Name: Un modello del Glaucoma indotto da sutura Circumlimbal nei ratti e nei topi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Impara a indurre ipertensione oculare cronica nei roditori con sutura circumlimbale per studiare il glaucoma. Questa tecnica minimamente invasiva permette di analizzare il deterioramento delle cellule gangliari retiniche e i meccanismi di recupero.

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Questo lavoro è finanziato dalla National Health e contributo al progetto Medical Research Council of Australia (1046203), Australian Research Consiglio futuro Fellowship (FT130100338).

Tutte le procedure sperimentali sono state condotte secondo il codice di pratica australiana per la cura e l'uso degli animali per fini scientifici, l'impostazione del National Health and Medical Research Council in Australia. Approvazione etica è stata ottenuta dal comitato di etica animale di Howard Florey Institute (approvazione numero 13-044-UM e 13-068-UM per ratti e topi, rispettivamente).
1. misurazione della pressione intraoculare in ratti coscienti
<ol><li>Impostare il tonometro rimbalzo di laboratorio per l'impostazione di ratto. Fasciare il ratto sveglio in un pezzo di panno morbido per calmare l'animale. Esporre la testa e il collo. Premere delicatamente il torso in una mano, con parte posteriore dell'animale che riposa contro il petto dello sperimentatore. Nota: L'anestesia d'attualità non è necessaria.</li>
	<li>Usare l'altra mano per avvicinare il tonometro rimbalzo occhio del ratto, in modo che la punta della sonda IOP è circa 2-3 mm lontano da e perpendicolare all'apice corneale. Utilizzare la mano destra per misurare lo IOP nell'occhio di destra dell'animale e la mano sinistra per l'occhio sinistro.</li>
	<li>Attendere alcuni secondi per il ratto per calmare e premere una volta il tasto di misurazione. Osservare che la punta della sonda IOP colpito delicatamente l'apice corneale una volta; e sente il bip del tonometro di rimbalzo una volta. Nota: Un singolo beep del tonometro confermerà l'avvenuta misurazione, che può essere letta dallo schermo LCD. Un doppio segnale acustico indica un errore di misura. Errori di misura possono derivare da fattori quali la distanza di lavoro inadeguato tra la sonda e la cornea, un'inclinazione eccessiva nell'orientamento del tonometro, o la sonda colpisce la palpebra o una parte non centrale della cornea. Consultare il manuale del tonometro rimbalzo dal produttore per maggiori dettagli per quanto riguarda gli errori di misura.</li>
	<li>Ripetere il passaggio 1.3 dieci volte ad intervalli di 1-2 secondo, da queste misurazioni derivare un valore medio di IOP per quel punto di tempo. Reimpostare il tonometro dopo la lettura dith 5.</li>
	<li>Per il monitoraggio seriale, è possibile misurare lo IOP allo stesso tempo del giorno e in condizioni di luce coerente per minimizzare la variazione diurna IOP ciclo20,21.</li>
</ol>2. misura di pressione intraoculare in topi coscienti
<ol><li>Consente di impostare il tonometro rimbalzo nella posizione del mouse secondo le istruzioni del fabbricante.</li>
	<li>Per frenare il mouse a mano, posizionare il mouse sulla cima di una gabbia di grill e tirare delicatamente la coda all'indietro. Nota: Questo richiederà l'animale di grip sulla griglia del metallo con le sue zampe anteriori e il tentativo di tirarsi in avanti, che sarà leggermente allungare il suo corpo.<ol>
<li>Usare l'altra mano afferrare la pelle flaccida immediatamente dietro le orecchie. Fissare la parte inferiore del corpo dell'animale, tenendo la coda tra l'anulare e il dito medio (o tra il mignolo e il palmo della mano). Nota: Non tentare di afferrare la pelle troppo stretta, per evitare il soffocamento e applicando pressione sugli occhi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Con la mano libera di ora (inizialmente tenendo la coda), avvicinare il tonometro rimbalzo occhio del mouse, in modo che la punta della sonda IOP è circa 2-3 mm da e perpendicolare all'apice corneale. Per misurare l'altro occhio, è necessario ruotare il mouse in modo che l'altro occhio è ora davanti il tonometro.</li>
	<li>Attendere che il mouse calmare e premere una volta il tasto di misurazione. Osservare che la punta della sonda IOP ha colpito delicatamente l'apice corneale; con un segnale acustico conferma l'avvenuta misurazione. Nota: Un doppio segnale acustico indica un errore di misura. Può essere utile per avere una seconda lettura di sperimentatore e documento le letture di IOP mentre il primo sperimentatore prende le misure.</li>
	<li>Ripetere il passaggio 2.4 per ottenere dieci letture con successo per derivare un IOP. Reimpostare il tonometro dopo la lettura dith 5. Consentire un intervallo di 1-2 secondi tra letture.</li>
	<li>Secondo la misura di serie nei ratti, misurare mouse IOP allo stesso tempo del giorno e in condizioni di luce coerente.</li>
</ol>3. induzione di elevazione della pressione intraoculare in topi e ratti anestetizzati
<ol><li>Pulire il banco chirurgico con clorexidina 0,5% in etanolo al 70%. Coprire la panca con teli sterili. Autoclave tutte le apparecchiature chirurgiche in anticipo. Garantire a tutti gli sperimentatori indossano adeguati dispositivi di protezione personale (maschere chirurgiche, camici e guanti sterilizzati).</li>
	<li>Per indurre l'anestesia generale, metti l'animale in una camera di induzione. Formula 3-3,5% isoflurane con O2 ad una portata di 3 L/min.<ol>
<li>Mantenere l'anestesia con isoflurano 1,5% a 2 L/min consegnato tramite una roditore maschera durante la chirurgia. Garantire sufficiente profondità di anestesia per l'assenza di un riflesso di pizzico di zampa.</li>
