Name: Immunizzazione di Alpaca (Lama pacos) con gli antigeni della proteina e la produzione di anticorpi di dominio singolo antigene-specifiche (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 27 s
Description: Scopri il metodo per produrre anticorpi a dominio singolo in alpaca (Lama pacos) mediante immunizzazione con antigeni proteici. Questa tecnica consente di generare anticorpi specifici per applicazioni terapeutiche e diagnostiche.

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Questo lavoro è stato supportato dal National Institutes of Health (P30GM103486).

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D. ssa Whiteheart e Hersh sono presso l'Università del Kentucky e operare un nucleo nel centro per medicina molecolare che produce gli anticorpi di singolo dominio in "Alpaca" come un servizio a pagamento.

Come osservato, l'alta affinità e specificità degli anticorpi di singolo dominio, combinato con la loro espressione facile e stabilità, renderli reagenti ideali per le applicazioni nella ricerca biomedica, come critici Reagenti biochimici, strumenti diagnostici, o agenti terapeutici18. Per applicazioni commerciali, ci sono alcune questioni relative alla proprietà intellettuale che devono essere considerate. Inoltre, gli anticorpi di singolo dominio possono essere progettati per contenere specifici marcatori o tag che possono essere utilizzati come reporter in test cellulari o in diagnostica. La chiave per questi usi è la capacità di produrre anticorpi specifici singolo dominio contro gli antigeni di interesse. Un metodo è descritto qui per produrre gli anticorpi di singolo dominio utilizzando gli alpaca, che produce una risposta immunitaria robusta contro un'ampia varietà di antigeni della proteina. Considerazioni per la movimentazione degli animali e la conformità normativa sono descritti. Queste sono la chiave per il successo in questa parte del processo.
Ci sono altre strategie per la produzione di anticorpi di singolo dominio che non richiedono l'immunizzazione, ma invece utilizzano librerie semisintetiche con diversi sistemi per la selezione e l'ottimizzazione iterativa di affinità19,20 . Tuttavia, il vantaggio di utilizzare librerie derivate da animali immunizzati è la capacità di isolare in modo affidabile gli anticorpi altamente arricchito, diversificata e ad alta affinità di singolo dominio. Inoltre, non solo si osservano variazioni di sequenza significativa, ma una maggioranza significativa di anticorpi specifici singolo dominio isolato ha avuto unici inserimenti ed eliminazioni, specialmente nel CDR3.
Più ulteriormente, singolo dominio anticorpi possono essere prodotto tramite un processo semplice che richiede solo piccole iniezioni dell'antigene e dopo questo processo, gli animali possono essere restituiti alla mandria. Di nota, l'animale può essere liberamente utilizzato per la produzione di fibre, ma dovrà essere esclusi dall'uso come carne (catena alimentare umana) dovute all'uso del test di antigeni e non FDA approvato adiuvante per produzione dell'anticorpo di singolo dominio. Una volta completata la procedura, gli animali devono essere monitorati per una settimana, dato un esame veterinario finale e quindi possono essere restituiti nella loro fattoria casa o riposati per sei mesi prima un altro giro di produzione dell'anticorpo di singolo dominio.

