Name: Microdissection di segmenti di tessuto renale primario e incorporazione con tecnologia romanzo costrutto senza impalcatura (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-03-27T13:30:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: Impara la microdissezione di reni murini per isolare segmenti cortico-midollari con architettura intatta. Questa tecnica avanzata consente di creare costrutti renali senza impalcatura per applicazioni di ingegneria tissutale.

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NIH istituzionale Postdoctoral Training Grant, NIH-HL-007260

Tutte le procedure chirurgiche degli animali descritte di seguito sono state approvate dal istituzionale Animal Care e utilizzare Committee (IACUC) presso Medical University of South Carolina, prima di qualsiasi animali ambulatori o uso di qualsiasi tessuti animali.
1. murino nefrectomia
<ol><li>Indossi una maschera chirurgica e protezione bouffant per ridurre al minimo il rischio di contaminazione. Mantenere la sterilità durante il set-up dell'area chirurgica.<ol>
<li>Posto non fenestrate telini chirurgici sul tavolo operatorio.</li>
		<li>Aprire il pacchetto di strumenti sterilizzati nell'autoclave su teli sterili. Gli strumenti necessari per il nephrectomy sono 3 piccoli emostatiche, belle forcipe con i denti, una pinzetta senza denti e forbici iris dritto.</li>
		<li>Posizionare un altro telo chirurgico non fenestrate al centro del tavolo operatorio.</li>
		<li>Preparare 5 mL di Dulbecco Phosphate Buffered Saline (DPBS) con calcio e magnesio, completati con 1% di penicillina/streptomicina in una provetta conica sterile 15 mL. Posto questa soluzione sul ghiaccio accanto al tavolo operatorio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ottenere un mouse C57BL/6 di 8-12 settimane vecchio (maschio o femmina) dal complesso di stabulazione degli animali.</li>
	<li>Posizionare il mouse all'interno di una camera di induzione di anestesia e indurre con 3,5% inalato isoflurano. Posizionare un cono di naso del mouse, utilizzando 2% isoflurane per anestesia di manutenzione.<ol>
<li>Monitor per un'adeguata profondità di anestesia periodicamente durante la procedura chirurgica valutando per pedale reflex (pizzico di punta costante).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rimuovere tutti i capelli dal torso ventrale utilizzando la crema depilatoria. Sciacquare la zona con acqua distillata per garantire che tutti i capelli sono stato rimosso dall'addome.</li>
	<li>Trasferire il mouse al tavolo operatorio sterile in posizione supina sotto il telo non fenestrate superiore. Tagliare una finestratura2 2 x 2 cm nel drappo solo che ricopre l'addome del mouse.</li>
	<li>Applicare povidone-iodio seguito da etanolo al 70% all'addome usando le sfere di cotone o garza sterile.</li>
	<li>Utilizzando una pinzetta con denti e iris forbici, fare un'incisione della pelle addominale verticale di 3-4 cm parallela alla linea mediana, 0,5 cm a sinistra della linea mediana Nota: Se il tentativo di rimuovere il rene di destra, questo sarà un'incisione 0,5 cm a destra della linea mediana.<ol>
<li>Afferrare il peritoneo con una pinzetta senza denti e incise con forbici iris di entrare nella cavità addominale. Applicare emostatiche ai bordi laterali superiori ed inferiori della pelle e del peritoneo per posizionare lateralmente tensione e migliorare l'esposizione.</li>
		<li>Spostare delicatamente il contenuto intestinale verso il lato destro dell'addome per esporre il rene di sinistra. Posizionare delicatamente la trazione sul rene per elevarlo fuori l'addome.</li>
		<li>Posizionare una pinza emostatica attraverso l'ILO del rene di sinistra. Utilizzare forbici iris al transetto l'uretere e i vasi renali.</li>
		<li>Posizionare il rene di sinistra nel 1% soluzione DPBS penicillina/streptomicina sul ghiaccio.</li>
		<li>Trasferimento nella provetta contenente il rene per la cappa di sterili per coltura. Trasferire il rene dalla provetta conica 15 mL per una capsula di Petri 60mm (Figura 1). Sciacquare due volte con 5 mL DPBS con calcio e magnesio. Mantenere il rene sospeso in 5 mL di DPBS nel piatto 60 mm.<ol>
<li>Preparare un piatto di petri di ulteriori 60 mm con 5 mL DPBS da usarsi durante il protocollo di microdissection.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Eutanasia il mouse dal thoracotomy e dissanguamento dopo l'acquisizione del rene, secondo un protocollo approvato di animali IACUC.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. murino rene Microdissection per l'isolamento del segmento renale
<ol><li>Continuare ad usare una tecnica sterile per questa parte del protocollo, inclusi i guanti sterili, mascherina chirurgica e bouffant per minimizzare il rischio di contaminazione.<ol>
<li>Luogo sterile tende sulla piattaforma microscopio stereo anche per quanto riguarda le aree appena a sinistra e destra del microscopio per avere un campo sterile per strumenti. Inserire fogli di plastica adesive sulle manopole di messa a fuoco del microscopio e spruzzare con etanolo al 70%. Accendere l'Illuminatore doppio collo d'oca per illuminare il palco.</li>
