Name: Laboratorio di allevamento di mosche stabili e altri ditteri muscoidi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-03T12:30:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Impara a allevare mosche stabili (Stomoxys calcitrans) per l'entomologia del bestiame usando materiali semplici e un mezzo a quattro ingredienti. Questo metodo economico facilita la ricerca sullo sviluppo degli insetti.

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Vorremmo ringraziare Anthony Weinhold e i numerosi studenti che hanno lavorato con noi nel corso degli anni per il supporto tecnico, nonché suggerimenti per migliorare il nostro insetto procedure di allevamento.

1. uovo insieme (Figura 1)
<ol><li>Preparare tazza incita, inserire un'estremità del panno in Becher ~ 500 mL riempita con acqua calda (~ 40 ° C). Si sovrappongono i lati della tazza e fissare con un elastico. Piegare l'estremità libera del panno indietro sopra la parte superiore della Coppa.</li>
	<li>Posto Coppa incita in gabbia di mosche di 8 – 10 giorni vecchio per femmina Gravid h. ~ 2 stabile vola sarà oviposit sul panno.</li>
	<li>Allontana da uova in gabbia e risciacquare fuori il panno egging egging calice in un pentolino con bottiglia di lavaggio a pressione.</li>
</ol>2. preparare Pan allevamento larvale
<ol><li>
Preparare il supporto (quantità per 1 vaschetta di allevamento)
	<ol>
<li>Unire la crusca di frumento (500 g), trucioli di legno (200 g) e farina di pesce (115g) in vaschetta di plastica piatto di 10 L e mescolare bene.</li>
		<li>Aggiungere bicarbonato di ammonio (50 g) di acqua (~ 25 ° C, 1600 mL) e mescolare fino a completa dissoluzione.</li>
		<li>Aggiungere acqua soluzione gli ingredienti secchi e mescolare affinché nessun materiale unwetted. Livello medio in padella, ma non comprimere.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Aggiungere le uova volare stabile
	<ol>
<li>Fare un solco poco profondo in mezzo la lunghezza della padella.</li>
		<li>Depositare 1 mL di stabile volare uova (~ 8.000 uova) in solco con pipetta di uovo (Figura 2). Nota: Pipetta uovo fatta tagliando una pipetta graduata in plastica al punto desiderato, inserendo 100 mesh schermo e incollaggio pipetta tornare insieme.</li>
		<li>Coprire le uova con un sottile strato di mezzo per prevenire il disseccamento.</li>
		<li>Coprire la pentola con federa, chiudere con un elastico e l'etichetta. Mettere pentole in camera larvale (23 ± 2 ° C, 30 – 50% RH e 12:12 [L:D] h fotoperiodo). Nota: Lo sviluppo larvale dura 10 – 14 giorni dal momento della deposizione delle uova.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. pupal elaborazione, larve spostarsi sul margine del mezzo 7 – 9 giorni dopo la deposizione delle uova e Pupariate di giorni 13 o 14
<ol><li>Paletta puparia, principalmente situato intorno ai bordi della vaschetta sotto la crosta che si forma sulla superficie del mezzo, fuori e messo in una pentola pulita.</li>
	<li>Riempire la pentola, con puparia, ½ a ¾ piena d'acqua. Rompere con ciuffi di puparia e medie. Componenti di crusca e proteine di frumento del mezzo lavandino mentre puparia > 1 giorno vecchio galleggiante19.</li>
	<li>Rimuovere materiale galleggiante, puparia e alcuni componenti medi con un colino e lavare attraverso una serie di setacci (n. 5, #7, #12, #20) per rimuovere il mezzo rimanente. Il setaccio #12 raccoglie il puparia e il #20 mantiene rifiuti solidi di entrare lo scarico. Lavare puparia tra setacci con uno spruzzatore di lavandino.</li>
	<li>Risciacquare il setaccio #12, puparia, in una pentola pulita. Riempire la pentola a ½ pieno di acqua. Versare puparia galleggiante in un colino e lasciare drenare l'acqua in eccesso.</li>
	<li>Trasferimento drenati puparia a schermo di secchezza con ventilatore e lasciare fino a secco (Figura 3).</li>
</ol>4. pupal scaffale, un metodo alternativo per la raccolta Puparia è con un ripiano Pupal18
Nota: La mensola fatta da un pezzo di plastica tagliato dalla fine di una padella piatto tipico di 10 L (10,2 cm di altezza x 10,2 cm di larghezza x 31,9 cm di lunghezza).
<ol><li>Preparare il supporto come descritto al punto 2.1. Cono medio in padella da ~2.5 cm profondo su un'estremità a ~7.5 cm profondo su altro.</li>
	<li>
Inserire ripiano su supporto nella parte bassa di allevamento padella e nastro adesivo per evitare le larve dallo strisciare lungo la mensola (Figura 4).
	<ol>
<li>Saturare la spugna (~14.5 x 9.0 x 4,5 cm3, cellulosa rigenerata) e avvolgerlo in un panno imbevuto di acqua (30,5 x 42 cm2, cotone) e posto sullo scaffale circa mezzo pollice dal mezzo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Aggiungere le uova, come descritto al punto 2.2 e procedere come prima.
	<ol>
<li>Verifica padelle ogni giorno per assicurare che la spugna rimanga umida.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Risciacquo puparia dallo scaffale, spugna e panno in un piatto pulito padella e versare nel colino 14 giorni dopo la deposizione delle uova.</li>
</ol>5. controllo di qualità
<ol><li>Pesare tutti i puparia prodotta in padella (Totale wt.).</li>
	<li>Isolare 100 puparia, pesare e inseriti in una capsula di Petri di 9 cm.</li>
	<li>Conteggio e sesso adulti ~ 5 – 8 giorni più tardi per determinare il tasso di emersione e rapporto del sesso. Conservare capsule di Petri con adulti è emersi in un congelatore per il conteggio in un secondo momento, se necessario. Mosche sono sessuati dalla forma dei loro occhi e larghezza della placca fronto-orbitale20 o genitali sotto ingrandimento basso.</li>
	<li>Peso totale record, peso di 100 puparia e numero di emersi adulti maschi e femmine.</li>
</ol>6. preparazione di sangue
<ol><li>Raccogliere sangue fresco di bovini da un macello locale a secchi 19 L contenenti 70 g di sodio citrato tribasico diidrato in 500 mL di acqua. Mescolare vigorosamente per 5 – 10 min di sangue e restituito al laboratorio.</li>
	<li>Sangue di ceppo attraverso un colino per rimuovere la formazione di coaguli e partizionato in contenitori 2L, etichetta con la data di raccolta e conservare in congelatore (-20 ° C).</li>
	<li>Rimuovere il contenitore dal freezer e posto in frigorifero 2 giorni prima del necessario. Sangue può essere utilizzato per ~ 2 settimane una volta scongelati e conservati nel congelatore per fino a 1 anno.</li>
</ol>7. adult Maintenance
<ol><li>Preparare gabbie, fondo gabbia linea con carta da macellaio per facilitare la pulizia.</li>
	<li>Mettere 50 g di secco pupe volare stabile (~ 3.500) in ogni gabbia. Adulti eclose poche ore a un paio di giorni dopo l'elaborazione pupal.</li>
	<li>Posto un sangue fresco imbevuto femminile tovagliolo sulla cima di ogni gabbia per l'alimentazione. Avviare l'alimentazione entro 24 h dalla eclosion adulto e ripetere ogni giorno fino al giorno prima della deposizione delle uova (9 – 10 giorni dopo la nascita).</li>
	<li>Dopo la deposizione delle uova (sezione 1), posizionare la gabbia in freezer per 4 – 8 h e poi pulire rimuovendo la carta, risciacquo frass dai lati e piano con acqua calda e strofinare tutte le superfici con detersivo e candeggina. Sciacquare le gabbie con acqua calda e lasciare per asciugare.</li>
</ol>

