Name: Effetti del gusto segnalazione proteina Abolishment su infiammazione dellintestino in un modello murino di malattia infiammatoria intestinale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-11-09T15:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: Scopri come valutare gli effetti di proteine segnalatrici sull'infiammazione intestinale in un modello murino di colite indotta da DSS. Questo metodo permette di studiare le risposte immunitarie e i fattori genetici nella malattia infiammatoria intestinale.

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Questo lavoro è sostenuto da sovvenzioni da parte del National Natural Sciences Foundation of China (81671016, 31471008 e 31661143030) e il National Institutes of Health (DC010012, DC015819) e dalla Fondazione Siyuan.

Tutti gli esperimenti coinvolgenti topi sono stati esaminati e approvati dal istituzionale Animal Care e comitati di uso dell'Università di Zhejiang. Si consiglia di indossare adeguati dispositivi di protezione personali prima di eseguire questo protocollo.
1. preparazione di topi e DSS
<ol><li>Tenere i topi knockout (α-gustducin- / -) ed età - sesso- e controllo di selvaggio-tipo di pari peso di corpo (α-gustducin+ +) topi C57BL/6 singolarmente in gabbie pulite. Nota: I topi knockout sono stati backcrossed con topi C57BL/6 per più di 20 generazioni e hanno uno sfondo di genetica C57BL/6 di 100% quasi.</li>
	<li>Sciogliere 30 g di polvere di Destrano solfato sodio (DSS) in 1 L d'acqua in autoclave. Mescolare fino a quando la soluzione diventa chiara per garantire che la concentrazione di lavoro finale è del 3% (p/v). Nota: La soluzione DSS può essere conservata a temperatura ambiente per 1 settimana o a 4 ° C fino all'utilizzo.</li>
</ol>2. induzione e la valutazione di colite DSS in topi
<ol><li>Pesare e registrare il peso corporeo iniziale di ogni mouse. Posizionare i topi singolarmente nelle gabbie di plastica standard ed etichettare le gabbie.</li>
	<li>Sostituire regolarmente l'acqua potabile con soluzione DSS 3% per un totale di 7 giorni a cui entrambi i gruppi di topi hanno accesso ad libitum.</li>
	<li>Misurare il peso corporeo del mouse, registrare il consumo di soluzione DSS e raccogliere ed esaminare lo sgabello di ogni mouse ogni giorno durante l'amministrazione di DSS. Osservare la severità di diarrea e sanguinamento rettale e convertire questo al DSS indotta malattia indice12.</li>
	<li>Durante l'esperimento, la percentuale di perdita di peso rispetto al peso iniziale e l'indice di malattia vengono calcolati per valutare i sintomi di colite. Nota: L'indice di malattia è segnato dalla combinazione di osservazioni di diarrea e sanguinamento rettale e sono definiti come segue: 0 (normale delle feci, senza sangue), 1 (feci molli, senza sangue), 2 (feci molli, poco sangue), 3 (feci molto molli, modesto sanguinamento) e 4 (feci acquose, spurgo significativo)12. L'indice di malattia viene analizzato ogni giorno per ogni mouse.</li>
	<li>Entro la fine del trattamento di 7 giorni DSS, sacrificare i topi da dislocazione cervicale e procedere con gli esperimenti restanti.</li>
</ol>3. preparazione dei campioni di tessuto
<ol><li>Posizionare il mouse nella posizione supina e pulire la pelle dell'addome con etanolo al 70%. Fare un'incisione di 3 cm di lunghezza della linea mediana nell'addome con un paio di piccole forbici per esporre la cavità addominale.</li>
	<li>Utilizzare un paio di pinze per attentamente separare la milza da altri tessuti, quindi rimuovere la milza e misurare le sue dimensioni.</li>
