare il flusso di sangue sono più breve possibile al fine di mantenere pressoché continuo epi-illuminazione. Successivamente, durante la crescita di trombi, la nave è perfuso con colorante fluorescente meno, in modo che possa essere osservato continuamente. </li><li> Selezionare e occlude 5 navi per orecchio. Limitare il tempo di induzione trombo al microscopio per circa 1 h dopo l&#39;iniezione di FITC-destrano. </li></ol> 6. Seguito dato Attività <ol><li> Eseguire un chiusura della ferita del collo usando polipropilene transcutanea 6/0 punti di sutura. </li><li> Durante il recupero dall&#39;anestesia, mettere il mouse nella gabbia e riscaldare l&#39;animale usando la luce infrarossa. </li><li> Trasferire i dati registrati dal registratore DVD al software che permette la misurazione del diametro dei vasi e la velocità del flusso sanguigno. </li></ol>_title &quot;&gt; 7. Esame dell&#39;orecchio sinistro <ol><li> Lasciate che l&#39;animale recuperare ed eliminare tutti iniettato FITC-destrano per 48 ore. </li><li> Eseguire nuovamente i passi sopra descritti, questa volta prepara il diritto vena giugulare e l&#39;orecchio sinistro. </li></ol> 8. Tessuto Asservation <ol><li> Dopo intravitale microscopia a fluorescenza dell&#39;orecchio sinistro, campione da 0,5 ml di sangue dalla vena retrobulbare plesso dell&#39;occhio utilizzando un capillare di vetro. penetrare accuratamente l&#39;angolo palpebrale interno con movimenti avvitamento, finché il sangue venoso fluisce attraverso il capillare. Raccogliere la sonda in un acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) tubo di sangue. </li><li> Dopo il prelievo del sangue, sacrificare l&#39;animale iniettando 500 mg / kg di peso corporeo ketamina nella vena caudale. </li><li> Contare le cellule del sangue utilizzando un analizzatore ematologico per una valutazione quantitativa dei leucociti, eritrociti, trombociti, emoglobina, ematocrito e. </li><li> Centrifugare il sangue EDTA rimanendo a 2.500 xg e temperatura ambiente per 10 ma. Pipetta e congelare il plasma sanguigno per ulteriori indagini. </li><li> Utilizzando forbici, tagliare gli atri e fissarli in formaldeide al 4% per l&#39;esame istologico. </li></ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ci sono diversi passaggi critici per l&#39;induzione trombo successo nel lobo di topi hr SKH1-HR. Per problemi, le rispettive fasi del protocollo sono indicati tra parentesi. condizioni di esame sono ideali in animali giovani all&#39;età di 4 - 6 settimane ed a basso cheratinizzazione dell&#39;epidermide. Negli animali più vecchi, la qualità di visualizzazione dei vasi è peggiore e meno paragonabili a causa della distanza maggiore tra la superficie della pelle e dei vasi bersaglio...

Lo scopo del presente articolo è quello di descrivere la tecnica della microscopia intravitale applicata al padiglione auricolare del mouse senza peli per l&#39;osservazione diretta e l&#39;analisi del microcircolo, formazione di trombi, ed evoluzione trombo. Con un&#39;incidenza di 1 a 1.000, trombosi venosa è ancora una causa comune di morbidità. Anche se la diagnostica, le strategie di prevenzione e le terapie sono stati sviluppati negli ultimi anni, un terzo di trombosi venosa si manifesta come un&#39;embolia polmonare 1. trombosi arteriosa gioca un ruolo fondamentale nelle malattie cardiovascolari, che sono la causa più comune di morte nei paesi industrializzati. trombosi arteriosa in base alla rottura di placche aterosclerotiche è coinvolto in attacchi cardiaci, infarti mesenterici, e un colpo apoplettico. Ogni intervento chirurgico espone strutture subendoteliali ai componenti del sangue, cambia la dinamica del flusso di sangue, e immobilizza il paziente. Nella chirurgia endoprotesico del arto inferiore, t organoransplantation e trombosi chirurgia lembo sono spesso causa di complicazioni. Microvascolare trombosi in particolare provoca spesso danni irreversibili, a causa della mancanza di sintomi clinici. Analogamente, trombosi microvascolare gioca un ruolo cruciale in diverse patologie, incluse porpora trombotica trombocitopenica, sepsi, coagulazione intravascolare disseminata, sindrome antifosfolipidi, e insufficienza venosa cronica, tra gli altri. Diversi nuovi farmaci per la terapia e la prevenzione della trombosi sono stati sviluppati negli ultimi anni, ma i farmaci antiaggreganti e anticoagulanti hanno ancora effetti collaterali, antagonisti mancanza, e presentano gli effetti di lunga durata. Queste carenze portano a problemi di assistenza medica di emergenza. Pertanto, sono necessarie ulteriori ricerche per scoprire i complessi processi che si verificano durante la trombosi, che difficilmente può essere simulato in vitro. Il topo glabro hr SKH1-Hr è stato scoperto 1926 in uno zoo di Londra.A causa di un difetto genetico sul cromosoma 14, l&#39;animale perde il pelo dopo postnatale giorno 10. Questo rende il padiglione auricolare ben vascolarizzato accessibile a microscopia intravitale dei vasi. Lo spessore medio dell&#39;orecchio è di 300 micron. È costituita da due strati di derma, che sono separati da cartilagine. Sul lato dorsale convessa della cartilagine, 3 fasci vascolari entrano lobo. archi vascolari apicali e basali shunt collegano i tre fasci. Venule hanno diametri tra 200 um (basale) e 10 um (apicale). Capillari a maglie strette circondano i capelli vuoto follicoli 2. L&#39;anatomia del mouse hr SKH1-Hr glabro rende il padiglione auricolare un modello potente e conveniente per la ricerca trombosi.

