Name: Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6 (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-07-12T13:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 20 s
Description: Scopri il modello di colostomia distale murina per studiare la colite di diversione nei topi C57BL/6. Questo metodo riproduce le caratteristiche istologiche umane senza richiedere animali geneticamente modificati.

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Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dall'autorità di governo veterinaria (Landesamt für Landwirtschaft, Lebensmittelsicherheit und Fischerei Mecklenburg-Vorpommern, (LALLF M-V)).
1. cura preoperatoria e la preparazione dell'animale
<ol><li>All'arrivo nella struttura degli animali, animali (C57Bl/6) si divide in gruppi di dimensioni simili, ogni gruppo della gabbia insieme e mantenere gruppi costante durante gli esperimenti. Nota: Utilizzare animali dello stesso sesso. I risultati descritti sono stati ottenuti con topi maschi. Nota: Se vengono utilizzati gli animali maschii, gruppi gabbia insieme a partire da quando sono 7 settimane di età in modo che possa essere stabilita una gerarchia, minimizzando così il rischio di comportamento aggressivo durante gli esperimenti.</li>
	<li>Almeno una settimana prima dell'intervento chirurgico, passare a un'ad alta energia (> 14 MJ/kg) e ad alta percentuale proteica (> 20%) alimentazione contenente tutti gli oligoelementi essenziali e vitamine (per informazioni dettagliate, vedere elenco dei materiali). Nota: Assicurare tutti i topi pesare almeno 25 g quando l'ambulatorio è effettuato.</li>
	<li>Indurre l'anestesia e analgesia tramite l'iniezione intraperitoneale di ketamina (87 mg/kg i.p.) e xilazina cloridrato (13 mg/kg i.p.). Attendere fino a quando il mouse tollera lo stimolo meccanico, per esempio punta passo, senza risposta motoria.</li>
	<li>Fissare il mouse narcotizzato con nastri in posizione supina su un sottofondo di calore posizionato presso il banco di funzionamento, garantendo stabile posizionamento durante il funzionamento ed evitare un'enorme perdita di calore corporeo. Nota: Il sottoposto di calore deve avere una temperatura di 36 ° C a 40 ° C; la temperatura ambiente di funzionamento dovrebbe essere 21 ° C.</li>
</ol>2. operazione distale colostomia
<ol><li>Radersi i capelli addominali. Prima di iniziare l'intervento chirurgico, disinfettare il campo di funzionamento tre volte utilizzando alcol 70% e un iodophor. Drappo il campo di funzionamento per garantire condizioni di asepsi.</li>
	<li>Per eseguire una laparotomia mediana di 15 mm, incidendo i muscoli addominali ed il peritoneum lungo la linea alba, riducendo così al minimo la perdita di sangue.</li>
	<li>Utilizzare due DeBakey atraumatica, estrarre con cautela l'intestino cieco, ileo terminale e ascendente e colon trasverso dalla cavità peritoneale. Nota: Fare attenzione a limitare rigorosamente la manipolazione meccanica dell'intestino per evitare lesioni alle strutture mesenteriche.</li>
	<li>Identificare il Polo cecal, il colon ascendente e piccolo intestino (figure 1a e 1b). Nota: La corretta identificazione del colon ascendente è fondamentale per il corretto posizionamento del colostomy. Nei casi in cui l'anatomia della regione ileocecal è ambigua, la presenza di placche di Peyer identifica l'intestino tenue e la presenza di feci formate caratterizza il colon.</li>
	<li>Usare un righello per determinare la posizione del colostomy futuri. Esso va posizionata a 20 mm distale alla valvola ileocecal per una colostomia distale.</li>
	<li>Praticare una seconda incisione di 3 mm nella parete addominale nel quadrante superiore destro. Tirare il segmento del colon precedentemente identificato attraverso questa incisione per formare un anello, facendo attenzione a non distorcere il ciclo.</li>
	<li>Passare accuratamente una cannula 22 calibri flessibili i.v. attraverso il mesocolon. Fare attenzione a non per danneggiare le strutture vascolari mesenteriche.</li>
	<li>Restituire l'intestino nella cavità peritoneale.</li>
	<li>Difficoltà entrambe le estremità del tubo flessibile alla cute tramite semplici punti di sutura e una sutura riassorbibile (ad es., polyglactin 910 o polyfil 4-0 1/2 c).</li>
	<li>Prima di chiudere la laparotomia, eseguire la rianimazione fluida usando un'iniezione intraperitoneale di 0,5 mL di soluzione fisiologica 0,9%.</li>
	<li>Chiudere il peritoneo e lo strato del muscolo con una sutura continua utilizzando una sutura riassorbibile (ad es., polyglactin 910 o polyfil 4-0 1/2 c). Chiudere la pelle con una sutura continua utilizzando una sutura riassorbibile (ad es., polyglactin 910 o polyfil 4-0 1 / 2c).</li>
	<li>Aprire il ciclo colon esteriorizzato eseguendo un transection subtotale utilizzando una forbice bene. Evitare tutte le lesioni al mesentery. Transetto non colon completamente.</li>
	<li>Difficoltà ogni apertura di colostomia con tre punti di pieno-spessore singoli al peritoneo e della pelle utilizzando un monofilo, suturare assorbibile (ad es., polidioxanone o monofilo 6-0 3/8s). Ciclo afferente, che è un colostomy dell'estremità-funzionale, e il ciclo efferente, che è una fistola mucosa, sono chiaramente separati a questo punto (Figura 1C). Nota: Tempo di funzionamento deve essere meno di 20 minuti per limitare le perdite di fluido e termiche.</li>
	<li>Dopo chirurgia, di finitura disinfettare strumenti utilizzando una soluzione di disinfezione senza aldeide in bagno ad ultrasuoni secondo le istruzioni del produttore.</li>
</ol>3. sham operazione (Colotomy)
<ol><li>Eseguire i passaggi 1.1. attraverso 2.4.</li>
	<li>Usare un righello per determinare la posizione di futuri colotomy. Il colotomy deve essere posizionato alla stessa distanza dalla valvola ileocecal come la colostomia nel gruppo sperimentale.</li>
	<li>Aprire i due punti almeno due terzi utilizzando forbici bene la sua circonferenza.</li>
	<li>Nelle vicinanze il colotomy con un singolo strato, pieno-spessore interrotta sutura utilizzando un monofilo, suturare assorbibile (ad es., polidioxanone, monofilo 6-0 3/8s). Nota: Tempo di funzionamento deve essere meno di 20 minuti per un chirurgo sperimentato, limitando le perdite di fluido e termiche.</li>
	<li>Eseguire i passaggi 2.10. , 2.11. e 2.14.</li>
</ol>4. postoperatoria
<ol><li>Restituire gli animali nelle loro gabbie. Offrono un'atmosfera ben temperata di 37 ° C (ad es., con una lampada a raggi infrarossi) fino a quando i topi sono completamente svegli. Quindi, tenere topi in un ambiente di temperatura e umidità regolata (21 ° C, umidità relativa 30% ± 10%). Consentire il libero accesso a cibo e acqua potabile. Per facilitare l'assorbimento fluido, fornire ulteriori mangimi impregnati d'acqua.</li>
	<li>Iniziare l'analgesia postoperatoria iniettando 0,1 mg/kg corpo peso buprenorfina s.c. quando animali mostrano risposta alla stimolazione meccanica. Fare attenzione a evitare la depressione respiratoria.</li>
	<li>Supplemento acqua potabile con 1 mg/mL tramadol per analgesia continua durante la prima settimana postoperatoria.</li>
	<li>Per compensare la diminuita assunzione di liquidi causa di ridotta mobilità, fornire un solido Pad bere nella gabbia durante la prima settimana postoperatoria.</li>
	<li>Pesare gli animali e comportamento animale punteggio al giorno durante la prima settimana, ogni due giorni durante il resto del primo mese e ogni terzo giorno durante il secondo mese utilizzando il Punteggio di severità di malattia descritto in Kleinwort et al. 6.</li>
</ol>