	<li>Identificare e sollevare i due punti con il forcipe e separarla dal mesentery circostanti. Tirare fuori tutto il colon fino a quando l'intestino cieco e del retto sono visibili.</li>
	<li>Isolare il colon transecting esso al margine colonocecal e profondità nel bacino gratuita del colon prossimale e distale, rispettivamente. Quindi, misurare e registrare la lunghezza del colon isolato. Fare attenzione a non danneggiare il tessuto colico durante la procedura di dissezione.</li>
	<li>Sciacquare il colon con 10 mL di soluzione tampone fosfato (PBS) e ghiacciata con una siringa da 10 mL dotata di un ago sonda gastrica per rimuovere le feci e il sangue finché l'eluato è completamente chiaro.</li>
	<li>Per identificazione istologica, dividere in parti uguali i campioni di tessuto in tre parti: prossimale, medio e distale. Quindi, fissare il tessuto con paraformaldeide al 4% (PFA) durante la notte a 4 ° C.</li>
	<li>Per l'analisi dell'espressione di citochine, congelare tutto il colon rapidamente con azoto liquido e conservare a-80 ° C fino all'utilizzo.</li>
</ol>4. istologica valutazione della severità di colite indotta da DSS
<ol><li>Ematossilina ed eosina (H & E)<ol>
<li>Dopo la fissazione, immergere il tessuto in una soluzione di saccarosio al 30% in PBS 1x pernottamento in una provetta da 15 mL per cryoprotect i campioni.</li>
		<li>Incorporare il tessuto in temperatura di taglio ottimale (OCT) composto e metterlo a-20 ° C fino a quando si indurisce il OCT.</li>
		<li>Trasferire il blocco di OCT contenente il tessuto di un criostato, impostare la manopola di spessore nel criostato a 12 µm e fetta e raccogliere 12 sezioni congelate di µm di spessore.</li>
		<li>Riscaldare le sezioni di tessuto raccolti da un criostato a 65 ° C per 20 minuti su una piastra calda.</li>
		<li>Lavare le sezioni brevemente in acqua distillata. Li macchia con ematossilina macchiatura soluzione per 5 min e successivamente risciacquare con acqua corrente per 5 min.</li>
		<li>Differenziare le sezioni con 0,5% di acido cloridrico-etanolo per 30 s e risciacquare in esecuzione sotto acqua corrente per 1 min. Quindi, eseguire il lavaggio in PBS 1X per 1 min e successivamente risciacquare con acqua corrente per 5 min.</li>
		<li>Eseguire lavaggio delle sezioni del tessuto in alcol 70%, 75%, 80% e 95%, ciascuno per 10 s. controcolorazione in eosina soluzione per 2 min.</li>
		<li>Eseguire disidratazione attraverso alcol al 95% e 2 cambi di alcool assoluto per 5 minuti ogni volta. Chiaro in 2 cambi di xilene per 5 min.</li>
		<li>Il Punteggio dei danni ai tessuti del colon prossimale, medio e distale di ogni topo per il gene knockout e il selvaggio-tipo gruppi sulla base dei risultati della precedente H & E colorazione. Nota: L'indice di malattia è un punteggio combinato di danno epiteliale ed infiammazione nelle regioni mucosa, sottomucosa, muscolare e sierosa, che è definita come segue: 0 (nessun danno tissutale e l'infiammazione), 1 (infiammazione e danno di tessuto focale), 2 (irregolare danno tissutale e l'infiammazione) e 3 (infiammazione e danno diffuso del tessuto)12,13. Tre punteggi per topo per le parti prossimali, medie e distale del colon vengono poi sommati per ottenere un punteggio totale per ogni animale. Quindi vengono calcolati i punteggi medi per ogni gruppo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Immunohistochemistry14<ol>
