Name: Preparare un 68Ga-etichettato arginina glicina aspartato (RGD)-peptide per langiogenesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 48 s
Description: Scopri un protocollo semplice per preparare peptidi RGD etichettati con Gallio-68 per l'angiogenesi e l'imaging oncologico. Questo metodo sistematico facilita la valutazione biologica dei peptidi radiomarcati.

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Questo lavoro è stato supportato da una ricerca nucleare e programma di sviluppo della National Research Foundation di Corea (NRF) sovvenzione finanziata dal governo coreano (n. 2017M2A2A6A02019904).

Tutti gli esperimenti sugli animali sono state condotte in conformità con le linee guida per la cura e l'uso di ricerca animali sotto protocolli approvati dalla Korea Institute di radiologica e Comitato di studi degli animali scienze mediche. Tutti i reagenti e solventi sono stati acquistati e utilizzati senza ulteriore purificazione. NOTA-RGD-peptidi sono stati redatti secondo letteratura metodi15.
Attenzione: 68Ga emette raggi gamma e positroni. Tutti gli esperimenti, compreso il contatto diretto o indiretto con sostanze radioattive, devono essere effettuati da addestrati e consentito solo al personale. Durante la manipolazione di materiali radioattivi, dispositivi di protezione appropriati, schermatura, distintivo del dosimetro di radiazione e anelli e un misuratore di sondaggio deve essere utilizzati.
1. radiolabeling RGD-peptidi con 68GaCl3
Nota: 68Ga (t1/2 = 68 min, β+ = 89% e CE = 11%) è stata ottenuta da 68Ga /68generatore di Ge.
<ol><li>Eluire il 68GaCl3 dal generatore con 4 mL di 0,05 M HCl.</li>
	<li>Eliminazione dei fogli inceppati con gas di azoto a 80 ° C per 30 min ad asciugare 68GaCl3 (333 kBq, 1 mL) in un flaconcino di reazione da 5 mL.</li>
	<li>Aggiungere una soluzione di RGD-peptide (100 µ g) in acetato di sodio 1 M (100 µ l, pH 5-6) nel flaconcino di reazione contenente 68GaCl3 dal punto 1.2.</li>
	<li>Riscaldare la miscela di reazione a 80 ° C per 5 min. Quindi, raffreddare fino a temperatura ambiente.</li>
	<li>Purificare il prodotto grezzo con cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). Utilizzare il seguente sistema: una colonna di C-18, una portata di 0,5 mL/min, una pendenza gradiente di acetonitrile di 1.17%/min (5% - 40% in 30 min) e componenti di eluizione: A = 0,1% acido trifluoroacetico (TFA) in acetonitrile, B = 0,1% TFA in acqua. Nota: L'HPLC è dotato di un rivelatore di matrice del fotodiodo e un rilevatore di radioattività. Il 68Ga-RGD-peptide è stato raccolto a un tempo di ritenzione del min 12,5 (Figura 2).</li>
	<li>Purificare il risultante 68Ga-RGD-peptide utilizzando un sistema di estrazione in fase solida.<ol>
<li>Filtrare la soluzione attraverso una cartuccia di fase inversa C18 e lavare con 2 mL di soluzione fisiologica.</li>
		<li>Eluire 68Ga-RGD-peptide con 0,7 mL di etanolo al 95%. Togliere il solvente a 80 ° C sotto azoto gassoso per 20 min e ricostituire con tampone fosfato salino (PBS) prima dell'uso.</li>
		<li>Filtrare il prodotto radioattivo attraverso un filtro sterile da 0,22 µm e formulare in 1 mL di soluzione salina sterile.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Verifica il rendimento radiochimico di cromatografia di radio-strato sottile (TLC).<ol>
<li>Depositare 1 µ l su una piastra di cromatografia di strato sottile istantanea (ITLC, 10 cm di lunghezza). Sviluppare la lastra in una camera contenente l'eluente (acido citrico in soluzione acquosa 0,1 M, pH 5.0) fino a 9 centimetri lontano dal luogo. Nota: Il coefficiente di conservazione per 68Ga-RGD-peptide è 0 e il coefficiente di conservazione non reagito 68Ga3 + è 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Calcolare l'attività specifica finale dal rapporto di radioattività corrispondente alla non-radioattività come MBq/nmol. Nota: Dopo l'iniezione di 100 µ l di formulati 68Ga-RGD-peptide per HPLC, la quantità di componente non radioattivo è stata calcolata sulla curva di taratura standard utilizzando non radioattivi Ga-RGD-peptide.</li>
</ol>2. in Vitro assorbimento cellulare
Nota: Le cellule di glioblastoma umano di Uppsala 87 Glioma maligno (U87MG) sono state coltivate in media dell'Aquila di Dulbecco modificato (DMEM), completati con 10% fetale bovino del siero e l'1% penicillina-streptomicina. Le cellule sono state coltivate in piastre da 150 mm a 37 ° C in atmosfera umidificata di 5% CO2. Le cellule sono state raccolte o dividere di trypsinization: 0,25% (p/v) tripsina e 0,02% (p/v) acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) in PBS a 37 ° C per 3-5 min.
