Name: שיטה אוטומטית כדי לקבוע את הביצועים של דרוזופילה בתגובה לשינויים בטמפרטורה בחלל ובזמן (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-10-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 52 s
Description: חקור ביצועי תנועה של זבובי פירות בתגובה לשינויי טמפרטורה באמצעות זירה מתוכנתת. השיטה מאפשרת שינויים מהירים ומדויקים בטמפרטורה לחקר תגובות התנהגותיות ורגישות סביבתית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמך בחלקה על ידי מלגה Behavioural, תוכנית קוגניטיבי מדעי המוח של אוניברסיטת של חרונינגן, במלגה ללימודי תואר שני, y Consejo נאסיונאל דה Ciencia Tecnología (CONACyT) במקסיקו, כמובן מאליו אנדריה סוטו-פאדילה, במענק מטעם קרן טמפלטון ג'ון לחקר הזמן הוענק Hedderik ואן ריין, ז'אן כריסטוף Billeter. אנחנו גם אסיר תודה פיטר חריט Bosma בשל השתתפותו בפיתוח הגשש FlySteps .
ניתן למצוא קבצי script TemperaturePhases, FlySteps, ו FlyStepAnalysis כמידע משלים, הקישור הבא זמני וזמין לציבור: https://dataverse.nl/privateurl.xhtml?token=c70159ad-4d92-443d-8946-974140d2cb78