<ol><li>Glotzer, D. J., Glick, M. E., Goldman, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proctitis+and+colitis+following+diversion+of+the+fecal+stream%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Proctitis and colitis following diversion of the fecal stream.</a> Gastroenterology. 80, 438-441 (1981).</li>
<li>Morson, B., Dawson, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMorson%2C+B+%22Gastrointestinal+Pathology%22">Gastrointestinal Pathology</a>. , Blackwell Scientific Publications. London. (1972).</li>
<li>Whelan, R. L., Abramson, D., Kim, D. S., Hashmi, H. F. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8153859">Diversion colitis. A prospective study.</a> Surg Endosc. 8, 19-24 (1994).</li>
<li>Haas, P. A., Fox, T. A., Szilagy, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endoscopic+examination+of+the+colon+and+rectum+distal+to+a+colostomy%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Endoscopic examination of the colon and rectum distal to a colostomy.</a> Am J Gastroenterol. 85, 850-854 (1990).</li>
<li>Valatas, V., Bamias, G., Kolios, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+colitis+models%3A+Insights+into+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease+and+translational+issues%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Experimental colitis models: Insights into the pathogenesis of inflammatory bowel disease and translational issues.</a> Eur J Pharmacol. 759, 253-264 (2015).</li>
<li>Kleinwort, A., Döring, P., Hackbarth, C., Heidecke, C. D., Schulze, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deviation+of+the+Fecal+Stream+in+Colonic+Bowel+Segments+Results+in+Increased+Numbers+of+Isolated+Lymphoid+Follicles+in+the+Submucosal+Compartment+in+a+Novel+Murine+Model+of+Diversion+Colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Res+Int%22%5BJournal%5D)">Deviation of the Fecal Stream in Colonic Bowel Segments Results in Increased Numbers of Isolated Lymphoid Follicles in the Submucosal Compartment in a Novel Murine Model of Diversion Colitis.</a> Biomed Res Int. 2017, 13(2017).</li>
<li>Tangjarukij, C., Navasumrit, P., Zelikoff, J. T., Ruchirawat, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+pyridoxine+deficiency+and+supplementation+on+hematological+profiles%2C+lymphocyte+function%2C+and+hepatic+cytochrome+P450+in+B6C3F1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunotoxicol%22%5BJournal%5D)">The effects of pyridoxine deficiency and supplementation on hematological profiles, lymphocyte function, and hepatic cytochrome P450 in B6C3F1 mice.</a> J Immunotoxicol. 6, 147-160 (2009).</li>
<li>Soave, O., Brand, C. D. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1954740">Coprophagy in animals: a review.</a> Cornell Vet. 81, 357-364 (1991).</li>
<li>Ebino, K. Y., Yoshinaga, K., Suwa, T., Kuwabara, Y., Takahashi, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+prevention+of+coprophagy+on+pregnant+mice--is+coprophagy+beneficial+on+a+balanced+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Effects of prevention of coprophagy on pregnant mice--is coprophagy beneficial on a balanced diet.</a> Jikken Dobutsu. 38, 245-252 (1989).</li>
<li>Babickova, J., Tothova, L., Lengyelova, E., Bartonova, A., Hodosy, J., Gardlik, R., Celec, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sex+Differences+in+Experimentally+Induced+Colitis+in+Mice%3A+a+Role+for+Estrogens%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation%22%5BJournal%5D)">Sex Differences in Experimentally Induced Colitis in Mice: a Role for Estrogens.</a> Inflammation. 38, 1996-2006 (2015).</li>
<li>Lee, S. M., Kim, N., Son, H. J., Park, J. H., Nam, R. H., Ham, M. H., Choi, D., Sohn, S. H., Shin, E., Hwang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Sex+on+the+Azoxymethane%2FDextran+Sulfate+Sodium-treated+Mice+Model+of+Colon+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cancer+Prev%22%5BJournal%5D)">The Effect of Sex on the Azoxymethane/Dextran Sulfate Sodium-treated Mice Model of Colon Cancer.</a> J Cancer Prev. 21, 271-278 (2016).</li>
