Name: Un modello Murine di encefalite virale acuta indotta da virus dengue (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 23 s
Description: Scopri come creare un modello murino immunocompetente ICR per studiare l'encefalite virale acuta indotta dal virus dengue. Questo protocollo permette di analizzare la neuropatogenesi in vivo.

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Questo studio è stato sostenuto da sovvenzioni del Ministero della Scienza e della Tecnologia (MOST107-2321-B-038-001) e dal finanziamento intramurale 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Taiwan.

I protocolli sperimentali di studio sugli animali sono stati approvati dal Comitato Istituzionale per la cura degli animali e l'utente del National Defense Medical Center (numero IACUC: 16-261), secondo le linee guida stabilite dal Ministero della Scienza e della Tecnologia di Taiwan.
1. Procedura di infezione
<ol><li>Preparare le scorte non adattate dENV2 (strain PL046)9 (originariamente ottenute dai Centers for Disease Control di Taiwan, che vanno da 2,5 x 107 a 1 x 109 PFU/mL).</li>
	<li>Diluire lo stock di virus a 1 x 106 PFU con Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medio per un volume totale di 40 .L.</li>
	<li>Riempire una siringa da 0,3 mL dotata di un ago da 30 G con 10 x 105 PFU di virus diluito, e riempire un'altra siringa da 0,3 mL dotata di un ago da 30 G con 30 (7,5 x 105 PFU) di virus diluito.</li>
	<li>
Tenere il topo da urlo ICR di 7 giorni e seguire i seguenti passaggi.
	<ol>
<li>Per l'iniezione intracerebrale, tenere il mouse in una posizione prona premendo l'auricolare tra l'indice e il pollice, e intracerebralmente iniettare 10 L di virus diluito nell'area lambda, il punto all'intersezione della sutura sagittale e lambdoid 16.</li>
		<li>Dopo l'iniezione intracerebrale, tenere il topo in posizione supina utilizzando l'indice e il pollice e iniettare intraperitonealmente 30 L di virus diluito delicatamente nell'addomel murino. NOTA: Per evitare il cannibalismo, il 75% di alcol viene utilizzato per creare una perdita temporanea della sensazione olfattiva della madre. Inoltre, si suggerisce di coprire le cucciolate con le feci e l'urina della madre.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Posare i topi da latte nelle loro gabbie e attendere 5 min per controllare la loro poststimolazione di sicurezza con l'avidità dei topi, tra cui camminare e latte materno succhiare. NOT:</</c9> Molto spesso, i topi dimostrano una normale poststimolazione dell'attività e non sembrano esserci effetti nocivi a seguito della sfida tecnica. Durante questo esperimento, gli animali sono stati mantenuti dal Institutional Animal Care e User Committee del National Defense Medical Center, Taiwan.</li>
	<li>Valutare il progresso giornaliero dei topi in termini di peso corporeo (utilizzando un equilibrio in microgrammo), malattia virale acuta (con il punteggio della malattia come descritto nella sezione 2), e il tasso di sopravvivenza9,10,11 ,12,13,14,15.</li>
</ol>2. Punteggio di malattia
<ol><li>Monitorare il grado di encefalite virale acuta malattie simili. Assegnare un punteggio pari a 0 ai mouse sani; 1 ai topi con sintomi di malattia minore, tra cui perdita di peso, mobilità ridotta e un orientamento del corpo gobbo; 2 ai topi che presentano crisi limbiche; 3 ai topi la debolezza limbica del dado, compreso il movimento con difficoltà e la debolezza dell'arto anteriore o dell'arto posteriore; 4 per la paralisi; 5 per la morte. NOT:</</c0> Una volta che il punteggio raggiunge 3, i sintomi della malattia sono considerati in rapida evoluzione.</li>
	<li>Tracciare il punteggio della malattia, secondo il punto 2.1, per ogni giorno come una cifra basata sulla curva utilizzando la media SD dei punteggi dei test giornalieri in ogni gruppo.</li>
</ol>

