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DOI: 10.3791/55234-v
Gurpreet Kaur1,2, Jaimo Ahn1, Kurt D. Hankenson1,3, Jason W. Ashley1,4
1Department of Orthopaedic Surgery,Perelman School of Medicine, University of Pennsylvania, 2Department of Biological Sciences,University of the Sciences, 3The Department of Small Animal Clinical Sciences,College of Veterinary Medicine, Michigan State University, 4Department of Biology,College of Science, Technology, Engineering, & Mathematics, Eastern Washington University
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La segnalazione notch è una forma di comunicazione cellulare che si basa sul contatto diretto tra le cellule. Per indurre correttamente la segnalazione di Notch in vitro, i ligandi di Notch devono essere presentati alle cellule in uno stato immobilizzato. Questo protocollo descrive i metodi per la stimolazione in vitro della segnalazione Notch nei precursori degli osteoclasti di topo.
L'obiettivo generale di questa procedura è osservare gli effetti della stimolazione del segnale notch in vari punti durante il processo di differenziazione degli osteoclasti. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia cellulare, come ad esempio:Come cambia il ruolo della segnalazione notch durante un processo cellulare? Il vantaggio principale di questa tecnica è la sua marginalità, che le permette di essere adattata ad altre cellule o ligandi a tacche.
Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulla differenziazione degli osteoclasti, può essere applicato anche ad altri processi come la sopravvivenza cellulare, la proliferazione o la differenziazione di altri tipi di cellule. Inizia la procedura fissando un topo in posizione supina e disinfettando la pelle con etanolo al 70%. Quindi, praticare un'incisione lungo la superficie anteriore di un arto posteriore per esporre la tibia e il femore.
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