Name: Applicazione della tecnologia microfluidica Biochip per rilevare siero allergene-specifiche dellimmunoglobulina E (sIgE) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Impara a rilevare IgE sieriche specifiche con un sistema microfluidico a chemiluminescenza per la diagnosi di allergie respiratorie, alimentari e cutanee. Questo metodo riduce i costi e il volume di siero necessario rispetto alle tecniche tradizionali.

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Gli autori ringraziano il Professor Mei Jiang per il suo aiuto nell'analisi statistica e Mr. Hammer Tsui nella preparazione del manoscritto. Questo studio è stato sostenuto da Guangzhou Science e Technology Foundation (201804020043) e National Foundation Natural Science of China (NSFC 81572063 e 81802076 NSFC). I gruppi di finanziamenti concordato con il disegno di studio, analisi dei dati, preparazione del manoscritto e decisione di pubblicare. Nessun altro finanziamento ricevuto per questo studio.

Questo studio e l'uso di campioni di siero umano sono stati approvati dal comitato etico della The primo affiliati ospedale di Guangzhou Medical University (GYYY-2016-73). Tutti i partecipanti hanno dato il loro consenso scritto autonomamente o tramite i loro genitori (nel caso di bambini).
1. informazioni di base del gruppo di studio
Nota: Il Repository di informazioni di allergia della stato chiave laboratorio di malattia respiratoria (aria-SKLRD) è una banca di grandi siero istituita all'interno dell'ospedale di Guangzhou Institute of Respiratory (GIRH). Ha avviato nell'ultimo decennio, l'aria-SKLRD ha già iniziato a raccogliere e conservare i campioni di siero dai pazienti con le malattie allergiche, insieme a loro informazioni cliniche (tabella 1)4,5. Questo studio è stato effettuato con i sieri da aria-SKLRD.
<ol><li>Cerca nel database di aria-SKLRD per sieri raccolti da gennaio 2015 al giugno 2018 e selezionare i pazienti con malattia allergica, che sono stati trovati per essere sensibili agli allergeni comuni nella regione.</li>
	<li>Garantire che tutti i pazienti selezionati sono malattie allergiche relative, quali rinite allergica e asma, dermatite allergica e/o orticaria, e che il siero di questi pazienti contiene più siero allergene-specific IgE (sIgE) sensibilizzazioni di allergeni comuni in questa regione, rilevati dal sistema 1.</li>
	<li>Escludere i pazienti con i record medici incompleti, quelli persi al follow-up, coloro che rifiutano di dare il consenso informato per quanto riguarda l'uso dei loro campioni di siero per scopi scientifici, quelli con un'immunodeficenza identificata, quelli attualmente su immunoterapia o agenti immunomodulatori, o quelli che si trovano ad per avere infezioni parassitarie.</li>
	<li>Garantire che nessun trattamento o farmaco di prescrizione è stato dato prima della raccolta del siero in modo da minimizzare le interferenze per i risultati del laboratorio. Tutti i campioni di siero che non soddisfano i criteri sono stati respinti.</li>
</ol>2. studiare il flusso e misure di interesse
Nota: Il sistema di microfluidica ha bisogno di 100 µ l di siero per la determinazione 19 allergeni. Sangue venoso (5 mL) è stato raccolto da ogni paziente utilizzando un vaso sanguigno vuoto contenenti gel di separazione. Dopo centrifugazione per 10 min a 1.000 x g, lo strato superiore è stato raccolto per il test. Siero non utilizzato è stato conservato a-80 ° C. Prima del test, il siero è stato mantenuto a temperatura ambiente per 30 min e fu scosso con un Vortex. Cicli ripetuti di congelamento e scongelamento sono stati evitati.
<ol><li>Principalmente testare i campioni di siero per sIgEs agli allergeni interi di Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), peli di gatto (e1), peli di cane (e5), erba di Bermude (g2), timothy erba ( G6), scarafaggi (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans (m5), Ambrosia (w1), albume d'uovo (f1), latte (f2), grano (f4), arachidi (f13), soia (f14), mandorle (f20), granchio (f23) e gamberetti (f24). Seguire le istruzioni riportate nella sezione 3. Nota: sIgE determinazione è stato fatto con le IgE allergene-specifiche assay kit (vedere la Tabella materiali) e misurata da un analizzatore a chemiluminescenza.</li>
	<li>Selezionare casualmente tre campioni tra i campioni con abbastanza siero (almeno 900 µ l) per uno studio di riproducibilità. Mantenendo tutte le condizioni immutate, misurare i tre sieri per allergene sIgEs al giorno per 9 giorni consecutivi (cioè, un totale di 100 x 9 = 900 µ l di siero).</li>
</ol>3. procedura di prova semi-automazione del sistema microfluidico
