Name: Valutazione dellomeostasi dopaminergici in topi tramite luso di analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni e assorbimento della dopamina sinaptosomiali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-09-21T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Scopri come valutare l'omeostasi dopaminergica nei topi utilizzando l'assorbimento sinaptosomiale della dopamina e l'analisi HPLC. Questi metodi permettono di misurare i livelli di dopamina nel tessuto striatale e la funzionalità del trasportatore dopo manipolazioni in vivo.

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Questo lavoro è stato supportato dalla UCPH 2016 programma d'eccellenza (U.G., A.R., K.J.), la Fondazione di Lundbeck (M.R.) la Fondazione Lundbeck Center for biomembrane in nanomedicina (U.G.), l'Istituto nazionale di salute sovvenzioni P01 DA 12408 (U.G.), danese Consiglio per la ricerca indipendente - scienze mediche (U.G.).

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<li>Torres, G. E., Amara, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glutamate+and+monoamine+transporters%3A+new+visions+of+form+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Glutamate and monoamine transporters: new visions of form and function.</a> Curr Opin Neurobiol. 17, 304-312 (2007).</li>
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<li>Dunkley, P. R., Jarvie, P. E., Robinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+rapid+Percoll+gradient+procedure+for+preparation+of+synaptosomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">A rapid Percoll gradient procedure for preparation of synaptosomes.</a> Nat Protoc. 3, 1718-1728 (2008).</li>
<li>Whittaker, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thirty+years+of+synaptosome+research%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurocytol%22%5BJournal%5D)">Thirty years of synaptosome research.</a> J Neurocytol. 22, 735-742 (1993).</li>
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<li>Earles, C., Schenk, J. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rotating+disk+electrode+voltammetric+measurements+of+dopamine+transporter+activity%3A+an+analytical+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22Anal+Biochem%22%5BJournal%5D)">Rotating disk electrode voltammetric measurements of dopamine transporter activity: an analytical evaluation.</a> Anal Biochem. 264, 191-198 (1998).</li>
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<li>Schonfuss, D., Reum, T., Olshausen, P., Fischer, T., Morgenstern, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+constant+potential+amperometry+for+investigations+of+dopaminergic+neurotransmission+kinetics+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Modelling constant potential amperometry for investigations of dopaminergic neurotransmission kinetics in vivo.</a> J Neurosci Methods. 112, 163-172 (2001).</li>
<li>Hoover, B. R., Everett, C. V., Sorkin, A., Zahniser, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+regulation+of+dopamine+transporters+by+tyrosine+kinases+in+rat+neuronal+preparations%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Rapid regulation of dopamine transporters by tyrosine kinases in rat neuronal preparations.</a> J Neurochem. 101, 1258-1271 (2007).</li>
<li>Hansen, F. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Missense+dopamine+transporter+mutations+associate+with+adult+parkinsonism+and+ADHD%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Missense dopamine transporter mutations associate with adult parkinsonism and ADHD.</a> J Clin Invest. 124, 3107-3120 (2014).</li>
<li>Damier, P., Hirsch, E. C., Agid, Y., Graybiel, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+substantia+nigra+of+the+human+brain.+II.+Patterns+of+loss+of+dopamine-containing+neurons+in+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">The substantia nigra of the human brain. II. Patterns of loss of dopamine-containing neurons in Parkinson's disease.</a> Brain. 122 (Pt 8), 1437-1448 (1999).</li>
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<li>Yoshitake, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-sensitive+liquid+chromatographic+method+for+determination+of+neuronal+release+of+serotonin%2C+noradrenaline+and+dopamine+monitored+by+microdialysis+in+the+rat+prefrontal+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">High-sensitive liquid chromatographic method for determination of neuronal release of serotonin, noradrenaline and dopamine monitored by microdialysis in the rat prefrontal cortex.</a> J Neurosci Methods. 140, 163-168 (2004).</li>