<ol><li>Cook, D. F., Dadour, I. R., Keals, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+fly%2C+house+fly+%28Diptera%3A+Muscidae%29%2C+and+other+nuisance+fly+development+in+poultry+litter+associated+with+horticultural+crop+production%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Econ.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Stable fly, house fly (Diptera: Muscidae), and other nuisance fly development in poultry litter associated with horticultural crop production.</a> J. Econ. Entomol. 92 (6), 1352-1357 (1999).</li>
<li>Dominghetti, T. F., de Barros, A. T., Soares, C. O., Cançado, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stomoxys+calcitrans+%28Diptera%3A+Muscidae%29+outbreaks%3A+current+situation+and+future+outlook+with+emphasis+on+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Bras.+Parasitol.+Vet%22%5BJournal%5D)">Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae) outbreaks: current situation and future outlook with emphasis on Brazil.</a> Rev. Bras. Parasitol. Vet. 24 (4), 387-395 (2015).</li>
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<li>Albuquerque, T. A., Zurek, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+changes+in+the+bacterial+community+of+animal+feces+and+their+correlation+with+stable+fly+oviposition%2C+larval+development%2C+and+adult+fitness%5BTitle%5D)+AND+%22Front.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Temporal changes in the bacterial community of animal feces and their correlation with stable fly oviposition, larval development, and adult fitness.</a> Front. Microbiol. 5 (590), 1-9 (2014).</li>
<li>Bailey, D. L., Whitfield, T. L., LaBrecque, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laboratory+biology+and+techniques+for+mass+producing+the+stable+fly%2C+Stomoxys+calcitrans+%28L.%29+%28Diptera%3A+Muscidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Laboratory biology and techniques for mass producing the stable fly, Stomoxys calcitrans (L.) (Diptera: Muscidae).</a> J. Med. Entomol. 12 (2), 189-193 (1975).</li>
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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Mosche stabili possono trovare lo sviluppo in un'ampia varietà di substrati in natura e possono essere allevati in molti tipi di media in laboratorio. Abbiamo usato dei trucioli di legno e vermiculite come agenti volumizzanti. La vermiculite ha funzionato bene, ma fatto puparia separazione da allevamento medio difficile ed era costoso (~$0.60/pan). Forse a causa il rigore aggiunto di separare puparia dal mezzo, eclosion era inoltre più basso con vermiculite, 57% vs 75% per trucioli di legno. Trucioli di Cottonwood erano ...