		<li>Apri strumenti sterilizzati (forcipe fine senza denti, manico per bisturi, lama per bisturi #15, due emostatiche dritti, due 30½ hollow-foro aghi di calibro) su teli sterili. Posto la #15 lama sul bisturi ora di gestire e collegare una pinza emostatica per ogni adattatore/mozzo dell'ago per creare strumenti per la dissezione dell'ago per un uso successivo, come mostrato nella Figura 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Spostare i piatti petri-60mm, uno contenente il rene in DPBS e l'altri DPBS unica, dalla coltura del tessuto cappa alla zona di microscopio.<ol>
<li>Porre la capsula di petri 60 mm sotto l'obiettivo e rimuovere il coperchio per esporre il rene. Lasciare il piatto contenenti DPBS al lato sul campo sterile per un uso successivo.</li>
		<li>Spostare il piatto in modo che solo la superficie anteriore o posteriore del rene è in vista (vale a dire, la faccia piatta grande del rene, con l'altra faccia toccare il fondo del piatto). Zoom a 3.2-4x per questa parte della procedura. Usando la mano non dominante, utilizzare una pinzetta senza denti per perforare e pin il rene contro il piatto vicino ai poli inferiori e superiori del rene.</li>
		<li>Mantenere la mano non dominante sul posto per appuntare il rene. Con la mano dominante, è necessario utilizzare la lama #15 per rimuovere lo strato capsulare fibroso traslucido da superficie esposta. Radere la più superficiale 0.5 mm dalla superficie esposta del rene per rimuovere il resto della capsula.</li>
		<li>Usare la lama #15 di sezionare una piramide rovesciata del tessuto dall'area decapsulato, circa 2 mm3 dimensioni. Recuperare la capsula 60 mm solo DPBS e porre la piramide del tessuto nel piatto pulito. Scartare il resto del rene.</li>
		<li>Diminuire l'ingrandimento di 1.5-2.0 X per il resto della dissezione. Utilizzando due strumenti emostato-ago come strumenti da taglio, affettare il frammento di tessuto in pezzi progressivamente più piccoli fino a quando i segmenti di tessuto sono minore o uguale al diametro delle punte dell'ago. Una di 2 mm di tessuto renale3 dimensioni produrrà più di 50 segmenti una volta completamente sezionati.</li>
		<li>Spostare il piatto di 60 mm con segmenti renale alla cappa di coltura del tessuto. Rimuovere DPBS con 1000 µ l pipette. Aggiungere 5 mL DMEM, completati con 10% siero bovino fetale (FBS) e 1% di penicillina/streptomicina.</li>
		<li>Cultura per 3 giorni a 37 ° C in un incubatore o impianto in costrutti cellulari immediatamente.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. renale segmento cellulare costrutto Fabrication
<ol><li>Fibroblasti cutanei umani normali cultura (NHDF) e cellule endoteliali microvascolari adipose umane (HAMEC) per diverse settimane ottenere 7,2 x 105 fibroblasti e 1,8 x 105 cellule endoteliali per costrutto desiderato. Nella cappa di coltura tissutale, seme il rapporto appropriato dei fibroblasti alle cellule endoteliali (4:1) in pozzetti, asta-a forma di in stampi di agarosio per formare senza impalcatura pre-vascolare endoteliale-fibroblasto costrutti (SPEC) come precedentemente descritti da Czajka et al. 19.</li>
	<li>Ottenere un emostato sterilizzato, ago 30½ G e una spatola sterile con estremità piatta.<ol>
<li>Rimuovere la maggior parte dei media dalla piastra 60 mm contenenti segmenti renale, facendo attenzione a non aspirare e rimuovere i segmenti renali.</li>
		<li>Dotare le lenti di ingrandimento chirurgiche per visualizzare l'impianto dei segmenti.</li>
		<li>Raschiare la fine della spatola delicatamente lungo la parte inferiore del piatto 60 mm per ottenere 10-15 segmenti, stendere in modo uniforme lungo la punta della spatola. Posizionare la punta della spatola più vicino possibile al labbro del pozzo dove è stato seminato la SPEC.</li>
		<li>Usare uno strumento di ago di pinza emostatica-30½ G in altra mano per spostare ogni singolo segmento dalla punta spatola sul bordo del pozzo. Abbassare delicatamente ogni segmento nel bene usando la punta dell'ago fino a quando leggermente sommerso la sospensione cellulare precedentemente seminato.</li>
		<li>Cultura renale segmento-SPEC in 2:1:1 rapporto di mezzo MGF-2/EGM-2/DMEM (2,5 mL di volume totale). Cambiare ogni 24 ore di coltura per 3 giorni. Rimuovere i costrutti dagli stampi a 72 h e difficoltà o flash-blocco per l'elaborazione.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Metodi utilizzati per tessuto renale vivente costrutti variano notevolmente per quanto riguarda sia il tipo delle cellule e biomateriali utilizzati e in molti casi, l'ingegnere sono obsoleti o non ben caratterizzati in letteratura7. Mentre molti stanno usando cellule staminali approcci o ricapitolare i singoli componenti dell'architettura renale in isolamento, è la prospettiva di ricreare artificialmente un intero organo con oltre 26 tipi differenti delle cellule differenziate da sospensioni cellu...