		<li>Evitare la depressione respiratoria regolando la portata quando necessario per mantenere la frequenza respiratoria a circa 60 respiri/min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Selezionare casualmente un occhio per indurre ipertensione oculare, con l'occhio controlaterale per servire come un controllo non trattato. Instillare una goccia di 0.5% proxymetacaine soluzione oftalmica per l'anestesia d'attualità. Per pulire la superficie oculare, sciacquare l'occhio con 3 mL di soluzione salina normale sterile.</li>
	<li>Coprire l'animale con un telo chirurgico sterile, fenestrato, esponendo l'occhio ad essere suturato.</li>
	<li>Eseguire una sutura sulla congiuntiva bulbare intorno al globo. Nei ratti, tessere il suturare di nylon parallelo a 7/0 e 2 mm posteriormente al limbus (Figura 1). Nei topi, posizionare la sutura in nylon 10/0 a 1 mm posteriormente al limbus.<ol>
<li>Fare attenzione a non per penetrare la sclera. Un'improvvisa dilatazione pupillary durante la procedura chirurgica indica che la sclera è probabilmente stata penetrata.</li>
		<li>Ancoraggio la sutura sul conjunctiva usando 5-6 punti di ancoraggio in ratti e 4-5 punti di ancoraggio in topi.</li>
		<li>Evitare la compressione diretta sulle vene principali episcleral infilando la sutura sotto la congiuntiva all'incrocio di queste vene. Nota: Mentre si consiglia di evitare la compressione della vena episcleral principali in ratti, questo non viene normalmente fatto in topi a causa della scarsa visibilità di queste vene agli occhi del mouse. Anche se le vene principali non vengono compressi direttamente, è probabile che i più piccoli vasi nel plesso di vena episcleral sono sotto pressione, che può essere un fattore che contribuisce all'elevazione IOP sostenuta (vedi discussione per meccanismo dell'altezza dello IOP).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Fissare la sutura legando un nodo scorsoio poi seguito da un secondo nodo semplice (Figura 1). Per evitare un picco IOP post-chirurgico eccessivamente alto, dispone di un assistente misurare lo IOP immediatamente prima di fissare il secondo nodo.<ol>
<li>Se lo IOP è trovato per essere troppo alto, è possibile regolare il nodo di slittamento rilasciando parzialmente la tensione su un'estremità della sutura (freccia in Figura 1A).</li>
		<li>Dopo aver raggiunto la IOP desiderata (idealmente 30-60 mmHg nei ratti o nei topi di 30-40 mmHg), cravatta fuori il secondo nodo mantenendo una forza di trazione continua su quella estremità della sutura (freccia in Figura 1A).</li>
		<li>Dopo il secondo nodo è stato inasprito, tagliare le estremità della sutura per ridurre al minimo qualsiasi sensazione di corpo estraneo. Monitorare l'animale durante il recupero dall'anestesia generale. Nota: È importante utilizzare il slipknot quando prima di accasarsi per assicurare un'adeguata compressione verso l'interno sull'occhio. Dopo diverse settimane di solito è notato che le estremità diventano incorporate nel conjunctiva.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. monitoraggio IOP
<ol><li>Prendere la prima misurazione della IOP a 2 minuti postoperatorio sotto anestesia isoflurano. Successivamente, monitorare lo IOP quando il roditore ha riacquistato coscienza secondo i suddetti passaggi 1 e 2. Nota: Monitorare lo IOP due volte durante il primo giorno (2 minuti e 1 ora), tutti i giorni nella prima settimana e una volta o due volte alla settimana da allora in poi.</li>
</ol>5. Diluire la funzione e la struttura della retina
<ol><li>A sperimentale punto finale desiderato (in questo caso dopo 8 settimane in ratti e 12 settimane nei topi), in anestesia generale mediante iniezione intraperitoneale con chetamina/xilazina, misurare la funzione retinica con il scuro-adattato elettroretinogramma (ERG) come descritto più dettagliatamente altrove15,16,17. Nota: Abbiamo trovato robusti disfunzione delle cellule del ganglio, strato di fibre nervose retiniche assottigliamento e ganglio cellula perdita per durate tra 8-12 settimane. Altri hanno impiegato con successo periodi più lunghi di IOP elevazione14,15.</li>
	<li>Immediatamente dopo la misurazione di ERG, misurare lo spessore dello strato di fibre nervose retiniche (RNFL) e dello spessore retinico totale utilizzando il dominio spettrale coerenza ottica tomografia (SD-OCT) 16,18.</li>
	<li>Alla fine dello studio longitudinale, eutanasia degli animali sotto anestesia profonda.<ol>
<li>Sezionare la retina per istologia18, ad esempio immunostaining del intero-supporto retina usando un anticorpo specifico di cella (RGC) ganglionari come RNA-proteina con più d'impionbatura anticorpo (trasformante) o dominio homeobox/POU cervello-specifico 3A di proteina (Brn3a)16,19,22.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Morrison, J. C., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9093024">A rat model of chronic pressure-induced optic nerve damage.</a> Experimental Eye Research. 64 (1), 85-96 (1997).</li>
<li>Feng, L., Chen, H., Suyeoka, G., Liu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+laser-induced+mouse+model+of+chronic+ocular+hypertension+to+characterize+visual+defects%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A laser-induced mouse model of chronic ocular hypertension to characterize visual defects.</a> Journal of Visualized Experiments. (78), (2013).</li>
<li>Chiu, K., Chang, R., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser-induced+chronic+ocular+hypertension+model+on+SD+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Laser-induced chronic ocular hypertension model on SD rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (10), 549(2007).</li>
