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DOI: 10.3791/57467-v
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Qui, presentiamo un protocollo per purificare gli esosomi da siero con ridotta co-purificazione non-exosomal di proteine del sangue e del plasma. Il protocollo ottimizzato include ultrafiltrazione, trattamento con proteasi e cromatografia di esclusione di formato. Una maggiore purificazione di esosomi analisi a valle di vantaggi, tra cui più accurata quantificazione delle vescicole e caratterizzazione proteomica.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di purificare le vescicole dal sangue riducendo al contempo le proteine e i complessi co-purificanti che possono interferire con l'analisi a valle, tra cui il tracciamento delle nanoparticelle e la proteomica. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave come quali sono i cambiamenti proteomici nel siero o nelle vescicole plasmatiche durante lo stato di malattia rispetto a uno stato sano. Il vantaggio principale di questa tecnica è la maggiore precisione nell'enumerazione delle vescicole.
Nella rimozione di abbondanti contaminanti non vescicolari, aumentiamo l'identificazione di proteine a bassa abbondanza e i potenziali biomarcatori della malattia. Le implicazioni di questo metodo si estendono alla scoperta di nuovi biomarcatori diagnostici. Consente una determinazione più accurata della composizione proteomica delle vescicole extracellulari in matrici complesse, come il sangue.
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