<li>Angele, M. K., Pratschke, S., Hubbard, W. J., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gender+differences+in+sepsis%3A+cardiovascular+and+immunological+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22Virulence%22%5BJournal%5D)">Gender differences in sepsis: cardiovascular and immunological aspects.</a> Virulence. 5, 12-19 (2013).</li>
<li>Brown, R. Z. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2307/1943592/abstract">Social Behaviour, reproduction, and population changes in the house mouse (Mus musculus L).</a> Eccological Monographs. 23, 788-795 (1953).</li>
<li>Poole, T. B., Morgan, H. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+aggressive+behaviour+betweeen+male+mice+%28Mus+musculus+L.%29+in+colonies+of+different+sizes%5BTitle%5D)+AND+%22Animal+Behaviour%22%5BJournal%5D)">Differences in aggressive behaviour betweeen male mice (Mus musculus L.) in colonies of different sizes.</a> Animal Behaviour. 21, 788-795 (1973).</li>
<li>Pasquarelli, N., Voehringer, P., Henke, J., Ferger, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+a+change+in+housing+conditions+on+body+weight%2C+behavior+and+brain+neurotransmitters+in+male+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of a change in housing conditions on body weight, behavior and brain neurotransmitters in male C57BL/6J mice.</a> Behav Brain Res. 333, 35-42 (2017).</li>
<li>Langgartner, D., Foertsch, S., Fuchsl, A. M., Reber, S. O. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27788633">Light and water are not simple conditions: fine tuning of animal housing in male C57BL/6 mice.</a> Stress. 20, 10-18 (2017).</li>
<li>Nicholson, A., Malcolm, R. D., Russ, P. L., Cough, K., Touma, C., Palme, R., Wiles, M. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19930822">The response of C57BL/6J and BALB/cJ mice to increased housing density.</a> J Am Assoc Lab Anim Sci. 48, 740-753 (2009).</li>
<li>Buchler, G., Wos-Oxley, M. L., Smoczek, A., Zschemisch, N. H., Neumann, D., Pieper, D. H., Hedrich, H. J., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strain-specific+colitis+susceptibility+in+IL10-deficient+mice+depends+on+complex+gut+microbiota-host+interactions%5BTitle%5D)+AND+%22Inflamm+Bowel+Dis%22%5BJournal%5D)">Strain-specific colitis susceptibility in IL10-deficient mice depends on complex gut microbiota-host interactions.</a> Inflamm Bowel Dis. 18, 943-954 (2012).</li>
<li>Nakanishi, M., Tazawa, H., Tsuchiya, N., Sugimura, T., Tanaka, T., Nakagama, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+strain+differences+in+inflammatory+responses+of+colonic+mucosa+induced+by+dextran+sulfate+sodium+cause+differential+susceptibility+to+PhIP-induced+large+bowel+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Sci%22%5BJournal%5D)">Mouse strain differences in inflammatory responses of colonic mucosa induced by dextran sulfate sodium cause differential susceptibility to PhIP-induced large bowel carcinogenesis.</a> Cancer Sci. 98, 1157-1163 (2007).</li>
<li>Mahler, M., Bristol, I. J., Leiter, E. H., Workman, A. E., Birkenmeier, E. H., Elson, C. O., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, 544-551 (1998).</li>
<li>Mekada, K., Abe, K., Murakami, A., Nakamura, S., Nakata, H., Moriwaki, K., Obata, Y., Yoshiki, A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19448337">Genetic differences among C57BL/6 substrains.</a> Exp Anim. 58, 141-149 (2009).</li>
<li>Sellers, R. S., Clifford, C. B., Treuting, P. M., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+variation+between+inbred+laboratory+mouse+strains%3A+points+to+consider+in+phenotyping+genetically+immunomodified+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological variation between inbred laboratory mouse strains: points to consider in phenotyping genetically immunomodified mice.</a> Vet Pathol. 49, 32-43 (2012).</li>
<li>Mills, C. D., Kincaid, K., Alt, J. M., Heilman, M. J., Hill, A. M. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10843666">M-1/M-2 macrophages and the Th1/Th2 paradigm.</a> J Immunol. 164, 6166-6173 (2000).</li>
</ol>