<table><tbody><tr><td>SKH-1/hr topi</td><td>Charles River</td><td>477</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>sniff per alimenti da laboratorio standard</td><td>Spezialdiaeten</td><td>V1594-0&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>stereomicroscopio operativo</td><td>Leica&nbsp;</td><td>M651/M655&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>microscopio intravitale</td><td>Zeiss</td><td>Axiotech Vario 100&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>obiettivo (20X/0,95)&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>20x/0,50 W; Piano-NEOFLUAR&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>obiettivo (63X/0,95)</td><td>Zeiss</td><td>63x/0,95 W; ACHROPLAN&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>telecamera CCD in bianco e nero&nbsp;</td><td>Pieper&nbsp;</td><td>FK 6990 IQ-S&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Registratore DVD</td><td>Panasonic</td><td>DMR-EX99V&nbsp;</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>cloruro di sodio</td><td>Braun</td><td>5/12612055/1011</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Ketamina 10%</td><td>Bela pharm</td><td>F3901-6</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Xilazina 2%</td><td>Bayer</td><td>6293841.00.00</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>FITC-destrano 5%</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>46945-100MG-F</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>dexapantenolo 5% unguento per gli occhi</td><td>Bayer</td><td>6029009.00.00</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>formaldeide 4%</td><td>Sigma</td><td>HT501128-4L</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>472301</td><td>può essere acquistato da altri fornitori.</td></tr><tr><td>vetrini coprioggetti 5 x 5 x 1 mm</td><td>Menzel</td><td>L4339</td><td>possono essere acquistati da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Le strisce adesive</td><td>Leukosilk</td><td>4683400</td><td>possono essere acquistate da altri fornitori.</td></tr><tr><td>centrifuga</td><td>Beckman Coulter</td><td>CLGS 15</td><td>può essere acquistata da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>analizzatore ematologico</td><td>Sysmex</td><td>KX-21 A6980</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Provetta per sangue EDTA</td><td>Sarstedt</td><td>201.341</td><td>può essere acquistata da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>i tamponi di cotone</td><td>Sanyo</td><td>604-A-1</td><td>possono essere acquistati da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>la luce infrarossa</td><td>Beurer</td><td>5/13855</td><td>può essere acquistata da altri fornitori.</td></tr><tr><td>monouso synringe</td><td>Braun&nbsp;</td><td>2020-08</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>siringa da insulina</td><td>Braun</td><td>9161502</td><td>può essere acquistata da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>aghi ipodermici usa e getta</td><td>Braun</td><td>465 7640</td><td>possono essere acquistati da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>capillare end-to-end</td><td>Sarstedt</td><td>19.447</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>piastra riscaldante</td><td>Klaus Effenberg</td><td>OP-T 185/03</td><td>può essere acquistata da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>forbici 14,5 cm</td><td>Aesculap</td><td>BC259R</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>porta aghi</td><td>Aesculap</td><td>BM081R</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>micropinze</td><td>Aesculap</td><td>BD331R</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>microforbici</td><td>Aesculap</td><td>OC496R</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>bisturi 21</td><td>Dahlhausen</td><td>11.000.00.511</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Prolene 7-0</td><td>Ethicon</td><td>XNEH7470</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Ethicon</td><td>XN8706. P33</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>elettrocauterizzazione</td><td>Servoprax</td><td>H40140</td><td>può essere acquistato da altri fornitori&nbsp;</td></tr><tr><td>Pad in acrilico Riscaldamento</td><td></td><td></td><td>integrato, 0,5&nbsp; cm di piano alto</td></tr></tbody></table>