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<li>Weber, A. J., Zelenak, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+glaucoma+in+the+primate+induced+by+latex+microspheres%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Experimental glaucoma in the primate induced by latex microspheres.</a> Journal of Neuroscience Methods. 111 (1), 39-48 (2001).</li>
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<li>Waisbourd, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+structural+and+functional+changes+after+intraocular+pressure+reduction+in+patients+with+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Graefe%27s+Archive+for+Clinical+and+Experimental+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reversible structural and functional changes after intraocular pressure reduction in patients with glaucoma.</a> Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. 254 (6), 1159-1166 (2016).</li>
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<li>Anderson, A. J., Stainer, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+control+experiment+for+studies+that+show+improved+visual+sensitivity+with+intraocular+pressure+lowering+in+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">A control experiment for studies that show improved visual sensitivity with intraocular pressure lowering in glaucoma.</a> Ophthalmology. 121 (10), 2028-2032 (2014).</li>
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<li>Zhao, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+the+Circumlimbal+Suture+Model+of+Chronic+IOP+Elevation+in+Mice+and+Assessment+of+Changes+in+Gene+Expression+of+Stretch+Sensitive+Channels%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of the Circumlimbal Suture Model of Chronic IOP Elevation in Mice and Assessment of Changes in Gene Expression of Stretch Sensitive Channels.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, 41(2017).</li>
<li>Nguyen, C. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Recording+of+Electroretinography+and+Visual+Evoked+Potentials+in+Anesthetized+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Recording of Electroretinography and Visual Evoked Potentials in Anesthetized Rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (113), (2016).</li>
<li>Van Koeverden, A. K., He, Z., Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29739991">Systemic hypertension is not protective against chronic IOP elevation in a rodent model.</a> Scientific Reports. 8 (1), 7107(2018).</li>
<li>Rodriguez, A. R., de Sevilla Muller, L. P., Brecha, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+RNA+binding+protein+RBPMS+is+a+selective+marker+of+ganglion+cells+in+the+mammalian+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Neurology%22%5BJournal%5D)">The RNA binding protein RBPMS is a selective marker of ganglion cells in the mammalian retina.</a> Journal of Comparative Neurology. 522 (6), 1411-1443 (2014).</li>
<li>Aihara, M., Lindsey, J. D., Weinreb, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Twenty-four-hour+pattern+of+mouse+intraocular+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Twenty-four-hour pattern of mouse intraocular pressure.</a> Exp Eye Research. 77 (6), 681-686 (2003).</li>
<li>Jia, L., Cepurna, W. O., Johnson, E. C., Morrison, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patterns+of+intraocular+pressure+elevation+after+aqueous+humor+outflow+obstruction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Patterns of intraocular pressure elevation after aqueous humor outflow obstruction in rats.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 41 (6), 1380-1385 (2000).</li>
<li>Nadal-Nicolas, F. M., Jimenez-Lopez, M., Sobrado-Calvo, P., Nieto-Lopez, L., Canovas-Martinez, I., Salinas-Navarro, M., Vidal-Sanz, M., Agudo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brn3a+as+a+marker+of+retinal+ganglion+cells%3A+qualitative+and+quantitative+time+course+studies+in+naive+and+optic+nerve-injured+retinas%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Brn3a as a marker of retinal ganglion cells: qualitative and quantitative time course studies in naive and optic nerve-injured retinas.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 50 (8), 3860-3868 (2009).</li>
<li>Liu, H. H., Flanagan, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mouse+Model+of+Chronic+Ocular+Hypertension+Induced+by+Circumlimbal+Suture%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">A Mouse Model of Chronic Ocular Hypertension Induced by Circumlimbal Suture.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 353-361 (2017).</li>
<li>Liu, H. H., He, Z., Nguyen, C. T., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+functional+loss+in+a+rat+model+of+chronic+intraocular+pressure+elevation%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+%26+Physiological+Optics%22%5BJournal%5D)">Reversal of functional loss in a rat model of chronic intraocular pressure elevation.</a> Ophthalmic & Physiological Optics. 37 (1), 71-81 (2017).</li>
<li>Liu, H. H., Zhang, L., Shi, M., Chen, L., Flanagan, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+laser+and+circumlimbal+suture+induced+elevation+of+intraocular+pressure+in+albino+CD-1+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Comparison of laser and circumlimbal suture induced elevation of intraocular pressure in albino CD-1 mice.</a> PLoS One. 12 (11), 0189094(2017).</li>
<li>Shen, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraocular+Pressure+Induced+Retinal+Changes+Identified+Using+Synchrotron+Infrared+Microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intraocular Pressure Induced Retinal Changes Identified Using Synchrotron Infrared Microscopy.</a> PLoS One. 11 (10), 0164035(2016).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