<ol><li>Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Disease+Primers%22%5BJournal%5D)">Dengue infection.</a> Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055(2016).</li>
<li>Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue%3A+knowledge+gaps%2C+unmet+needs%2C+and+research+priorities%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities.</a> Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).</li>
<li>Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurological+complications+of+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Neurology%22%5BJournal%5D)">Neurological complications of dengue virus infection.</a> Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).</li>
<li>Geneva: World Health Organization. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Dengue%3A+Guidelines+for+Diagnosis%2C+Treatment%2C+Prevention+and+Control%3A+New+Edition%22">Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition</a>. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).</li>
<li>Amaral, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracerebral+infection+with+dengue-3+virus+induces+meningoencephalitis+and+behavioral+changes+that+precede+lethality+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroinflammation%22%5BJournal%5D)">Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice.</a> Journal of Neuroinflammation. 8, 23(2011).</li>
<li>de Miranda, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-3+encephalitis+promotes+anxiety-like+behavior+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice.</a> Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).</li>
<li>Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+infection+by+a+neuroinvasive+neurovirulent+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurovirology%22%5BJournal%5D)">In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus.</a> Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).</li>
<li>Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apoptosis+in+the+mouse+central+nervous+system+in+response+to+infection+with+mouse-neurovirulent+dengue+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses.</a> Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).</li>
<li>Tsai, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+retard+dengue+virus-induced+acute+viral+encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis.</a> Scientific Reports. 6, 27670(2016).</li>
<li>Cheng, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+Nrf2+by+the+dengue+virus+causes+an+increase+in+CLEC5A%2C+which+enhances+TNF-alpha+production+by+mononuclear+phagocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes.</a> Scientific Reports. 6, 32000(2016).</li>
<li>Ho, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blockade+of+dengue+virus+infection+and+viral+cytotoxicity+in+neuronal+cells+in+vitro+and+in+vivo+by+targeting+endocytic+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways.</a> Scientific Reports. 7 (1), 6910(2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-TNF-alpha+restricts+dengue+virus-induced+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Leukocyte+Biology%22%5BJournal%5D)">Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy.</a> Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).</li>
<li>Kao, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+antiparasitic+drug+niclosamide+inhibits+dengue+virus+infection+by+interfering+with+endosomal+acidification+independent+of+mTOR%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Neglected+Tropical+Diseases%22%5BJournal%5D)">The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715(2018).</li>
<li>Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+heat+shock+factor+1+as+an+antiviral+strategy+against+dengue+virus+replication+in+vitro+and+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo.</a> Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).</li>
<li>Jhan, M. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue+virus+infection+increases+microglial+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Dengue virus infection increases microglial cell migration.</a> Scientific Reports. 7 (1), 91(2017).</li>
<li>Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+Stereotaxic+Delivery+of+rAAV+and+Special+Considerations+in+Vector+Handling%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling.</a> Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).</li>
<li>Fong, C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+encephalitis%2Fencephalopathy+with+reversible+splenial+lesion+%28MERS%29+due+to+dengue+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus.</a> Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).</li>
<li>Sarathy, V. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lethal+murine+infection+model+for+dengue+virus+3+in+AG129+mice+deficient+in+type+I+and+II+interferon+receptors+leads+to+systemic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease.</a> Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).</li>
<li>Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dengue+fever+viremia+model+in+mice+shows+reduction+in+viral+replication+and+suppression+of+the+inflammatory+response+after+treatment+with+antiviral+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs.</a> The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).</li>
<li>Tyler, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+Viral+Encephalitis%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Acute Viral Encephalitis.</a> New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).</li>
<li>Yauch, L. E., Shresta, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+dengue+virus+infection+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Antiviral+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse models of dengue virus infection and disease.</a> Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).</li>
<li>Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanded+dengue+syndrome%3A+subacute+thyroiditis+and+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage.</a> BMC Infectious Diseases. 12, 240(2012).</li>
<li>Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+hemorrhage+in+dengue+fever%3A+management+and+outcome%3A+a+series+of+5+cases+and+review+of+literature%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature.</a> Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).</li>
<li>Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repurposing+of+prochlorperazine+for+use+against+dengue+virus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection.</a> Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).</li>
<li>Rocha, B. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dengue-specific+serotype+related+to+clinical+severity+during+the+2012%2F2013+epidemic+in+centre+of+Brazil%5BTitle%5D)+AND+%22Infectious+Disease+Poverty%22%5BJournal%5D)">Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil.</a> Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116(2017).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

L'infezione da DENV è stata rilevata nel SNC di pazienti con dengue grave3,17, suggerendo la possibilità della manifestazione di encefalite virale acuta avvenuta durante la patogenesi dengue. Qui, riportiamo un modello murino in vivo dell'infezione da DENV per studiare il coinvolgimento della disfunzione del SNC nella dengue grave, in particolare con un focus sulle malattie acute simili all'encefalite acuta indotta da DENV. Rispetto ai modelli precedenti, in part...

