4 agosto 2018
Qui presentiamo un protocollo per valutare sperimentalmente la coagulazione del plasma nel tessuto del fegato in vivo. In un modello porcino, microcircolazione viene esaminato dal laser Doppler, profondità di coagulazione è misurato istologicamente, temperatura al sito di coagulazione di effetto di tenuta del tubo e macchina fotografica termografica e termometro a infrarossi è documentata dalla pressione di scoppio esperimenti.
Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della chirurgia epatica clinica sulla relazione di profondità di impostazione dell'energia della coagulazione al plasma di argon ed elio e sul processo di coagulazione del plasma stesso. I principali vantaggi di questa tecnica sono che il modello animale di grandi dimensioni è simile all'applicazione clinica e che non sono necessarie attrezzature speciali. La termografia a infrarossi può essere utilizzata per monitorare la distribuzione e il decadimento della temperatura, ma anche per monitorare la frequenza respiratoria e le torte.
Inoltre, i processi infiammatori possono essere monitorati mediante termografia a infrarossi. A dimostrare la procedura sarà Pascal Paschenda, un tecnico del nostro gruppo. Almeno un'ora prima di iniziare la procedura, accendere il taccuino della fotocamera termografica e il termometro a infrarossi.
Quando l'attrezzatura è pronta, posizionare una femmina di suino Landrace tedesco anestetizzato di 25-30 chilogrammi in posizione supina su un tavolo chirurgico standard e utilizzare un tampone chirurgico standard per disinfettare l'area chirurgica tre volte con un disinfettante chirurgico standard. Quindi utilizzare un bisturi per eseguire un'ampia laparotomia della linea mediana dal processo xifoideo al pube e installare divaricatori chirurgici per esporre il tessuto epatico. Per ottenere le misurazioni della microcircolazione di base, accendere il flussometro e lo spettrofotometro laser doppler e utilizzare una sonda piatta per misurare il flusso e la velocità.
Quindi, accendere il dispositivo di coagulazione al plasma, aprire l'apposita bombola del gas di trasporto e regolare il flusso di gas a tre litri al minuto. Selezionare la potenza di uscita del dispositivo di coagulazione appropriata e utilizzare uno stampo in titanio con un'apertura quadrata di uno per un centimetro quadrato per standardizzare la zona di coagulazione. Quindi utilizzare una sonda di un centimetro per coagulare la regione per cinque secondi.
Per misurare il microcircolo post-coagulazione, posizionare la sonda piatta su ciascun sito di coagulazione per misurare il flusso e la velocità di ciascun sito. Per misurare la temperatura in ciascun sito, regolare la messa a fuoco della termocamera e impostare l'inquadratura sul primo sito di coagulazione in modo che la regione di coagulazione e il tessuto circostante interessato dal trasferimento di calore si trovino al centro del campo visivo. Registrare il processo di coagulazione con il coagulatore di plasma sulla superficie del fegato con una telecamera termografica per un periodo di due minuti.
Analizza quindi le sequenze di immagini con l'apposito software di analisi termografica. Per misurare la pressione di scoppio, accendere prima le pompe automatiche e il misuratore di pressione. Successivamente, dividere tutte le connessioni legamentose al fegato e dividere il peduncolo epatico sopra la flessura duodenale superiore, lasciando intatte le lunghe porzioni della vena porta e del dotto biliare comune.
Quindi dividere la vena cavale sopra e sotto il fegato per consentire il recupero dell'organo. Usando forbici affilate, resecare metà del lobo epatico mediale sinistro e coagulare al plasma la superficie tagliata. Isolare la vena porta, l'arteria epatica comune e il dotto biliare nel peduncolo epatico.
Usando una pinza di fissaggio, clamp la vena porta. Quindi utilizzare una sutura monofil 4.0 per legare il vaso. Bloccare l'arteria epatica comune con un secondo paio di pinze e legare l'arteria con un'altra sutura monofilo 4.0.
Inserire un catetere French 16 nel dotto biliare comune, legando il dotto con sutura di seta 2.0. E collegare il catetere alle pompe automatiche. Installare un rubinetto a tre vie con un misuratore di pressione e riempire una siringa a profusione con soluzione fisiologica.
Avviare le pompe automatiche con una portata di 99 millilitri all'ora. Quindi monitorare la superficie di taglio del fegato e il misuratore di pressione per perdite e registrare la pressione di scoppio. In questo esperimento rappresentativo, il flusso sanguigno capillare è diminuito di circa il 60% rispetto al basale a 25 watt di potenza di uscita del dispositivo, del 66% a 50 watt e di quasi il 100% a 100 watt.
Non è stato osservato alcun cambiamento di temperatura durante o dopo la coagulazione plasmatica. La coagulazione plasmatica crea una zona superficiale di necrosi che può essere facilmente distinta dal normale parenchima epatico. Dopo la coagulazione al plasma di elio, la profondità di coagulazione aumenta significativamente in diretta correlazione con la potenza di uscita del dispositivo al plasma applicato.
Si noti che le misurazioni della pressione di scoppio effettuate sulla superficie di taglio del lobo epatico mediale sinistro espiantato non dimostrano alcuna differenza dopo la coagulazione con plasma di elio o argon. Utilizzando queste tecniche, l'ultima è stata quella di quantificare l'effetto coagulatorio locale e di stimare l'effetto di sigillatura del dotto biliare della coagulazione plasmatica. Queste tecniche possono anche essere utilizzate per confrontare diversi mezzi di bilio ed emostasi in un contesto chirurgico simile a quello dei pazienti umani.
Inoltre, gli effetti emostatici e biliostatici della coagulazione plasmatica possono essere applicati dopo epatectomie maggiori nello stesso modello. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come valutare i principali effetti della coagulazione al plasma di argon ed elio in un modello animale di grandi dimensioni.
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Questo articolo presenta un protocollo per la valutazione della coagulazione plasmatica nel tessuto epatico in vivo mediante l'utilizzo di un modello suino. Le misurazioni principali includono la microcircolazione tramite doppler laser, la profondità di coagulazione in sede istologica e la temperatura nel sito di coagulazione mediante termografia a infrarossi.
Questo protocollo consente la valutazione preclinica degli effetti sulla coagulazione plasmatica in un modello animale di grandi dimensioni clinicamente rilevante, supportando la validazione del bersaglio per interventi emostatici e biliostatici. Quantificando le variazioni della microcircolazione, la profondità di coagulazione e i profili termici, fornisce dati meccanicistici per la riduzione del rischio nello sviluppo di dispositivi chirurgici. L'approccio collega la verifica delle ipotesi nella fase di scoperta con la continuità traslazionale nei percorsi innovativi della chirurgia epatica.
Colloca la valutazione della coagulazione plasmatica all'interno del continuum dalla scoperta alla fase preclinica, consentendo una valutazione basata su ipotesi degli strumenti chirurgici a energia.