Alpaca e altri membri della famiglia camelide, sono diventati una fonte popolare per la generazione di anticorpi per la ricerca biomedica1,2,3. Camelidi hanno un sistema immunitario unico in quanto producono anticorpi normali così come catene pesanti soli anticorpi che permettono la produzione di anticorpi di singolo dominio molto più piccoli, pur mantenendo alta specificità e ad alta affinità. Così, camelide anticorpi forniscono un reagente versatile utile per una varietà di scopi. Qui è descritto un metodo per immunizzare alpaca e produrre anticorpi di singolo dominio ad una varietà di antigeni della proteina. Questi anticorpi possono essere prodotti in camelidi tramite un processo relativamente semplice che richiede solo l'immunizzazione tramite piccole iniezioni di proteina bersaglio (antigene) e un pareggio di sangue4. Successivamente, la costruzione della libreria, M13 phage display5 e panning contro l' antigene ricombinante6 viene utilizzato per isolare e produrre anticorpi di singolo dominio con le caratteristiche desiderate. Poiché il processo si avvale della potenza della tecnologia di visualizzazione dei fagi, cinque o più antigeni possono essere utilizzati contemporaneamente per animale, riducendo così il numero di animali utilizzati e le relative spese.
Tipica dei mammiferi anticorpi o immunoglobuline sono molecole di grandi dimensioni costituito da due tipi di catene (2 catene pesanti e 2 catene leggere), che sono collegati tra loro attraverso legami bisolfurico. Questi anticorpi sono relativamente grandi, che esibiscono i pesi molecolari di ~ 140-190 kDa per la specie più abbondante di IgG da esseri umani, topi, capre e conigli. A causa della loro struttura multi-unità secondaria, ad alto peso molecolare e legami bisolfurico, immunoglobuline possono essere piuttosto impegnative per produrre in grandi quantità, rendendo il loro costo elevato. Negli anni novanta, si è scoperto che rendono camelidi, che comprende cammelli, lama e alpaca, oltre l'immunoglobulina di tipo mammifero tipico, una forma novella dell'immunoglobulina che è più semplice nella struttura, che possiede solo pesanti catene7. Questi anticorpi unico camelide possiedono la stessa capacità di legare specificamente sostanze estranee con alta affinità ma sono solo costituiti da una proteina catena8. Inoltre, gli anticorpi camelide possono essere troncati sperimentalmente in un frammento di unità la VHH ancora più piccolo, chiamato anche un dominio singolo anticorpo9. A causa del loro di piccola dimensione, singolo dominio anticorpi sono utili per una vasta gamma di applicazioni di ricerca biomedica e sono disponibili da una varietà di fonti accademiche e commerciale1,10. Un'eccezione sembra essere macchiarsi occidentale poiché singolo dominio anticorpi più spesso sono diretti contro epitopi dipendente di conformazione, che solitamente si perdono in condizioni di denaturante utilizzato in Western blot.
Poiché essi sono costituiti da una catena polipeptidica singola, anticorpi specifici singolo dominio possono essere selezionati e facilmente prodotta in grandi quantità come proteine ricombinanti in batteri. Anticorpi di singolo dominio possono anche essere geneticamente modificate per contenere specifici marcatori o tag che possono essere utilizzati come "gruppi di reporter" per la diagnosi di malattie11. Questa facilità di manipolazione accoppiato con la loro flessibilità d'uso rende anticorpi di singolo dominio una risorsa importante per i ricercatori alle università e altrove.
Come parte di un National Institutes of Health supportato core, metodi esistenti sono stati adattati per produrre gli anticorpi di singolo dominio da alpaca3,4. Alpaca presentano vantaggi significativi in entrambi la maneggevolezza rispetto più grandi membri della famiglia camelide, così come l'accessibilità. Alpaca sono ampiamente sollevati per fibra e carne e così possono essere ottenuti regionalmente da agricoltori locali alpaca, che possono essere identificati attraverso i loro siti Web o attraverso associazioni di allevatori di stato. Due razze di Alpaca sono disponibili, Suri e Huacaya. Huacaya sono più comune e sono stati utilizzati per questo protocollo, ma il protocollo è generalmente applicabile a due razze e più ampiamente applicabile anche ad altri camelidi.

<table><tbody><tr><td>GERBU FAMA adiuvante</td><td>Biotechnik, Heidelberg, Germania&nbsp;</td><td>3003,6001</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per prelievo di siero</td><td>Becton Dickinson</td><td>367983</td><td></td></tr><tr><td>Provetta per prelievo di sangue</td><td>Becton Dickinson</td><td>366643</td><td></td></tr><tr><td>Set per prelievo di sangue Vacutainer</td><td>Becton Dickinson</td><td>368652</td><td></td></tr><tr><td>Maxisorp Piastre per immunoterapia</td><td>Nunc</td><td>439454</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG anti-lama di capra coniugato HRP&nbsp;</td>Substrato della perossidasi cromogenica del reagente <td>Bethyl Labs</td><td>A160-100P</td><td></td></tr><tr><td>TMB&nbsp;</td><td>KPL</td><td>50-76-03</td><td></td></tr><tr><td>Lettore di piastre</td><td>Spectramax</td><td>M5</td><td>Qualsiasi lettore compatibile con UV/VIS è accettabile</td></tr><tr><td>Uni-SepMAXI+ provetta per la separazione dei lifociti</td><td>Novamed</td><td>U-17</td><td></td></tr><tr><td>RNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>74104</td><td></td></tr><tr><td>Colonna trituratrice QIAGEN</td><td></td><td>79654</td><td></td></tr><tr><td>Trascrittasi inversa Superscript IV&nbsp; &nbsp;</td><td>Invitrogen</td><td>18064014</td><td></td></tr><tr><td>soluzione AEBSF</td><td>Biosynth</td><td>A-5440</td><td></td></tr><tr><td>TG1 phage display cellule competenti</td><td>Lucigen</td><td>60502</td><td></td></tr></tbody></table>

immunizzazione di alpaca (lama pacos) con gli antigeni della proteina e la produzione di anticorpi di dominio singolo antigene-specifiche