Mosche stabili, Stomoxys calcitrans (L.), sono ematofagi mosche cui punture dolorose può interferire il comportamento al pascolo del bestiame, causano dolore e sofferenza per animali da compagnia e interferire con attività ricreative umane in tutto il mondo. Mosche stabili immaturi sviluppano nella fermentazione materia vegetativa, spesso contaminato da rifiuti di origine animale. Colture e mutevoli pratiche agronomiche hanno prodotto gravi episodi di mosche stabili in presenza di residui colturali, verdure in Australia1, canna da zucchero in Brasile2e l'ananas in Costa Rica3. Anche se solo 14 mosche stabili per animale sono considerati la soglia economica4, sono state fatte osservazioni di più di 2.000 mosche per animale durante recenti focolai5. Tali livelli di infestazione riducono la produttività di host per vicino allo zero e possono causare mortalità6. A seguito di focolai agronomico associati, mosche stabili stanno ricevendo rinnovato interesse e domanda per colonie di laboratorio è aumentato drammaticamente.
Per quanto riguarda tutti gli insetti holometamorphic, mosche stabili ottenere tutti i nutrienti necessari per la crescita durante la fase larvale o immatura. Pertanto, una componente importante di un sistema di allevamento è la dieta larvale o substrato. Le larve del Mosca stabile sono state osservate lo sviluppo in un'ampia gamma di substrati in campo7 e sono dipendente della comunità microbica del substrato8,9. Substrati naturali larvali sono principalmente composte di decomposizione o vegetativi materiali spesso contaminati con rifiuti azotati di fermentazione.
Per l'allevamento di laboratorio, substrati larvale volare stabile sono di solito composte da un materiale vegetativo e una fonte di azoto aggiunto. Numerosi materiali sono stati usati per le diete larvale volare stabile. Le diete larvale prime ha imitato substrati naturali e incluso di fermentazione paglia di avena e letame di cavallo o mucca10,11. Fonti di carboidrati includono frumento crusca12,13,14, erba medica pasto12,13,14 e una formulazione commerciale sviluppato da specialità chimiche Produttori Association (CSMA, crusca di grano 33%, 27% di farina di erba medica, lievito di birra 40% granuli)13,14,15,16. Fonti di azoto includono lievito sospensione12, farina di pesce e di bicarbonato di ammonio17. Materiali inerti volumizzanti sono spesso inclusi nelle diete tra cui avena scafi12, bagassa13, vermiculite16, trucioli di legno13,18 e gusci di arachidi pellettato14.
Un obiettivo primario di laboratorio allevamento è quello di produrre un prodotto che è come fisiologicamente simile a "wild type" possibile in modo che gli esperimenti del laboratorio produrrà risultati riflettono quelle delle popolazioni di campo. Ciò richiede che essere minimizzato in allevamento e selezione per mantenere genetica diversità e risorse nutritive essere paragonabili a quelle nel campo. Gli obiettivi secondari sono per ridurre al minimo il lavoro e le spese. Una componente importante di minimizzare le spese è l'utilizzo di componenti di alimentazione disponibile localmente. Al volo stabile del sistema presentato di allevamento è stato sviluppato per raggiungere questi obiettivi.