DENV, un virus artropode della famiglia Flaviviridae, contiene un genoma di RNA a senso positivo che codifica tre proteine strutturali virali (capside, premembrana e busta) e sette proteine non strutturali virali (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B e NS5). I quattro sierotipi di DENV (DENV1-4), che infettano circa 390 milioni di persone ogni anno, causano un onere globale anche se i governi hanno diretto notevoli sforzi verso il controllo dei vettori e delle malattie delle zanzare1. Attualmente, i vaccini protettivi e i farmaci antivirali terapeutici sono in fase di sviluppo e richiedono un'ulteriore convalida a lungo termine2. Nella pratica clinica, anche se un paziente dengue con infezione da SNC è raro, deve essere ulteriormente esplorato per comprendere la diversità dello sviluppo della malattia dengue3. Sono necessarie ulteriori indagini e validazioni; in particolare, l'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) ha incluso il coinvolgimento del compromissione del SNC, come il danno cognitivo, le convulsioni, l'encefalopatia e l'encefalite, nella classificazione della dengue grave3,4. La costruzione di modelli animali di infezione da DENV è indispensabile per esplorare la neuropatogenesi dell'infezione da DENV.
Per generare l'infezione da CNS da parte di DENV, diversi studi hanno eseguito diverse vie di infezione da DENV, tra cui (1) l'inoculazione intracerebrale di topi C57BL/6 che hanno ricevuto 4 x 103 unità di formazione di placche (PFU) di DENV35non adattati, 6, (2) inoculazione intraperitoneale di topi BALB/c che hanno ricevuto 7 x 104 PFU di DENV47in vitro , (3) inoculazione intracerebrale di topi svizzeri che hanno ricevuto 1 x 105 PFU di DENV18in vivo e (4) co-inoculazione intracerebrale e intraperitale dei topi da allattamento ICR che hanno ricevuto 1 x 106 PFU di DENV29 nonadattati . Secondo i risultati di questi studi5,6,7,8,9, infezione DENV nei topi provocare la replicazione virale nel cervello, portando a virale acuta sindromi simili all'encefalite, cambiamenti comportamentali accompagnati da paralisi degli arti e instabilità posturale, neurotossicità e infiammazione del SNC, perdite plasmatiche generali e localizzate attraverso la barriera emato-encefalica (BBB) e letalità. Tutti i risultati di questi studi5,6,7,8,9hanno dimostrato la capacità di DENV di infettare il SNC e l'induzione di encefalite virale acuta malattia a seguito di infezione.
Sulla base dei nostri risultati attuali9,10,11,12,13,14,15, abbiamo creato un modello murino di infezione DENV come un in vivo per esaminare l'efficacia terapeutica di agenti/fattori mirati contro la replicazione virale, nonché la neurotossicità. Qui, riportiamo il protocollo utilizzato per creare un topo ICR immunocompetente per studiare l'infezione da CnS e per monitorare lo sviluppo di neuropatie con diverse gravità causate da DENV. I risultati mostrano la progressione significativa della malattia simile all'encefalite nei topi infetti da DENV in modo dipendente dal tempo.

