Misurazione del segnalatore del ricettore accoppiato con G-proteina mediante la legatura GTP con etichetta radio

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare le membrane cellulari che contengono recettori accoppiati a proteine G o GPCR e studiare la farmacologia dei GPCR utilizzando un saggio di legame funzionale del GTP. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biochimica riguardanti le proprietà farmacologiche di recettori accoppiati a proteine G stabiliti o orfani. I principali vantaggi sono che è semplice, rapido e misura l'evento più prossimale nella segnalazione dei recettori accoppiati a proteine G.

Innanzitutto, piastrate le cellule renali embrionali umane su una piastra di coltura tissutale di 10 centimetri in 10 millilitri di DMEM completo. Incubare le cellule a 37 gradi Celsius e al 5% di anidride carbonica, fino a raggiungere la confluenza dal 70% all'80%. Dopo l'incubazione, trasfettare le cellule con HAMOR1 utilizzando un reagente di trasfezione adatto secondo le linee guida del produttore.