<li>Riscaldare le sezioni di tessuto raccolti da un criostato a 65 ° C per 20 minuti su una piastra calda. Lavare le sezioni in 1X PBS 3 volte, per 10 minuti ciascuno. Incubare le sezioni di tessuto in perossido di idrogeno 3% per 10 min eliminare perossidasi endogena. Lavare le sezioni 3 volte di più. Bloccare i tessuti con blocco buffer (3% BSA, detergente non ionico 0,3%, 2% di siero di capra, 0,1% di sodio azide in PBS 1X) a temperatura ambiente per 1 h o più.</li>
		<li>Sostituire il tampone bloccante con una soluzione contenente i seguenti anticorpi primari di tipo-specifica delle cellule immuni: CD45 per leucociti, CD3 per le cellule T, B220 per le cellule B, CD11b per i macrofagi e Ly6G per i neutrofili. Incubare per una notte a 4 ° C.</li>
		<li>Rimuovere gli anticorpi primari da sezioni di tessuto dall'aspirazione. Lavare le sezioni con 1x PBS 3 volte, per 10 minuti ciascuno. Incubare le sezioni con anticorpo secondario biotinilato seguita da incubazione con il complesso di streptavidina-HRP a temperatura ambiente.</li>
		<li>Incubare le sezioni con 3, 3'-diaminobenziding (DAB) soluzione per sviluppare un colore marrone chiaro o scuro e visualizzare le cellule immunoreactive.</li>
		<li>Colorante di contrasto le sezioni con ematossilina e 0,3% (v/v) diluito ammoniaca. Prendere immagini campo chiaro a 10 ingrandimenti al microscopio.</li>
		<li>Utilizzare un programma di elaborazione di immagine per identificare e quantificare la popolazione delle cellule immunitarie contrassegnate sia l'epitelio e la lamina propria (sotto l'epitelio) di impostazione 2 maschere: utilizzare la prima maschera nella funzionalità basate su colore-cubo per impostare un rilevamento del colore soglia e misurare le aree colorate DAB-reattiva; utilizzare la seconda maschera per determinare aree totale dell'epitelio e laminare propria nella sezione esaminata. Esprimere la popolazione delle cellule immunoreactive come rapporto della zona di colorazione delle cellule infiltrate all'area totale del tessuto esaminato.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Gene Expression valutazione di colite indotta da DSS
<ol><li>Recuperare i tessuti del colon dal DSS-trattati gene knockout e topi wild-type da un congelatore a-80 ° C e aggiungere 0,6 mL di tampone di Lisi a 25 mg di tessuto, quindi omogeneizzare in un omogeneizzatore.</li>
	<li>Seguire il protocollo del kit di estrazione di RNA per estrarre il RNA totale e dnasi I viene utilizzata per eliminare qualsiasi contaminante DNA genomic.</li>
	<li>Eseguire un gel di agarosio per controllare la qualità del RNA estratto. Se la sua banda di RNA 28S è più luminosa di banda 18S, è utilizzabile. Prendere 1 µ l di campione di RNA per determinare la concentrazione di RNA su un microspectrophotometer.</li>
	<li>Mescolare 1 µ g di RNA totale con 2,5 µ l di primer di18 17,di 20 mM oligo (dT)12,13,14,15,16,e 1 µ l di leucemia murina di Moloney trascrittasi inversa del virus (MMLV). Incubare a 42 ° C per 60 min preparare il cDNA.</li>
	<li>Impostare le reazioni di PCR in tempo reale di miscelazione 1 µ l del cDNA con 0,5 µ l di primer forward e reverse qPCR per TNF, IFN-γ, IL-5, IL-13, IL-10 e TGF-β1 β-actina come controllo oltre a 2 x tintura verde fluorescente.</li>
	<li>Eseguire la qPCR con i seguenti parametri: 95 ° C per 10 minuti, seguiti da 45 cicli di 95 ° C per 10 s, 50 ° C per 25 s e 72 ° C per 20 s.</li>
	<li>Calcolare la relativa quantificazione dell'espressione genica utilizzando i 2–ΔΔCt metodo15. Comparativamente analizzare i livelli di espressione genica nel knockout vs. topi wild-type.</li>
</ol>