1. הכנת אוכל לטוס בינוני
<ol><li>שופכים 1 ליטר של מי ברז לתוך גביע זכוכית 2 ל', להוסיף פס מגנטי מערבבים. לשים את הספל על פלטה מגנטית ב 300 ° C עד רותחים בטמפרטורה.</li>
	<li>מערבבים-כדורים לדקה 500 ולהוסיף את הפעולות הבאות: 10 גרם של אגר 30 גר' גלוקוז, 15 גר' סוכרוז, 15 גר' קמח תירס, 10 גרם של נבט חיטה, 10 גרם קמח סויה, 30 גר' מולסה, 35 גרם שמרים יבשים פעילים.</li>
	<li>כאשר מערבבים קצף נמרצות, להנמיך את הטמפרטורה פלטה עד 120 ° C תוך כדי ערבוב.</li>
	<li>להפעיל את הטמפרטורה פלטה נוספת עד 30 מעלות צלזיוס לאחר 10 דקות ולהמשיך לערבב עד המיקס מתקררת כדי 48 º C. למדוד את הטמפרטורה על-ידי הוספת מד חום ישירות לתוך האוכל בלי לגעת בקירות של הספל.</li>
	<li>לפזר 2 גר' p-הידרוקסי-בנזואית חומצה מתיל אסטר לתוך 10 מ"ל אתנול 96%, להוסיף את התערובת יחד עם 5 מ ל חומצה propionic 1 מ'. המשך ערבוב למשך 3 דקות.</li>
	<li>כבה את הכיריים ויוצקים 45 מ ל מזון לתוך בקבוקים rearing ו 6.5 מ ל מזון לתוך הבקבוקונים אוסף.</li>
</ol>2. הכנת זבובים
<ol><li>מקום 20 גברים ו- 20 נקבה זבובים לבקבוקים rearing המכיל 45 מ של אוכל לטוס בינוני. העברת הזבובים בקבוקים חדשים לאחר 3-4 ימים על-ידי הקשה אותם למטה ולאחר מכן הקשה על אותם לתוך הבקבוקים טריים. למחוק את הזבובים לאחר שלושה שינויים.<ol>
<li>מקם את הבקבוקים בתוך החממה תחת 12-h אור/12-h מחזורים כהה עם טמפרטורת חום קבועה של 25 מעלות צלזיוס. הערה: דור חדש של זבובים יהיה eclose לאחר עשרה ימים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>עזים ומתנגד לאחרונה eclosed זבובים על רפידות פחמן דו-חמצני לכל היותר 4 דקות ולאסוף אותם 2.5 x 9.5 ס מ לטוס לגידול צלוחיות עם 6.5 מ של מדיום מזון לעוף באמצעות מברשת.<ol>
<li>לאסוף זבובים בתולה רק ולהפריד ביניהם על ידי קבוצות של זבובים 20 לכל גידול המבחנה.</li>
		<li>מקם את הבקבוקונים בתוך אינקובטורים במשך 5-7 ימים, שינוי הזבובים בקבוקונים חדשים כל 2-3 ימים, בימים לפני הניסויים.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. מסגרת של אורות
<ol><li>ליצור מסגרת עץ של 10 ס מ אורך, רוחב 4 ס"מ, 4 ס מ גובה 0.5 ס מ עבה.</li>
	<li>על כל אחד הקצוות קצר, ליצור גבול של 4 ס מ אורך 4 ס מ גובה, רוחב 1.5 ס מ לכיוון הבתוך שטח של מסגרת העץ. השאר הפנים הפנימי של הגבול פתוח.</li>
	<li>תרגיל שני חורים של 0.5 ס מ קוטר בנקודת החיתוך של אחד הקצוות ארוך של מסגרת העץ ועל כל הגבולות בקצוות קצר.</li>
	<li>מקום 10 ס מ של רצועה LED לבנה חמה בתוך כל אחד הגבולות על הקצוות קצר. לקלף האחורי של רצועת LED להדביק אותו מיד במקום. הערה: עבור ניסויים ב שעליה תאורה צריכים להיות מסולקים, רצועת LED לבן חם הרבה מכדי LED אינפרא-אדום רצועות.</li>
	<li>להתחבר קצה אחד של רצועת LED באחד הגבולות את אספקת החשמל מיתוג, סופו אחרים לרצועת LED על הגבול ההפוך.</li>
	<li>הפעל את אספקת החשמל מיתוג כדי לוודא כי שתי רצועות LED להפעיל.</li>
	<li>לכסות את הצד הפתוח של כל גבול עם פיסת נייר לבן.</li>
	<li>דבק עוד פיסת נייר על כל אחד מהשלבים פנימי של קצוות ארוכים.</li>
</ol>4. טמפרטורה מבוקרת ארנה
<ol><li>הפעל את הזירה מבוקרי טמפרטורה (איור 1A וג 1). ודא המאוורר מתחיל לרוץ הטבעת אלומיניום מתחיל מתחמם.</li>
	<li>להשתמש בכבל USB להתחבר הזירה טמפרטורה מבוקרת מחשב בקרת להריץ את הסקריפט TemperaturePhases עם הרצפים טמפרטורה.</li>
	<li>פתח את התסריט TemperaturePhases שליטה במחשב וודא כי הרצף טמפרטורה מוגדרת כראוי (Video 1).<ol>
<li>בדוק כי משך הזמן של כל שלב נסיוני מוגדר כ- 60 s על-ידי אימות "הגומה. StimulusDur"שווה ל- 60 s.</li>
		<li>בדוק כי 1) המספר השווה רצוי מספר שלבים, 2) איטרטיבי ON/OFF ההקמה של מעיד על אדום דיודות מפיצות אור (נוריות), 3) 2 ° C בטמפרטורה לכל שלב, 4) 16 ° C כמו הטמפרטורה המוצא שכולכם צודקים תחת "התחל את ניסיוני מדור "אבן. הערה: לאפשר את הזבובים להסתגלות לזירה לטוס במשך 7 דקות ב 16 ° C כדי למנוע גידול מלאכותיים של מהירות במהלך שלבי הניסוי הראשון (איור 2).</li>
		<li>להריץ את הסקריפט TemperaturePhases . התוכנה לאתחל במשך 5 שניות כפי שנקבע "בזירה. המתן", אז תפסיק.</li>
		<li>הקש על מקש הרווח של לוח המקשים כדי להתחיל הפעלת את שלבי הניסוי פעם זבוב פוצץ אל תוך הזירה לעוף (שלב 5.3). הערה: TemperaturePhases הוא script הנוכחי שליטה התיבה; עם זאת, ניתן ליצור סקריפטים מותאמים אישית אחרים לשימוש בהתקן זה להתאים לדרישות של ניסויים שונים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>חבר את המצלמה על הזירה הקלטה למחשב באמצעות כבל ה-USB של המצלמה.</li>
	<li>פתח את התוכנית הקלטת וידאו (ראה טבלה של חומרים) הקלטה במחשב על-ידי בחירה "קובץ | סרט ההקלטה החדשה". המסך מציג את התמונה מן המצלמה תיפתח.<ol>