La sutura di circumlimbal è un nuovo modello di ipertensione oculare cronica. Oltre agli studi da cui i risultati rappresentativi sono provenienza16,18, questo modello animale è stato utilizzato in una serie di recenti studi15,23,24,25 ,26. Confronto tra questi rapporti precedenti dimostra che il meto...

Modelli animali forniscono che un'importante piattaforma per la ricerca del laboratorio di cellulare processi sottostanti patogenesi del glaucoma, nonché valutare potenziali interventi terapeutici. Diversi modelli viscoelastici sono stati sviluppati per produrre elevazione sostenuta pressione intraoculare (IOP), il più importante fattore di rischio per il glaucoma. Metodi che sono stati applicati per elevare la IOP includono: iniezione salina ipertonica in episcleral vene1, photocoagulation del laser del trabecolato2 o delle vene limbal3e l'iniezione intracameral di sostanze come fantasma rosso globuli4, microsfere5,6 e viscoelastico agenti7. Ogni approccio presenta vantaggi e limitazioni.
Un buon modello per il glaucoma dovrebbe imitare il processo di malattia, con la minima complicazione come opacities trauma, infiammazione e media. Queste complicazioni sono associate frequentemente con le procedure utilizzate per indurre l'altezza dello IOP e possono confondere l'interpretazione dei risultati. Ad esempio, paracentesi della camera anteriore, anche quando non vengono introdotte sostanze estranee, sono stato indicato per causare il trauma e l'infiammazione che non è rappresentativo di cambiamento glaucomatoso tipico8,9. Oltre all'importanza di evitare l'infiammazione, mantenere chiarezza ottica facilita in vivo imaging ed elettrofisiologia per monitorare la progressione della malattia. Anche se non è chiaro in che misura queste complicazioni possono interessare le indagini di malattia, può essere meglio evitare penetrante dell'occhio durante l'induzione del modello. L'approccio di sutura circumlimbal evita la penetrazione del globo e facilita in vivo valutazione longitudinale della struttura retinica e della funzione. Ancora più importante, questo modello si differenzia da quelle precedenti nella sua capacità di restituire IOP ai valori basali di rimozione della sutura quando richiesto. Normalizzazione di IOP può essere utile per studiare il cellulare e correlati molecolari del ganglio reversibile e irreversibile delle cellule ferita10,11,12,13,14.
Questo articolo si concentra sulla tecnica per l'induzione del modello. Caratterizzazione della lesione retinica indotta da questo modello nei ratti e nei topi può essere trovato più dettagliatamente altrove15,16,17,18,19.