Tutti gli autori dichiarano di non avere nessun interessi concorrenti.

Il modello murino di DC ha presentato in questo protocollo affidabile riproduce le caratteristiche istopatologiche del DC umana (ad es., lo sviluppo del de novo di follicoli linfoidi nel submucosa dei segmenti dell'intestino infiammato, cripta accorciamento e riduzioni in numeri delle cellule di calice). Oltre a questo vantaggio, questo modello è indotta da un fattore scatenante molto simile e presenta con un decorso clinico di moderata gravità lieve, come è il caso in esseri umani più colpiti.
<p c...

Negli ultimi anni, un numero sostanza di colite non infettive entità diverse da malattie intestinali infiammatorie classica (IBDs; i. e., ulcerosa o colite di Crohn) sono stati caratterizzati clinicamente e histopathologically in esseri umani. I meccanismi fisiopatologici che portano allo sviluppo di queste forme di colite completamente non sono capiti parzialmente perché appropriati modelli animali sono scarse. Colite di diversione è un'entità recentemente descritta. Anche se il termine è stato coniato nel 1980 da Glotzer1, la prima descrizione di un simile fenotipo è stato dato nel 1972 da Morson2. La malattia si sviluppa in 50%-91% dei pazienti con deviazione enterostomia e la sua intensità clinica varia3,4. Data l'incidenza annuale di circa 120.000 pazienti colostomia in Stati Uniti d'America, questa entità di malattia costituisce un problema sanitario importante.
L'obiettivo generale di sviluppare questo protocollo era di fornire un modello murino di DC che si basa su un trigger di colite simile a quello veduto in DC umana e che riproduce le caratteristiche istopatologiche primarie della malattia umana. A differenza di altri modelli di colite murina, induzione di colite nel nostro modello non necessita di animali geneticamente modificati (per esempio, topi transgenici IL-7, N-caderina dominante negativi topi o topi TGFβ- / - ), l'applicazione di chimicamente irritante sostanze (ad es., colite indotta del sodio (DSS) - colite indotta, o acido solfonico del trinitrobenzene (TNBS) - solfato di destrano), o il trasferimento di popolazioni di cellule specifiche in topi carenti immuni (come il trasferimentoad alta CD45RB modello di colite) (per una rassegna, Vedi5). A differenza di altri modelli, il sistema immunitario intatto del nostro modello DC consente la valutazione del meccanismo immunologico coinvolti nello sviluppo del DC. La limitazione della infiammazione delle mucose al segmento di intestino escluso consente la valutazione della sua ripercussione su immunità mucosale in altre parti del tratto gastrointestinale, sull'omeostasi immunitaria in altri scompartimenti immuni del tratto intestinale (per esempio. , Patch di Peyer ed i linfonodi di Intestinum) e sull'omeostasi immunitaria dell'intero organismo. Infine, il nostro modello costituisce uno strumento appropriato per indagare i meccanismi di controllo stimoli infiammatori locali provenienti da cambiamenti nell'ambiente locale normale per entrambi il microbioma locale come pure gli antigeni alimentari.

