Rilevamento di fosforilazione di Rab10 di LRRK2 attività mediante SDS-PAGE con un Tag di fosfato-binding

L'obiettivo generale di questo esperimento è quello di rilevare la fosforilazione di Rab10 da parte di LRRK2 utilizzando SDS-PAGE con un tag di legame con il fosfato. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della ricerca sul Parkinson, come ad esempio il modo in cui le mutazioni della malattia in LRRK2 influenzano la fosforilazione di Rab10. Il vantaggio principale di questa tecnica è che si può avere una stima approssimativa della stechiometria della fosforilazione di Rab10 utilizzando un semplice western blot.

Molti dei passaggi di questo protocollo sono abbastanza standard e sono descritti in modo sufficientemente dettagliato dal protocollo di testo che accompagna questo video. Qui, vogliamo mostrarti i passaggi che beneficiano maggiormente dell'istruzione visiva. Preparare piastre di cellule HEK293 trasfettate come descritto nel protocollo di testo.