Nota: Il sistema 2 è l'integrazione della tecnologia microfluidica automatico, microarray della proteina, luce fredda analisi, analisi parallela di IgE e tecnologia di elaborazione immagini. Il protocollo di prova è divisa in quattro parti: preparazione delle attrezzature, caricamento del campione, incubazione e misura.
<ol><li>
Preparazione dell'attrezzatura
	<ol>
<li>Accendere il PC e il potere di analizzatore. Nota: L'interruttore di alimentazione è a sinistra della base.</li>
		<li>Sul PC, avviare il programma di LabIT. Se si apre la finestra di avviso di Dark Frame , fare clic su OK per eseguire la prova di tenuta. In seguito, scegliere il centro del logo per accedere all'interfaccia di funzionamento. Nota: Il sistema ricorderà all'utente di eseguire la prova di tenuta se è inattivo per più di 24 h.</li>
		<li>Controllare la reazione Temp e CCD (charge coupled device) Temp nell'angolo inferiore destro dello schermo. La temperatura di reazione dovrebbe salire a 37 ° C ± 1 ° C in circa 10 min, e la Temp CCD dovrebbe cadere a-15 ° C ± 1 ° C.</li>
		<li>Eseguire la prova di tenuta dopo il Temp CCD è sceso a-15 ° C ± 1 ° C. Prima di eseguire la prova di tenuta, assicurarsi che non ci sono nessun altri oggetti lasciati all'interno dello strumento e chiudere la porta. Fare clic su strumenti | Test di sistema | Prova di tenuta. Non aprire la porta durante i test. Quando il test è finito, si aprirà la finestra del report.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Caricamento del campione
	<ol>
<li>Aggiungere 620 µ l di tampone di lavaggio, 120 µ l di tampone bloccante, 60 µ l di coniugati A e B, 60 µ l di substrato A e B e 100 µ l di campioni di siero per il serbatoio di reagente corrispondente sulla cartuccia microfluidica.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Incubazione
	<ol>
<li>Fare clic su ID cartuccia, utilizzare lo scanner di codici a barre per analizzare il numero di serie della cartuccia, immettere l'ID di campione, inserire la cartuccia nell'analizzatore e chiudere la porta e fare clic su Analyzer ed eseguire per avviare l'analisi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Misura
	<ol>
<li>Esportare i risultati per software di analisi statistica (ad esempio, Excel) dopo la misurazione. Nota: Dopo 30 minuti di incubazione, l'analizzatore esegue automaticamente la misura e riporta il risultato.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Spegnimento dell'analizzatore
	<ol>
<li>Per manutenzione ordinaria, dopo aver terminato il test, rimuovere la cartuccia e pulire l'analizzatore ferro di riscaldamento interno ed elettromagnete leggermente con 75% di alcol. Nota: Non premere con forza o scuotere l'elettromagnete.</li>
		<li>Chiudere la finestra di LabIT. Si aprirà la finestra di monitoraggio della temperatura. Si chiuderà automaticamente quando il CCD si riscalda per la modalità di protezione di 5 ° C. A quel punto, sarà possibile spegnere il potere del analizzatore al PC. Nota: Non chiudere manualmente la finestra di controllo prima che il Temp CCD è salito a 5 ° C della temperatura e non spegnere il potere dell'analizzatore né il PC durante il riscaldamento del CCD.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. definizione di sIgE reattività
Nota: Per un esemplare di siero non diluito, il campo di rilevamento del sistema 2 è 0,21 – 100 IU/mL.
<ol><li>Base al valore di soglia di 0,35 IU/mL, considera un livello di sIgE superiore a 0,35 IU/mL per essere positivo6,7. Valuta la reattività delle prove sIgE come8: classe 1 (≥0.35 e < 0,70 IU/mL), classe 2 (≥0.70 e < 3,50 IU/mL), classe 3 (≥3.50 e < 17,50 IU/mL), classe 4 (≥17.50 e < 50,00 IU/mL), classe 5 (≥50.00 e < 100,00 IU/mL) e classe 6 (≥100.00 IU/mL).</li>
</ol>5. elaborazione statistica
<ol><li>Utilizzare un istogramma per visualizzare il tasso positivo degli 19 allergeni (Figura 1) e utilizzare la curva di Levey-Jennings per dimostrare la ripetibilità del rilevamento sistema (Figura 2)9.</li>
	<li>Selezionare le tre più comuni allergeni inalanti e allergeni alimentari (in totale, sei allergeni) e confrontare i risultati dei sistema 1 per valutare la sua prestazione diagnostica clinica10,11. Includere il tasso di concordanza, sensibilità, specificità, valori predittivi positivi e negativi e l'area sotto il curva (AUC) di caratteristica (ROC) di funzionamento come i criteri di valutazione del ricevitore.</li>
	<li>Applicare correlazione analisi12 per descrivere le correlazioni tra i due sistemi e utilizzare il valore kappa per coerenza di Spearman. Categorizzare il valore kappa come quasi perfetto (0.8-1.0), sostanziale (0,6-0,8), moderato (0,4 – 0,6), Fiera (0.2-0.4) o poveri (< 0.2)13. Utilizzare delle analisi statistiche SPSS 23.0 e MedCalc 11.0 e definire P < 0,05 come significatività statistica.</li>
</ol>