<ol><li>Le cellule U87MG di seme in piastre da 6 pozzetti ad una densità di 1 x 106 cellule per pozzetto.</li>
	<li>Incubare le cellule con 68Ga-RGD-peptide (111 kBq) a 37 ° C per 30, 60, 90 e 120 min preparare campioni in triplice copia.</li>
	<li>Lavare le cellule 2 x 2 ml di PBS e harvest di trypsinization. Utilizzare tripsina 0,25% (p/v) e 0.02% (p/v) acido etilendiamminotetraacetico (EDTA) in PBS a 37 ° C per 3-5 min.</li>
	<li>Raccogliere la sospensione cellulare (500 µ l) e la misura in un γ-counter.</li>
	<li>Calcolare l'assorbimento percentuale del composto dalle cellule di % (conteggi della conta di cellule/totale).</li>
</ol>3. in Vitro del siero stabilità
<ol><li>Aggiungere 500 µ l di siero di topo preparati al momento, 500 µ l di siero umano e 500 µ l di PBS. Incubare la miscela a 37 ° C per 2 h.</li>
	<li>Valutare di ITLC intervalli di tempo specificati (30, 60, 90 e 120 min). Punto 1-2 aliquota µ l della miscela alla piastra ITLC (fase mobile: acido citrico 0.1 M). Sviluppare la lastra come descritto al punto 1.7. Nota: 68Ga3 + si prevede di passare con il fronte del solvente, considerando che il composto con etichettato rimarrà all'origine.</li>
</ol>4. la determinazione della lipofilia
<ol><li>Aggiungere 68Ga-RGD-peptide (3,7 MBq, 3,7 µ l) per il sistema di ripartizione ottanolo-PBS (1:1, v/v, totale 1 mL).</li>
	<li>Mescolare le fiale vigorosamente per 5 min a temperatura ambiente e centrifugare a 10.000 x g per 5 min a temperatura ambiente.</li>
	<li>Prelevare 100 µ l campioni da ogni strato e misurare la radioattività con un contatore di γ. Il valore di registro segnalati P si basa sulla media di tre campioni.</li>
</ol>5. tumore modello
Nota: Topi nudi di BALB/c (6-8 settimane vecchio, donna, n = 23) sono stati utilizzati per questo studio. I topi sono stati successivamente utilizzati per studi PET (n = 3) e biodistribuzione (n = 20) quando i volumi del tumore ha raggiunto 200-300 mm3 (1-2 settimane dopo l'impianto).
<ol><li>Caricare le cellule del tumore in 28 G, 1/2 pollice siringhe per insulina.</li>
	<li>Iniettare cellule U87MG (5 x 106) in 100 µ l di PBS in regione del braccio sinistro.</li>
	<li>Anestetizzare il mouse con isoflurano 2% in ossigeno e gas durante l'iniezione delle cellule.<ol>
<li>Assicurarsi che il mouse è stato anestetizzato dalla perdita del pedale ritiro riflesso seguente pizzicamento con forcipe tra le dita del piede destra posteriore. Non lasciare incustodito un animale fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. quantificazione in Vivo di αvβ3 integrina utilizzando PET
<ol><li>Anestetizzare i topi con isoflurano 2% in ossigeno.<ol>
<li>Assicurarsi che il mouse è stato anestetizzato dalla perdita del pedale ritiro riflesso seguente pizzicamento con forcipe tra le dita del piede destra posteriore. Non lasciare incustodito un animale fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Posizionare la testa al centro del portale PET.</li>
	<li>Per via endovenosa amministrare il 68soluzione Ga-RGD-peptide (7,4 MBq, 200 µ l) per il xenograft del mouse modello tramite vena caudale per 1 min.</li>
	<li>Allo stesso tempo, è necessario eseguire una scansione PET in modalità elenco (esplorazione dinamica) per 150 min. Nota: I dati grezzi di PET sono stati ricostruiti da un lasso di tempo definito dall'utente (cioè, ogni 30 min). Dopo la scansione PET, una scansione di micro-tomografia computerizzata (CT) (50 kVp dei raggi x, 0,16 mA) è stata condotta per la correzione di attenuazione.</li>
</ol>7. biodistribuzione Ex Vivo
<ol><li>Iniettare 68Ga-RGD-peptide (0.37 MBq, 200 µ l) nella vena caudale del modello del topo dello xenotrapianto. Anestetizzare il mouse con isoflurano 2% in ossigeno e gas durante le iniezioni. Nota: Topi nudi di BALB/c, come descritto nella sezione 5, sono stati divisi in quattro gruppi e sacrificati a tempi differenti (n = 5 per gruppo).</li>
	<li>Svegliare i topi immediatamente dopo la somministrazione di 68Ga-RGD-peptide e sacrificarli a 30, 60, 90 e 120 min di postinjection con biossido di carbonio l'eutanasia. Nota: I tessuti di interesse sono stati estratti. Target selezionati erano sangue, muscolo, cuore, polmone, fegato, milza, stomaco, intestino, reni, osso e tumore.</li>
	<li>Il tessuto di pesare e misurare la radioattività con un contatore di γ. Nota: I risultati sono stati espressi come la percentuale di dose iniettata per grammo di tessuto (% ID/g).</li>
</ol>