intravitale microscopia e trombo induzione nel lobo di un mouse hairless

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

complicanze trombotiche di malattie vascolari sono una delle principali cause di morbilità e mortalità nei paesi industrializzati. A causa delle complesse interazioni tra cellule ematiche e non cellulari durante la formazione di trombi, studi affidabili della fisiologia e fisiopatologia della trombosi possono essere eseguite solo in vivo. Pertanto, questo articolo presenta un modello orecchio nei topi senza peli e si concentra sull&#39;analisi in vivo del microcircolo, formazione di trombi, e l&#39;evoluzione del trombo. Utilizzando intravitale microscopia a fluorescenza e la via endovenosa (iv) l&#39;applicazione dei rispettivi coloranti fluorescenti, un&#39;analisi ripetitiva di microcircolazione del padiglione auricolare può facilmente realizzabile, senza la necessità di preparazione chirurgica. Inoltre, questo modello può essere adattato per studi in vivo su temi diversi, tra cui la guarigione delle ferite, danno da riperfusione, o di angiogenesi. In sintesi, l&#39;orecchio di topi glabri è un modello ideale per la a vivo studio della microcircolazione cutanea in condizioni fisiologiche o fisiopatologiche e per la valutazione della sua reazione a differenti trattamenti sistemici o topici.

Effetti del trattamento cannabinoidi su trombogenesi Sull&#39;iniezione di 0,05 mL di FITC-destrano, fototossica induzione trombo porta ad una lesione endoteliale e la formazione di un tappo di piastrine parietale (figure 2 e 3). Nel presente studio, induzione trombo dopo l&#39;iniezione ip di cannabinoidi (5 mg / kg di peso corporeo) o un veicolo determinato un&#39;occlusione trombotica recipien...

Il modello orecchio del mouse SKH1-Hr hr hairless consente intravitale microscopia a fluorescenza del microcircolo e fototossico induzione trombo senza previa preparazione chirurgica nel letto microvascolare esaminato. Pertanto, l&#39;orecchio del topo glabro è un eccellente modello in vivo per studiare le complesse interazioni durante la formazione di trombi microvascolare, l&#39;evoluzione del trombo, e trombolisi.

Intravitale Microscopia e Trombo induzione nel lobo di un mouse Hairless

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

L'obiettivo generale di questo esperimento è studiare l'influenza di potenziali farmaci vasocoattivi sulla formazione di trombi microvascolari in vivo. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali sulla formazione dei trombi, come l'identificazione di nuove sostanze antitrombotiche in grado di prevenire la formazione di trombi microvascolari, una delle principali complicanze nella sepsi e durante il trapianto di tessuti. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il modello dell'orecchio del topo senza pelo consente la microscopia a fluorescenza intravitale e l'induzione fototossica del trombo senza necessità di preparazione chirurgica preliminare nel letto microvascolare esaminato.Iniziare pesando e registrando il peso del topo. Quindi caricare il volume appropriato della sostanza in esame in una siringa per insulina. Somministrare il farmaco 30 minuti prima dell'induzione del trombo.Dopo aver anestetizzato il topo 15 minuti prima dell'induzione del trombo, riposizionare il topo nella gabbia fino all'inizio dell'anestesia. Per verificare un'anestesia sufficiente, pizzicare la coda con una pinza ed osservare l'assenza di reazione. Successivamente, aspirare

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Microscopia intravitale di seguire gli eventi emodinamici infiammatori e temporale e spaziale del microcircolo piale.

Microscopia intravitale della microcircolazione cervello di topo usando una finestra chiusa del cranio

Questo video dimostra la procedura per generare ictus fototrombotico in un modello murino mediante illuminazione laser di un cranio intatto dopo la somministrazione di colorante fotosensibile.