Malattia renale cronica (CKD) è una delle attuali sfide importante di sanità pubblica in tutto il mondo1. La prevalenza di CKD negli Stati Uniti è oltre il 14% della popolazione totale, con oltre 600.000 americani soffrono la forma più grave, stadio finale malattia renale (ESRD)2. Le attuali opzioni di trattamento disponibili per quelli con ESRD includono dialisi e trapianto renale. Anche se circa 25.000 pazienti sottopongono a trapianto renale ogni anno, un numero significativo di pazienti vengono aggiunti ogni anno portando a una grande disparità tra quelli in attesa di un organo salva-vita e quelli riceventi trapianto3. Oltre ai suoi effetti negativi gravi sulla longevità e qualità della vita, la dialisi sono associato con un onere finanziario sorprendente. Nel 2014, Medicare pagato crediti ammontano a oltre $ 30 miliardi per ESRD pazienti2. Con un rifornimento limitato dell'organo e nessuna tendenza al ribasso apparente in pazienti che necessitano di dialisi, gli sforzi di ricerca finalizzati ad individuare soluzioni alternative alla dialisi e trapianto sono sempre importanti. Anche un relativamente breve ritardo nella necessità di dialisi aumenta sostanzialmente numero di un paziente di anni di vita di qualità-regolato e produttività mentre rinviando alla dialisi costi4,5,6.
Soluzioni per la perdita di tessuto funzionale, come quella in ESRD, sono attualmente allo studio in ingegneria tissutale e medicina rigenerativa laboratori, con approcci vari ampiamente da basati su impalcatura organoid fabbricazione a organo intero ingegneria utilizzando decellularized strutture dell'organo per l'impianto cellulare7,8,9,10,11. Ricapitolare complesse strutture renali dai reni marginali o scartati solo parzialmente è stato studiato. Infatti, quasi il 20% dei reni procurati per trapianto vengono scartati per vari motivi12,13. Il tessuto renale funzionale da questi presunti innesti potrebbe essere utilizzato e incorporato in uno o molti costrutti tessutale. Studi precedenti hanno dimostrato la fattibilità di lavorare con questi organi scartati, che utilizzano i reni per la matrice extra-cellulare per tessuto ingegneria fini14,15. Tuttavia, pochi hanno utilizzato il tessuto primario nephronal da reni sani per l'ingegneria dei tessuti fini16,17,18.
Un metodo precedentemente descritto da Kim et al. prevede isolamento di renale "segmenti" da reni sani del ratto, che poi sono stati seminati su impalcature di (PGA) acide poliglicolico per costrutto fabbricazione16. Tuttavia, poche informazioni sono dato per quanto riguarda la metodologia esatta dissezione e segmenti sono stati ottenuti da una combinazione di filtrazione e tritare bene. Descriviamo una modifica del presente protocollo, che analogamente produce segmenti discreti renale con architettura nephronal intatto, ma si basa invece sulle tecniche di microdissezione. Nefrectomie vengono eseguiti su topi adulti viventi, dopo di che i reni sono trasferiti il microscopio di dissezione dove la capsula renale è rimosso, e il tessuto è ulteriormente sezionato. Piccolo calibro 30½ G aghi sono usati come strumenti da taglio e anche come guide aiutando nella dissezione, come l'ago diametro è uguale al diametro del bersaglio dei segmenti renali. I segmenti isolati, in questo caso murini, renali mantengono vitalità nella cultura e incorporano con costrutti cellulari senza impalcatura endoteliale-fibroblasto19. Questi costrutti sono stati utilizzati precedentemente per altri organi, tra cui un pancreas artificiale bio20l'ingegnere.