<ol><li>Friedlander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Definition+of+Two+Angiogenic+Pathways+by+Distinct+alpha+v+integrins%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Definition of Two Angiogenic Pathways by Distinct alpha v integrins.</a> Science. 270 (5241), 1500-1502 (1995).</li>
<li>Janssen, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+Targeting+with+Radiolabeled+alpha+v+beta+3+Integrin+Binding+Peptides+in+a+Nude+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Tumor Targeting with Radiolabeled alpha v beta 3 Integrin Binding Peptides in a Nude Mouse Model.</a> Cancer Research. 62, 6146-6151 (2002).</li>
<li>Kok, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+and+functional+evaluation+of+RGD-modified+proteins+as+%CE%B1v%CE%B23+integrin+directed+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Preparation and functional evaluation of RGD-modified proteins as αvβ3 integrin directed therapeutics.</a> Bioconjugate Chemistry. 13 (1), 128-135 (2002).</li>
<li>Garanger, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+multifunctional+molecular+conjugate+vector+for+targeting%2C+imaging%2C+and+therapy+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">New multifunctional molecular conjugate vector for targeting, imaging, and therapy of tumors.</a> Molecular Therapy. 12 (6), 1168-1175 (2005).</li>
<li>Dijkgraaf, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PET+imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+integrin+expression+in+tumours+with+68Ga-labelled+mono-%2C+di-+and+tetrameric+RGD+peptides%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">PET imaging of αvβ3 integrin expression in tumours with 68Ga-labelled mono-, di- and tetrameric RGD peptides.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 38 (1), 128-137 (2011).</li>
<li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+cyclic+RGD+dimers+with+Gly3and+PEG4linkers%3A+Promising+agents+for+tumor+integrin+%CE%B1v%CE%B23+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled cyclic RGD dimers with Gly3and PEG4linkers: Promising agents for tumor integrin αvβ3 PET imaging.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 36 (6), 947-957 (2009).</li>
<li>Li, Z. B., Chen, K., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+multimeric+RGD+peptides+for+microPET+imaging+of+integrin+%CE%B1v%CE%B23expression%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled multimeric RGD peptides for microPET imaging of integrin αvβ3expression.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 35 (6), 1100-1108 (2008).</li>
<li>Liu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isomerism+and+solution+dynamics+of+90Y-labeled+DTPA-biomolecule+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22Bioconjugate+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Isomerism and solution dynamics of 90Y-labeled DTPA-biomolecule conjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 12 (1), 84-91 (2001).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glycosylated+RGD-containing+peptides%3A+tracer+for+tumor+targeting+and+angiogenesis+imaging+with+improved+biokinetics%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Glycosylated RGD-containing peptides: tracer for tumor targeting and angiogenesis imaging with improved biokinetics.</a> Journal of Nuclear Medicine. 42 (2), 326-336 (2001).</li>
<li>Sivolapenko, G. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+of+metastatic+melanoma+utilising+a+technetium-99m+labelled+RGD-containing+synthetic+peptide%5BTitle%5D)+AND+%22Euroean+Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Imaging of metastatic melanoma utilising a technetium-99m labelled RGD-containing synthetic peptide.</a> Euroean Journal of Nuclear Medicine. 25 (10), 1383-1389 (1998).</li>
<li>Haubner, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+Imaging+of+%CE%B1v%CE%B23+Integrin+Expression+Using+18+F-labeled+RGD-containing+Glycopeptide+and+Positron+Emission+Tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Noninvasive Imaging of αvβ3 Integrin Expression Using 18 F-labeled RGD-containing Glycopeptide and Positron Emission Tomography.</a> Cancer Research. 61, 1781-1785 (2001).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+trivalent+metal+ion+complexes+of+the+tetraacetate+derivatives+of+12-%2C+13-+and+14-membered+tetraazamacrocycles%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of trivalent metal ion complexes of the tetraacetate derivatives of 12-, 13- and 14-membered tetraazamacrocycles.</a> Inorganica Chimica Acta. 190 (1), 37-46 (1991).</li>
<li>Clarke, E. T., Martell, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stabilities+of+the+Fe%28III%29%2C+Ga%28III%29+and+In%28III%29+chelates+of+N%2CN%E2%80%B2%2CN%E2%80%B3-triazacyclononanetriacetic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Inorganica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Stabilities of the Fe(III), Ga(III) and In(III) chelates of N,N′,N″-triazacyclononanetriacetic acid.</a> Inorganica Chimica Acta. 181 (2), 273-280 (1991).</li>
<li>Shetty, D., Lee, Y. S., Jeong, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((68Ga-labeled+radiopharmaceuticals+for+positron+emission+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">68Ga-labeled radiopharmaceuticals for positron emission tomography.</a> Nuclear Medicine Molecular Imaging. 44 (4), 233-240 (2010).</li>
<li>Shin, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis+and+Preliminary+Evaluation+of+68Ga-NOTA-Biphenyl-c%28RGDyK%29+for+the+Quantification+of+Integrin+%CE%B1v%CE%B23%5BTitle%5D)+AND+%22Bulletin+of+the+Korean+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Synthesis and Preliminary Evaluation of 68Ga-NOTA-Biphenyl-c(RGDyK) for the Quantification of Integrin αvβ3.</a> Bulletin of the Korean Chemical Society. 38 (12), 1415-1418 (2017).</li>
<li>Cai, W., Chen, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multimodality+Molecular+Imaging+of+Tumor+Angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Nuclear+Medicine%22%5BJournal%5D)">Multimodality Molecular Imaging of Tumor Angiogenesis.</a> Journal of Nuclear Medicine. 49, suppl2 113-128 (2008).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Nello studio presente, abbiamo introdotto un protocollo per preparare un radiopeptide αvβ3 integrina e sua valutazione biologica di targeting. Lo sviluppo di farmaci tradizionali comporta una procedura complicata. Richiede una grande quantità di materiale di riferimento e una durata relativamente lunga. Anche se la metodologia suggerita non può sostituire il processo di valutazione delicato, questo sistema può essere utilizzato ai fini dello screening. Questa proposta di sistema ridurrebbe considere...