Modellazione dell'ictus fototrombotico in un modello murino: una tecnica di illuminazione laser attraverso il cranio del topo dopo la somministrazione di colorante fotosensibile per indurre la fototrombosi

Questo video mostra la tecnica di microscopia a fluorescenza intravitale per studiare la formazione di trombi in un modello murino. Al topo viene iniettato un polisaccaride marcato con fluoroforo per monitorare la circolazione sanguigna. Dopo l'illuminazione con una luce ad alta intensità, l'induzione fototossica di una lesione nella microvascolarizzazione dell'orecchio porta alla formazione di un trombo, che viene confermato visualizzando l'ostruzione nel flusso sanguigno.

Microscopia a fluorescenza intravitale per studiare la formazione di trombi microvascolari

Fonte: Kim, D., et. al. Imaging fluorescente nel vicino infrarosso combinato e tomografia microcomputerizzata per la visualizzazione diretta dei tromboemboli cerebrali. J. Vis. Exp. (2016)Questo video dimostra la visualizzazione del trombo cerebrale nei topi utilizzando l'imaging con tomografia micro-computerizzata (micro-CT). Un modello murino di trombo cerebrale viene iniettato con nanoparticelle d'oro mirate alla fibrina che fungono da agente di contrasto. Il mouse viene posizionato sul...

Visualizzazione di un trombo cerebrale in un topo mediante imaging con tomografia microcomputerizzata

Qui riportiamo una tecnica sperimentale di fluorescenza microscopia intravitale di visualizzare eterotipiche piastrine-neutrofili interazioni sul endotelio attivato durante l'infiammazione vascolare e la formazione di trombi nei topi vivi. Questa tecnologia microscopica sarà prezioso per studiare il meccanismo molecolare della malattia vascolare e per testare agenti farmacologici in condizioni fisiopatologiche.

In tempo reale di immagine degli eterotipica piastrine-neutrofili interazioni sull&#39;endotelio Attivato durante l&#39;infiammazione vascolare e la formazione di trombi in topi vivi

La matrice extracellulare subisce sostanziale rimodellamento durante la guarigione delle ferite, l'infiammazione e tumorigenesi. Vi presentiamo un approccio immunofluorescenza intravitale romanzo per visualizzare le dinamiche di fibrillare come pure componenti della matrice maglia-come con alta risoluzione spaziale e temporale con epifluorescenza o microscopia a due fotoni.

A lungo termine intravitale immunofluorescenza Imaging di tessuto componenti della matrice con Epifluorescenza e due fotoni Microscopia

Questa applicazione semplificata della microscopia intravitale delle vene mesenterarie nei topi può essere utilizzata in diversi modelli di infiammazione per osservare le interazioni leucociti-endoteliali e piastrine-leucociti.

Interazioni intravitale Microscopia di leucociti-endoteliali e piastrine-leucociti in Mesenterial Vene Mice

Riportiamo una procedura raffinata del cloruro ferrico (FeCl 3) modelli trombosi -indotta sulla carotide e dell'arteria mesenterica così come la vena, caratterizzato in modo efficiente usando la microscopia intravitale per monitorare il tempo di occlusiva la formazione di trombi.

Ferrico I modelli murini Trombosi indotta da cloruri

Questo protocollo descrive l'induzione di un modello di ischemia-riperfusione (IR) sulla pelle orecchio mouse utilizzando magnete di bloccaggio. Utilizzando un modello di imaging intravitale custom-built, studiamo in vivo risposte infiammatorie post-riperfusione. La logica alla base dello sviluppo di questa tecnica è quello di estendere la comprensione di come leucociti rispondono al danno IR pelle.

Inducendo ischemia-riperfusione lesioni in Ear pelle mouse per intravitale Multiphoton Imaging delle risposte immunitarie

Descriviamo qui il metodo per l'imaging di megacariociti e proplatelet nel midollo dell'osso del cranio di topi viventi usando la microscopia a due fotoni.

In vivo Imaging a due fotoni di megacariociti e proplatati nel midollo osseo del cranio del topo

Scopri la microscopia intravitale e l'induzione fototossica del trombo nel lobo dell'orecchio del topo SKH1-Hrhr. Questo metodo permette di studiare la formazione del trombo microvascolare in vivo senza preparazione chirurgica preliminare.

Intravitale Microscopia e Trombo induzione nel lobo di un mouse Hairless

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