<table><tbody><tr><td>Monouso ospedaliero</td> <td>sterile non fenestrato</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Monouso ospedaliero</td><td>sterile fenestrato</td><td>697</td><td></td></tr><tr><td>Pinze antizanzare Halsted 5 Miltex</td><td></td><td>Mil-7-4</td><td>"Emostatico" curvo nel manoscritto</td></tr><tr><td>Forcipe Graefe extra fine, curvo con denti</td><td>Fine Science Tools</td><td>11155-10</td><td>Pinze fini con denti</td></tr><tr><td>Pinze Graefe extra fini, seghettate (senza denti)</td><td>Fine Science Tools</td><td>11152-10</td><td>Pinze fini senza denti</td></tr><tr><td>Forbici fini - Carburo di tungsteno</td><td>Fine Science Tools</td><td>14568-09</td><td>Forbici per iride</td></tr><tr><td>Scrub chirurgico Betadine con pompa, iodio povidone 7,5%</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>67618-151-17</td><td></td></tr><tr><td>Garza di cotone sterile (4" x 4")Fisher</td> <td>Healthcare</td><td>22-415-469</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione tamponata con fosfato di Dulbecco</td><td>Corning</td><td>21-030-CV</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di penicillina/streptomicina, 100X</td><td>Corning</td><td>30-002-Cl</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano, USP</td><td>Produttore: Piramal, Distributore: McKesson</td><td>2254845</td><td></td></tr><tr><td>Nair Hair Remover</td><td>Nair</td><td>22600-23307</td><td>Crema depilatoria nel testo</td></tr><tr><td>200 Proof Ethanol</td><td>Decon Laboratories</td><td>2705</td><td>Diluito al 70% Soluzione di etanolo</td></tr><tr><td>BioLite 60mm Piatto per coltura tissutale</td><td>Themo-Scientific</td><td>130181</td><td></td></tr><tr><td>Press'n Seal</td><td>Glad</td><td>12587-70441</td><td>Applicato allo stereoscopio</td></tr><tr><td>SZX16 Stereo Microscope</td><td>Olympus</td><td>Illuminatore a fibre ottiche SZX16</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Cole Parmer</td><td>41720-20</td><td></td></tr><tr><td>Tubo autoportante a doppia luce, 23" L Gooseneck</td><td>Cole Parmer</td><td>EW-41720-60</td><td></td></tr><tr><td>Manico per bisturi #3</td><td>Miltex</td><td>Mil-4-7</td><td></td></tr><tr><td>Lama sterile in acciaio al carbonio a coste, dimensione della lama 15</td><td>Bard-Parker</td><td>371115</td><td></td></tr><tr><td>31 1/2 gauge</td><td>Needle ThermoFisher Scientifico</td><td>14-826F</td><td>Becton Dickinson 305106</td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>Corning</td><td>10-017-CV</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Select 100% siero bovino</td><td>Atlas Biologicals</td><td>FS-0500-AD</td><td></td></tr><tr><td>Fibroblasti dermici umani normali</td><td>Lonza</td><td>CC-2511</td><td></td></tr><tr><td>Cellule endoteliali microvascolari adipose umane</td><td>Sciencell Research Laboratories</td><td>7200</td><td></td></tr><tr><td>Lenti chirurgiche (2,5x)</td><td>Orascoptic</td><td>(N/A) Custom Order</td><td></td></tr><tr><td>FGM-2 (Fibroblast Basal Medium con FGM-2 SingleQuots Added)</td><td>Lonza</td><td>CC-3131, CC-4126</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 (Endoteliale Basal Medium with EGM-2 SingleQuots Added)</td><td>Lonza</td><td>CC-3156, CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit per cellule di mammifero</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>L3224</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo anti-citocheratina-18</td><td>Abcam</td><td>ab668</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-topo di capra, Alexa Fluor 633</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-21052</td><td></td></tr><tr><td>IgG anti-coniglio di capra, Alexa Fluor 546</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11010</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Von Willebrand Factor Antibody</td><td>Abcam</td><td>ab6994</td><td></td></tr><tr><td>Albumina, isotiocianato di fluoresceina Coniugato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A9771-50MG</td><td></td></tr><tr><td>Hoescht 33342</td><td>BD Pharmingen</td><td>561908</td><td></td></tr><tr><td>Background Buster</td><td>Innovex Biosciences</td><td>NB306</td><td></td></tr></tbody></table>