<li>ודא כי תמונת המצלמה לוכדת כל הקצוות של הזירה, מעיד על נוריות אדומות.</li>
		<li>. תתחיל להקליט על ידי לחיצה על הכפתור האדום באמצע הקצה התחתון של המסך מציג את תמונת המצלמה ברגע המסגרת של אורות הוגדרה סביב הזירה (שלב 5.4) הערה: שינויים קטנים בתחום התאורה יכולים להשפיע הדיוק של המעקב. מומלץ לשמור את ההארה של הזירה מבוקרי טמפרטורה קבועה על ידי תיקון המיקום של המנגנון.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. הטמפרטורה ניסויים התנהגותיים
<ol><li>להכין את הזירה לעוף (איור 1C).<ol>
<li>במקום חוט לבן דבק מוליך על האריחים נחושת, הבטחת שכל הקצוות מכוסים.</li>
		<li>מניחים את הטבעת אלומיניום המחוממת סביב האריחים נחושת. הקצה של הטבעת מתאים באופן מושלם סביב האריחים נחושת אז מניחים אותה תמיד באותו מיקום.</li>
		<li>לנקות את מכסה זכוכית עם טישו נקייה ומניחים אותו על הטבעת אלומיניום, השארת רווח שדרכו זבוב יכול להיות מפוצץ ב. הערה: לפני הניסויים, מעיל מכסה זכוכית עם הסוכן siliconizing כדי ליצור משטח חלקלק. החל הסוכן siliconizing במשך 24 שעות ביממה, לשטוף אותו עם מים לפני השימוש.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להריץ את הסקריפט TemperaturePhases (שלב 4.3.3) ופתח את התוכנית הקלטת וידאו (שלב 4.5).</li>
	<li>לפוצץ את הזבוב מ בקבוקון rearing (שלב 2.2.2) אל תוך הזירה לעוף (למשל., 1 זכר לטוס באיור3).<ol>
<li>לקחת בקבוקון של זבובים מן החממה, לחץ עליה פעמיים כדי לכפות עליהם ללכת למטה, השמנה של זבוב אחד עם העצמות הפה, לסגור את הצנצנת ואת סינרול החממה.</li>
		<li>מקם את הזבוב בזירה דרך הפרצה שננטש בין מכסה זכוכית טבעת אלומיניום (שלב 5.1.3).</li>
		<li>לסגור את הפער בין מכסה זכוכית אלומיניום טבעת על ידי דוחף את מכסה הזכוכית עד שהוא מגיע לקצה של הטבעת אלומיניום ברגע הזבוב הוא הציג לזירה לעוף.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להציב את המסגרת של אורות סביב הזירה כדי להבטיח תאורה סימטרי.<ol>
<li>סמן את המיקום (למשל., שימוש בסמן קבוע) של המסגרת של אורות סביב לטוס הזירה (איור 1C) כדי להבטיח כי המסגרת ממוקמת תמיד באותו מיקום.</li>
	</ol>
</li>
	<li>להתחיל להקליט עם התוכנית הקלטת וידאו (שלב 4.5.2), הקש על מקש הרווח במקלדת של המחשב הבקרה כדי להתחיל הפעלת את שלבי הניסוי (שלב 4.3.4).</li>
	<li>ניסיוני אחרי כל השלבים נעשים, שמירת הוידאו בתבנית .mp4 או .avi ולהסיר הזבוב מן הזירה לטוס עם העצמות הפה. הערה: בסוף שלבי הניסוי יכול להיקבע על ידי שתי נוריות אדומות מעיד על להיות כבויים או ההפסקה script TemperaturePhases .<ol>
<li>לעצור את הקלטת על ידי לחיצה על הלחצן ' עצור ' באמצע הקצה התחתון של המסך בתוכנית הקלטת הוידאו. הקש "קובץ | "שמור בשם כדי לשמור את הווידאו.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. וידאו מעקב וניתוח נתונים
<ol><li>השתמש FlySteps (סרטון 2) תוכנת מעקב כדי לבצע מעקב אחר קטעי וידאו.<ol>
<li>פתח את "configuration_file.ini" בתוך התיקיה "FlyTracker".</li>
		<li>הגדר את המיקום של קטעי וידאו ב- "video_folder" ואת שמותיהם של קטעי וידאו ב- "video_files".</li>
		<li>לציין גבולות הזירה לטוס ב- "arena_settings" על בסיס (x, y) קואורדינטות של נקודות מרובות בקצה הזירה.</li>
		<li>ציין את המיקום של נוריות אדומות מעיד ב- "led_settings" על בסיס (x, y) קואורדינטות פיקסלים של המיקום של המרכז של הנוריות.</li>
		<li>בדוק את מיקומו של גבולות הזירה לעוף על-ידי הגדרת "באגים" 'נכונה' ב- "arena_settings", לחיצה על "שמור", להריץ את הסקריפט בתוך הטרמינל. לכידת מסך של הוידאו יופיע עם ריבוע כחול הנוצרת על-ידי הקואורדינטות שהוזנו ב- "arena_settings". הערה: כיכר זו מקיפה את האזור לבצע אחריהם מעקב.</li>
		<li>לשנות "באגים" ב- "arena_settings" ל- "false", לחץ על "שמור", ולהפעיל את המסך בטרמינל עוד פעם. הערה: אפשרות זו תפעיל את תהליך מעקב. הערה: זבובים יכולים ללכת אל מחוץ לאזור מעקב על גבי הטבעת אלומיניום מחוממת. זה קורה במהלך השניות הראשונות של ניסוי, אחרי אשר זבובים. תפסיק לגעת את הטבעת מחוממת ולהישאר בתוך האזור מעקב. הערה: ניתן לעקוב קטעי וידאו עם אחרים תוכנת מעקב לפי ההעדפות של הנסיין.</li>
	</ol>
</li>
	<li>שימוש (x, y) המיקום של כל זבוב שסופקו על-ידי תוכנת מעקב כדי לחשב את מידת הריבית עבור הביצועים בטמפרטורה. קבצי script מותאמים אישית (למשל., FlyStepsAnalysis ב Supplementary) יכול לשמש.</li>
	<li>להשוות את עקומות הביצועים בטמפרטורה של קבוצות שונות לעוף באמצעות מדידות חוזרות ונשנות (RM) השונות (ANOVA) ופוסט-הוק השוואות מרובות באמצעות תוכנה סטטיסטית (ראה טבלה של חומרים).</li>
</ol>