L'angiogenesi è un processo biologico che è caratterizzato dallo sviluppo di nuovi vasi sanguigni. Tra i molti fattori angiogenetici, αvβ3 integrina è associato con l'invasività, perché l'integrina è altamente espresso nei vasi sanguigni del tumore angiogenica ma è assente nel tessuto normale1.
Peptidi radioattivi di grippaggio del ricevitore con il dominio di aspartato (RGD) arginina glicina, che ha un'alta affinità nei confronti dei recettori con integrina αv3 β, sono considerati promettente angiogenesi imaging agenti2,3 , 4 , 5 , 6 , 7. diversi radiofarmaci sono stati creati per PET e sue proprietà biologiche sono state convalidate in vari modelli animali8,9,10,11. In termini di un radionuclide, 68Ga presenta parecchi vantaggi sopra altri radioisotopi. In primo luogo, ha un'elevata accessibilità per gli utenti ed è economicamente vantaggioso perché non è necessario un ciclotrone. In secondo luogo, 68Ga-based radiofarmaci producono alta risoluzione spaziale rispetto con tomografia computata dell'emissione del singolo-fotone (SPECT), consentendo più accurata quantificazione. Infine, l'emivita di 67,71 minuti di 68Ga può essere sufficiente per la preparazione di piccoli peptidi o proteine.
Per produrre un complesso stabile con 68Ga, sono stati sviluppati molti chelanti. Chelatori rappresentativi sono l'acido 1,4,8,11-tetraazacyclotetradecanetetraacetic (TETA), acido 1,4,7,10-tetraazaciclododecano-1,4,7,10-tetraacetico (DOTA), acido 1,4,7-triazacyclononane-1,4,7-bioconjugate (NOTA), diethylenetriaminepentaacetic acido (DTPA) e N, n' '-di(2-hydroxybenzyl) etilendiammina-N, n' '-diacetic acido (O3333). NOTA è stato segnalato per formare un complesso altamente stabile con 68Ga (registro stabilità costante 30.98)12,13,14.
Lo scopo del presente studio è quello di fornire un protocollo conciso per lo sviluppo di un nuovo radiopeptide (Figura 1). Ad esempio, prepariamo 68Ga-labeled RGD-peptidi e metodi attuali per la valutazione biologica di questi analoghi in un modello dello xenotrapianto.