<li>Decressac, M., Mattsson, B., Lundblad, M., Weikop, P., Bjorklund, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+neurodegenerative+and+behavioural+changes+induced+by+AAV-mediated+overexpression+of+alpha-synuclein+in+midbrain+dopamine+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Progressive neurodegenerative and behavioural changes induced by AAV-mediated overexpression of alpha-synuclein in midbrain dopamine neurons.</a> Neurobiol Dis. 45, 939-953 (2012).</li>
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<li>Mikkelsen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MPTP-induced+Parkinsonism+in+minipigs%3A+A+behavioral%2C+biochemical%2C+and+histological+study%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicol+Teratol%22%5BJournal%5D)">MPTP-induced Parkinsonism in minipigs: A behavioral, biochemical, and histological study.</a> Neurotoxicol Teratol. 21, 169-175 (1999).</li>
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<li>Van Dam, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+distribution+of+biogenic+amines%2C+amino+acids+and+cholinergic+markers+in+the+CNS+of+the+C57BL%2F6+strain%5BTitle%5D)+AND+%22Amino+Acids%22%5BJournal%5D)">Regional distribution of biogenic amines, amino acids and cholinergic markers in the CNS of the C57BL/6 strain.</a> Amino Acids. 28, 377-387 (2005).</li>
<li>Barth, C., Villringer, A., Sacher, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+hormones+affect+neurotransmitters+and+shape+the+adult+female+brain+during+hormonal+transition+periods%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Sex hormones affect neurotransmitters and shape the adult female brain during hormonal transition periods.</a> Front Neurosci. 9 (37), (2015).</li>
<li>Corthell, J. T., Stathopoulos, A. M., Watson, C. C., Bertram, R., Trombley, P. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+bulb+monoamine+concentrations+vary+with+time+of+day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory bulb monoamine concentrations vary with time of day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Zhuang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperactivity+and+impaired+response+habituation+in+hyperdopaminergic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hyperactivity and impaired response habituation in hyperdopaminergic mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 1982-1987 (2001).</li>
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<li>Wickham, R. J., Park, J., Nunes, E. J., Addy, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+Rapid+Dopamine+Dynamics+with+Fast+Scan+Cyclic+Voltammetry+During+Intra-oral+Tastant+Administration+in+Awake+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Examination of Rapid Dopamine Dynamics with Fast Scan Cyclic Voltammetry During Intra-oral Tastant Administration in Awake Rats.</a> J Vis Exp. , e52468(2015).</li>
<li>Phillips, P. E., Robinson, D. L., Stuber, G. D., Carelli, R. M., Wightman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+measurements+of+phasic+changes+in+extracellular+dopamine+concentration+in+freely+moving+rats+by+fast-scan+cyclic+voltammetry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Real-time measurements of phasic changes in extracellular dopamine concentration in freely moving rats by fast-scan cyclic voltammetry.</a> Methods Mol Med. 79, 443-464 (2003).</li>
<li>Callaghan, P. D., Irvine, R. J., Daws, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+the+in+vivo+dynamics+of+neurotransmitter+release+and+serotonin+uptake+after+acute+para-methoxyamphetamine+and+3%2C4-methylenedioxymethamphetamine+revealed+by+chronoamperometry%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Int%22%5BJournal%5D)">Differences in the in vivo dynamics of neurotransmitter release and serotonin uptake after acute para-methoxyamphetamine and 3,4-methylenedioxymethamphetamine revealed by chronoamperometry.</a> Neurochem Int. 47, 350-361 (2005).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Questo manoscritto descrive i protocolli sperimentali utili per delineare DA omeostasi in qualsiasi modello del mouse di scelta. Forniamo protocolli dettagliati per misura i livelli di DA nel tessuto cerebrale da topi con HPLC e sinaptosomiali DA assorbimento per valutare funzionale DA trasporto attraverso DAT. Saranno elaborati le procedure, protocolli e i limiti per l'esperimento di HPLC e analisi di assorbimento sinaptosomiale DA sotto.
Il protocollo di assorbimento sinaptosomiale in grado ...