<ol><li>Abram, P. K., Boivin, G., Moiroux, J., Brodeur, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioural+effects+of+temperature+on+ectothermic+animals+unifying+thermal+physiology+and+behavioural+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22bioRxiv%22%5BJournal%5D)">Behavioural effects of temperature on ectothermic animals unifying thermal physiology and behavioural plasticity.</a> bioRxiv. , (2016).</li>
<li>Rajpurohit, S., Schmidt, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Measuring+thermal+behavior+in+smaller+insects%3A+A+case+study+in+Drosophila+melanogaster+demonstrates+effects+of+sex%2C+geographic+origin%2C+and+rearing+temperature+on+adult+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Fly%22%5BJournal%5D)">Measuring thermal behavior in smaller insects: A case study in Drosophila melanogaster demonstrates effects of sex, geographic origin, and rearing temperature on adult behavior.</a> Fly. 10 (4), 149-161 (2016).</li>
<li>Jezovit, J. A., Levine, J. D., Schneider, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phylogeny+environment+and+sexual+communication+across+the+Drosophila+genus%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Biology%22%5BJournal%5D)">Phylogeny environment and sexual communication across the Drosophila genus.</a> The Journal of Experimental Biology. 220 (1), 42-52 (2017).</li>
<li>Sinclair, B. J., Williams, C. M., Terblanche, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+Thermal+Performance+among+Insect+Populations%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+and+Biochemical+Zoology%22%5BJournal%5D)">Variation in Thermal Performance among Insect Populations.</a> Physiological and Biochemical Zoology. 85 (6), 594-606 (2012).</li>
<li>Gibert, P., Huey, R., Gilchrist, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Locomotor+performance+of+Drosophila+melanogaster%3A+Interactions+among+developmental+and+adult+temperautures%2C+age%2C+and+geography%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Locomotor performance of Drosophila melanogaster: Interactions among developmental and adult temperautures, age, and geography.</a> Evolution. 55 (1), 205-209 (2001).</li>
<li>Trotta, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermal+plasticity+in+Drosophila+melanogaster%3A+A+comparison+of+geographic+populations%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Thermal plasticity in Drosophila melanogaster: A comparison of geographic populations.</a> BMC Evolutionary Biology. 6, 1-13 (2006).</li>
<li>Klepsatel, P., Gálikova, M., De Maio, N., Huber, C. D., Christian, S., Flatt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Variation+in+thermal+performance+and+reaction+norms+among+populations+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Evolution%22%5BJournal%5D)">Variation in thermal performance and reaction norms among populations of Drosophila melanogaster.</a> Evolution. 67 (12), 3573-3587 (2013).</li>
<li>Latimer, C. A. L., Wilson, R. S., Chenoweth, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+genetic+variation+for+thermal+performance+curves+within+and+among+natural+populations+of+Drosophila+serrata%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Evolutionary+Biology%22%5BJournal%5D)">Quantitative genetic variation for thermal performance curves within and among natural populations of Drosophila serrata.</a> Journal of Evolutionary Biology. 24, 965-975 (2011).</li>
<li>Chen, J., Nolte, V., Schlotterer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature-related+reaction+norms+of+gene+expression%3A+Regulatory+architecture+and+functional+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Temperature-related reaction norms of gene expression: Regulatory architecture and functional implications.</a> Molecular Biology and Evolution. , (2015).</li>
<li>Kellermann, V., Overgaard, J., Hoffmann, A. A., Flojgaard, C., Svenning, J. -C., Loeschcke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Upper+thermal+limits+of+Drosophila+are+linked+to+species+distributions+and+strongly+constrained+phylogenetically%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Upper thermal limits of Drosophila are linked to species distributions and strongly constrained phylogenetically.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (40), 16228-16233 (2012).</li>
<li>Andersen, J. L., Manenti, T., Sørensen, J. G., Macmillan, H. A., Loeschcke, V., Overgaard, J. <a target="_blank" href="https://besjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1365-2435.12310">How to assess Drosophila cold tolerance: Chill coma temperature and lower lethal temperature are the best predictors of cold distribution limits.</a> Functional Ecology. 29 (1), 55-65 (2015).</li>
<li>Krstevska, B., Hoffmann, A. A. <a target="_blank" href="https://link.springer.com/article/10.1007/BF01989735">The effects of acclimation and rearing conditions on the response of tropical and temperate populations of Drosophila melanogaster and D. simulans to a temperature gradient (Diptera: Drosophilidae).</a> Journal of Insect Behavior. 7 (3), 279-288 (1994).</li>
<li>Frank, D. D., Jouandet, G. C., Kearney, P. J., Macpherson, L. J., Gallio, M. <a target="_blank" href="https://www.nature.com/articles/nature14284">Temperature representation in the Drosophila brain.</a> Nature. 519 (7543), 358-361 (2015).</li>
<li>Gallio, M., Ofstad, T. A., Macpherson, L. J., Wang, J. W., Zuker, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+coding+of+temperature+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">The coding of temperature in the Drosophila brain.</a> Cell. 144 (4), 614-624 (2011).</li>
<li>Hamada, F. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+internal+thermal+sensor+controlling+temperature+preference+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">An internal thermal sensor controlling temperature preference in Drosophila.</a> Nature. 454 (7201), 217-220 (2008).</li>
<li>Ni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+gustatory+receptor+paralogue+controls+rapid+warmth+avoidance+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A gustatory receptor paralogue controls rapid warmth avoidance in Drosophila.</a> Nature. 500 (7464), 580-584 (2013).</li>
<li>Liu, W. W., Mazor, O., Wilson, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermosensory+processing+in+the+Drosophila+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Thermosensory processing in the Drosophila brain.</a> Nature. 519 (7543), 353-357 (2015).</li>
<li>Neely, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TrpA1+Regulates+Thermal+Nociception+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Public+Library+of+Science+ONE%22%5BJournal%5D)">TrpA1 Regulates Thermal Nociception in Drosophila.</a> Public Library of Science ONE. 6 (8), e24343(2011).</li>
<li>Zhong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thermosensory+and+non-thermosensory+isoforms+of+Drosophila+melanogaster+TRPA1+reveal+heat+sensor+domains+of+a+thermoTRP+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Thermosensory and non-thermosensory isoforms of Drosophila melanogaster TRPA1 reveal heat sensor domains of a thermoTRP channel.</a> Cell Reports. 1 (1), 43-55 (2012).</li>
<li>Barbagallo, B., Garrity, P. A. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4508239/">Temperature sensation in Drosophila.</a> Current Opinion in Neurobiology. 34, 8-13 (2015).</li>
<li>Tang, X., Platt, M. D., Lagnese, C. M., Leslie, J. R., Hamada, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temperature+integration+at+the+AC+thermosensory+neurons+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Temperature integration at the AC thermosensory neurons in Drosophila.</a> Journal of Neuroscience. 33 (3), 894-901 (2013).</li>
<li>Petavy, G., David, J. R., Gibert, P., Moreteau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viability+and+rate+of+development+at+different+temperatures+in+Drosophila%3A+A+comparison+of+constant+and+alternating+thermal+regimes%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Thermal+Biology%22%5BJournal%5D)">Viability and rate of development at different temperatures in Drosophila: A comparison of constant and alternating thermal regimes.</a> Journal of Thermal Biology. 26 (1), 29-39 (2001).</li>
<li>Diegelmann, S., Zars, M., Zars, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+dissociation+of+acquisition+and+memory+strength+in+the+heat-box+spatial+learning+paradigm+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Genetic dissociation of acquisition and memory strength in the heat-box spatial learning paradigm in Drosophila.</a> Learning & Memory. 13 (1), 72-83 (2006).</li>
<li>Zars, M., Zars, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+and+low+temperatures+have+unequal+reinforcing+properties+in+Drosophila+spatial+learning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Comparative+Physiology+A%3A+Neuroethology%2C+Sensory%2C+Neural%2C+and+Behavioral+Physiology%22%5BJournal%5D)">High and low temperatures have unequal reinforcing properties in Drosophila spatial learning.</a> Journal of Comparative Physiology A: Neuroethology, Sensory, Neural, and Behavioral Physiology. 192 (7), 727-735 (2006).</li>
<li>Zars, T., Wolf, R., Davis, R., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+expression+of+a+type+I+adenylyl+cyclase+rescues+the+rutabaga+mutant+memory+defect%3A+in+search+of+the+engram%5BTitle%5D)+AND+%22Learning+%26+Memory%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific expression of a type I adenylyl cyclase rescues the rutabaga mutant memory defect: in search of the engram.</a> Learning & Memory. 7 (1), Cold Spring Harbor, NY. 18-31 (2000).</li>
<li>Jones, M. A., Grotewiel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+for+age-related+impairment+in+locomotor+and+other+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model for age-related impairment in locomotor and other behaviors.</a> Experimental Brain Research. 46 (5), 320-325 (2011).</li>
</ol>