<table><tbody><tr><td>68Ga/68Ge generatore</td><td>ITG</td> <td>Company-10</td> <td>mCi&nbsp;</td></tr><tr><td>Soluzione di acido cloridrico</td><td>Sigma-aldrich</td><td>84429</td><td></td></tr><tr><td>Acetato di sodio</td><td>Sigma-aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>C18 cartuccia in fase inversa</td><td>Acque</td><td>WAT020515</td><td></td></tr><tr><td>0,22-&mu; m filtro sterile</td><td>Milllipore</td><td>SLGV033RS</td><td></td></tr><tr><td>Radio-TLC scanner</td><td>Bioscan</td><td>AR2000</td><td></td></tr><tr><td>ITLC carta</td><td>Agilent</td><td>SGI001</td><td></td></tr><tr><td>Acido citrico</td><td>Sigma-aldrich</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>HPLC</td><td>Waters-Waters</td><td></td> <td>1525 sistema contenente pompa binaria, array di fotodiodi (Waters 2998), rivelatore di radioattività (Raytest, Gabi)</td></tr><tr><td>Acetonitrile</td><td>J.T. Baker</td><td>14-650-359</td><td></td></tr><tr><td>Acido trifluoroacetico</td><td>Sigma-aldrich</td><td>302031</td><td></td></tr><tr><td>Eagle modificato di Dulbecco&nbsp;</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>11965092</td><td></td></tr><tr><td>siero fetale bovino</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>16000044</td><td></td></tr><tr><td>T175 fiasche.</td><td>Corning</td><td>CLS431080</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>penicillina-streptomicina</td><td>Thermo fisher scientific</td><td>15240112</td><td></td></tr><tr><td>&gamma;-counter</td><td>Perkin</td> Elmer-1480 <td></td><td>Wizard 3</td></tr><tr><td>Siringa Insunlin</td><td>Becton Dickinson</td><td>326105</td><td></td></tr><tr><td>Pompa Synringe</td><td>Harvard Apparecchio</td><td>70-4500</td><td></td></tr><tr><td>micro-PET/CT</td><td>Siemens Inveon</td><td>-</td><td></td></tr></tbody></table>

preparare un 68ga-etichettato arginina glicina aspartato (rgd)-peptide per l'angiogenesi