microdissection di segmenti di tessuto renale primario e incorporazione con tecnologia romanzo costrutto senza impalcatura

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Trapianto di rene è ora una terapia tradizionale per la malattia renale di stadio finale. Tuttavia, con circa 96.000 persone sulla lista d'attesa e solo un quarto di questi pazienti che hanno raggiunto il trapianto, c'è un disperato bisogno di alternative per quelli con mancanza di organi. Al fine di ridurre le conseguenze dannose di dialisi nonché i costi nel complesso sanitari che sostiene, indagine attiva è in corso in cerca di soluzioni alternative al trapianto d'organo. Impiantabili tessutale renale costrutti cellulari sono un tale approccio fattibile per sostituire la perdita di funzionalità renale. Qui, descritto per la prima volta, è il microdissection dei reni murini per l'isolamento di vivere corticomedullary renale segmenti. Questi segmenti sono capaci di rapida incorporazione all'interno senza impalcatura endoteliale-fibroblasto costrutti che consentono rapidi collegamenti con vasculature host una volta impiantato. Reni di topo adulto sono stati prelevati da donatori viventi, seguiti da stereoscopio microdissection ottenere segmenti renale 200-300 µm di diametro. Più costrutti renale furono fabbricati usando segmenti renale primarie raccolte da un solo rene. Questo metodo viene illustrata una procedura che potrebbe salvare il tessuto funzionale renale da organi che altrimenti sarebbe da scartare.