<ol><li>Kamble, S., Bharmal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incremental+Direct+Expenditure+of+Treating+Asthma+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Asthma+Research%22%5BJournal%5D)">Incremental Direct Expenditure of Treating Asthma in the United States.</a> Journal of Asthma Research. 46 (1), 73-80 (2009).</li>
<li>Paganelli, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+antibodies+in+the+diagnosis+of+atopic+disease.+Clinical+evaluation+of+a+new+in+vitro+test+system%2C+UniCAP%2C+in+six+European+allergy+clinics%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP, in six European allergy clinics.</a> Allergy. 53 (8), 763-768 (1998).</li>
<li>Wang, J., Godbold, J. H., Sampson, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+serum+allergy+%28ige%29+tests+performed+by+different+assay+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Correlation of serum allergy (ige) tests performed by different assay systems.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (5), 1219-1224 (2008).</li>
<li>Sun, B., Zheng, P., Wei, N., Huang, H., Zeng, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-sensitization+to+silkworm+moth+%28Bombyx+mori%29+and+9+inhalant+allergens+among+allergic+patients+in+Guangzhou%2C+Southern+China%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Co-sensitization to silkworm moth (Bombyx mori) and 9 inhalant allergens among allergic patients in Guangzhou, Southern China.</a> PLoS ONE. 9 (5), e94776(2014).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Component-Resolved+Diagnostic+Study+of+Dermatophagoides+Pteronyssinus+Major+Allergen+Molecules+in+a+Southern+Chinese+Cohort%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigational+Allergology+%26+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Component-Resolved Diagnostic Study of Dermatophagoides Pteronyssinus Major Allergen Molecules in a Southern Chinese Cohort.</a> Journal of Investigational Allergology & Clinical Immunology. 25 (5), 343-351 (2015).</li>
<li>Luo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((grass+pollen+allergens+and+components+detected+in+a+southern+Chinese+cohort+of+patients+with+allergic+rhinitis+and%2For+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">grass pollen allergens and components detected in a southern Chinese cohort of patients with allergic rhinitis and/or asthma.</a> Molecular Immunology. 78 (2016), 105-112 (2016).</li>
<li>Zeng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Longitudinal+profiles+of+serum+specific+IgE+and+IgG4+to+Dermatophagoides+pteronyssinus+allergen+and+its+major+components+during+allergen+immunotherapy+in+a+cohort+of+southern+Chinese+children%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Longitudinal profiles of serum specific IgE and IgG4 to Dermatophagoides pteronyssinus allergen and its major components during allergen immunotherapy in a cohort of southern Chinese children.</a> Molecular Immunology. 74 (2016), 1-9 (2016).</li>
<li>Lee, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Specific+IgE+measurement+using+AdvanSure%28R%29+system%3A+comparison+of+detection+performance+with+ImmunoCAP%28R%29+system+in+Korean+allergy+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Clinica+Chimica+Acta%22%5BJournal%5D)">Specific IgE measurement using AdvanSure(R) system: comparison of detection performance with ImmunoCAP(R) system in Korean allergy patients.</a> Clinica Chimica Acta. (9-10), 914-919 (2012).</li>
<li>Eckels, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+control%2C+analysis+and+secure+sharing+of+Luminex%28R%29+immunoassay+data+using+the+open+source+LabKey+Server+platform%5BTitle%5D)+AND+%22Bmc+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">Quality control, analysis and secure sharing of Luminex(R) immunoassay data using the open source LabKey Server platform.</a> Bmc Bioinformatics. 14 (1), 145(2013).</li>
<li>Bland, J. M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Statistical+methods+for+assessing+agreement+between+two+methods+of+clinical+measurement%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement.</a> Lancet. 327 (8476), 307-310 (1986).</li>
