Applicazione e metodologia della tecnica NMR Non distruttivo ¹⁹F dominio del tempo per misurare il contenuto in prodotti contenenti fluoro di droga

L'obiettivo generale di questa metodologia di risonanza magnetica nucleare nel dominio del tempo del fluoro 19 a basso campo, è determinare il contenuto medio di farmaci fiorinati nei prodotti farmaceutici formulati. Si tratta di una tecnica non distruttiva per lo sviluppo e la produzione di farmaci nell'industria farmaceutica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo farmaceutico, nel processo di formulazione di farmaci e prodotti farmaceutici.

Suggerire il contenuto medio di farmaci in compresse e capsule. Il vantaggio principale di questa tecnica è che non è distruttiva e più veloce dei metodi convenzionali come la cromatografia liquida ad alte prestazioni quando si misura il contenuto medio di farmaci nei prodotti farmaceutici. Pesare i campioni per la calibrazione nelle provette NMR appropriate fino alla linea di marcatura, o a circa 30 millimetri di altezza.

Pesare anche i campioni di prodotto farmaceutico formulato nelle provette NMR appropriate fino alla linea di marcatura o a circa 30 millimetri di altezza. Quindi, posizionare il campione standard in teflon all'interno di un tubo NMR da 25 o 26 millimetri. Posizionare il tubo NMR nella sonda all'interno del magnete.

Lasciare che il tubo si equilibri per cinque-10 minuti, prima di accordare lo strumento su f 19. Selezionare auto o one, nel menu dei comandi del software RIRMR. Ripetere la misurazione almeno tre volte.

E prendi l'ultimo valore del parametro o uno. Accedere al menu dei comandi nel software RINMR e selezionare auto p 90, per calibrare l'impulso a 90 gradi per f 19, con il campione di teflon standard, utilizzando la sequenza di calibrazione automatica standard disponibile nello strumento. Per un miglior rapporto segnale/rumore, posizionare il campione API, preparato nel tubo NMR da 25 millimetri, all'interno della sonda f 19, installata nel magnete e lasciarlo equilibrare per almeno 10 minuti.

Misurare il tempo di rilassamento t one seguendo le istruzioni del manuale dello strumento, per ogni campione API, utilizzando l'esperimento standard per il recupero dell'inversione, dal software RINMR. Per misurare il tempo di rilassamento, navigare nella sequenza e selezionare il carico nel software RIMR. Quindi selezionare la sequenza di impulsi di recupero inverso e fare clic su Apri.

Verificare che i parametri di base abbiano i valori corretti facendo clic sulla scheda a. Nel menu degli strumenti, seleziona gli script e verrà visualizzata una finestra. Quindi seleziona la scheda per t one e fai clic sulla freccia verde.

Apparirà un'altra finestra. Selezionare il file dell'elenco dei ritardi con i ritardi appropriati. In alternativa, creare l'elenco dopo aver fatto clic su Apri.

Una volta che l'elenco dei ritardi è soddisfacente, fare clic su OK. Una finestra visualizzerà un prompt per la creazione di un file per tutti gli spettri che verranno raccolti, al fine di calcolare il valore di t one. Fare clic su Salva per lo strumento per avviare l'acquisizione dei dati.

E salva automaticamente i file nella cartella selezionata. Apparirà una finestra, con la curva di rilassamento t uno e la costante di tempo o il valore t uno. Per costruire la curva di calibrazione, posizionare prima un campione di calibrazione nel magnete, per un particolare API.

Equilibrare i campioni per un minimo di cinque minuti per le provette più piccole e di 10 minuti per le provette più grandi. Acquisire un decadimento a induzione libero o un esperimento solido con i parametri appropriati, seguendo le istruzioni nel manuale dello strumento. Nella scheda sequenza del software RIRR, caricare la sequenza di impulsi selezionando la sequenza e facendo clic su Apri.

Verificare che i parametri di base abbiano i valori corretti. Misurare tutti i campioni, preparati per ciascun API, dopo che sono stati bilanciati alla temperatura del magnete, per cinque-10 minuti, per generare le curve di calibrazione per ogni campione API. Salvare i dati in una cartella, assegnando un nome distinto a ogni esecuzione sperimentale.

