人脑脊液 Endopeptidomic 分析的样品制备
December 4th, 2017
提出了一种人脑脊液内源性多肽的质谱分析方法。通过采用分子量切断过滤、色谱预分馏、质谱分析以及随后的多肽识别策略组合, 就可以将已知的脑脊液 peptidome 扩大近十倍以前的研究。
该方案的目标是制备和分析人脑脊液样品，用于内源性肽的 LC-MS 分析。在 LC-MS 之前进行肽预分级分离步骤可增加鉴定肽的数量，并能够检测丰度相对较低的 CSF 肽。CSF 中的内源性肽是尚未被广泛探索的钙分子，可能包括神经退行性疾病的重要新生物标志物。该方法可通过质谱法对 CSF 肽组进行广泛表征。该方法的主要优点是它能够注射低丰度 CSF 肽，并且与多重同量异位标记技术兼容，使其适用于临床研究。到目前为止，我们主要将该方法应用于脑脊液的分析。但我们有初步数据表明，只要稍作修改，它也可以用于血浆和组织样品的分析。首先在室温下在滚轮混合器上解冻 1.5 毫升等分的 CSF。解冻后，将内容物转移到 10 毫升聚丙烯管中。并加入 80 微升一摩尔 TAB 作为缓冲剂。然后加入 0.65 毫升 8 摩尔盐酸胍以溶解蛋白质聚集体，并在室温下轻轻涡旋 10 分钟。接下来，在 60 微升 200 毫摩尔 TCEP 水溶液中，并在 55
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概述
本研究提出了一种用于人类脑脊液（CSF）中内源性肽的质谱分析方法。通过利用分子量截止过滤、色谱预分级和质谱分析，该研究显著扩展了已知的CSF肽组，增强了低丰度肽的识别，这些肽可能作为神经退行性疾病的生物标志物。
关键研究组成部分
科学领域
- 神经科学
- 质谱分析
- 生物标志物发现
背景
- CSF中的内源性肽在识别神经退行性疾病方面可能具有重要意义。
- 低丰度CSF肽尚未得到广泛研究。
- 现有方法对CSF肽组提供的数据有限。
研究目的
- 增强人类CSF中内源性肽的识别和表征。
- 提供更全面的CSF肽组视图。
- 探索神经退行性疾病中新生物标志物的潜力。
使用的方法
- CSF样品的预分级质谱分析。
- 涉及用特定试剂解冻和处理1.5毫升CSF分液。
- 与多重等质标记技术兼容。
- 可以通过微小修改适应血浆和组织样品分析。
主要结果
- 该方法允许检测到比以往研究更多的肽。
- 关键发现表明存在以前未探索的低丰度肽。
- 提供可能导致新生物标志物发现的见解。
结论
- 本研究展示了一种高效的CSF肽组表征方法。
- 该方法的多功能性为神经退行性疾病的临床研究开辟了途径。
- 对理解神经元机制和识别疾病标志物具有潜在意义。
常见问题
Chapters in this video
0:05
Title
1:12
Pre-treatment of Bulk Volume CSF without Quantification
2:24
Pre-treatment of Small Volume CSF Samples with Isobaric Labeling
4:00
MWCO Filtration, Desalting, and Sample Clean-up by Solid Phase Extraction
6:00
Offline High-pH Reverse Phase HPLC Sample Fractionation
7:09
LC-MS Analysis
7:47
Results: Peptide Identification After LC-MS Analysis
9:13
Conclusion