<table><tbody><tr><td>soluzione salina normale</td><td>Baxter International Inc</td> AHB1323 <td>Mantenere l'idratazione corneale durante l'intervento chirurgico</td><td></td></tr><tr><td>Cloresadina 0,5%</td><td>Orion Laboratories</td><td>27411, 80085</td><td>Disinfezione dello strumento chirurgico</td></tr><tr><td>Isoflurano 99,9%</td><td>Abbott Australasia Pty Ltd</td><td>CAS 26675-46-7</td><td>Nome proprietario: Isoflo(TM) Anestetico per inalazione. Anestetico per inalazione di grado farmaceutico miscelato con ossigeno gassoso per la procedura di sutura</td></tr><tr><td>lubrificante oculare</td><td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>1618611</td><td>Nome proprietario: Lubrificante oculare per mantenere umido l'altro occhio</td></tr><tr><td>Porta ago (microchirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>555419NT</td><td>Per tenere l'ago durante la chirurgia oculare</td></tr><tr><td>Proxymetacaine 0,5%</td> <td>Alcon Laboratories&nbsp;</td><td>CAS 5875-06-9</td><td>Forbici per analgesia oculare topica</td></tr><tr><td>(microchirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>501232</td><td>Per tagliare il moncone di sutura in eccesso durante la legatura</td></tr><tr><td>Telo chirurgico</td><td>Forniture mediche vitali</td><td>GM29-612EE</td><td>Garantire un ambiente sterile durante l'intervento chirurgico</td></tr><tr><td>Ago da sutura per ratti (microchirurgia)</td><td>Aghi medici Ninbo</td><td>151109</td><td>8-0 Sutura in nylon con ago rotondo, tagliente 3/8, doppio ago, lunghezza sutura 30 cm</td></tr><tr><td>Ago da sutura per topi (microchirurgia)</td><td>Aghi medici Ninbo</td><td>160905</td><td>sutura in nylon 10-0 attaccata con ago rotondo, tagliente 3/8, doppio ago, lunghezza sutura 30 cm</td></tr><tr><td>Pinzette (microchirurgia)</td><td>World Precision Instruments</td><td>500342</td><td>manipolare i tessuti durante la chirurgia oculare</td></tr><tr><td></td><td>TONOLAB, iCare, Helsinki, Finlandia</td><td>TV02</td><td>per il monitoraggio della pressione intraoculare</td></tr></tbody></table>