Calcolare la percentuale di peso dei campioni, in base alla quantità in ciascuna provetta. Considerando la purezza del campione API, nel tubo più grande. Posizionare i campioni di prodotto farmaceutico già formulati nel magnete, per misurarli uno alla volta.

Equilibrare i campioni cinque minuti per le provette NMR piccole o 10 minuti per i campioni nelle provette NMR più grandi. Acquisire lo stesso esperimento NMR, con le stesse condizioni, dei campioni calibrati per ogni API. Aprire il software di calibrazione RI.

Richiama tutti i dati solidi facendo clic sul simbolo della clip per aprire il FID o i file solidi da una particolare API e i suoi campioni di prodotti farmaceutici come compresse. Per tutti i campioni misurati, inserire le percentuali di peso sotto la colonna di concentrazione e i pesi sotto la colonna di massa. Selezionare la regione appropriata, utilizzando il metodo della media per costruire la curva di calibrazione.

Salvare la curva di calibrazione. Quindi, selezionare la regione dell'esperimento solido da cinque a 300 punti, per creare le curve di calibrazione. I risultati della calibrazione, utilizzando il metodo della media, appaiono sotto forma di tabella.

Come secondo metodo di calibrazione, utilizzare il metodo Fit nel software di calibrazione RI, per costruire la curva di calibrazione con la stessa regione selezionata. Salvare la curva di calibrazione. I risultati della calibrazione, utilizzando il metodo Fit, vengono visualizzati sotto forma di tabella.

Come terzo metodo di calibrazione, apri il software Mnova. Trascina tutti i dati solidi da una particolare API. E inserisci le percentuali di peso dei campioni.

Nel menu avanzato, selezionare il dominio del tempo e quindi la quantificazione. Apparirà una finestra. Fare clic sul segno più blu per selezionare l'area di integrazione.

Quindi integrare la regione appropriata utilizzando la modalità di magnitudine, per costruire la curva di calibrazione. Salvare la curva di calibrazione. Nella tabella, inserire le percentuali di farmaci per campione sotto la colonna di concentrazione solo per gli standard.

E i pesi per tutti i campioni sotto la colonna di massa. I campioni di calibrazione devono essere in rosso. Assicurarsi che la funzione del segnale sia y uguale a s su m, per normalizzare il segnale in massa.

Per garantire la riproducibilità e la ripetibilità, è possibile misurare ogni campione tre volte, in giorni diversi, e creare una curva di calibrazione in entrambi i pacchetti software. Assicurarsi di salvare i file della curva di calibrazione. Leggere i dati NMR dai campioni misurati e inserire i loro pesi per determinare la percentuale in peso di API fluorurato nelle compresse o capsule formulate.

Utilizzare le curve di calibrazione ottenute da ciascuno dei tre diversi metodi di calibrazione. Infine, calcola la quantità di farmaco fluorurato per compressa o capsula come valore medio, utilizzando l'equazione trovata nel protocollo di testo. E confronta con i valori calcolati dal software, in base alle curve di calibrazione.

Qui sono mostrati i risultati rappresentativi della curva di calibrazione di Cinacalcet HCL, calcolati come misure di base libera e triplicato. Utilizzo del software di calibrazione RI in modalità media. L'uso del software di calibrazione RI in modalità Fit produce una curva di calibrazione simile di Cinacalcet HCL nelle misurazioni in triplice copia.

La curva di calibrazione di Cinacalcet HCL in misure in triplice copia, utilizzando il metodo dell'area del software Mnova in modalità magnitudine, produce risultati comparabili. Di seguito è riportata una tabella dei risultati per le dosi calcolate di Cinacalcet base libera in compresse commerciali. Con le loro statistiche tramite software di calibrazione RI che utilizzano i metodi della media e dell'adattamento, nonché il software Mnova.

Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in 15-20 minuti. Ad esempio, i campioni di calibrazione possono richiedere un'ora. E devono essere eseguiti solo una volta se eseguiti correttamente.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come quantificare il contenuto medio di farmaci fluorurati nei prodotti farmaceutici formulati, con la tecnica non distruttiva del fluoro 19 TD NMR a basso campo. Non dimenticare che lavorare con farmaci e strumenti NMR può essere estremamente pericoloso e che durante l'esecuzione di questa procedura devono essere sempre prese precauzioni come dispositivi di protezione individuale e nessun oggetto metallico vicino al magnete.