המחברים מצהירים כי יש להם אינטרסים כלכליים אין מתחרים.

כאן הובאו אוטומטיים מבוקרי טמפרטורה זירה (איור 1) שמייצר שינויי טמפרטורה מדויקת בזמן ובמרחב. שיטה זו מאפשרת חשיפה של הפרט דרוזופילה מחיישנים מגביר הדרגתית של הטמפרטורה (איור 2 , איור 3) אלא גם לאתגרים טמפרטורה דינמי שבו כל אריח של הזירה זבוב היה מחומם באופן עצמאי לטמפרטורה שונים (איור 4 , איור 5).
הזירה מבוקרי טמפרטורה ...

טמפרטורה היא גורם סביבתי מתמיד זה משפיע על איך אורגניזמים לפעול ולהתנהג1. הבדלי גובה ורוחב להוביל הבדלים בסוג באקלים האורגניזם נחשפים, שתוצאתה בחירה אבולוציונית לתגובתם טמפרטורה2,3. האורגניזמים להגיב טמפרטורות שונות דרך עיבודים מורפולוגי, פיזיולוגיים והתנהגותיים זה למקסם ביצועים תחת שלהם מסוים סביבות4. לדוגמה, זבוב הפירות דרוזופילה melanogaster, אוכלוסיות מאזורים שונים יש העדפות טמפרטורה שונות, הגוף גדלים, פעמים התפתחותית, אריכות-חיים, פוריות וביצועים הליכה בטמפרטורות שונות2 ,5,6,7. המגוון שנצפה בין הזבובים ממוצא שונה מוסבר בחלקו על ידי וריאציה גנטית גן פלסטיק הביטוי8,9. באופן דומה, מינים דרוזופילה מאזורים שונים להפיץ באופן שונה בין מעברי צבע טמפרטורה ולהראות הבדלים ההתנגדות החום הקיצוני, בדיקות קר10,11,12.
דרוזופילה הפך גם לאחרונה מודל הבחירה כדי להבין את הבסיס הגנטי והעצבים של טמפרטורה תפיסה13,14,15,16,17. באופן כללי, הזבוב הבוגר תופסים טמפרטורה באמצעות חיישני טמפרטורה היקפיים קרים וחמים, מחושיהם ודרך חיישני טמפרטורה15,16 14,13,המוח , 17 , 18 , 19 , 20. קולטני הפריפריה לטמפרטורות חם אקספרס Gr28b.d16 או Pyrexia21, תוך הפריפריה מאופיינים קולטנים קר Brivido14. במוח, טמפרטורה מעובד על ידי נוירונים לבטא TrpA115. מחקרים התנהגותיים על מוטציות של המסלולים הללו משתפרים הבנתנו כיצד מעובד בטמפרטורה ולתת תובנות מנגנונים משתנים בין אוכלוסיות של דרוזופילה ממחוזות שונים.
כאן נתאר ארנה מבוקרי טמפרטורה שמייצר שינויי טמפרטורה מדויקת ומהירה. חוקרים יכולים מראש תכנית שינויים אלה, אשר מאפשר מניפולציות טמפרטורה סטנדרטית ו הדיר ללא התערבות אנושית. זבובים הם הקליטו, במעקב עם תוכנות מיוחדות כדי לקבוע את המיקום שלהם ואת המהירות בכל השלבים השונים של ניסוי. המדד העיקרי הוצג פרוטוקול זה הוא מהירות הליכה בטמפרטורות שונות, כי הוא אינדקס רלוונטי מבחינה אקולוגית בביצועים פיזיולוגיים ניתן לזהות הסתגלות תרמיות בודדות5. יחד עם טמפרטורה קולטן מוטציות, טכניקה זו יכולה לסייע לחשוף את המנגנונים של עיבוד תרמי ברמה התאית וביוכימי.

