Elevato oltre a Test combinato con Video Software di monitoraggio per studiare l'effetto ansiolitico dei supplementi chetogenica esogeni del labirinto

Qui, presentiamo un protocollo per studiare le variazioni del livello di ansia di modelli animali roditori. L'elevata plus labirinto (EPM) test, utilizzato insieme a un video software di tracking fornisce un metodo affidabile per documentare l'effetto di vari trattamenti potenziali di ansiolitico in scenari di laboratorio preclinica.

Il labirinto plus elevato è un metodo per documentare l'effetto di vari trattamenti potenzialmente ansiolitici su modelli di roditori da laboratorio in modo più umano rispetto ad altri metodi. Il vantaggio principale di questo metodo è che si basa sulla prolività istintiva del roditore sia agli spazi bui che a quello chiuso, oltre alla paura incondizionata delle altezze e alla prevenzione degli spazi aperti. Collin Park, un collaboratore del mio laboratorio, aiuterà a dimostrare la procedura.

Diversi giorni prima del test, maneggia gli animali raccogliendoli dal busto e tenendoli per un minuto per acclimatarli allo sperimentatore. Quindi, misurare il peso corporeo degli animali prima di iniziare qualsiasi trattamento per determinare il calcolo del dosaggio per il trattamento. Successivamente, familiarizzare gli animali con il metodo di gavage intragastrico usando l'acqua per gavage per cinque giorni prima del completamento dei chetoni.

Per il test d'ansia, utilizzare l'elevato più labirinto o apparato EPM, un apparato a forma di plus con quattro braccia con due braccia aperte e due chiuse. Illuminare l'apparato EPM utilizzando l'illuminazione indiretta dal soffitto invece di illuminarlo direttamente. Assicurarsi che tutti e quattro i bracci siano illuminati in modo simile.

Collegare la chiave di installazione del software di tracciamento del movimento a una porta USB 2.0 e installare il software. Quindi, fissare la fotocamera sopra l'area sperimentale e assicurarsi che rimanga immobile per tutta la durata dell'esperimento. Infine, impostare un nuovo esperimento nel sistema software di tracciamento del movimento utilizzando il manuale di istruzioni.

Posizionare l'animale nell'area sperimentale. Quindi, avviare il processo di acquisizione dei dati premendo il pulsante start sul pannello di controllo dell'ora. Nella sala prove raccogliere i dati EPM in due modi, manualmente e utilizzando il software.

Gli osservatori accecati sono separati da una tenda. Attendere l'ene della registrazione del processo di tracciamento o premere il pulsante di arresto sul pannello di controllo dell'ora. Quindi, rimuovere l'animale dall'area sperimentale.

Infine, per accedere allo strumento di analisi premere il pulsante di analisi nella barra dell'assistente di sperimentazione. Selezionare prove e intervalli di tempo per analizzare e generare un report. Inizia trasferendo i ratti nella loro gabbia di casa nella stanza sperimentale 30 minuti prima di iniziare l'esperimento.

Posizionare un topo all'intersezione dei quattro bracci dell'EPM rivolti verso il braccio aperto opposto allo sperimentatore. Esegui il software di tracciamento video e registra manualmente il comportamento dell'animale per cinque minuti. Quindi, se l'animale cade dall'EPM, raccoglilo e riposizionare lo stesso punto dell'EPM dove è caduto.

Escludere i dati comportamentali di questo animale dall'analisi. Alla fine del test di cinque minuti, interrompere il software di tracciamento video. Rimuovere l'animale dall'EPM e riposizionare di nuovo sulla gabbia di casa.

Infine, pulire l'EPM con un detergente disinfettante seguito dall'acqua del rubinetto. Asciugare l'apparecchio con tovaglioli di carta. Dopo l'alimentazione cronica, i ratti del gruppo KSMCT hanno trascorso molto più tempo a braccia aperte rispetto al gruppo di controllo.

Il gruppo KS ha trascorso molto più tempo al centro rispetto al gruppo di controllo. E meno tempo viene speso a braccia chiuse nei gruppi LKE, KS, KSMCT rispetto al controllo. I ratti dei gruppi KS e KSMCT percorrevano distanze significativamente più lunghe a braccia aperte.

Mentre i ratti dei gruppi LKE, KS e KSMCT mostravano una distanza significativamente inferiore percorsa nelle braccia chiuse rispetto al gruppo di controllo. Inoltre, dopo sette giorni di gavage orale, il tempo trascorso a braccia aperte era maggiore nel gruppo KE, ma diminuiva al centro per i gruppi KE, KS e KSMCT. Anche il numero di ingressi alle braccia chiuse è stato significativamente inferiore dopo sette giorni di somministrazione nei gruppi KE e KS.

È molto importante posizionare tutti i ratti sull'apparecchiatura in un maniero coerente all'incrocio rivolto lontano dallo sperimentatore. Il test EPM sui roditori è un metodo adatto e sensibile per indagare l'effetto di diversi trattamenti che influenzano le aree cerebrali coinvolte nell'effetto ansiolitico e nei meccanismi di azione.