Il protocollo descritto produce circa 50 segmenti renale per ogni sezione3 mm 2 piramidale del tessuto renale. I segmenti renali che sono stati elaborati e stampati hanno componenti tubolari e glomerulare in diverse proporzioni (Vedi Figura 2). I segmenti intatti sono stati sottoposti ad un test per determinare la redditività dei diversi segmenti una volta ogni 24 ore per tre giorni. Verde fluorescente calceina-AM è presente con attività dell'ester...

Tessutale renale costrutti forniscono una soluzione per la carenza di organi e deleteri effetti della dialisi. Qui, descriviamo un protocollo a micro sezionare murini reni per isolamento di segmenti cortico-midollare. Questi segmenti sono impiantati nei costrutti senza impalcatura cellulare, formando organoids renale.

Microdissection di segmenti di tessuto renale primario e incorporazione con tecnologia romanzo costrutto senza impalcatura

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...

L'obiettivo generale di questa procedura di dissezione microscopica è isolare segmenti discreti di tessuto renale vivente con architettura renale intatta per applicazioni di ingegneria tissutale. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo dell'ingegneria tissutale, ad esempio è possibile raccogliere sterili interi segmenti di tessuto di organi primari isolati ed essere mantenuti in vita in coltura? Il vantaggio principale di questa tecnica è che i segmenti contengono un'architettura renale intatta rispetto all'utilizzo di linee cellulari per ricreare un organo complesso con oltre 26 diversi tipi di cellule.Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia della malattia renale allo stadio terminale perché questi costrutti miglioreranno la filtrazione e possono aiutare i pazienti a non dialisi. Durante l'intervento, indossare un'attrezzatura chirurgica adeguata, tra cui una maschera e un berretto per ridurre al minimo il rischio di contaminazione. Allo stesso modo, fai ogni sforzo per mantenere la sterilità per tutto il tempo.Iniziare i preparativi drappeggiando il tavolo operatorio. Quindi, aprire la confezione degli strumenti autoclavati sui teli s

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Questo protocollo descrive la decellularizzazione dei reni di ratto Sprague Dawley mediante perfusione anterograda di detergenti attraverso il sistema vascolare, producendo matrici extracellulari renali acellulari che fungono da modelli per il ripopolamento con cellule epiteliali renali umane. La ricellularizzazione e l'uso del saggio di perfusione della resazurina per monitorare la crescita vengono eseguiti all'interno di bioreattori di perfusione appositamente progettati.

Ripopolamento cellule epiteliali e preparazione di roditori matrice extracellulare Ponteggi per lo sviluppo del tessuto renale

È stata sviluppata un'innovativa tecnica di biofabbricazione per ingegnerizzare costrutti tridimensionali che assomigliano alle caratteristiche architettoniche, ai componenti e alle proprietà meccaniche dei tessuti in vivo. Questa tecnica presenta un materiale sacrificale di nuova concezione, la gomma BSA, che trasferisce caratteristiche spaziali dettagliate, riproducendo le architetture in vivo di un'ampia varietà di tessuti.

Tridimensionale Tecnologia biomimetica: Novel Biorubber Consente di creare Definito micro e macro scala Architetture in collagene idrogel

L'obiettivo principale di questo protocollo è quello di isolare in modo efficiente culture vitale primaria glomeruli con contaminanti minimale per l'uso in una varietà di applicazioni a valle. Glomeruli isolati mantengono relazioni strutturali tra tipi di componenti delle cellule e possono essere coltivate ex vivo per un breve periodo.