Dopamina (DA) è un neurotrasmettitore modulatory critico per il comportamento del motore, la ricompensa e la funzione conoscitiva1,7,8,9. Squilibri nell'omeostasi DA sono implicati in diverse patologie neuropsichiatriche come disordine di iperattività di deficit di attenzione, tossicodipendenza, depressione e morbo di Parkinson1. DA viene rilasciato dal neurone presinaptico nella fessura sinaptica, dove lega a ed attiva i recettori sulla membrana pre- e postsinaptico, trasporto così ulteriormente il segnale. Il livello di DA nella sinapsi dopo il rilascio è controllato da DAT3,10, spazialmente e temporalmente. Il trasportatore sequestra dallo spazio extracellulare e così sostiene la fisiologica DA livelli3,11. Rimozione genetica di DAT nei topi provoca un fenotipo di hyperdopaminergic caratterizzato dai livelli elevati DA sinaptica, deplezione intracellulare DA piscine e profondi cambiamenti nella postsinaptica DAergica segnalazione10,12.
Qui, vengono presentati due protocolli separati, un metodo di misura DA contenuto del tessuto e l'altro per valutare la funzionalità del DAT. combinata con l'analisi di superficie biotinylation descritto da Gabriel et al.13 questi due metodi forniscono informazioni su DA livelli di contenuto e funzionali di DAT per una valutazione approfondita dell'omeostasi DA. Con questi metodi DA omeostasi dei vari modelli di malattia o topi transgenici può essere caratterizzato e descritto. Questi strumenti sono stati implementati e ottimizzati e sono uso standard nei nostri laboratori. Saggi di corrente hanno servito per studiare le conseguenze sull'omeostasi DA alterare il C-terminale di DAT14 o esprimendo la Cre ricombinasi sotto la tirosina idrossilasi (TH) promotore 5.

<table><tbody><tr><td>Inibitore COMT</td><td>Sigma Aldrich, Germania</td><td>RO-41-0960</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>[3H]-Dopamina</td><td>Perkin-Elmer Life Sciences, Boston, MA, USA</td><td>NET67-3001MC</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>Filtri in microfibra di vetro</td><td>GF/C Whatman, GE Healthcare Life Sciences, Buckinghamshire</td><td>1822-024</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale</td></tr><tr><td>DA HiSafe Fluido di scintillazione</td><td>Perkin Elmer</td><td>1200-437</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale di DA</td></tr><tr><td>MicroBeta2</td><td>Perkin Elmer</td><td></td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale di DA</td></tr><tr><td>Kit di analisi delle proteine BCA</td><td>Thermo Scientific Pierce</td><td>23225</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale</td></tr><tr><td>DA HEPES</td><td>Sigma Life Science</td><td>H3375</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale</td></tr><tr><td>DA Saccarosio</td><td>Sigma Life Science</td><td>S7903</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma Life Science</td><td>S3014</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale</td></tr><tr><td>DA KCl</td><td>Sigma Life Science</td><td>P9541</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Merck KGaA</td><td>10043-52-4</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale</td></tr><tr><td>DA MgSO4</td><td>Sigma Life Science</td><td>63065</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>Acido ascorbico</td><td>Sigma Life Science</td><td>A0278</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>Sigma Life Science</td><td>G7021</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale</td></tr><tr><td>DA Pargyline</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-8013</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>Desipramina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D3900</td><td>Per la captazione sinaptosomiale DA protocollo</td></tr><tr><td>Dopamina</td><td>Sigma Life Science</td><td>H8502</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>Cocaina</td><td>Sigma Life Science</td><td>C5776</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>Matrice cerebrale</td><td>Strumenti ASI</td><td>RBM2000C</td><td>Per il protocollo di captazione sinaptosomiale DA</td></tr><tr><td>Disgregatore meccanico del teflon Cafano</td><td>Buch & Holm</td><td>Fuori produzione</td><td>Per protocollo di captazione sinaptosomiale DA (omogeneizzazione)</td></tr><tr><td>Antec Decade (Rivelatore amperometrico)</td><td>Antec, Leiden, Paesi Bassi</td><td>Fuori produzione: nuovo modello DECADE Elite / Lite&trade; Rivelatore elettrochimico tipo 175 e 176</td><td>Per protocollo HPLC</td></tr><tr><td>Avantec 0.22 &mu; m filtro in vetro</td><td>Frisenette ApS, Danimarca</td><td>13CP020AS</td><td>Per protocollo HPLC</td></tr><tr><td>Colonna: Prodigy 3 &mu; ODS-3 C18</td><td>Phenomenex, YMC Europe, Chermbeck, Germania</td><td>Numero di parte: 00A-3300-E0</td> Per il software della soluzione LC <td>del protocollo HPLC</td></tr><tr><td></td><td>Workstation della serie Shimadzu LabSolutions</td><td>Per il protocollo HPLC</td><td></td></tr><tr><td>Acido perclorare 0,1M</td><td>Fluka Analytical</td><td>35418-500ml</td><td>Per il protocollo HPLC (preparazione dei tessuti)</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma</td><td>E5134-50g</td><td>Per il protocollo</td></tr> <tr><td>HPLCNatriumdiidrogenofosphar</td><td>Bie& Berntsen</td><td>1.06346 1000g</td><td>Per il protocollo HPLC</td></tr><tr><td>Sodio 1-ottanosulfonato monoidrato</td><td>Aldrich</td><td>74885 -10g</td><td>Per il protocollo HPLC</td></tr><tr><td>Acetonitrile, grado HPLC isocratico</td><td>Scharlau</td><td>AC03402500</td><td>Per il protocollo HPLC</td></tr><tr><td>Filtre 0.22um</td><td>Frisenette ApS, Danimarca</td><td>Avantec 13CP020AS</td><td>Per il protocollo HPLC (preparazione dei tessuti)</td></tr> <tr><td>acido orto-fosforico 85%</td><td>Merck</td><td>1.00563. 1000ml</td><td>Per il protocollo HPLC</td></tr><tr><td>Electrode</td><td>Antec, Leiden, Paesi Bassi</td><td>AN1161300</td><td>Per il protocollo HPLC (vedi manuale online)</td></tr><tr><td>Programma di rivelatori sul rivelatore elettrochimico DECADE II</td><td>Antec, Leiden, Paesi Bassi</td><td>Lite&trade; Rivelatore elettrochimico tipo 175 e 176</td><td>Per protocollo HPLC</td></tr></tbody></table>