un modello del glaucoma indotto da sutura circumlimbal nei ratti e nei topi

A Model of Glaucoma Induced by Circumlimbal Suture in Rats and Mice

La sutura di circumlimbal è una tecnica per indurre glaucoma sperimentale nei roditori cronicamente elevando la pressione intraoculare (IOP), un ben noto fattore di rischio per il glaucoma. Questo protocollo dimostra una guida dettagliata su questa tecnica a lungo Evans ratti e topi C57BL/6. In anestesia generale, una "" sutura viene applicata sul conjunctiva, intorno all'equatore e dietro il limbus dell'occhio. Il collega occhio serve come controllo non trattato. Nel corso della durata del nostro studio, che era un periodo di 8 settimane per ratti e 12 settimane per i topi, IOP è rimanere elevato, come misurato regolarmente di tonometria di rimbalzo in animali coscienti senza anestesia topica. In entrambe le specie, gli occhi suturati ha mostrato le caratteristiche dell'elettroretinogramma costanti con disfunzione retinica interna preferenziale. Tomografia ottica di coerenza ha mostrato selettiva assottigliamento dello strato di fibre nervose retiniche. L'istologia della retina del ratto in sezione trasversale trovato ridotta densità delle cellule nello strato delle cellule del ganglio, ma nessun cambiamento in altri strati cellulari. Macchiatura delle retine di piatto-montato del mouse con un marker specifico di cellule del ganglio (trasformante) ha confermato la perdita delle cellule del ganglio. La sutura di circumlimbal è un semplice, minimamente invasiva e conveniente modo per indurre ipertensione oculare che porta alla lesione delle cellule del ganglio in topi e ratti.

I seguenti risultati in ratti18 e topi16 precedentemente sono stati segnalati e sono riassunti qui. La sutura circumlimbal ha prodotto un modello simile dell'altezza dello IOP nei ratti e nei topi (Figura 2). Una breve impennata IOP, fino a 58,1 ± 2.7 mmHg in ratti e 38,7 ± 2.2 mmHg nei topi, è stata trovata subito dopo la procedura di sutura. Nei ratti, IOP grandezza ridotta gradualmente nel tempo per essere 44...

Ipertensione oculare cronica è indotta applicando una sutura circumlimbal in ratti e topi, che conduce al deterioramento strutturale e funzionale delle cellule ganglionari retiniche coerente con il glaucoma.

Un modello del Glaucoma indotto da sutura Circumlimbal nei ratti e nei topi

The circumlimbal suture is a technique for inducing experimental glaucoma in rodents by chronically elevating intraocular pressure (IOP), a well-known ...

Questo approccio fornisce un modo riproducibile e minimamente invasivo per elevare IOP per lunghi periodi di tempo. Questo ci aiuterà a capire meglio il glaucoma. Un vantaggio di questa tecnica, è che l'elevazione IOP è facilmente reversibile, permettendo ai ricercatori di indagare le capacità degli occhi di riprendersi dall'elevazione cronica della pressione.Una dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto è difficile suturare e legare un nodo di tensione dalla sola lettura di un manoscritto. Per aiutare bene, si consiglia di uno nuovo a questa tecnica, praticare la sutura al microscopio. Inizia fasciando il topo sveglio in un pezzo di panno morbido per calmare l'animale.Tenere delicatamente il busto in una mano, con gli animali tornati appoggiati contro il petto degli investigatori, ed esporre la testa e il collo. Utilizzare l'altra mano per portare il tonometro di rimbalzo vicino all'occhio dei ratti, in modo che la punta della sonda interoculare sia a circa due o tre millimetri di distanza e perpendicolare all'apice corneale. Attendere alcuni secondi affinché il topo si calmi, quindi premere il pulsante di misurazione una volta.Osservare la parte superiore del

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Questo video dimostra l'induzione del glaucoma in un ratto anestetizzato iniettando soluzione salina ipertonica nella vena episclerale. La soluzione salina entra nella rete trabecolare attraverso il canale di Schlemm, causando cicatrici tissutali, che bloccano il deflusso dell'umore acqueo e aumentano la pressione intraoculare. L'elevata pressione danneggia le cellule gangliari retiniche, portando al glaucoma.