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<li>Egger, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+Acute+Murine+Dextran+Sodium+Sulphate+Colitis%3A+Cytokine+Profile+and+Dose+Dependency%5BTitle%5D)+AND+%22Digestion%22%5BJournal%5D)">Characterisation of Acute Murine Dextran Sodium Sulphate Colitis: Cytokine Profile and Dose Dependency.</a> Digestion. 62 (4), 240-248 (2000).</li>
<li>Whittem, C. G., Williams, A. D., Williams, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+Colitis+Modeling+using+Dextran+Sulfate+Sodium+%28DSS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS).</a> Journal of Visualized Experiments. (35), 1652(2010).</li>
<li>Howitt, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuft+cells%2C+taste-chemosensory+cells%2C+orchestrate+parasite+type+2+immunity+in+the+gut%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Tuft cells, taste-chemosensory cells, orchestrate parasite type 2 immunity in the gut.</a> Science. 351 (6279), New York, N.Y. 1329-1333 (2016).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere nessun concorrenti interessi finanziari.

Questo metodo può essere impiegato per quantità determinare l'effetto delle mutazioni di specifici geni gustativi su infiammazione in un modello murino IBD indotta da DSS. Per sfruttare al meglio, induzione ottimale di IBD è un passo fondamentale. Lo sviluppo di colite è influenzato da diversi fattori, tra cui topo, housing ambiente, microflora intestinale, così come i geni di interesse. Si consiglia di eseguire un esperimento pilota con un piccolo numero di topi per testare diversi dosaggi e durate di amministrazione DS...

Le due forme principali di malattia infiammatoria intestinale (IBD), morbo di Crohn (CD) e colite ulcerosa (UC) sono caratterizzate da condizioni infiammatorie croniche remittente o progressive dell'intestino con eziologia multifattoriale1,2 . Lo sviluppo delle IBD dipende dalla genetici, nonché determinati fattori ambientali quali dieta, uso di antibiotici e soprattutto, infezioni da patogeni. Tuttavia, l'eziologia e la regolamentazione dei meccanismi molecolari implicati IBD sono ancora poco chiari. Da qui, numerosi modelli animali chimicamente indotte di IBD sono stati costruiti e applicati per delineare la patogenesi e meccanismi di regolamentazione e valutare l'efficacia terapeutica umana3.
Recettori del gusto sono recettori accoppiati a proteine G (GPCR) e sono classificati come due tipi principali: (T1Rs), tipo I e II (T2Rs) che consentono di rilevare composti amari, dolce e umami. Cascate di segnalazione del gusto vengono avviate da tastant T1Rs o T2Rs, attivando l'eterotrimerica G proteine leganti composto α-gustducin e un dimero Gβγ e che porta al rilascio delle subunità Gβγ. La frazione Gβγ a sua volta stimola l'effettore a valle dell'enzima fosfolipasi C-β2 (PLC-β2). Attivato PLC-β2 quindi idrolizza il fosfatidilinositolo 4,5-bisphosphate in due messaggeri intracellulari secondarie [inositolo-1,4,5-trisfosfato (IP3) e diacilglicerolo] e IP3 si lega a e aprire il suo canale-ricevitore IP3 R3, rilasciando ioni calcio dal reticolo endoplasmatico. Questo conduce infine all'apertura del canale di ioni potenziale transitorio del ricevitore Trpm5 e rilascio del neurotrasmettitore ATP sui nervi gustativo4,5,6,7. Ancora, le vie di segnalazione del gusto salato ed acido sono diversi e indipendenti da sapori amari8, dolce e umami. Inoltre, i componenti di gusto GPCR e proteine a valle esistono in vari tessuti extra-orali. Recenti studi hanno indicato quello α-gustducin, il componente principale del gusto di segnalazione, è trovato per essere espresso nella mucosa intestinale. Ulteriori studi sono necessari per comprendere le funzioni di questi gusto segnalazione componenti in tessuti extra-orali9,10.
Il metodo qui descritto è usato per caratterizzare le funzioni delle proteine di segnalazione gustative espresse in tessuti extra-orali. Uniamo una linea di topi transgenici sviluppata per la delineazione di Cascate di segnalazione in papille gustative con il modello di colite indotta chimicamente. In gran parte grazie alla sua semplicità procedurale e patologiche somiglianze alla colite ulcerosa umana, il Destrano solfato di sodio (DSS)-indotto IBD modello è stato più ampiamente utilizzato tra i vari modelli colite indotta chimicamente11. In questo studio, abbiamo usato i topi α-gustducin-carente come una linea di rappresentante del mouse per rivelare nuove funzioni di α-gustducin immunità mucosa dell'intestino e infiammazione 1) analizzando i cambiamenti morfologici nel tessuto e 2) analizzando le differenze nell'espressione di citochine legate alla infiammazione del colon. Questo metodo può essere utilizzato per determinare quantitativamente e qualitativamente i contributi di proteine di segnalazione gustativi (e altre proteine espresse nell'intestino), a danno di tessuto e l'infiammazione intestinale, quando topi geneticamente modificati per linee per i geni di interesse sono disponibili. Vantaggi di questo metodo sono consentendo agli utenti di ottenere integrata dei dati derivanti dalle azioni del DSS chimica e deficit del gene di interesse. Questo metodo può essere ulteriormente migliorato per aumentare la sua sensibilità e rivelare i cambiamenti sottili intestinali a livello cellulare e molecolare.