<li>Carletta, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+Agreement+on+Classification+Tasks%3A+The+Kappa+Statistic%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+Linguistics%22%5BJournal%5D)">Assessing Agreement on Classification Tasks: The Kappa Statistic.</a> Computational Linguistics. 22 (2), 249-254 (1996).</li>
<li>Shyur, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+multiple+allergen-specific+IgE+by+microfluidic+immunoassay+cartridge+in+clinical+settings%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Allergy+and+Immunology%22%5BJournal%5D)">Determination of multiple allergen-specific IgE by microfluidic immunoassay cartridge in clinical settings.</a> Pediatric Allergy and Immunology. 21, 623-633 (2010).</li>
<li>Cesana, B. M., Antonelli, P., Gallazzi, E., Marino, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+measurement+methods%3A+an+endless+application+of+wrong+statistical+methods%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of measurement methods: an endless application of wrong statistical methods.</a> Intensive Care Medicine. 37 (6), 1038-1040 (2011).</li>
<li>Park, K. H., Lee, J., Sim, D. W., Lee, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+Singleplex+Specific+IgE+Detection+Immunoassays%3A+ImmunoCAP+Phadia+250+and+Immulite+2000+3gAllergy%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparison of Singleplex Specific IgE Detection Immunoassays: ImmunoCAP Phadia 250 and Immulite 2000 3gAllergy.</a> Annals of Laboratory Medicine. 38 (1), 23-31 (2018).</li>
<li>Teppo, H., Revonta, M., Haahtela, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+rhinitis+and+asthma+have+generally+good+outcome+and+little+effect+on+quality+of+life+-+a+20-year+follow-up%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Allergic rhinitis and asthma have generally good outcome and little effect on quality of life - a 20-year follow-up.</a> Allergy. 66 (8), 1123-1125 (2011).</li>
<li>Fischer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+type+I+sensitization+to+alpha-gal+in+forest+service+employees+and+hunters%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Prevalence of type I sensitization to alpha-gal in forest service employees and hunters.</a> Allergy. 72 (10), 1540-1547 (2017).</li>
<li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multicentre+study+assessing+the+prevalence+of+sensitizations+in+patients+with+asthma+and%2For+rhinitis+in+China%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">A multicentre study assessing the prevalence of sensitizations in patients with asthma and/or rhinitis in China.</a> Allergy. 64 (7), 1083-1092 (2009).</li>
<li>Ahlstedt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+usefulness+of+specific+IgE+blood+tests+in+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Allergy%22%5BJournal%5D)">Understanding the usefulness of specific IgE blood tests in allergy.</a> Clinical & Experimental Allergy. 32 (1), 11-16 (2002).</li>
<li>Wood, R. A., Segall, N., Ahlstedt, S., Williams, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accuracy+of+IgE+antibody+laboratory+results%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Allergy+Asthma+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">Accuracy of IgE antibody laboratory results.</a> Annals of Allergy Asthma & Immunology. 100 (2), 288-289 (2008).</li>
<li>Aberer, W., Kränke, B., Hager, A., Wick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+testing+needs+better+standardization--test+results+from+different+laboratories+lack+comparability+mostly+due+to+missing+effective+standards%5BTitle%5D)+AND+%22International+Archives+of+Allergy+%26+Immunology%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy testing needs better standardization--test results from different laboratories lack comparability mostly due to missing effective standards.</a> International Archives of Allergy & Immunology. 108 (1), 82-88 (1995).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Simile ai risultati da molti altri studi15,16,17, i risultati dal sistema microfluidico basato su sieri da 293 pazienti allergici ha mostrati quella casa acari della polvere (tra cui d. pteronyssinus, D. farinaee b. tropicalis) sono i principali allergeni inalanti provocando malattie allergiche nel sud della Cina, considerando che per il cibo, latte, arachidi, gamberetti e granchio sono gli allergeni ...