<table><tbody><tr><td>Materiale operativo</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>sottofondo termico, 6 watt</td><td>ThermoLux, Witte + Sutor GmbH</td><td>461265</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo 70% (con metiletilchetone)</td><td>Pharmacie dell'Ospedale Universitario Greifswald</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Applicatori in legno, testina di cotone piccola unilaterale, bastoncino di legno, lunghezza 150 mm</td><td>Centramed GmbH, Germania</td><td>8308370</td><td>per la disinfezione del campo operatorio</td></tr><tr><td>Forbice</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BC064R</td><td></td></tr><tr><td>Pinza DeBakey atraumatica</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>OC021R</td><td></td></tr><tr><td>Porta aghi</td><td>Aesculap (BRAUN)</td><td>BM012R</td><td></td></tr><tr><td>Vasofix Safety i.v. cannula 22G</td><td>Braun Melsungen AG, Germania</td><td>4268091S-01</td><td></td></tr><tr><td>VICRYL Plus 4-0 viola intrecciato; V-5 17 m 1/2c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td></td><td></td>VCP994H</tr><tr><td>PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm</td><td>ETHICON, Inc.</td><td>Z991H</td><td></td></tr><tr><td>BD Plastipak 1 mL (Siringhe con ago con interno sterile)</td><td>BD Medical</td><td>305501</td><td></td></tr><tr><td>Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin)</td><td>ANTISEPTICA, Germany</td><td>18824-01</td><td>disinfezione degli strumenti chirurgici in bagno ad ultrasuoni</td></tr><tr><td>Farmaci</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ketamina 10%, 100 mg/mL (ketamina cloridrato)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>9089.01.00</td><td>87 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>Xylasel, 20 mg/mL (xilazina cloridrato)</td><td>selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH</td><td>400300.00.00</td><td>13 mg/kg i.p.</td></tr><tr><td>NaCl 0,9%</td><td>Braun Melsungen AG, Germania</td><td>6697366.00.00</td><td></td></tr><tr><td>Buprenovet 0,3 mg/mL (buprenorfina)</td><td>Bayer, Germania</td><td>PZN: 01498870</td><td>0,1 mg/kg s.c.</td></tr><tr><td>Tramal Gocce, 100 mg/mL (tramadolo cloridrato)</td><td>Gr&uuml; nenthal GmbH, Germania</td><td>10116838</td><td>1 mg/mL di acqua potabile</td></tr><tr><td>Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone)&nbsp;</td><td>Cephasaar GmbH, Germania</td><td>PZN: 08844252</td><td>25 mg/kg di peso corporeo i.p.</em</td></tr><tr><td>>metronidazolo 5 mg/mL</td><td>Braun Melsungen AG, Germania</td><td>PZN: 05543515</td><td>12,5 mg/kg di peso corporeo i.p.</td></tr><tr><td>Food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ssniff M-Z Ereich</td><td>ssniff, Germania</td><td>&nbsp; V1184-3</td><td></td></tr><tr><td>Bevanda solida Dehyprev Vit BIO, buste</td><td>TripleATrading, Paesi Bassi</td><td>SDSHPV-75</td><td></td></tr><tr><td>Attrezzatura</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon Eclipse Ci-L</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germania</td><td></td><td>microscopia ottica</td></tr><tr><td>VetScan HM 5&nbsp;</td><td>Abaxis, USA</td><td>770-9000</td><td>Analizzatore ematologico veterinario di 50 & micro; l EDTA-sangue venoso</td></tr><tr><td>Bandelin SONOREX (Bagno ad ultrasuoni)</td><td>Bandelin electronics, Germania</td><td>RK 100 H</td><td>disinfezione degli strumenti chirurgici</td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NIS-Element BR4 software</td><td>Nikon Instruments Europe BV, Germania</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prism Versione 6</td><td>GraphPad Software, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi c57bl/6