Preparing a 68Ga-labeled Arginine Glycine Aspartate (RGD)-peptide for Angiogenesis

L'integrina di3 α βvè una molecola di adesione heterodimeric coinvolti nell'angiogenesi e migrazione delle cellule tumorali. L'integrina è overexpressed in cellule endoteliali angiogenici tumorali, dove in genere ha una bassa concentrazione. Questa espressione specifica di αvβ3 lo rende un valido biomarcatore per antiangiogenico e imaging droga. Come una modalità di imaging funzionale, tomografia a emissione di positroni (PET) fornisce informazioni su biochimici e fisiologici cambiano in vivo, dovuto la relativa sensibilità alta unico alla scala nanomolari. Quindi, basati su radiometal radiofarmaci PET hanno ricevuto grande attenzione per la quantificazione non invasiva dell'angiogenesi del tumore. Questo documento fornisce un protocollo sistemico per preparare un nuovo peptide radiometal-etichettati per la valutazione dell'angiogenesi. Questo protocollo contiene informazioni sull'affidabilità radiochimica, liposolubilità, uptake cellulare, stabilità del siero e proprietà farmacocinetiche. Il 68Ga-RGD-peptide è uno dei ligandi PET rappresentante verso αvβ3 integrina. Qui, presentiamo un protocollo per preparare un 68Ga-RGD-peptide e la valutazione della sua efficacia biologica.

La chelazione di 68GaCl3 con NOTA-RGD-peptide è stato semplice, e la resa radiolabeling era 99%. Impurità di reazione sono stati rimossi con successo come mostrato nella Figura 2. La purezza radiochimica di 68Ga-RGD-peptide era supera al 99%, e specifiche attività alla fine della sintesi era 90-130 MBq/nmol (Figura 3).
L'uptake cellulare...

L'integrina di3 α βvè un tipo di proteina di adesione che è altamente espresso sulle cellule endoteliali attivate che subiscono l'angiogenesi. Quindi, valutando l'integrità dell'integrina è di grande interesse in oncologia. Qui, presentiamo un metodo per preparare 68Ga-etichetta radiopeptides e un metodo per valutarne l'efficacia biologica.

Preparare un 68Ga-etichettato arginina glicina aspartato (RGD)-peptide per l'angiogenesi

The &#945;v&#946;3 integrin is a heterodimeric adhesion molecule involved in tumor cell migration and angiogenesis. The integrin is overexpressed in ...

Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nella preparazione del Gallio 68 etichettato RGD-Peptide e il metodo per la valutazione biologica dei suoi analoghi. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un semplice protocollo sistemico per lo sviluppo di un nuovo peptide con etichetta radiometale. A dimostrare la procedura sarà Ki-Hye Jung, un post-doc del nostro istituto.Iniziare utilizzando acido cloridrico molare 0,5 per elusare il tricloruro di gallio radioetichettato da un generatore di germanio di gallio radioetichettato. Eliminare il composto in cinque flaconcino di reazione millilitro con gas azoto a 80 gradi Celsius. Seguito dall'aggiunta di 100 microgrammi di acetato di glicina arginina o peptide RGD in un acetato di sodio molare al composto essiccato.Riscaldare la miscela di reazione a 80 gradi Celsius per cinque minuti prima di lasciare raffreddare la miscela a temperatura ambiente. Per purificare il prodotto grezzo con cromatografia liquida ad alte prestazioni, aggiungere la soluzione a una colonna C18 e passare la soluzione attraverso una cartuccia a fasi inversa C18. Lavare la cartuccia con due millilitri di soluzione salina ed elutare il peptide

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Normale adulto tessuto vascolarizzato mammiferi che manca l'angiogenesi fisiologica e che non è stata esposta a un intervento chirurgico viene utilizzato per studiare: (i) l'avvio e lo sviluppo di angiogenesi in seguito alla somministrazione intraperitoneale di agenti di test, e (ii) la modifica di angiogenesi dopo somministrazione sistemica di selezionati agenti di test.