<table><tbody><tr><td>Arduino Due</td><td>Arduino</td><td></td><td>A000062 תוכנה RUG</td></tr><tr><td>אלקטרוניקה לוח</td><td>Ruijsink הנדסה דינמית</td><td>FF-Main-02-2014</td><td></td></tr><tr><td>ספק כוח Boost</td><td>XP-Power 48. V 65 W</td><td>ECS65US48</td><td>מוגדר ל-53 וולט</td></tr><tr><td>ספק כוח חימום אריחים</td><td>XP-Power 15. V 80 W</td><td>VFT80US15</td><td></td></tr><tr><td>ספק כוח קירור</td><td>XP-Power 15. V 130 W</td><td>ECS130U515</td><td></td></tr><tr><td>אלמנטים פלטייר</td><td>מרלו תעשיות</td><td>RC12-4</td><td>2 אלמנטים, הזנת DC מבוקרת</td></tr><tr><td>גוף קירור</td><td>פישר טכניק</td><td>LA 9/150-230V</td><td>מנותק לרטט</td></tr><tr><td>חיישני טמפרטורה</td><td>התמחויות מדידה</td><td>MCD_10K3MCD1</td><td>מיקרו תרמיסטור בדיקה</td></tr><tr><td>בלוק/אריחי נחושת</td><td>Ruijsink הנדסה דינמית</td><td>FF-CB-01-2014</td><td></td></tr><tr><td>טבעת אומינום</td><td>Ruijsink הנדסה דינמית</td><td>FF-RoF-02-2015</td><td></td></tr><tr><td>Tesa 4104 סרט לבן 25 x 66 מ"מ</td><td>רכיבי RS</td><td>111-2300&nbsp;</td><td>סרט מוליך לבן</td></tr><tr><td>נוריות אדומות</td><td>Lucky Ligt</td><td>ll-583vc2c-v1-4da</td><td>אורך גל בין 625 ננומטר, 20 mAmp ו-6 V</td></tr><tr><td>רצועת LED לבנה חמה</td><td>Ledstripkoning</td><td>HQ-3528-SMD</td><td>60 נוריות למטר</td></tr><tr><td>מתג ספק כוח</td><td>גנרי</td><td>T-36-12</td><td></td></tr><tr><td>Logitech c920</td><td>Logitech Europe SA</td><td>PN960-001055</td><td></td></tr><tr><td>QuickTime Player</td> הקלטת <td>מחשב</td><td></td> אפל <td> תוכנית</td></tr><tr><td>מעקב תוכנה ניתוח</td><td>R</td><td></td><td>חבילות: pacman</td></tr><tr><td>תוכנת ניתוח מעקב</td><td>MATLAB</td><td></td><td></td></tr><tr><td>הדמיה תרמית</td><td>FLIR T400sc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גרפים וסטטיסטיקות תוכנה</td><td>Graph Pad Prism</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sigmacote</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SL2-100ML</td><td>חומר סיליקון</td></tr><tr><td>בקבוקי גידול זבובים</td><td>Flystuff</td><td>32-130</td><td>6oz בקבוק מלאי Drosophila</td></tr><tr><td>Flypad</td><td>Flystuff</td><td>59-114</td><td></td></tr><tr><td>בקבוקוני גידול זבובים</td><td>דומיניק דוצ'ר</td><td>789008</td><td>צינורות Drosophila צרים 25x95 מ"מ</td></tr><tr><td>אינקובטור</td><td>Sanyo</td><td>MIR-154</td><td></td></tr><tr><td>פלטה חמה מגנטית</td><td>Heidolph</td><td>505-20000-00</td><td>MR Hei-Standard</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Caldic מרכיבים ב.ו.</td><td>010001.26.0</td><td></td></tr><tr><td>גלוקוז</td><td>גזונד & wel</td><td>1019155</td><td>דקסטרוז / Druivensuiker</td></tr><tr><td>סוכרוז</td><td>ואן גילזה</td><td></td><td>סוכר מגורען</td></tr><tr><td>קמח תירס</td><td>זבוב</td><td>62-100</td><td></td></tr><tr><td>נבט חיטה</td><td>Gezond & 1017683</td><td></td><td></td></tr><tr><td>קמח סויה</td><td>Flystuff</td><td>62-115</td><td></td></tr><tr><td>מולסה</td><td>Flystuff</td><td>62-117</td><td></td></tr><tr><td>שמרים יבשים פעילים</td><td>כוכב</td><td></td><td></td>אדום</tr><tr><td>Tegosept</td><td>Flystuff</td><td>20-258</td><td>100%</td></tr></tbody></table>

שיטה אוטומטית כדי לקבוע את הביצועים של דרוזופילה בתגובה לשינויים בטמפרטורה בחלל ובזמן

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

הטמפרטורה היא גורם סביבתי בכל מקום זה משפיע על איך מינים להפיץ ולהתנהג. מינים שונים של זבובי דרוזופילה פירות יש תגובות ספציפיות לשינוי הטמפרטורות בהתאם הסתגלות סובלנות הפיזיולוגית שלהם. זבובים דרוזופילה בעלי גם חום חישה מערכת הפך בסיסי להבנת הבסיס העצבי של טמפרטורת עיבוד ב- ectotherms. אנו מציגים כאן ארנה מבוקרי טמפרטורה המאפשרת שינויי טמפרטורה מדויקת ומהירה עם שליטה הגיאופוליטיות והמרחביות הטמפורלי כדי לחקור את התגובה של זבובים בודדים את שינוי הטמפרטורה. זבובים בודדים להציב בזירה, נחשפים אתגרים טמפרטורה מתוכנתים מראש, כגון הדרגתי אחיד מגביר טמפרטורה כדי לקבוע נורמות התגובה או טמפרטורות המפוזרים במרחב בו זמנית כדי לקבוע העדפות. אנשים מתבצע באופן אוטומטי, המאפשר כימות של העדפה מהירות או מיקום. בשיטה זו ניתן לכמת במהירות התגובה על מגוון רחב של טמפרטורות כדי לקבוע טמפרטורה ביצועים עקומות דרוזופילה או חרקים אחרים באותו סדר גודל. בנוסף, זה יכול לשמש עבור מחקרים גנטיים לכמת טמפרטורה העדפות ותגובות של מוטציות או פראי-סוג זבובים. שיטה זו יכולה לעזור לחשוף את הבסיס של היווצרות המינים תרמי, הסתגלות, כמו גם המנגנונים העצביים העומדים מאחורי בטמפרטורה.

הזירה מבוקרי טמפרטורה (איור 1 א') מורכב שלוש אבנים נחושת שהטמפרטורה שלהם יכול להיות נשלט בנפרד במעגל לתכנות. כל אריח נחושת בעל חיישן טמפרטורה שנותן משוב המעגל לתכנות. המעגל הפעלת ספק כוח כדי להגדיל את הטמפרטורה של כל אריח. אלמנטים פסיביים תרמואלקטרי לשמש החימום קבוע כדי לשמור על הטמפרטורה הרצויה, בעוד כיור חום מקורר על ידי אוהד מספק קירור מתמדת. ההשלכות של שינוי הטמפרטורה קובעת את מהירות התהליך באופן ליניארי. גידול של 2 ° C דורשת רק 0.1 s, וגידול של 18 ° C דו...

כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לקבוע באופן אוטומטי את ביצועי גינקולוגיות דרוזופילה -שינוי הטמפרטורות באמצעות לתכנות מבוקרי טמפרטורה ארנה שמייצר שינויי טמפרטורה מהירים ומדויקים בזמן ובמרחב.