Un metodo efficiente di setacciatura per isolare i Glomeruli intatti dal rene di ratto adulto.

Questo lavoro descrive due metodi per studiare lo sviluppo degli organi, una migliore impostazione dello xenotrapianto sulla membrana corioallantoica (CAM) dagli embrioni aviari che consente la vascolarizzazione di organi embrionali e organoidi coltivati e una nuova direzione z fissa metodo di coltura dell'organo con condizioni sperimentali modificate che consente l'imaging confocale time-lapse ad alta risoluzione.

Ottimizzazione della cultura organoide e organipica renale per la vascolarizzazione, lo sviluppo esteso e l'imaging di microscopia migliorato

Descriviamo un protocollo per la microdisezione laser di sottosezioni del rene umano, tra cui il glomerulus, il tubulo prossimale, l'arto ascendente spesso, il condotto di raccolta e l'interstizio. L'RNA viene quindi isolato dai compartimenti ottenuti e il sequenziamento dell'RNA viene effettuato per determinare i cambiamenti nella firma trascrittamica all'interno di ogni sottoseme.

Applicazione della microdisezione laser per scoprire la trascritomica regionale nel tessuto renale umano

Questo protocollo introduce un metodo per sviluppare un'impalcatura utilizzando reni di ratto decellularizzati. Il protocollo include processi di decellularizzazione e ricellularizzazione per confermare la biodisponibilità. La decellularizzazione viene eseguita utilizzando Tritone X-100 e solfato di dodecil di sodio.

Preparazione di impalcature renali decellularizzate nei ratti

Gli impianti di ingegneria tissutale per la chirurgia ricostruttiva raramente progrediscono oltre gli studi preclinici a causa della laboriosa coltura ex vivo , che include componenti di scaffold complessi e costosi. Qui, presentiamo una procedura in un'unica fase progettata per la diversione urinaria con un'impalcatura tubulare accessibile a base di collagene contenente microinnesti autologhi.

Modello chirurgico per tubi uroteliali di ingegneria tissutale a stadio singolo in minipig

Qui, presentiamo protocolli che descrivono in dettaglio le istruzioni per l'implementazione di colture cellulari 3D utilizzando matrici di collagene e collagene-agarosio in un sistema microfisiologico. Questi protocolli supportano la co-coltura del tubulo prossimale renale e degli sferoidi del carcinoma a cellule renali, simulando condizioni in vivo e consentendo un'indagine avanzata sulle interazioni tra le cellule tumorali del rene.

Co-coltura microfluidica dell'epitelio renale sano e tumorale per modellare la progressione del cancro del rene

Qui, descriviamo i protocolli per ottenere colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane (HRTEC) dalla corteccia renale per sviluppare monostrati e colture tridimensionali su una matrice extracellulare (3D-HRTEC).

Sviluppo di colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali umane in monostrati e condizioni tridimensionali

Presentiamo un protocollo ottimizzato per l'elaborazione di interi reni umani per isolare e coltivare cellule epiteliali del tubulo prossimale renale primario e l'applicazione di queste cellule in una piattaforma microfluidica tridimensionale, microfluidica e microfisiologica per ricapitolare il tubulo prossimale renale.

Isolamento di cellule epiteliali primarie del tubulo prossimale umano e loro utilizzo nella creazione di un modello microfisiologico del tubulo prossimale renale

Impara la microdissezione di reni murini per isolare segmenti cortico-midollari con architettura intatta. Questa tecnica avanzata consente di creare costrutti renali senza impalcatura per applicazioni di ingegneria tissutale.

Microdissection di segmenti di tessuto renale primario e incorporazione con tecnologia romanzo costrutto senza impalcatura

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