La prevalenza delle allergie è aumentato costantemente negli ultimi decenni e colpisce il 20% - 30% della popolazione globale1. Identificazione degli allergeni causativi ha un significato importante nella gestione delle malattie. In Cina, poiché le prove della puntura registrati in vivo della pelle non sono disponibili nel paese, determinazione in vitro di siero-specific IgE è il più importante e strumento comunemente utilizzato per il tipo I allergia diagnosi2. Questo è simile a pratiche nel mondo occidentale, ma anche se ImmunoCAP sistema (sistema 1), un sistema di base di enzima-collegata dell'immunosorbente fluorescenza, è percepito come il gold standard per la diagnosi di allergia in vitro3, il suo uso in Cina è molto limitata per il prezzo elevato di attrezzature e reagenti. Quindi è assolutamente necessario un nuovo sistema di diagnosi di allergia alternativo con un alto rapporto qualità-prezzo.
Il sistema BioIC (sistema 2) è un sistema basato su cartuccia microfluidico sulla base del principio di chemiluminescenza per saggi multiplex di siero-specific IgE. Con una dimensione di 7 cm x 4 cm, la cartuccia di microfluidica è composto da tre strati di plastica stampati ad iniezione. La parte superiore è 3 in policarbonato trasparente spessore mm che trasporta buona stabilità durante i processi di gruppo termico. Insieme allo strato di 3 mm di spessore inferiore costruito da un copolimero di acrilonitrile, butadiene e stirene (ABS), esso panini 0,5 mm di spessore strato intermedio in gomma siliconica. Essendo di colore nero, lo strato intermedio offre priorità bassa più bassa durante il rilevamento di chemiluminescenza. Sulla superficie del gel di silice, un sottile strato di membrana di nitrocellulosa (NC membrana) viene spruzzato nella posizione corrispondente alla zona di reazione, che consente l'individuazione delle diverse proteine allergeniche. Lo scopo di questo studio è di valutare la performance clinica del sistema microfluidico per la determinazione di multiplex di allergene-specific IgE nel siero.