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

שיטה זו יכולה לעזור לנו לענות על שאלות מפתח על תגובת זבובים לשינויי טמפרטורה, כגון הבדלים בין גנוטיפים, האינטראקציה עם רמזים חושיים אחרים, או הפונקציה של קולטני טמפרטורה שונים. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא מאפשרת שינויי טמפרטורה מהירים ומדויקים מרובים השולטים בזמן ובכלל ובדרך אוטומטית. התחל על ידי הצבת 20 זבובים זכר ו 20 נקבה בבקבוק גידול המכיל 45 מיליליטר של מזון זבוב בינוני, והנחת הבקבוק בתוך אינקובטור 25 מעלות צלזיוס תחת אור 12 שעות, 12 שעות מחזורים כהים.לאחר 10 ימים, הרדמה זבובים eclosed לאחרונה על רפידות פחמן דו חמצני לכל היותר ארבע דקות. ולהשתמש מכחול כדי לאסוף זבובים בתולה ב 2.5 על ידי 9.5 ס"מ זבוב גידול בקבוקונים המכילים 6.5 מיליליטר של מזון זבובים טריים בינוני, מופרדים על ידי סקס לקבוצות של 20 זבובים לכל בקבוקון. ואז להחזיר את הבקבוקונים לאנקובטור במשך חמישה עד שבעה ימים.כדי להגדיר זירה מבוקרת טמפרטורה, הפעל את הזירה ופתח את סקריפט שלבי הטמפרטורה במחשב הבקרה. ודא כי רצף הטמפרטורה מוגדר כראוי ובדוק שמשך הזמן של כל שלב ניסיוני מוגדר ל- 60 שניות. תחת סעיף בלוק ניסיוני ההתחלה, לאשר הגדרות אלה:המספר הרצוי של שלבים, התקנה איטרטיבית על / כבוי של דיודות פולטות אור אדום אינדיקציה, שתי מעלות צלזיוס עליית טמפרטורה לכל שלב, ו 16 מעלות צלזיוס כמו הטמפרטורה ההתחלתית.לאחר מכן, הפעל את תסריט שלבי הטמפרטורה. התוכנה תהיה לאתחל במשך חמש שניות ולאחר מכן להפסיק. לניסויים התנהגותיים בטמפרטורה, מניחים גדיל של סרט מוליך לבן על החלק העליון של אריחי הנחושת של הזירה, ומבטיחים שכל הקצוות מכוסים.מניחים טבעת אלומיניום מחוממת סביב אריחי הנחושת ולהשתמש ברקמה נקייה כדי לנגב את כיסוי הזכוכית. מניחים את הכיסוי על החלק העליון של טבעת האלומיניום, משאירים פער שדרכו ניתן לפוצץ זבוב פנימה ומקש על בקבוקון זבוב התאקלם פעמיים כדי לכפות את הזבובים לתחתית הבקבוקון. באמצעות שאפה בפה, ללכוד זבוב אחד ולסגור את הבקבוקון לפני לשים אותו בחזרה לתוך החממה.לפוצץ את הזבוב לתוך הזירה דרך הפער בין כיסוי הזכוכית לטבעת האלומיניום ומיד לדחוף את תלתן הזכוכית כדי לסגור את הפער. מניחים מסגרת של אורות סביב הזירה כדי להבטיח תאורה סימטרית ולהתחיל להקליט עם תוכנית הקלטת וידאו. לאחר מכן הקש על מקש הרווח של מחשב הבקרה כדי להתחיל להפעיל את השלבים הניסיוניים.כדי לעקוב אחר סרטוני הווידאו, פתח את תוכנת המעקב אחר שלבי הטיסה ופתח את קובץ התצורה בתוך תיקיית המעקב לעוף. הגדר את מיקום סרטוני הווידאו תיקיית וידאו ואת שמות סרטוני הווידאו בקבצי וידאו. ציין את גבולות הזירה לטוס בהגדרות הזירה בהתבסס על קואורדינטות x/y פיקסל של נקודות מרובות בקצה הזירה.ספציפי את המיקום של נורות LED אדומות לא פעילות בהגדרות LED, בהתבסס על הקואורדינטות x/y פיקסל של המיקום של מרכז נורות LED. כדי לבדוק את המיקום של גבולות הזירה לטוס, להגדיר איתור באגים כ- true בהגדרות הזירה, לחץ על שמור והפעל את קובץ ה- Script במסוף. לכידת מסך של הווידאו תופיע עם ריבוע כחול שנוצר על ידי הקואורדינטות שהוכנסו בהגדרות הזירה.לאחר מכן שנה את איתור הבאגים בהגדרות הזירה ל- false. לחץ על שמור והפעל שוב את המסך במסוף כדי להתחיל בתהליך המעקב. בניסוי התנהגותי טמפרטורה טיפוסי, זבובים בודדים שנחשפו ל-16, 20 או 24 מעלות צלזיוס מפגינים קטר גבוה יותר בתחילת הניסוי, מאשר לאחר חמש דקות.הזירה מבוקרת הטמפרטורה יכולה לשמש גם להשוואת תגובות התנהגותיות זבוב מרקע גנטי שונה לשינויי טמפרטורה דינמיים. לדוגמה, בניסוי זה, המהירות של כל המינים שנבדקו גדלה בהתאם לעקומות התגובה שלהם ככל שהטמפרטורה עלתה, עד שהגיעה לנקודה של ביצועים מרביים, שלאחריה המהירויות שלהם נרקבו והזבובים נספו. כאשר זבובים בודדים נחשפו ל-40 מעלות צלזיוס באמצע ואריח צד אחד, כאשר אריח הצד השני ב-22 מעלות צלזיוס נוחים, הזבובים מסוג Wild הפסיקו במהירות לנוע לאורך הזירה ולהישאר במיקום הנוח.לעומת זאת, מוטציית הזיכרון הקלאסית Dunce זבובים להמשיך לחקור את הזירה ולבלות פחות זמן מאשר פקדים במיקום נוח. כמו כן, בדיקת שילובים של טמפרטורה ומיקום שימושיים גם בהבנת הפונקציה של קולטני טמפרטורה שונים במהלך שינויי טמפרטורה דינמיים. כפי שמודגם בניסוי זה שבו מוטנטים בודדים d melanogaster נחשפו לטמפרטורות עולות בעוד מיקום נוח משתנה ב 22 מעלות צלזיוס סופק גם.בעת ביצוע הליך זה, זכור לבצע את השלבים לפי הסדר ובמהירות כדי שתוכל ללכוד כמה שיותר התנהגות זבובים. לצד הליך זה ניתן להשתמש בשיטות אחרות כמו גיאוטקסיס שלילי או בדיקות חנק חום כדי לענות על שאלות נוספות כגון היכן זבובים נעים כרגיל או שיש להם עמידות רגילה בחום. ההשלכות של טכניקה זו להרחיב אותנו הבנת הפרעות נוירולוגיות או מוטציות שבהן תפיסת טמפרטורה או כאב לשחק תפקיד.בדרך כלל, אנשים חדשים בשיטה זו ייאבקו כי כל צעד הוא פשוט בפני עצמו אבל הם נדרשים להיות מתואמים בצורה מושלמת ולכן הטכניקה צריכה להיות מתורגל.