Immunization of Alpacas (Lama pacos) with Protein Antigens and Production of Antigen-specific Single Domain Antibodies

In questo manoscritto, un metodo per l'immunizzazione di alpaca e l'uso di metodi di biologia molecolare per produrre gli anticorpi antigene-specifiche singolo dominio è descritto e dimostrato. Camelidi, quali alpaca e lama, sono diventate una risorsa preziosa per la ricerca biomedica poiché producono un nuovo tipo di anticorpo sola catena pesante, che può essere utilizzato per produrre anticorpi di singolo dominio. Perché il sistema immunitario è altamente flessibile, anticorpi di singolo dominio possono avvenire a molti antigeni differenti della proteina e anche diverse conformazioni dell'antigene, con un elevato grado di specificità. Queste caratteristiche, tra gli altri, fanno gli anticorpi singolo dominio uno strumento prezioso per la ricerca biomedica. Un metodo per la produzione di anticorpi di singolo dominio da alpaca è segnalato. Un protocollo di immunizzazione, raccolta del sangue e l'isolamento della B-cellula è descritto. Le B-cellule sono utilizzate per la costruzione di una libreria immunizzata, che viene utilizzata nella selezione di anticorpi specifici singolo dominio tramite panning. Anticorpi di dominio singolo specifico presunto ottenuti tramite panning sono confermati dal menu a tendina, ELISA, o analisi gel-spostamento. Gli anticorpi di singolo dominio risultante quindi possono essere utilizzati direttamente o come parte di un reagente ingegnerizzato. Gli usi di anticorpo di singolo dominio e dominio singolo anticorpo-basato regents includono applicazioni strutturali, biochimiche, cellulari, in vivo e terapeutiche. Anticorpi di singolo dominio possono essere prodotti in grandi quantità come proteine ricombinanti in sistemi di espressione procariotici, purificato e utilizzati direttamente oppure possono essere progettati per contenere specifici marcatori o tag che possono essere utilizzati come reporter in studi cellulari o in diagnostica.