<table><tbody><tr><td>Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI)</td><td>Gibco</td><td>11875-085</td><td>Virus diluente</td></tr><tr><td>0,3 mL Siringa da insulina&nbsp;</td><td>BD Ultra-Fine&shy;II</td><td>328838</td><td>Iniezione intracerebrale e intraperitoneale</td></tr><tr><td>Microbalance</td><td>METTLER TOLEDO's LabX</td><td>AL104</td><td>Peso del topo</td></tr><tr><td>DENV2 non adattato (ceppo PL046)</td><td>I Centri per il controllo delle malattie di</td><td></td> <td>Taiwan-Infettare il topo</td></tr><tr><td>da latte Institute of Cancer Research (ICR)</td><td>BioLASCO Taiwan Co.,</td> <td>Ltd-Il</td> <td>nostro modello murino</td></tr></tbody></table>

un modello murine di encefalite virale acuta indotta da virus dengue

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Il virus dengue (DENV), un virus trasmesso da artrodi trasmesso dalle zanzare, può causare la grave malattia nota come febbre emorragica dengue, caratterizzata da complicazioni letali dovute a perdite di plasma, asciti, effusioni pleuriche, grave emorragia e compromissione dell'organo. Alcuni casi di infezione Da DENV presentano manifestazioni neurologiche; tuttavia, gli studi non hanno esplorato ulteriormente la neuropatogene indotta da DENV. In questo studio, presentiamo un protocollo per utilizzare un topo ICR (Istituto di ricerca sul cancro) immunocompetente per studiare l'induzione dell'infezione del sistema nervoso centrale (SNC) con DENV, seguito dalla progressione di encefalite virale acuta malattia.

Gravi complicazioni neurologiche associate alla dengue sono state segnalate nei pazienti per la patogenesi dengue4. Anche se questi casi sono rari in clinica, la creazione di un modello murino immunocompetente di infezione Da DENV può essere utilizzato non solo per studiare l'immunopatogene, ma anche per esplorare l'infezione da SNC, la neuroinfiammazione, la neurotossicità e il virale acuto una malattia simile all'encefalite. In questo studio, secondo il nostro at...

Qui, presentiamo un protocollo per la creazione di un iCR immunocompetente (Istituto di ricerca sul cancro) modello murino di infezione del sistema nervoso centrale per visualizzare lo sviluppo della neuropatia. Il monitoraggio dei disturbi encefalitici virali con punteggi di malattia identici potrebbe essere eseguito per mostrare la neuropatia indotta dal virus dengue in vivo.

Un modello Murine di encefalite virale acuta indotta da virus dengue

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Questo protocollo di un modello di malattia si vede l'infezione da virus dengue nel cervello diventare una piattaforma in vivo per lo screening di vettori virali e ospiti associati alla neuropatogenesi. A differenza dei modelli precedenti, i nostri modelli utilizzano strumenti dell'infezione con un basso titer virale, per infettare i topi che allattano immunocompetente Institute of Cancer Research per l'induzione della procreazione della malattia encefalitica. A dimostrare la procedura sarà Ting-Jing Shen, dottorando del mio laboratorio.Prima di iniziare la procedura di infezione, diluire il virus dengue non adattato due stock, a una per 10 alla quinta unità di formatura della placca per 40 microlitri di concentrazione media RPMI 1640. Successivamente, caricare una siringa da 0,3 millilitri dotata di un ago calibro 30 con 10 microlitri di virus diluito. E una siringa da 0,3 millilitri dotata di un ago calibro 30, con 30 microlitri di virus per animale.Per l'erogazione intercerebrale del virus, premere l'oracolo tra il pollice e l'indice per trattenere delicatamente un topo dell'Istituto di ricerca sul cancro di sette giorni in una posizione incline e iniettare il volume di 10 microliter del virus diluito nell'area lambda, all'intersezione della sutura sagittale e lambdoide. Dopo l'iniezione intercerebrale, utilizzare il pollice e l'indice per tenere il mouse in posizione supina e, delicatamente intraperitonealmente, iniettare il volume di 30 microliter del virus diluito, nell'addome murino. Per il punteggio della progressione della malattia, assegnare un punteggio da zero a cinque a ogni topo inoculato ogni giorno, in base al grado di malattie virali acute simili all'encefalite, e tracciare i punteggi per ogni giorno come una figura basata sulla curva, utilizzando il più e meno medio la deviazione standard dei punteggi giornalieri dei test in ogni gruppo.Rispetto ai cambiamenti di peso corporeo misurati in topi finti e solo inoculati, gli animali inoculati del virus dengue mostrano una diminuzione del peso corporeo in ogni momento durante lo studio. Inoltre, gli animali infetti da dengue virus dimostrano un aumento significativo delle posture della schiena dell'intuizione, convulsioni limbiche, debolezza limbica, paralisi e morte rispetto ai sintomi mostrati da finti animali inoculati. Infatti, i topi infetti da dengue mostrano una riduzione dipendente dal tempo dei tassi di sopravvivenza che non si osserva nei finti animali inoculati, confermando la creazione di un modello infettivo di virus dengue all'interno del sistema nervoso centrale che dimostra la progressione di malattie virali acute simili all'encefalite nei topi.La puntura del sito sbagliato può causare il blocco dell'ago da parte del punteggio e l'overflow della soluzione virale al di fuori della testa, con conseguente iniezione fallita e un'infezione fallita. Seguendo la procedura, i campioni cerebrali possono essere raccolti per danni patologici, infiltrazioni di cellule immunitarie e analisi di replicazione virale rispettivamente mediante citometria del flusso di colorazione ematossilina ed eosina e test di formazione della placca. Il nostro modello murino immunocompetente, fornisce una piattaforma per esplorare i meccanismi patogeni dell'infezione da virus dengue, per lo sviluppo di vaccini contro il virus dengue o farmaci anti-dengue virus.Il virus Dengue è un agente patogeno di livello due di biosicurezza e, in quanto tale, tutti gli esperimenti con questo virus dovrebbero essere completati in un laboratorio qualificato di biosicurezza animale di secondo livello.