an-automated-method-to-determine-performance-drosophila-response-to

Research

JoVE Journal

Behavior

התנהגות

זבובי פירות דרוזופילה יכולים להבחין בשינויים קטנים בטמפרטורה ולכן לבחור סביבות עם תנאים תרמיים נוחים. סרטון זה מתאר בדיקה התנהגותית הבודקת את העדפת הטמפרטורה של זחלי דרוזופילה על שיפוע תרמי ליניארי.

בדיקת שיפוע טמפרטורה: שיטה לבדיקת העדפת טמפרטורה בזחלי דרוזופילה

סרטון וידאו זה מתאר את מערכת ניטור פעילות דרוזופילה (DAM) המשמשת למעקב אחר פעילות לוקומוטורית. חוקרים משתמשים בנתוני פעילות שנאספו מה-DAM כדי לחקור את השעון הביולוגי בזבובי פירות. סרטון הפרוטוקול המוצג מראה כיצד לטעון זבובים במכשיר ולתעד נתוני פעילות עבור ניסויים צירקדיים.

דרוזופילה מוניטור פעילות (DAM): שיטה למדידת פעילות מוטורית בזבובים

לאחרונה זיהינו תפוקה צירקדית Drosophila הרומן, קצב העדפת טמפרטורה (TPR), שבו הטמפרטורה המועדפת זבובים עולה במהלך היום ויורד במהלך הלילה. TPR מוסדר באופן עצמאי מתפוקה צירקדית אחרת, פעילות לוקומוטורית. כאן אנו מתארים את העיצוב והניתוח של TPR בדרוסופילה.

עיצוב וניתוח של התנהגות העדפת טמפרטורה והשעון הביולוגי שלה בדרוסופילה

כאן אנו מתארים שיטה למדידה מהירה ומדויקת של ביצועי טיסה בדרוזופילה, המאפשרים תפוקה גבוהה הקרנה.

שיטה משופרת למדידה מדויקת והמהירה של טיסה בביצועים<em&gt; דרוזופילה</em

תסיסנית שימושית בלומדת מניפולציות גנטיות או סביבתיות המשפיעות על התנהגויות כמו פעילות של תנועה ספונטנית. כאן אנו מתארים פרוטוקול אשר מנצל צגים עם קרניים אינפרא אדומות ותוכנות לניתוח נתונים לכמת פעילות של תנועה ספונטנית.

קביעת הפעילות של תנועה הספונטנית ב<em&gt; Melanogaster דרוזופילה</em

הפרעות מטבוליות הן בין אחת המחלות הנפוצות ביותר בבני אדם. אורגניזם המודל גנטי הצייתן ד melanogaster יכול לשמש כדי לזהות גנים רומן שמווסתים את חילוף חומרים. מאמר זה מתאר שיטה פשוטה יחסית המאפשרת ללמוד את קצב חילוף חומרים בזבובים על ידי מדידת ייצור CO 2 שלהם.

מדידה של קצב חילוף החומרים ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; באמצעות Respirometry

דוח זה מתאר שיטה למדידת פעילות הזחלים של דרוזופילה באמצעות מוניטור פעילות הדרוזופילה TriKinetics. המכשיר משתמש בקרני אינפרא אדום כדי לזהות תנועות של עד 16 בעלי חיים בודדים. ניתן לנתח נתונים כדי לייצג פרמטרי תנועה כולל קצבים ומיקומי בעלי החיים בתוך תאי הבדיקה.

מדידה של הזחל פעילות ב<em&gt; דרוזופילה</em&gt; צג פעילות

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לקביעת הטמפרטורה הסביבתית המועדפת של הזחלים דרוזופילה באמצעות הדרגה תרמי רציפה.

וזמינותו שינוי טמפרטורה כדי לקבוע העדפות תרמי של הזחלים דרוזופילה

מגבלות תרמיות יכולות לחזות את סביבות אורגניזמים לסבול, שהוא מידע בעל ערך לנוכח שינוי האקלים המהיר. מתואר כאן פרוטוקולים בתפוקה גבוהה כדי להעריך מינימה תרמית קריטית וזמן נוקאאוט חום בחרקים. שני הפרוטוקולים ממקסמים את התפוקה וממזערים את עלות ההתייענות.

תפוקה גבוהה של מגבלות תרמיות קריטיות בחרקים

דו"ח זה מתאר שיטה למדידת זמן Drosophila melanogaster בוגר להפלה באמצעות מוניטור פעילות דרוזופילה (DAM2) בתגובה ללחץ חום בהולכת אוויר בתוך תא אינקובטור. DAM2 מודד פעילות על ידי רישום תנועות זבוב בודדות כאשר הן חוצות קרן אינפרא אדום. ניתוח הנתונים מקל על ידי קובץ הפעלה חדשני שנוצר על ידי המחברים.

בדיקות עמידות לחום באמצעות מערכת ניטור פעילות דרוזופילה : מדריך ליישום הפעלה לניתוח נתונים

חקור ביצועי תנועה של זבובי פירות בתגובה לשינויי טמפרטורה באמצעות זירה מתוכנתת. השיטה מאפשרת שינויים מהירים ומדויקים בטמפרטורה לחקר תגובות התנהגותיות ורגישות סביבתית.

שיטה אוטומטית כדי לקבוע את הביצועים של דרוזופילה בתגובה לשינויים בטמפרטורה בחלל ובזמן

גלה סרטונים נוספים