Il protocollo qui presentato è stato utilizzato per generare anticorpi di singolo dominio contro una gamma di antigeni della proteina. Cinque gli antigeni sono stati utilizzati per ogni alpaca. Monitoraggio sistema immunitario hanno indicato che la maggior parte degli antigeni ha mostrato inizio risposta robusta a tre settimane (Figura 1). Sbavature di produzione e costruzione della libreria dopo circa sei settimane dà il miglior equilibrio per gli animali che hanno più antigeni iniettati. Due turni di panning erano eseguite per ogni antigene e isolate colonie proiettato (Figura 2). Ordinamento di colonie positive ha identificato diversi dominio singolo anticorpo sequenze per gli antigeni differenti. Per esempi, tre cloni unici sono stati isolati per l'antigene di riferimento maltosio Binding Protein (MBP) (Figura 3A). Come è osservato frequentemente, gli anticorpi di singolo dominio contengono sequenza significativa diversità e altamente variabile CDR3 lunghezza (Figura 3). Queste caratteristiche sono particolarmente importanti nelle interazioni antigene/anticorpo di singolo dominio come visto nel riferimento singolo dominio anticorpo/CX3CL1 complesso17 (Figura 3B).
La maggior parte delle sequenze di Full-Length dominio singolo anticorpo può essere espresso e purificata a 1-10 mg/L di cultura (Figura 4A). A causa della diversità di lunghezza CDR3, anticorpi di singolo dominio diverso mostrano lieve variazione nel peso molecolare. Conferma di binding diretto e le prestazioni dell'applicazione specifici è fondamentale. Ad esempio, dopo due turni di selezione contro l'antigene B, un pannello di singolo dominio gli anticorpi erano identificati (Figura 2). Più sequenze identiche sono state identificate, e l'anticorpo di dominio singolo è stato prodotto e purificato. È stato quindi testato via tiro diretto verso il basso con resina di affinità di antigene e hanno mostrato il grippaggio di robusta dose-dipendente (Figura 4B). D'importanza, l'anticorpo di singolo dominio ha mostrato alcuna associazione per il controllo della resina. Questi dati dimostrano un'interazione diretta associazione e uno che è adatto per l'acquisizione di affinità in formati basati su ELISA e menu a tendina.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig1.jpg"> Figura 1 : Monitoraggio immuni rappresentativi di due antigeni distinti risultati significativa specifica risposta immunitaria agli antigeni distinti nello stesso animale. Molti antigeni mostrano risposta robusta già tre settimane dopo l'inizio della vaccinazione, con la maggior parte mostrando la risposta massima dopo sei settimane. Sei settimane permette maturazione di affinità anche ed è il tempo consigliato per la produzione sanguinare e isolamento della B-cellula. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig1large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig2.jpg"> Figura 2 : Basata sulla PCR conferma dei cloni positivi. Primer occupare il MCS del vettore pMES4 e un clone di nanobody positivo produce un amplicone di ~ 500 bp (contrassegnati con *). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig2large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig3.jpg"> Figura 3 : Sequenze di antigene-specifiche evidenziare la diversità degli anticorpi di alpaca singolo dominio. (A) allineamento di sequenze di anticorpo Seleziona dominio singolo isolato a MBP con un riferimento singolo dominio anticorpo 4XT1, quadro e regioni dideterminazione (Kabat) evidenziate di seguito. (B) struttura di alpaca dominio singolo anticorpo 4XT1 associato a CX3CL1 (PDB 4XT1), sottolineando il ruolo critico di CDR variabile loop nell'associazione antigene specifico. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig3large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58471/58471fig4.jpg"> Figura 4 : Purificazione e convalida degli anticorpi di singolo dominio. (A) SDS-PAGE di IMAC purificato singolo dominio anticorpi, confrontando gli anticorpi diversi singolo dominio. Diversi pesi molecolari sono principalmente dovuti a lunghezza variabile del ciclo CDR3. Diversi livelli di espressione sono stati osservati, con una minoranza degli anticorpi di singolo dominio mostrando scarsa resa della proteina purificata. (B) verifica del binding diretto utilizzando un'affinità di antigene menu a tendina. Grippaggio dell'anticorpo robusta dose-dipendente singolo dominio è osservato con resina antigene-accoppiato ma non con resina di controllo. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58471/58471fig4large.jpg" target="_blank">Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

Un metodo per la produzione di anticorpi di singolo dominio da alpaca, compreso immunizzazione, raccolta del sangue, delle cellule di B isolamento e selezione è descritto.

Immunizzazione di Alpaca (Lama pacos) con gli antigeni della proteina e la produzione di anticorpi di dominio singolo antigene-specifiche

In this manuscript, a method for the immunization of alpaca and the use of molecular biology methods to produce antigen-specific single domain antibodies ...