<table><tbody><tr><td>Agnitio BioIC Analyzer</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, Cina)</td> <td>BA-G2000</td><td></td></tr><tr><td>Kit di rilevamento delle IgE specifiche per allergeni BioIC</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, Cina)</td><td>DR17A12</td><td></td></tr><tr><td>BioIC Cartrideg Piastra di posizionamento</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, Cina)</td> <td>Dispenser di reagenti T20SET</td><td></td></tr><tr><td>BioIC</td><td>Agnitio Science & Tecnologia (Taiwan, Cina)</td> <td>DS-1</td><td></td></tr><tr><td>Macchina per codici a barre bidimensionale</td><td>Agnitio Science & Tecnologia(Taiwan, Cina)</td> Pacchetto software <td>NLS-HR200</td><td></td></tr><tr><td>, LabIT</td><td>Agnitio Science & Tecnologia (Taiwan, Cina)</td> <td>Versione 2.4.12</td><td></td></tr><tr><td>VORTEX-5 Vortex Mixer</td><td>Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd.</td><td>VORTICE-5</td><td></td></tr></tbody></table>

applicazione della tecnologia microfluidica biochip per rilevare siero allergene-specifiche dell'immunoglobulina e (sige)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Malattia allergica è comune negli adulti e nei bambini. Identificazione degli allergeni causativi è significativo nella prevenzione e nella gestione della malattia. Tuttavia, un sistema di misurazione specifici dell'immunoglobulina E (IgE) con un alto rapporto qualità-prezzo è carente nella Cina continentale, soprattutto negli ospedali cure primarie. Questo articolo descrive le procedure di principio e funzionamento di usando un sistema di chemiluminescenza basati su cartuccia microfluidico per rilevare IgE allergene-specifiche nel siero. I risultati sono stati confrontati con quelli di ImmunoCAP (sistema 1), lo standard industriale, e viene valutata la riproducibilità del sistema per rilevare i pazienti sensibilizzati ad allergeni comuni. I risultati hanno mostrato che in confronto con ImmunoCAP (sistema 1), il sistema BioIC (sistema 2) ha buona precisione e sensibilità nella rilevazione di siero-specific IgE contro gli allergeni inalanti e alimenti vari, ma con un costo significativamente inferiore. Può servire come una buona alternativa al sistema 1 negli ospedali di cure primarie in Cina che hanno convenienza finanziaria inferiore.

Tassi positivi per 19 comuni allergeni I risultati su 293 sieri sono mostrati nella Figura 3. Tra tutti gli allergeni inalanti, d. farinae aveva il più alto tasso positivo (80.89%, 273/293), seguita da D. pteronyssinus (78,84%, 231/293). Tra gli allergeni alimentari, crab ha il più alto tasso positivo (20,48%, 60/293), seguita da 13,65% (40/293) per gamberetti. Il tasso totale positivo per allergeni inalanti era ...

Questa carta presenta un protocollo per la rilevazione di siero-specific IgE con un sistema di chemiluminescenza basati su cartuccia di microfluidica e la valutazione della sua utilità nella diagnosi di allergia.

Applicazione della tecnologia microfluidica Biochip per rilevare siero allergene-specifiche dell'immunoglobulina E (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

Il sistema tecnologico microfluidico biochip è una sezione a base di cartucce microfluidiche che utilizza il principio di chemiluminescenza per l'assage dello specif siero IGE. Rispetto ad altri metodi di rilevamento, i sistemi bioIC hanno il vantaggio di essere a basso costo e richiedere meno siero per rilevare l'IGE sierico. Le implicazioni di questa tecnica sono tendenzialmente alla diagnosi di malattie allergiche come rinite e asma perché molti di questi pazienti sono sensibilizzati a comuni allergeni rilevabili.Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sulle malattie allergiche respiratorie, può anche essere applicato ad altre situazioni, come cibo e allergie cutanee. Poiché questa tecnica è più facile da usare e ha un metodo abbassato per la formazione degli operatori, le persone nuove al sistema possono imparare a usarla rapidamente. La dimostrazione vivida di questo problema è fondamentale in quanto determina se il test ha esito positivo e richiede un'abile operazione manuale.Per testare campioni di siero per gli anticorpi dell'immunoglobulina E siebro per interi allergeni, selezionare casualmente tre campioni con almeno 900 microlitri di siero e prelevare il chip da

application-biochip-microfluidic-technology-to-detect-serum-allergen

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Il video mostra un test basato su cellule per rilevare l'immunoglobulina G anti-acquaporina-4 utilizzando un biochip contenente cellule non trasfettate e cellule trasfettate che esprimono acquaporina-4. Questo metodo ha applicazioni nella diagnosi dei disturbi dello spettro della neuromielite ottica, confermati dalla forte fluorescenza verde sul biochip.

Un test per rilevare l'immunoglobulina G sierica anti-acquaporina-4

Questo video mostra il rilevamento dell'elettrochemiluminescenza degli autoanticorpi delle isole nel siero umano. Gli anticorpi nel siero collegano l'antigene coniugato al rutenio con l'antigene di cattura biotinilato, formando complessi che vengono rilevati mediante misurazioni di elettrochemiluminescenza.