valutazione dell'omeostasi dopaminergici in topi tramite l'uso di analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni e assorbimento della dopamina sinaptosomiali

Assessment of Dopaminergic Homeostasis in Mice by Use of High-performance Liquid Chromatography Analysis and Synaptosomal Dopamine Uptake

Dopamina (DA) è un neurotrasmettitore modulatory controllo attività motoria, i processi di ricompensa e funzione conoscitiva. Danno della neurotrasmissione dopaminergica (DAergic) è fortemente associato con diverse malattie del sistema nervoso centrale-collegata come morbo di Parkinson, disordine di iperattività di deficit di attenzione e farmaco dipendenza1,2 ,3,4. Delineare meccanismi di malattie riguardanti lo squilibrio DA è dipende criticamente su modelli animali di imitare gli aspetti delle malattie, e quindi sono importanti per fornire nuove conoscenze e terapeutiche possibili protocolli che valutano le parti specifiche di omeostasi DA obiettivi per queste malattie.
Qui, vi presentiamo due protocolli sperimentali utili che quando combinati forniscono una lettura funzionale del sistema DAergica in topi. I parametri biochimici e funzionali su DA omeostasi sono ottenuti attraverso la valutazione dei livelli di DA e della dopamina (DAT) trasportatore funzionalità5. Quando si esamina il sistema DA, la capacità di misurare in modo affidabile i livelli endogeni di DA del cervello adulto è essenziale. Pertanto, vi presentiamo come eseguire cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) sul tessuto cerebrale dai topi per determinare i livelli di DA. Eseguiamo l'esperimento sul tessuto da striato dorsale (dStr) e nucleo accumbens (NAc), ma il metodo è adatto per altre aree cerebrali innervati DA anche.
DAT è essenziale per la ricaptazione della DA nel terminale presinaptico, controllando così l'attività temporale e spaziale di DA. rilasciato Nel valutare l'omeostasi DA conoscere i livelli e funzionalità di DAT nello striato è di grande importanza. Qui, forniamo un protocollo che consente contemporaneamente dedurre informazioni sui livelli di superficie e funzione usando un'analisi di assorbimento sinaptosomiale6 DA.
Attuali metodi combinati con protocolli standard immunoblotting forniscono il ricercatore con opportuni strumenti per caratterizzare il sistema DAergica.