<table><tbody><tr><td>Diamalt</td><td>Premier Malt Products, Inc., Saddle Brook, NJ</td><td>2540</td><td></td></tr><tr><td>CSMA Fly media</td><td>Purina Animal Nutrition, Arden Hills, MN</td><td>5S6Z</td><td></td></tr><tr><td>Thin Maxi Pad</td><td>The Tranzonic Co., Cleveland, OH, USA</td><td>5001M</td><td></td></tr><tr><td>Manna per vitelli</td><td>MannaPro, Chesterfield, MO, USA</td><td>Manna Pro</td><td></td></tr><tr><td>Bicarbonato di ammonio</td><td>Spectrum Chemical Manufacturing Corp, Gardena, CA</td><td>A1125</td><td></td></tr><tr><td>Crusca di frumento, Coarse</td><td>Siemer Milling Company, Teutopolis, IL</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trucioli di legno</td><td>Tractor Supply Company, Brentwood, TN</td><td>502770699</td><td></td></tr><tr><td>Distribuzione di pasti</td><td>di pesce, North Sioux City, SD</td><td>F1550</td><td></td></tr><tr><td>Gabbie per adulti</td><td>All Aluminium Window Company, Lincoln, Ne</td><td>Custom</td><td>45 &volte; 45 &volte; 45 cm, 18 &volte; 16 rete schermo in alluminio, accesso a rasato</td></tr><tr><td>9 & volte; 28 cm panno di cotone nero</td><td>Robert Kaufman Tessuti, Los Angeles, CA</td><td>K040-114</td><td>Panno per uova</td></tr><tr><td>10 L pentole in plastica</td><td>Rubbermaid, Saratoga Springs, NY</td><td>FG2951ARWHT</td><td>Padelle larvali</td></tr><tr><td>Stockinette, cotone, rotolo da 12 pollici x 25 iarde</td><td>Tex-Care Medical Company, Burlington, NC</td><td>91311-225</td><td></td></tr></tbody></table>

laboratorio di allevamento di mosche stabili e altri ditteri muscoidi

Laboratory Rearing of Stable Flies and Other Muscoid Diptera

Mosche stabili, Stomoxys calcitrans, sono parassiti gravi di bestiame, gli esseri umani, animali da compagnia e animali selvatici in tutto il mondo. Durante gli ultimi 20 + anni, cambiamenti nelle pratiche agronomiche ha provocato gravi epidemie di mosche stabili in diversi paesi. Questi focolai perturbato produzione zootecnica e ricreazione umana conseguente richieste pubbliche per aumentare gli sforzi di ricerca e gestione per questo parassita. Una procedura semplice e poco costoso per l'allevamento di mosche stabili per le ricerche di laboratorio è presentata. La procedura utilizza componenti localmente disponibili dieta, attrezzature e forniture. La procedura può essere adattata per l'allevamento di altre mosche muscoidi inclusi viso volare (Musca autumnalis), corno fly (da schistosoma haematobium irritans) e Mosca domestica (Musca domestica). La procedura produce puparia Vola stabile con una media di 12,5 mg e ~ 35% uovo alla sopravvivenza adulto. Circa 3000 mosche sono prodotte in ogni vaschetta.

Pupariate 10 – 14 giorni di larve e adulti emergono 14 – 16 giorni dopo la deposizione delle uova. Tempo di generazione, uovo, è ~ 24 giorni. Allevamento dei dati per maggio 2013 al gennaio 2017 con tre diversi agenti volumizzanti e due colonie sono presentati nella Figura 5. Cottonwood ha dato il miglior rendimento, 3867 ±1442 (<img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/57341/57341eq1.jpg"> ± deviazione standard) pupe peso 12,5 ± 1,6 mg con 74 ±19% eclosion...

Una procedura per l'allevamento di mosche stabili (Stomoxys calcitrans) è presentata. La procedura utilizza materiali localmente disponibili per dieta componenti, attrezzature e forniture.