Rilevamento di autoanticorpi delle isole umane mediante un saggio di elettrochemiluminescenza

Questo video mostra un protocollo per rilevare l'immunoglobulina E siero-specifica utilizzando un sistema di chemiluminescenza basato su cartuccia microfluidica. Le IgE sieriche interagiscono con allergeni distinti immobilizzati nella zona di reazione della cartuccia, che vengono successivamente rilevati con anticorpi anti-IgE coniugati con perossidasi e un substrato chemiluminescente, consentendo il rilevamento simultaneo di più IgE allergene-specifiche.

Un sistema di rilevazione basato su cartuccia microfluidica per l'immunoglobulina E allergene-specifica

In questo articolo vi presentiamo un chip microfluidica per l'analisi singola cellula. Esso consente la quantificazione delle proteine ​​intracellulari, enzimi, cofattori, e secondi messaggeri per mezzo di saggi fluorescenti o immunologici.

Un chip microfluidica per la Versatile analisi chimica di singole cellule

Il lavoro proposto valuta il potenziale diagnostico di superficie per immagini risonanza plasmonica diretto e amplificato (SPRI) saggi, in particolare per l'individuazione di ormone della crescita umano ricombinante nel siero umano a spillo, confrontando SPRI risultati direttamente con disponibile in commercio saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) kit.

Analisi comparativa di ormone umano della crescita nel siero Utilizzando SPRI, Nano-SPRI e saggi ELISA

Descriviamo qui un metodo per generare microarray di antigeni personalizzabili che possono essere utilizzati per la rilevazione simultanea di autoanticorpi sierici IgG e IgM da esseri umani e topi. Questi array consentono il rilevamento quantitativo e ad alto rendimento di anticorpi contro qualsiasi antigene o epitopo di interesse.

Generazione di due colori Antigen microarray per la rilevazione simultanea di autoanticorpi IgG e IgM

Questo lavoro descrive un protocollo che utilizza un approccio risolti dai componenti per studiare la sensibilizzazione agli allergeni pollenici in una coorte di pazienti provenienti dalla Cina meridionale con rinite allergica e / o asma.

Un approccio diagnostico risolto con componente per uno studio sugli allergeni di polline delle erbe nei meridionali cinesi con rinite allergica e / o asma

Qui, abbiamo presentato i metodi per rilevare i autoantibodies di insule umane utilizzando dosaggi di elettrochemiluminescenza (ECL). Il protocollo usato per predire il diabete di tipo 1, può essere estesa, per rilevare gli autoanticorpi per altre malattie autoimmuni.

Saggi di elettrochemiluminescenza autoanticorpi anti-umano dell'isolotto

Questo lavoro Mostra le potenzialità della tecnologia array (PGA) glycan stampato per l'analisi degli anticorpi anti-carboidrati nei piccoli animali.

Stampato Glycan Array: Una tecnica sensibile per l'analisi del repertorio di anticorpi anti-carboidrati nei piccoli animali

In questo articolo, descriviamo un protocollo per caratterizzare le risposte di isotipo dell'immunoglobulina (Ig) T-dipendenti e T-indipendente in topi usando ELISA. Questo metodo usato da solo o in combinazione con flusso cytometry permetterà ai ricercatori di identificare le differenze nelle risposte di isotipo Ig B cellulo-mediata nei topi dopo immunizzazione antigene T-dipendente e T-indipendente.

Caratterizzazione delle risposte di isotipo dell'immunoglobulina timo-dipendenti e indipendenti del timo in topi usando l'analisi enzima-collegata dell'immunosorbente

Test basati su celle è un metodo ampiamente utilizzato per rilevare l'immunoglobulina del siero anti-acquaporina-4 G. Questo metodo potrebbe essere applicato a diagnosi clinica e ricerche scientifiche di neuromielite ottica dello spettro autistico.

Rilevamento di immunoglobulina Anti-acquaporina-4 G di siero umano dall'analisi Cell-based

Impara a rilevare IgE sieriche specifiche con un sistema microfluidico a chemiluminescenza per la diagnosi di allergie respiratorie, alimentari e cutanee. Questo metodo riduce i costi e il volume di siero necessario rispetto alle tecniche tradizionali.

Applicazione della tecnologia microfluidica Biochip per rilevare siero allergene-specifiche dell'immunoglobulina E (sIgE)

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