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Colite di diversione (DC) è una condizione clinica frequente che si verificano in pazienti con segmenti intestinali esclusi dal flusso a seguito di un'enterostomia diversione fecale. L'eziologia di questa malattia rimane mal definita, ma sembra differire da quello di malattie intestinali infiammatorie classica come il morbo di Crohn e colite ulcerosa. Ricerca finalizzata a decifrare i meccanismi fisiopatologici che portano allo sviluppo di questa malattia è stata gravemente ostacolata dalla mancanza di un appropriato modello murino. Questo protocollo genera un modello murino di DC che facilita lo studio del ruolo del sistema immunitario e la sua interazione con il microbioma nello sviluppo della DC. In questo modello utilizzando animali C57BL/6, parti distali del colon sono esclusi dal flusso fecale creando un colostomy distale, innescare lo sviluppo di delicato per moderare l'infiammazione nei segmenti intestinali esclusi e riproducendo le lesioni di segno distintivo dell'essere umano DC con una risposta infiammatoria sistemica moderata. Contrariamente al modello di ratto, un gran numero di modelli murini geneticamente modificati sullo sfondo C57BL/6 è disponibile. La combinazione di questi animali con il nostro modello consente i possibili ruoli di diverse citochine, chemochine o recettori di molecole bioattive (ad es., interleuchina (IL) -17; IL-10, chemokine CXCL13, recettori per le chemochine CXCR5 e CCR7 e il recettore della sfingosina-1-fosfato 4) deve essere valutata nella patogenesi della DC. La disponibilità di diversi ceppi di topi Congenici sullo sfondo C57BL/6 facilita in gran parte gli esperimenti di trasferimento per stabilire i ruoli dei tipi cellulari coinvolti nell'eziologia della DC. Infine, il modello offre l'opportunità di valutare le influenze di interventi locali (ad esempio, modifica del microbioma locale o terapia antinfiammatoria locale) su immunità mucosale nei segmenti intestinali affetti e non affetti e il su omeostasi immunitaria sistemica.

Chirurgia è ben tollerato sia nei gruppi di sham (colotomy) e sperimentale (colostomia). Mortalità perioperatoria non deve superare il 10% quando la chirurgia e perioperative management viene eseguita correttamente. Nella prima settimana postoperatoria, perdita di peso significativa è visto in entrambi i gruppi sperimentali e sham. Gli animali del gruppo finto raggiungono loro nadir di peso solitamente verso il quarto giorno postoperatorio, ma si verifica un giorno più tardi nel gruppo sp...

Murino colostomia distale fornisce un modello murino per colite di diversione umana, una colite linfocitaria prevalentemente nel segmento del colon escluso dal flusso fecale.

Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

L'obiettivo generale di questo protocollo è quello di facilitare lo studio del ruolo del sistema immunitario e della sua interazione con il microbioma nello sviluppo della colite da dirottamento. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave riguardanti la colite da diversione che si verifica in entrambi i segmenti esclusi dal flusso fecale e colpisce fino al 90% dei pazienti con enterostomia deviante. Il vantaggio principale di questa tecnica è che non richiede animali geneticamente modificati, l'uso di sostanze chimicamente irritanti o il trasferimento di specifiche popolazioni cellulari a topi immunodeficienti per indurre la colite.All'arrivo alla struttura per animali, dividi i topi in gruppi di dimensioni simili. Metti insieme ogni gruppo e mantieni i gruppi costanti durante gli esperimenti. Almeno una settimana prima dell'intervento, passare a un mangime ad alto contenuto energetico e proteico contenente tutti gli oligoelementi e le vitamine essenziali.Per prepararsi all'intervento chirurgico dopo aver anestetizzato l'animale secondo il protocollo di testo, utilizzare del nastro adesivo per stabilizzare l'animale in posizione supina su un termoforo per evitare la perdita di calore corporeo. Quindi, verificare che il mouse tolleri la stimolazione meccanica, ad esempio il pizzicamento delle dita dei piedi senza una risposta motoria.Prima di iniziare l'intervento chirurgico, disinfettare il campo operatorio tre volte utilizzando alcol al 70% e una virgola 4. Coprire il campo operatorio per garantire condizioni asettiche. Eseguire una laparotomia media di 15 mm incidendo i muscoli addominali e il peritoneo lungo la linea alba, riducendo così al minimo la perdita di sangue.Quindi, utilizzando due pinze atraumatiche Debakey, estrarre con cautela il cieco, l'ileo terminale e il colon discendente e trasverso dalla cavità peritoneale. Fare attenzione a limitare la manipolazione meccanica dell'intestino per evitare lesioni alle strutture mesenteriche e per mantenere la profusione ottimale dell'intestino. Successivamente, identifica il polo cecale, il colon ascendente e l'intestino tenue.Se l'anatomia della regione ileocecale è ambigua, la presenza di chiazze di Peyer identifica l'intestino tenue e la presenza di forme ature caratterizza il colon. Usa un righello per determinare la posizione della futura colostomia. Dovrebbe essere posizionato a 20 mm distalmente dalla valvola ileocecale per una colostomia distale.Praticare una seconda incisione di 3 mm nella parete addominale nel quadrante in alto a destra. Quindi, tirare il segmento del colon precedentemente identificato attraverso questa incisione per formare un anello, facendo attenzione a non distorcere il ciclo. Passare con cautela una cannula flessibile per via endovenosa calibro 22 attraverso il mesocolon, facendo attenzione a non danneggiare le strutture vascolari mesenteriche.Quindi, riporta l'intestino nella cavità peritoneale. Utilizzando semplici punti di sutura e una sutura riassorbibile, fissare entrambe le estremità del tubo flessibile alla pelle. Prima di chiudere la laparotomia, eseguire la rianimazione con fluidi utilizzando un'iniezione intraperitoneale di 0,5 ml di soluzione fisiologica allo 0,9%.Chiudere il peritoneo e lo strato muscolare con una sutura continua riassorbibile. Quindi, chiudi la pelle in modo simile. Utilizzando una forbice fine, aprire l'ansa del colon esteriorizzata eseguendo una transezione subtotale.Evitare tutte le lesioni al mesentere e non sezionare completamente il colon. Con una sutura assorbibile monofil, fissare ogni apertura della colostomia utilizzando tre punti singoli a tutto spessore al peritoneo e alla pelle. L'ansa afferente, che è una colostomia terminale funzionale, e l'ansa efferente, che è una fistola di muco, sono chiaramente separati a questo punto.Per eseguire una colotomia, dopo aver identificato il polo cepale, il colon ascendente e l'intestino tenue come dimostrato per la colostomia distale, utilizzare un righello per determinare la futura posizione della colotomia che dovrebbe essere posizionata alla stessa distanza dalla valvola ileocecale della colostomia. Usando le forbici sottili, apri il colon almeno due terzi della sua circonferenza. Utilizzando una sutura monofilo assorbibile, chiudere la colotomia con una sutura interrotta a tutto spessore prima di eseguire la rianimazione con fluidi e la chiusura del peritoneo e della cute come prima.Dopo la procedura, rimetti gli animali nelle loro gabbie e mettili sotto una lampada a infrarossi a 37 gradi Celsius fino a quando non sono completamente svegli prima di rimetterli in un ambiente a temperatura e umidità controllate. Quando gli animali mostrano una risposta alla stimolazione meccanica, iniziare l'analgesia postoperatoria, iniettando 0,1 mg per kg di peso corporeo, buprenorfina SC. Controllare attentamente la presenza di segni di depressione respiratoria. Integrare l'acqua potabile con 1 mg per ml di tramadolo per continuare l'analgesia durante la prima settimana postoperatoria.Per compensare la diminuzione dell'assunzione di liquidi dovuta alla ridotta mobilità, fornire un assorbente solido nella gabbia durante la prima settimana postoperatoria. Infine, pesa gli animali e valuta il comportamento degli animali ogni giorno durante la prima settimana, ogni due giorni durante il resto del primo mese e ogni terzo giorno durante il secondo mese. La chirurgia è ben tollerata sia nel gruppo sperimentale che in quello sham.La perdita di peso è più pronunciata nel gruppo sperimentale, raggiungendo il 21,7% del peso corporeo iniziale. Al contrario, gli animali fittizi perdono il 10,8% del loro peso corporeo iniziale. La mortalità totale durante i primi 60 giorni dopo l'intervento è di circa il 40% nel gruppo colostomia e di circa il 10% nel gruppo sham.La maggior parte dei decessi si è verificata durante la prima settimana postoperatoria, con le cause di morte mostrate in questa figura. La colostomia distale nei topi provoca lo sviluppo di colite prevalentemente linfocitica, riproducendo le caratteristiche istologiche distintive della DC umana. La lunghezza della cripta è significativamente ridotta nei segmenti intestinali esclusi e raggiunge la significatività statistica dopo 14 giorni di diversione fecale. La lunghezza della cripta calice-cellulica si riduce dopo 30 giorni nei segmenti intestinali esclusi.Anche il numero assoluto di cellule caliciformi è significativamente ridotto nelle cripte nel segmento intestinale escluso dopo 14 giorni postoperatori. La lesione caratteristica della DC, lo sviluppo di follicoli linfoidi nella mucosa richiede una durata più lunga della deviazione delle feci. Sebbene si possa osservare un aumento del numero dei follicoli linfoidi già a due settimane, le differenze diventano significative dopo due mesi.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire una colostomia distale murina. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in meno di 20 minuti se eseguita correttamente. Questo modello può essere combinato con altri modelli geneticamente modificati o esperimenti di trasferimento in ceppi di topi congenici, al fine di affrontare il ruolo dei mediatori infiammatori di specifiche popolazioni cellulari e la patogenesi della colite da diversione.