I metodi che descriviamo qui sono stati adottati dal nostro NIH COBRE sponsorizzato, University of Kentucky Protein Core Facility per aiutare i ricercatori a produrre anticorpi monodominio in alpaca. Gli anticorpi monodominio sono uno strumento importante utilizzato per rispondere alle domande chiave nella ricerca biomedica. Il principale vantaggio delle tecniche che dimostriamo è che consente la produzione di anticorpi monodominio fino a cinque proteine distinte in una singola alpaca.Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla salute umana e al trattamento delle malattie poiché questi anticorpi monodominio possono essere usati come terapie, come vaccini e come diagnostica. L'ostacolo più significativo per la maggior parte degli investigatori biomedici affermati è la gestione di animali di grandi dimensioni, come l'alpaca. La dimostrazione visiva della manipolazione di un alpaca, l'iniezione di antigeni e la raccolta del sangue sono fondamentali per il successo della produzione di anticorpi monodominio in questi camelidi.A dimostrare la procedura saranno il dottor Jeff Smiley, veterinario universitario, la signora Kathy Boaz, tecnico veterinario, e la signora Erin Jones, tecnico di animali da laboratorio. La manipolazione del sangue sarà dimostrata dal Dottor Martin Chao, Research Associate. Le storie reali di questa produzione sono Blue Eyes, Big Boy, o affettuosamente conosciuto come gorilla, e Freddie, i nostri alpaca del Kentucky.Per iniziare, trattenere l'animale con una cavezza e piombo. Quindi tagliare i capelli dell'alpaca con tosaerba elettriche in un motivo lunare a mezzaluna lungo la base del collo, da spalla a spalla. Tenere con cura l'alpaca per la testa e il collo e iniettare lentamente gli antigeni per via sottocutanea con un ago calibro 22 lungo la base del collo, vicino ai linfonodi di prua.Eseguire cinque iniezioni di circa 200 microlitri ciascuna, distanti circa cinque centimetri l'una dall'altra. Dopo questo, monitorare l'animale per circa 20 minuti per i segni di anafilassi. Ispezionare il sito di iniezione per l'infiammazione localizzata nei siti di iniezione settimanalmente.Per disegnare sangue, ritagliare i capelli dell'alpaca e disinfettare il sito di raccolta con tamponi di alcol. Trattenere delicatamente l'alpaca, assicurando che il collo sia tenuto in posizione verticale e dritta. Usando le proiezioni ventrali del processo trasversale delle vertebre come punto di riferimento, oclude la vena applicando pressione solo mediale al processo ventrale.Quindi, inserire l'ago con un angolo di 45 gradi, leggermente mediale alla proiezione, verso il centro del collo. Manipolare l'ago fino a quando il sangue scorre. In primo luogo, diluire 15 millilitri del sangue raccolto con cinque millilitri di PBS.Quindi, pipettare il sangue in un tubo di separazione dei linfociti per isolare i linfociti del sangue periferici, o PBL, attraverso la centrifugazione del gradiente di densità. Rimuovere delicatamente lo strato di plasma superiore, salvandolo in un tubo separato. Quindi, rimuovere delicatamente lo strato PBL e trasferirlo in un tubo sterile da 50 millilitri.Aggiungere 45 millilitri di PBS pre-refrigerato ai PBL e ruotare il tubo per 20 minuti a 800 volte G e quattro gradi Celsius. Rimuovere il supernatante con una pipetta, lasciando il pellet contenente i linfociti. Lavare il pellet altre due volte con cinque millilitri di PBS pre-refrigerato per preparare i PBL per l'isolamento dell'RNA.Utilizzando questo protocollo, gli anticorpi a dominio singolo sono stati generati contro una serie di antigeni proteici. Il monitoraggio immunitario ha indicato che la maggior parte degli antigeni ha mostrato una risposta robusta a partire da tre settimane e che il momento ottimale per ottenere il sangue è di sei settimane. Sequenziando le colonie positive hanno identificato diverse sequenze di anticorpi monodominio per diversi antigeni.Ad esempio, tre colonie uniche sono state isolate dalla proteina antigene di riferimento legante il maltosio. Generalmente, gli anticorpi a dominio singolo contenevano una significativa diversità di sequenza e una lunghezza altamente variabile dei loop di legame degli antigeni. Queste caratteristiche sono particolarmente importanti nelle interazioni con l'antigene anticorpale a dominio singolo.Questa procedura consente la produzione di anticorpi monodominio per un massimo di cinque antigeni per animale. Una singola raccolta di sangue e la costruzione della biblioteca vengono utilizzate per ogni animale. Con la selezione basata sul display del fago utilizzata per identificare anticorpi a catena singola specifici dell'antigene.Durante le iniezioni di antigene e il prelievo di sangue, è importante mantenere gli alpaca in gruppo, il che li mantiene più calmi. Questo può essere fatto usando fermi e cavi e legandoli nelle immediate vicinanze durante le procedure.

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Alcuni ceppi di topi sono in grado di resistere induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) con proteina basica della mielina. Qui descritto è un protocollo di immunizzazione semplice che inverte la mancanza di risposta e induce malattia paralitica in diversi tipiche macchie resistenti EAE del mouse.

Superare blocco nel encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) ceppi di topi resistenti dal trasferimento adottivo e uno stimolo antigenico

Vaccinazione profilattica e terapeutica spesso non riesce a stimolare forti risposte immunitarie dovuto settimana drenaggio del vaccino ai linfonodi e conseguente scarsa coinvolgimento delle cellule immunitarie. Mediante iniezione diretta di vaccino da linfonodi, cosiddetta iniezione endolinfatica, l'efficacia del vaccino può essere fortemente migliorata e dosi di vaccino può essere ridotta.