<table><tbody><tr><td><forte>Anticorpo</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD45</td><td>BD Biosciences</td><td>550539</td><td></td></tr><tr><td>CD3</td><td>BD Biosciences</td><td>555273</td><td></td></tr><tr><td>B220</td><td>BD Biosciences</td><td>550286</td><td></td></tr><tr><td>CD11b</td><td>BD Biosciences</td><td>550282</td><td></td></tr><tr><td>Ly6G</td><td>BD Biosciences</td><td>551459</td><td></td></tr><tr><td>< forte>Reagente</forte></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>destrano solfato sale di sodio (DSS)</td><td>MP Biomedicals</td><td>2160110</td><td></td></tr><tr><td>complesso streptavidina-HRP</td><td>BD Pharmingen</td><td>551011</td><td></td></tr><tr><td>H& Kit di colorazione</td><td>BBI Life Sciences</td><td>E607318</td><td></td></tr><tr><td>soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Sangon Biotech</td><td>B548117</td><td></td></tr><tr><td>FastStart Universal SYBR Green Master (ROX)</td><td>Roche</td><td>4913850001</td><td></td></tr><tr><td>MMLV Trascrittasi inversa, GPR</td><td>Clontech, TaKaRa</td><td>639574</td><td></td></tr><tr><td>TaKaRa MiniBEST Kit universale per l'estrazione dell'RNA...</td><td>TaKaRa</td><td>9767</td><td></td></tr><tr><td>BD 10 mL Siringa</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Strumenti e attrezzature</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>balance</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>forbici&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td>pinza</tr><tr><td>centrifuga</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>qPCR macchina</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>colorazione barattoli</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Software</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imag-Pro Plus&nbsp;</td><td>Cibernetica dei media, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

effetti del gusto segnalazione proteina abolishment su infiammazione dell'intestino in un modello murino di malattia infiammatoria intestinale

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Malattia infiammatoria intestinale (IBD) è uno dei disturbi gastrointestinali immuno-correlati, tra cui la colite ulcerosa e morbo di Crohn, che incide sulla qualità di vita di milioni di persone in tutto il mondo. IBD sintomi includono dolore addominale, diarrea e sanguinamento rettale, che possono derivare da interazioni tra microbiota dell'intestino, componenti alimentari, cellule epiteliali intestinali e le cellule immunitarie. È di particolare importanza per valutare come ogni gene chiave espressa in cellule epiteliali ed immune intestinale colpisce l'infiammazione del colon. Recettori del gusto accoppiati a proteine G, tra cui G proteina subunità α-gustducin e altre proteine di segnalazione, sono stati trovati nell'intestino. Qui, usiamo α-gustducin come rappresentante e descrivere un sodio del solfato del dextrano (DSS)-modello IBD per valutare l'effetto delle mutazioni del gene gustativo su immunità mucosa dell'intestino e infiammazione indotto. Questo metodo combina la tecnologia di knockout del gene con il modello IBD chimicamente indotto e quindi può essere applicato per valutare l'esito della nullificazione gene gustativo come pure altri geni che possono exuberate o smorzare la risposta immunitaria indotta da DSS nel colon. Topi mutanti vengono somministrati con DSS per un certo periodo durante il quale loro peso corporeo, sgabello e sanguinamento rettale sono monitorati e registrati. Presso diversi punti temporali durante l'amministrazione, alcuni topi sono euthanized, quindi le dimensioni e i pesi dei loro milze e i due punti sono misurati e tessuti dell'intestino sono raccolti e trattati per istologico e analisi dell'espressione genica. I dati mostrano che i risultati di knockout di α-gustducin in eccessiva perdita di peso, diarrea, sanguinamento intestinale, danno tissutale e topi infiammazione vs wild-type. Poiché la gravità dell'infiammazione indotta è influenzata da diversi ceppi di topi, habitat e dieta, ottimizzazione della durata di concentrazione e amministrazione di DSS in un esperimento pilota è particolarmente importante. Regolando questi fattori, questo metodo può essere applicato per valutare sia gli effetti anti - e pro-infiammatorie.