Una tecnica di iniezione di soluzione salina ipertonica per indurre il glaucoma nei ratti

In questo video, un ratto anestetizzato viene sottoposto a una procedura oculare in cui le perle magnetiche vengono iniettate nella camera anteriore sotto un campo magnetico per bloccare l'angolo iridocorneale. Questo blocco ostruisce la rete trabecolare, impedendo il drenaggio dell'umore acqueo e portando ad un aumento della pressione intraoculare, danneggiando le cellule gangliari retiniche e il nervo ottico. Questo sviluppa una condizione simile al glaucoma.

Induzione sperimentale del glaucoma tramite ostruzione dell'angolo iridocorneale in un modello murino

Fonte: Lani-Louzada, R., et al., Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori. J. Vis. Exp. (2022)Questo video dimostra l'induzione e il monitoraggio di un'elevata pressione intraoculare (IOP) in un modello di ratto. Il processo prevede la cauterizzazione dei vasi sanguigni limbari, con conseguente occlusione dei vasi e IOP elevata. Il ratto viene quindi lasciato riprendersi e la IOP viene regolarmente monitorata sia...

 Induzione di un'elevata pressione intraoculare in un modello di ratto

Ipertensione oculare cronica è indotta mediante fotocoagulazione laser del trabecolato negli occhi del mouse. La pressione intraoculare (IOP) è elevato per diversi mesi dopo il trattamento laser. La diminuzione di acuità visiva e la sensibilità al contrasto di animali da esperimento sono monitorati utilizzando il test optomotor.

Un modello di topo indotta da laser di cronica ipertensione oculare per caratterizzare difetti visivi

Presentiamo un metodo per indurre un'elevata pressione intraoculare (IOP), iniettando microsfere magnetiche nell'occhio del ratto, per modellare il glaucoma. Ciò porta a forti aumenti di pressione e a un'estesa morte neuronale. Questo protocollo è facile da eseguire, non richiede iniezioni ripetute e produce aumenti IOP stabili e duraturi.

Experimental Glaucoma indotta da iniezione oculare di microsfere magnetiche

Qui, presentiamo un protocollo per indurre ipertensione oculare nell'occhio murino che provoca la perdita di cellule gangliari retiniche come osservato nel glaucoma. microsfere magnetiche vengono iniettati nella camera anteriore e attratti l'angolo iridocorneale utilizzando un magnete per bloccare il deflusso dell'umore acqueo.

Un magnetica microperla occlusione modello per indurre ipertensione oculare-Dependent Glaucoma nei topi

Il glaucoma è caratterizzato da danni alle cellule gangliari retiniche. L'induzione del glaucoma in modelli animali può fornire informazioni sullo studio di questa malattia. Qui, descriviamo una procedura che induce la perdita di RGC in un modello di ratto in vivo e dimostra la preparazione di retine a montaggio intero per l'analisi.

Glaucoma inducono Procedura in un<em&gt; In Vivo</em&gt; Modello di ratto e tutto il montaggio Retina Preparazione

Qui, presentiamo un protocollo per indurre ipertensione oculare e neurodegenerazione glaucomatosa negli occhi del topo mediante iniezione intracamerale di olio di silicone e la procedura per la rimozione dell'olio di silicone dalla camera anteriore per restituire una pressione intraoculare elevata a Normale.

Un modello di ipertensione oculare indotta da olio di silicone reversibile nei topi

Qui, descriviamo l'uso della tomografia a coerenza ottica di dominio spettrale (SD-OCT) per visualizzare strutture retiniche e oculari in vivo in modelli di degenerazione retinica, glaucoma, retinopatia diabetica e miopia.

Valutazioni strutturali in vivo della malattia oculare in modelli di roditori mediante tomografia a coerenza ottica

L'obiettivo di questo protocollo è quello di caratterizzare un nuovo modello di neurodegenerazione glaucomatosa basato sulla cauterizzazione termica a 360° del plesso vascolare limbare, inducendo ipertensione oculare subacuta.

Cauterizzazione a cerchio completo del plesso vascolare limbare per il glaucoma indotto chirurgicamente nei roditori

Impara a indurre ipertensione oculare cronica nei roditori con sutura circumlimbale per studiare il glaucoma. Questa tecnica minimamente invasiva permette di analizzare il deterioramento delle cellule gangliari retiniche e i meccanismi di recupero.

Un modello del Glaucoma indotto da sutura Circumlimbal nei ratti e nei topi

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