Endolinfatica immunoterapia e di vaccinazione nei topi

Viene presentato un protocollo ottimizzato per la generazione di anticorpi monoclonali basati sulla tecnologia degli ibridomi. I topi sono stati immunizzati con un immunoconiugato. Le cellule della milza sono state fuse mediante PEG e un impulso elettrico con cellule di mieloma immortale. Le cellule di ibridoma produttrici di anticorpi sono state selezionate mediante HAT e screening ELISA antigene-specifico.

Generazione di Murine anticorpi monoclonali da ibridomi Tecnologia

Questo articolo fornisce un protocollo dettagliato per la preparazione e la valutazione degli anticorpi monoclonali contro prodotti naturali per l'utilizzo in vari test immunologici. Questa procedura comprende l'immunizzazione, la fusione cellulare, ELISA competitiva indiretto per clone positivo di screening e preparazione di ibridoma monoclonale. A vostra disposizione anche le specifiche per la caratterizzazione dell'anticorpo usando MALDI-TOF-MS e le analisi di ELISA.

Generazione di anticorpi monoclonali contro prodotti naturali

Descritto è la preparazione di nanoparticelle liposomiale antigeniche e loro uso nella stimolante della B-cellula attivazione in vitro e in vivo. Risposte anticorpali coerente e stabile ha condotto allo sviluppo di un nuovo modello di allergia dell'arachide. Il protocollo per la generazione di liposomi antigenici può essere estesa a diversi antigeni e modelli di immunizzazione.

Liposomi antigenici per la generazione di anticorpi specifici per la malattia

Lo sviluppo del test ELISpot interferone per la cavia PBMCs permette la caratterizzazione delle risposte delle cellule T in questo modello altamente rilevante per lo studio delle malattie infettive. Abbiamo applicato il test per misurare le risposte delle cellule T associate intradermica consegna di vaccini a DNA.

Ottimizzazione del interferone-gamma ELISpot analisi di risposte a cellula T misura nel modello cavia dopo la vaccinazione

Il saggio opsono-aderenza è un metodo alternativo al saggio di uccisione opsono-fagocitica per valutare le funzioni opsoniche degli anticorpi nello sviluppo del vaccino.

Test opsono-aderenza per valutare gli anticorpi funzionali nello sviluppo del vaccino contro bacillus anthracis e altri agenti patogeni incapsulati

Questo articolo descrive e dimostra la somministrazione di vaccini intranasali e la raccolta di latte dai conigli in allattamento (Oryctolagus cuniculus) come mezzo per valutare l'immunità mucosa in un modello traslazionale appropriato di immunizzazione materna.

Immunizzazione intranasale e raccolta del latte negli studi sull'immunizzazione materna nei conigli bianchi della Nuova Zelanda(Oryctolagus cuniculus)

La proteina anticorpale ricombinante espressa nelle cellule pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO e negli anticorpi monoclonali prodotti utilizzando la tecnologia tradizionale dell'ibridoma possono riconoscere e legarsi alla proteina N dell'aminopeptidasi suina (APN).

Produzione di anticorpi monoclonali contro l'aminopeptidasi N nell'epitelio della mucosa intestinale suina

Qui, presentiamo un protocollo alternativo per indurre attivamente l'encefalomielite autoimmune sperimentale in topi C57BL / 6, utilizzando l'epitopo immunogenico mielinico oligodendrocitario glicoproteina (MOG) 35-55 sospeso in adiuvante di Freund incompleto contenente la sottospecie di Mycobacterium avium uccisa dal calore paratuberculosis.

Attività adiuvante del Mycobacterium paratuberculosis nel migliorare l'immunogenicità degli autoantigeni durante l'encefalomielite autoimmune sperimentale

Scopri il metodo per produrre anticorpi a dominio singolo in alpaca (Lama pacos) mediante immunizzazione con antigeni proteici. Questa tecnica consente di generare anticorpi specifici per applicazioni terapeutiche e diagnostiche.

Immunizzazione di Alpaca (Lama pacos) con gli antigeni della proteina e la produzione di anticorpi di dominio singolo antigene-specifiche (Video) | JoVE Journal

Immunizzazione di Alpaca (Lama pacos) con gli antigeni della proteina e la produzione di anticorpi di dominio singolo antigene-specifiche

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