Protocollo di corrente DA assorbimento (Figura 1) include tutti i passaggi necessari per valutare la funzionalità del DAT in sinaptosomi dai topi. I nostri dati rappresentativi del metodo DA assorbimento (Figura 2) raffigura una curva di saturazione con dati non rettificati (Figura 2B) e regolato dati (Figura 2A). La curva di saturazione Mostra l'assorbimento da topi wil...

Assorbimento della dopamina sinaptosomiali e strumenti sperimentali rappresentano di analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni per indagare l'omeostasi della dopamina nei topi valutando la funzione del trasportatore della dopamina e livelli della dopamina in tessuto striatal, rispettivamente. Qui presentiamo i protocolli per misurare il contenuto di tessuto di dopamina e di valutare la funzionalità del trasportatore della dopamina.

Valutazione dell'omeostasi dopaminergici in topi tramite l'uso di analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni e assorbimento della dopamina sinaptosomiali

Dopamine (DA) is a modulatory neurotransmitter controlling motor activity, reward processes and cognitive function. Impairment of dopaminergic (DAergic) ...

In questo protocollo stiamo introducendo due tecniche. L'obiettivo della prima è valutare la funzione del trasportatore della dopamina misurando il reuptake della dopamina da preparazioni sinaptosomiali. La seconda serve per valutare i livelli di dopamina nei tessuti mediante analisi con HPLC.Questi metodi forniscono parametri importanti dell'omeostasi della dopamina mostrando come misurare il contenuto tissutale di dopamina e valutare la funzionalità del trasportatore della dopamina nei topi. Il principale vantaggio di queste tecniche è che possono essere eseguite dopo manipolazioni in vivo, come manipolazioni chemogenetiche, trattamenti farmacologici in vivo o addestramento comportamentale degli animali. A illustrare la procedura di HPLC sarà Pia Weikop, Professore Associato presso il Laboratorio di Neuropsichiatria.Per iniziare questa procedura, esporre il cranio tagliando la pelle ed eliminando eventuali tessuti in eccesso. Successivamente, tagliare il cranio lungo la sutura sagittale, fino all'estremit&agrave; anteriore. Inserire le punte delle forbici negli occhi ed asportare il cranio rimanente tagliandolo.Rimuovere rapidamente il cervello e collocarlo in PBS freddo di ghiaccio. Su

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Un protocollo per l'esecuzione unilaterale 6-OHDA lesioni del fascio proencefalo mediale è descritto nei topi. Questo metodo ha un basso tasso di mortalità (13,3%) con l'89% degli animali sopravvissuti mostrano una perdita&gt; 95% della dopamina striatale e di 90,63 ± -4,02% pregiudizi ipsiversive rotazione verso il lato della lesione.

Sviluppo di un unilateralmente lesionata 6-OHDA modello murino della malattia di Parkinson

La tecnica di misura amperometrico il rilascio di dopamina da una singola cellula rilevando la corrente ossidativo prodotta per ossidazione spontanea dopamina. Morsetto di tensione simultanea e la metodologia amperometria rivelano il rapporto meccanicistico tra il generale "attività" del trasportatore della dopamina e il ruolo di regolamentazione di questa attività sul trasporto inverso di dopamina.

Cella di misura singola di rilascio di dopamina con simultanea di tensione-clamp e Amperometria

La dopamina è distintamente regolata nel mesencefalo nuclei, che contengono la cella corpi e dendriti dei neuroni dopaminergici. Qui si descrive un approccio di dissezione e di manipolazione dei campioni per massimizzare i risultati e, quindi, le conclusioni e le intuizioni, sulla regolamentazione dopamina nel mesencefalo nuclei della substantia nigra (SN) e la zona ventrale tegmentale (VTA) in roditori.

Profiling completa del regolamento dopamina nel substantia nigra e ventrale tegmentale Area

Questo video dimostra la valutazione dell'assorbimento della dopamina nei sinaptosomi raccolti dal cervello di topo. Delinea i passaggi per preparare i sinaptosomi per l'assorbimento della dopamina tramite trasportatori della dopamina, trattandoli con concentrazioni variabili di dopamina radiomarcata, isolando i sinaptosomi e misurando la radioattività per quantificare l'assorbimento della dopamina.