È stata stabilita una procedura IBD DSS indotta attraverso la somministrazione di 3% DSS in acqua potabile per α-gustducin-knockout (KO) e topi wild-type (WT). Rispetto ai topi WT, i topi knockout ha esibito più grave colite con eccessiva perdita di peso, diarrea e sanguinamento intestinale (Figura 1). Dopo una somministrazione di DSS di 7 giorni, le differenze nell'integrità del tessuto sono state analizzate usando la macchiatura di H &amp; E come il metodo ...

Qui presentiamo un protocollo per studiare l'effetto di annullamento dei geni legati al gustazione sulle risposte immunitarie in un sodio del solfato del dextrano (DSS)-infiammatorie intestinali (IBD) la malattia del mouse modello indotto.

Effetti del gusto segnalazione proteina Abolishment su infiammazione dell'intestino in un modello murino di malattia infiammatoria intestinale

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

Questo metodo può aiutare a rispondere alle domande chiave nel campo della biodisosi infiammatoria sulla colite ulcerosa e sulla malattia di Crohn. Il principale vantaggio di questa tecnica è che può essere utilizzato per valutare i primi effetti anti e proinfammatori delle proteine di segnalazione. L'implicazione di questa tecnica estende l'indagine del gas in nuovi progressi e infiammazione.Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sull'effetto genetico sull'infiammazione intestinale. Può anche essere applicato ad altri fattori come diete e microbioma. Generalmente, gli individui nuovi a questo semestre faranno fatica perché elaborare il tessuto cicatriziale della malattia è complicato.La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto la dissezione e le fasi di preparazione dei tessuti sono difficili da imparare perché la mistalia e le strutture del tessuto cellulare possono essere alterate. Per indurre il sodio solfato di dextran, o colite DDS, sostituire l'acqua potabile regolare con una soluzione 3%DSS, aggiungere libidio per sette giorni. Misurazione quotidiana del peso corporeo di ogni mouse, del consumo di soluzioni DSS e della produzione di feci.Alla

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Immunologia e Infezioni

Modelli sperimentali di malattia infiammatoria intestinale, ci hanno permesso di esaminare il complesso di risposte innate e adattative immunitario associate con patogenesi. Utilizzando il punteggio istologico, la quantificazione di citochine pro-infiammatorie e di attività mieloperossidasi, si può cominciare a valutare queste risposte visto nella malattia infiammatoria intestinale.

Indagare infiammazione intestinale in DSS-indotta Modello di IBD

Questo video dimostra una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da sostanze chimiche, una malattia infiammatoria intestinale. Al topo è consentito consumare una soluzione di destrano solfato di sodio (DSS) per una durata adeguata. Dopo il consumo, il DSS danneggia il muco e la barriera dello strato epiteliale nel colon, consentendo ai microbi intestinali di entrare nel tessuto sottostante, dove vengono percepiti dalle cellule immunitarie residenti per mediare una risposta...

Una tecnica per generare un modello murino di colite indotta da destrano solfato di sodio

Questo video dimostra la valutazione della colite indotta da sostanze chimiche tramite colorazione immunoistochimica del tessuto del colon di topo. In una sezione di tessuto colorato, la presenza di un gran numero di cellule immuno-responsive nel tessuto danneggiato rappresenta l'infiltrazione di cellule immunitarie durante la colite.