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Destrano sodio solfato (DSS) somministrata in acqua potabile è un consolidato modello murino lesioni infiammatorie di colite acuta. Questo protocollo descrive il metodo per il trattamento DSS e la preparazione dei tessuti.

Colite Modeling murino utilizzando destrano sodio solfato (DSS)

Dimostriamo un protocollo in cui somministrazione del azoxymethane agente genotossico (AOM) seguito da tre cicli di pro-infiammatoria agente destrano solfato di sodio (DSS) rapidamente e genera costantemente tumori del colon in topi con somiglianze morfologiche e molecolari a quelli osservati negli colite umana cancro-associata.

Modellazione Colite-Associated Cancro con azoxymethane (OMA) e sodio solfato destrano (DSS)

In questo video, descriviamo una procedura chirurgica per generare un'ansa del colon prossimale di topo o un segmento pcLoop seguita da un'iniezione intraluminale di marcatori fluorescenti nel segmento per studiare la permeabilità epiteliale intestinale.

Generazione di un modello di ansa del colon prossimale di topo: una procedura chirurgica per generare un'ansa del colon prossimale e misurare la permeabilità intestinale rilevando marcatori fluorescenti nel siero dopo l'iniezione intraluminale

Questo video dimostra una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da sostanze chimiche, una malattia infiammatoria intestinale. Al topo è consentito consumare una soluzione di destrano solfato di sodio (DSS) per una durata adeguata. Dopo il consumo, il DSS danneggia il muco e la barriera dello strato epiteliale nel colon, consentendo ai microbi intestinali di entrare nel tessuto sottostante, dove vengono percepiti dalle cellule immunitarie residenti per mediare una risposta...

Una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da destrano solfato di sodio

Citrobacter infezione rodentium fornisce un valido modello per studiare le infezioni batteriche intestinali così come la risposta immunitaria e colite nei topi. Questo protocollo descrive la misura di integrità della barriera, il carico patogeno e danno istologico che permette per la caratterizzazione completa dei contributi patogeni e di accoglienza per murino colite infettiva.

Il<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: Studiare Contributi degli agenti patogeni e Host alla colite infettiva

Negli ultimi anni, endoscopi di nuova generazione sono emersi come importanti ausili di ricerca diagnostici per la valutazione colite murina e tumori colorettali. Presentiamo qui un protocollo dettagliato per la valutazione endoscopica di infiammazione e tumori colorettali nei topi, nonché un sistema di punteggio romanzo che utilizza gli identificatori decimali per documentare la gravità endoscopica di colite e tumori colorettali.

La colonscopia flessibile in topi per valutare la gravità della colite e colon-retto Tumori Utilizzo di un sistema Validated endoscopica Scoring

Viene presentato un protocollo per la creazione di un modello di topi geneticamente modificato del cancro del colon-retto mediante infezione adenocarica segmentale e la sua sorveglianza mediante colonscopia ad alta risoluzione.

Un modello di mouse geneticamente modificato del cancro colorettale sporadico

Ostruzioni intestinali sono un blocco parziale o totale dell'intestino che può causare dolore addominale, nausea, vomito e impedendo il passaggio delle feci. Questa procedura per la creazione di intestinale parziale ha pilastri in topi è affidabile a studiare i meccanismi alla base di crescita delle cellule patologiche e morte nell'intestino.

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Perdita anastomotic o ripartizione dopo la chirurgia è delle principali cause di mortalità e di morbosità postoperatoria. Il nostro studio per la creazione di un'anastomosi colica è un metodo affidabile e riproducibile per studiare i meccanismi di guarigione delle anastomosi.

Creazione dell'anastomosi colica in topi

Il protocollo presentato descrive una facile rimozione chirurgica dell'appendice (patch caecale) in un topo seguita dall'induzione del cancro colorettale associato alla malattia intestinale infiammatoria. Questo modello di appendicosa murina consente lo studio del ruolo biologico dell'appendice nella patogenesi della malattia gastrointestinale umana.

Murine Appendectomy Modello di Cronica Colite Associata Cancro Colorettale da Localizzazione precisa di Patch Caecal

Descriviamo un modello murino di ileo postoperatorio generato tramite manipolazione intestinale. La funzione del transito gastrointestinale, i cambiamenti patologici e l'attivazione delle cellule immunitarie sono stati valutati 24 ore dopo l'intervento chirurgico.

Modello murino di ileo postoperatorio

Scopri il modello di colostomia distale murina per studiare la colite di diversione nei topi C57BL/6. Questo metodo riproduce le caratteristiche istologiche umane senza richiedere animali geneticamente modificati.

Murino colostomia distale, un nuovo modello di colite di diversione in topi C57BL/6

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