Misurazione dell'assorbimento della dopamina nei sinaptosomi cerebrali di topo utilizzando la dopamina radiomarcata

Nella malattia e dei disordini del movimento di Parkinson, in generale, le analisi comportamentali sensibili e affidabili sono essenziali per testare nuove potenziali terapie. Qui, descriviamo una batteria gestibile di prove sensomotorie per i topi che sono sensibili a vari gradi di lesioni al sistema nigrostriatal e utile per gli studi preclinici.

Valutazione della Sensorimotor funzione in modelli murini di malattia di Parkinson

Qui descriviamo due saggi che sono stati stabiliti per studiare neurodegenerazione età-dipendente di dopaminergici (DA) neuroni...

Valutare fenotipi neurodegenerative<em&gt; Drosophila</em&gt; Neuroni dopaminergici mediante saggi arrampicata e Whole Brain Immunostaining

Gli isozimi lipossigenasi (LOX) possono generare prodotti che possono aumentare o diminuire la neuroinfiamminazione e la neurodegenerazione. Uno studio di interazione gene-ambiente potrebbe identificare effetti specifici dell'isozima LOX. L'uso del modello 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetraidropiridina (MPTP) del danno nigrostriatale in due linee transgeniche carenti di isozima LOX consente il confronto del contributo degli isozimi LOX sull'integrità dopaminergica e sull'infiammazione.

Modelli di interazione gene-ambiente per smascherare i meccanismi di suscettibilità nel morbo di Parkinson

Questa carta dettaglia l'uso di registrazioni di fisso-potenziale amperometrico utilizzando elettrodi in fibra di carbonio e tecnologia dei biosensori enzimatici per misurare il rilascio di dopamina e glutammato con elevata risoluzione temporale durante il naturale comportamento gratificante nella criceto femmina.

Misurare In Vivo i cambiamenti in neurotrasmettitori extracellulare durante naturalmente Premiando i comportamenti in criceti siriani femminili

Vi presentiamo una comoda estrazione in fase solida accoppiata alla cromatografia liquida (HPLC) con rivelazione elettrochimica (ECD) per la determinazione simultanea di tre neurotrasmettitori di monoammina e due dei loro metaboliti nelle urine dei bambini. Identifichiamo anche il metabolita MHPG come potenziale biomarcatore per la diagnosi precoce del danno cerebrale per neonati.

Un metodo pratico per estrazione ed analisi con cromatografia liquida dei neurotrasmettitori della catecolamina e loro metaboliti

Identificazione del recettore D1-alfa della dopamina nel nucleus accumbens è fondamentale per chiarire la disfunzione dei recettori D1 durante una malattia del sistema nervoso centrale. Abbiamo effettuato un romanzo determinazione del RNA in situ di ibridazione per visualizzare singole molecole di RNA in un'area specifica del cervello.

Identificazione della dopamina D1-alfa del ricevitore all'interno del roditore Nucleus Accumbens da un innovativo RNA In Situ Detection Technology

Questo metodo introduce una semplice tecnica per il rilevamento del rilascio endogeno di monoammina utilizzando fette di cervello acute. La configurazione utilizza una piastra a 48 pozzetti contenente un supporto in tessuto per il rilascio di monoammina. La monoammina rilasciata viene analizzata mediante HPLC accoppiato con il rilevamento elettrochimico. Inoltre, questa tecnica fornisce un metodo di screening per la scoperta di farmaci.

Un test basato su piastre per la misurazione del rilascio di monoamina endogena in fette cerebrali acute

Scopri come valutare l'omeostasi dopaminergica nei topi utilizzando l'assorbimento sinaptosomiale della dopamina e l'analisi HPLC. Questi metodi permettono di misurare i livelli di dopamina nel tessuto striatale e la funzionalità del trasportatore dopo manipolazioni in vivo.

Valutazione dellomeostasi dopaminergici in topi tramite luso di analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni e assorbimento della dopamina sinaptosomiali (Video) | JoVE Journal

Valutazione dell'omeostasi dopaminergici in topi tramite l'uso di analisi di cromatografia liquida ad alte prestazioni e assorbimento della dopamina sinaptosomiali

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