Valutazione della colite indotta da sostanze chimiche mediante analisi immunoistochimica di sezioni di tessuto del colon

DNBS / TNBS colite indotta offre un metodo alternativo e poco costoso per studiare la pathobiology delle malattie infiammatorie intestinali. Il protocollo descritto in questo documento delinea l'applicazione di successo di DNBS per indurre colite in topi e ratti e permette di studiare a fondo le risposte intestinale ospite-mediata.

DNBS / TNBS Colite Modelli: Fornire Insights Into malattia infiammatoria intestinale e gli effetti di grassi

Qui, presentiamo un protocollo per indurre l'infiammazione del colon nei topi mediante trasferimento adottivo di cellule T singeniche CD4+CD45RBin riceventi carenti di cellule T e B. Le caratteristiche cliniche e istopatologiche imitano le malattie infiammatorie intestinali umane. Questo metodo consente lo studio dell'inizio dell'infiammazione del colon e della progressione della malattia.

Induzione di Murine infiammazione intestinale per trasferimento adottivo di Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alto</sup&gt; T Cells in topi immunodeficienti

Qui, forniamo una descrizione dettagliata della procedura per indurre biopsie di pizzico guidate dal colonscopico nei topi e tracciare la chiusura delle ferite in tempo reale. Inoltre, vengono forniti metodi per la preparazione di tessuti per analisi istologiche, immunoistochimiche e molecolari del letto della ferita.

Esecuzione di biopsie di avvicinamento delle dita guidate dal colonscopico nei topi e valutazione dei successivi cambiamenti tissutali

Il punteggio sistematico dell'infiammazione intestinale utilizzando un sistema assistito da computer gratuito è un potente strumento per confrontare quantitativamente i cambiamenti istopatologici nei modelli di colite caratterizzati dalla presenza di ulcere e cambiamenti infiammatori. La valutazione del punteggio della colite istologica rafforza le osservazioni cliniche e facilita l'interpretazione dei dati.

Analisi sistematica del punteggio per l'infiammazione intestinale in un modello di colite indotta da solfato di sodio di Murine

In questo protocollo, viene descritto un modello di colite di trasferimento adottivo delle cellule T antigene-antigene specifico per l'intestino. Le cellule T CD4+ sono isolate da topi transgenici CBir1 TCR. Questi sono specifici per un antigene del microbiota intestinale immunodominante CBir1 flagellina, che viene trasferito nei topi Rag1-/- riceventi, portando all'infiammazione intestinale.

Induzione dell'infiammazione intestinale mediante trasferimento adottivo di cellule T CBir1 TCR transgeniche CD4 + a topi immunodeficienti

L'interazione tra suscettibilità genetica, immunità mucosa e ambiente microecologico intestinale è coinvolta nella patogenesi della malattia infiammatoria intestinale (IBD). In questo studio, abbiamo applicato il trapianto di microbiota fecale a topi carenti di IL-10 e abbiamo studiato il suo impatto sull'infiammazione del colon e sulla funzione cardiaca.

Valutazione terapeutica del trapianto di microbiota fecale in un modello murino carente di interleuchina 10

Questo protocollo descrive il metodo per stabilire un modello di acacite nel ratto. Il modello della sacca ileale è stato creato eseguendo un intervento chirurgico di anastomosi anale della sacca ileale (IPAA) utilizzando tecniche microchirurgiche. Dopo l'intervento chirurgico, il ratto è stato trattato con destrano solfato di sodio (DSS) al 4% per 4 giorni.

Un modello di ratto di pouchite dopo proctocolectomia e anastomosi anale con destrano solfato

Scopri come valutare gli effetti di proteine segnalatrici sull'infiammazione intestinale in un modello murino di colite indotta da DSS. Questo metodo permette di studiare le risposte immunitarie e i fattori genetici nella malattia infiammatoria intestinale.

Effetti del gusto segnalazione proteina Abolishment su infiammazione dellintestino in un modello murino di malattia infiammatoria intestinale (Video) | JoVE Journal

Effetti del gusto segnalazione proteina Abolishment su infiammazione dell'intestino in un modello murino di malattia infiammatoria intestinale

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