Rat mesentere angiogenesi Assay

Per dimostrare imaging molecolare del cancro RM con un piccolo peptide mirato MRI mezzo di contrasto specifico alle proteine ​​plasmatiche coagulato in stroma tumorale in un modello di cancro alla prostata del mouse.

MR Imaging Molecolare del cancro alla prostata con un piccolo Molecular CLT1 Peptide mirato di contrasto agente

Una procedura per l'isolamento di EOB-DTPA e successiva complessazione con Ga naturale (III) e 68 Ga è presentato qui, nonché un'attenta analisi di tutti i composti e ricerche sull'efficienza etichettatura, la stabilità in vitro e l'ottanolo / acqua coefficiente di distribuzione del complesso radiomarcato.

Indagini su GA (III) Complesso di EOB-DTPA e la sua<sup&gt; 68</sup&gt; Ga marcata radioattivamente analogico

Presentiamo un protocollo per la sintesi di idrogel funzionalizzati con RGD come dispositivi per la somministrazione di cellule e farmaci. La procedura prevede la cicloaddizione alchino-azidica (CuAAC) catalizzata dal rame tra l'acido poliacrilico modificato con alchino (PAA) e un derivato RGD-azide. Gli idrogel sono formati utilizzando la policondensazione assistita da microonde e le loro proprietà fisico-chimiche sono studiate.

La sintesi di RGD-funzionalizzati idrogeli come strumento per applicazioni terapeutiche

Un protocollo per la sintesi di guanidine alchil-modificato basate sull'uso dei precursori corrispondenti è presentato.

La modifica e funzionalizzazione del gruppo Guanidine da precursori su misura

Un protocollo per la sintesi di un 1,2-dithiolane modificato peptide e la caratterizzazione delle strutture supramolecolari derivanti dal peptide self-assembly.

Sintesi e caratterizzazione di 1,2-Dithiolane per volta peptidi autoassemblanti

Vengono descritte le tecniche per generare una libreria di peptidi corti in grado di attivare i mastociti tramite il recettore MRGPRX2. Le tecniche associate sono facili, poco costose e possono essere estese ad altri recettori cellulari.

Peptidi di screening che attivano MRGPRX2 utilizzando cellule HEK ingegnerizzate

TGT surface è una piattaforma innovativa per studiare il crosstalk fattore di crescita-integrina. Il design flessibile della sonda, la specificità del ligando di adesione e la precisa modulazione delle condizioni di stimolazione consentono solide valutazioni quantitative dell'interazione EGFR-integrina. I risultati evidenziano EGFR come un "meccano-organizzatore" che sintonizza la meccanica dell'integrina, influenzando l'assemblaggio dell'adesione focale e la diffusione cellulare.

Sonde tether per tensiometri per quantificare la meccanica e l'adesione dell'integrina mediata dal fattore di crescita

Questo studio ha sviluppato un metodo non invasivo e in tempo reale per valutare la distribuzione del ligando di morte programmato 1 in tutto il corpo, basato sull'imaging tomografico a emissione di positroni dell'antagonista D-dodecapeptide [68Ga]. Questa tecnica presenta vantaggi rispetto all'immunoistochimica convenzionale e migliora l'efficienza nell'identificazione dei pazienti appropriati che trarranno beneficio dalla terapia di blocco del checkpoint immunitario.

Sviluppo di un tracciante PET del peptide D marcato con 68gallio per l'imaging dell'espressione programmata del ligando di morte 1

Questa ricerca descrive il processo automatizzato per la produzione di [68Ga]Ga-3BP-3940 con il sintetizzatore GAIA V2, per l'imaging PET della proteina di attivazione dei fibroblasti. Vengono inoltre presentati i risultati dei test di controllo qualità eseguiti su tre lotti di prova.

Preparazione automatizzata di [68Ga]Ga-3BP-3940 su un modulo di sintesi per l'imaging PET del microambiente tumorale

Scopri un protocollo semplice per preparare peptidi RGD etichettati con Gallio-68 per l'angiogenesi e l'imaging oncologico. Questo metodo sistematico facilita la valutazione biologica dei peptidi radiomarcati.

Preparare un ⁶⁸Ga-etichettato arginina glicina aspartato (RGD)-peptide per l'angiogenesi

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