Laboratorio di allevamento di mosche stabili e altri ditteri muscoidi

Stable flies, Stomoxys calcitrans, are serious pests of livestock, humans, companion animals and wildlife worldwide. During the last 20+ years, changes in ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nell'entomologia del bestiame, come ad esempio ciò che le mosche stabili richiedono per lo sviluppo. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è semplice. Il mezzo è composto da soli quattro ingredienti.La propagazione di Stomoxys calcitrans inizia con la raccolta delle uova da uno stock di mosche. Ciò comporta la preparazione di una tazza per le uova. Immergi la punta di un panno in un barattolo da 250 millilitri riempito con acqua a 40 gradi Celsius.Quindi avvolgi il panno attorno all'esterno del barattolo e fissa il panno con un elastico. Piega l'estremità libera del panno sopra il barattolo per limitare l'accesso all'acqua. Ora metti questa tazza in una gabbia di mosche di 8-10 giorni.Dopo due ore, le femmine gravide depongono abbastanza uova per la generazione successiva. In genere, 2.500 mosche producono da 8 a 40.000 uova in due ore. Quindi, usando l'acqua, sciacquare le uova dalla stoffa per uova in una piccola teglia vuota.In teoria, le uova possono sopravvivere in acqua da otto a 12 ore. Tuttavia, è meglio limitare il tempo a cinque ore o meno. Per allevare le larve dalle uova, preparare un mezzo di mosca fresc

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Fopius arisanus è un uovo-parassitoide larvale di moscerini della frutta Tephritid che viene utilizzato con successo nel controllo biologico di questi parassiti importanti tropicale. Descriviamo qui un protocollo ottimizzato per l'allevamento di F. arisanus su piccola scala con materiali facilmente reperibili.

Un protocollo ottimizzato per la cura dei Fopius arisanus, Un parassitoide di frutta Tephritid mosche

Abbiamo proposto un sistema che utilizza poco costoso, sensori non invasivi pseudo-acustico ottici per rilevare automaticamente e con precisione, contare e classificare insetti base al loro suono volare volare.

Volare Insetto rilevamento e classificazione con sensori Economico

Questo manoscritto riporta un protocollo dettagliato per l'allevamento, su base regolare, di una popolazione di Drosophila melanogaster utilizzando una gabbia per la popolazione di mosche.

Mantenimento di un<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Cage Popolazione

Un metodo per l'allevamento di Drosophila melanogaster in condizioni axeniche e gnotobiotic è presentato. Fly embrioni vengono dechorionated in ipoclorito di sodio, trasferiti asetticamente alla dieta sterili, e allevati in contenitori chiusi. Inoculando dieta ed embrioni con i batteri porta ad associazioni gnotobiotic, e la presenza di batteri è confermata dalla placcatura di tutto il corpo omogenati Drosophila.

Allevamento la mosca della frutta<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Sotto axeniche e Gnotobiotic Condizioni

L'obiettivo generale di queste procedure è quello di stabilire, mantenere e aggiornare una popolazione prigioniera di Eristalis tenax in un ambiente di ricerca.

Allevamento e manutenzione a lungo termine di sirfidi Eristalis tenax per studi di ricerca

Questo protocollo descrive una metodologia di microiniezione che abbiamo standardizzato e usati per diversi anni per fornire determinate quantità di acidi nucleici direttamente all'emolinfa di zanzare e mosche di casa. Questo protocollo risulta in una iniezione minima mortalità e consente di effettuare misure di dose correlato della fecondità.

Riproducibile dsRNA Microinjection e analisi biologica di deposizione delle uova di zanzare e mosche domestiche

Descriviamo la metodologia e l'importanza del biotest di applicazione topica per misurare la suscettibilità agli insetticidi nelle zanzare e nei moscerini della frutta. Il test presentato è ad alto rendimento, utilizza la massa degli insetti, consentendo così di calcolare una dose letale relativizzata alla massa anziché la concentrazione, e probabilmente ha una variabilità inferiore rispetto ad altri metodi simili.

Biotest di applicazione topica per quantificare la tossicità degli insetticidi per zanzare e moscerini della frutta

Questo articolo descrive il mantenimento in laboratorio (compreso l'accoppiamento e l'alimentazione) della mosca dittera inferiore Bradysia (Sciara) coprophila.

Manutenzione in laboratorio della mosca dei ditteri inferiori Bradysia (Sciara) coprophila: un nuovo/vecchio organismo modello emergente

Questo articolo descrive protocolli dettagliati per la gestione di una colonia di laboratorio di Carausius morosus, inclusi procedimenti chiave per l'allevamento degli animali, la manipolazione delle uova, le cure ai nascituri, metriche rappresentative delle prestazioni e una panoramica sulla durata della vita e sulle caratteristiche biologiche della specie.

Un protocollo standardizzato per l'allevamento di Carausius morosus (Phasmatodea, Insecta) in condizioni di laboratorio

Comunità microbica in natura e laboratorio - Intervista

Impara a allevare mosche stabili (Stomoxys calcitrans) per l'entomologia del bestiame usando materiali semplici e un mezzo a quattro ingredienti. Questo metodo economico facilita la ricerca sullo sviluppo degli insetti.

Laboratorio di allevamento di mosche stabili e altri ditteri muscoidi

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