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Digestione delle proteine, ultrafiltrazione e cromatografia di esclusione di formato per ottimizz...
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
Protein Digestion, Ultrafiltration, and Size Exclusion Chromatography to Optimize the Isolation of Exosomes from Human Blood Plasma and Serum

Digestione delle proteine, ultrafiltrazione e cromatografia di esclusione di formato per ottimizzare l'isolamento degli esosomi da siero e Plasma sanguigno umano

Full Text
17,337 Views
09:22 min
April 13, 2018

DOI: 10.3791/57467-v

Gustavo Diaz1, Chandler Bridges1, Megan Lucas1, Yong Cheng2, Jeff S. Schorey2, Karen M. Dobos1, Nicole A. Kruh-Garcia1

1Department of Microbiology, Immunology and Pathology,Colorado State University, 2Department of Biological Sciences, Eck Institute for Global Health,University of Notre Dame

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Qui, presentiamo un protocollo per purificare gli esosomi da siero con ridotta co-purificazione non-exosomal di proteine del sangue e del plasma. Il protocollo ottimizzato include ultrafiltrazione, trattamento con proteasi e cromatografia di esclusione di formato. Una maggiore purificazione di esosomi analisi a valle di vantaggi, tra cui più accurata quantificazione delle vescicole e caratterizzazione proteomica.

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di purificare le vescicole dal sangue riducendo al contempo le proteine e i complessi co-purificanti che possono interferire con l'analisi a valle, tra cui il tracciamento delle nanoparticelle e la proteomica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave come quali sono i cambiamenti proteomici nel siero o nelle vescicole plasmatiche durante lo stato di malattia rispetto a uno stato sano. Il vantaggio principale di questa tecnica è la maggiore precisione nell'enumerazione delle vescicole.

Nella rimozione di abbondanti contaminanti non vescicolari, aumentiamo l'identificazione di proteine a bassa abbondanza e i potenziali biomarcatori della malattia. Le implicazioni di questo metodo si estendono alla scoperta di nuovi biomarcatori diagnostici. Consente una determinazione più accurata della composizione proteomica delle vescicole extracellulari in matrici complesse, come il sangue.

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Biochimica problema 134 esosomi dimensione esclusione cromatografia ultrafiltrazione Nanoparticle Tracking Analysis Biomarker proteomica

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