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Immunologia e Infezioni

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Induzione di encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino

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Questo video dimostra l'induzione di convulsioni indotte dalla manipolazione in un topo infetto dal virus dell'encefalomielite murina di Theiler (TMEV). Il topo infetto, che ha neuroni ipereccitabili, è esposto a stimoli fisici esterni. Questa esposizione provoca stress, portando a un'attività elettrica anormale nei neuroni, che provoca convulsioni.

Convulsioni indotte dalla manipolazione in un modello murino

Influenza A virus (IAVs) è importanti patogeni respiratori umani. Per capire la patogenicità di IAVs e per eseguire test preclinici di approcci vaccinali romanzo, modelli animali che imita la fisiologia umana sono necessari. Qui, descriviamo le tecniche per valutare IAV patogenesi, le risposte umorali e l'efficacia del vaccino utilizzando un modello murino di infezione.

Studi del Virus di riossidazione A in un modello murino di infezione

Qui descriviamo un metodo per l'instaurazione di un modello di microcefalia indotta da virus di Zika nel topo. Questo protocollo include metodi per inoculazione intracerebrale embrionale, neonatale e adulto-fase del virus Zika.

Creazione di modelli murini per disturbi neurologici indotta da Virus di Zika utilizzando strategie di iniezione intracerebrale: embrionale, neonatale e adulto

Il protocollo qui presentato consente la riproduzione di una diffusa demielinizzazione della materia grigia di entrambi gli emisferi corticali nei ratti Dark Agouti maschi adulti. Il metodo comprende l'impianto intracerebrale di un catetere, l'immunizzazione subclinica contro la glicoproteina degli oligodendrociti mielinici e l'iniezione intracerebrale di una miscela di citochine pro-infiammatorie attraverso il catetere impiantato.

Modello di ratto di demielinizzazione corticale cerebrale diffusa indotta da un'iniezione intracerebrale di citochine pro-infiammatorie

L'obiettivo del protocollo è quello di dimostrare le tecniche utilizzate per studiare la malattia virale isolando e quantificando il virus zoika, da più organi in un topo dopo l'infezione.

Isolamento e quantificazione del virus zika da più organi in un mouse

L'infezione intracerebrale con il virus dell'encefalomielite murina di Theiler (TMEV) nei topi C57BL/6 replica molti dei sintomi clinici precoci e cronici dell'encefalite virale e della successiva epilessia nei pazienti umani. Questo articolo descrive l'infezione virale, i sintomi e l'istopatologia del modello TMEV.

Un modello per l'epilessia di eziologia infettiva utilizzando il virus dell'encefalomielite murina di Theiler

Scopri come creare un modello murino immunocompetente ICR per studiare l'encefalite virale acuta indotta dal virus dengue. Questo protocollo permette di analizzare la neuropatogenesi in vivo.

Un modello Murine di encefalite virale acuta indotta da virus dengue

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