Un'analisi cinetica basata sulla fluorescenza Ca2 + mobilizzazione per identificare il G proteina-ha accoppiato il ricevitore agonisti, antagonisti e modulatori allosterici

L'obiettivo generale di questo saggio basato su cellule è identificare e caratterizzare molecole in grado di stimolare o inibire la mobilizzazione intracellulare del calcio mediata dal recettore accoppiato alla proteina G. Questo metodo può essere un saggio prezioso per la scoperta di farmaci con recettori accoppiati a proteine G perché può essere utilizzato per lo screening di molecole che modificano i corpi di calcio intracellulari mediati dal recettore. Il vantaggio principale di questa tecnica è che consente di identificare molecole con proprietà agonistiche o antagoniste all'interno dello stesso saggio.

Questo test può aiutare nella scoperta di nuovi farmaci candidati che agiscono sui recettori accoppiati a proteine G, promettenti bersagli terapeutici che svolgono un ruolo in molte malattie umane. Il giorno del passaggio delle cellule, rivestire ogni pozzetto di una piastra a 96 pozzetti in polistirene nero con fondo trasparente con 100 microlitri di soluzione di gelatina allo 0,1% e incubare le piastre per due ore a temperatura ambiente. Mentre la gelatina si solidifica, utilizzare una soluzione di tripsina EDTA per sollevare le cellule di interesse dal fondo del loro pallone di coltura, risospendendo le cellule in un terreno di crescita fresco in una provetta conica da 50 millilitri una volta che si sono staccate.