Name: Chromogenic In Situ Hybridization è uno strumento per la diagnosi del cancro della testa e del collo correlate allHPV (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-06-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Scopri la tecnica CISH per rilevare infezioni attive da HPV nei tumori della testa e del collo. Questo metodo visualizza l'mRNA E6-E7 con alta sensibilità e specificità, supportando la diagnosi e la gestione del paziente.

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Gli autori ringraziano il dipartimento di Patologia di Hopital Européen Georges Pompidou e Necker (Laurianne Chambolle, Elodie Michel, e Gisèle Legall); la piattaforma di istologia di PARCC, Hopital Européen Georges Pompidou (Corinne Lesaffre); Virginia Clark per l'editing di lingue; Alexandra Elbakyan per il suo contributo.

Il protocollo segue le linee guida etiche ed è stato approvato dal Comitato Etico (Comité-de-Protection-des-Personnes Ile-de-France-II, #2015-09-04).
1. Preparazione dei materiali
<ol><li>
Preparazione del tampone di lavaggio 1x
	<ol>
<li>Preparare 3 L di 1x buffer di lavaggio aggiungendo 2,94 L di acqua distillata e una bottiglia (60 mL) di tampone di lavaggio (50x) (vedi la tabella dei materiali) a un grande carboy. Mescolare bene. NOTA: Il buffer di lavaggio 1x può essere preparato in anticipo e conservato a temperatura ambiente per un massimo di 1 mese.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparazione di reagenti di controstitura
	<ol>
<li>Preparare il 50% di ematossilina.<ol>
<li>In un cofano fumato, aggiungere 100 mL di ematossialina i di Gill (vedi la tabella deimateriali) a 100 mL di acqua distillata in una macchia di colorazione. NOTA: la soluzione di colorazione dell'ematossilina al 50% può essere riutilizzata fino a 1 settimana.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Preparare lo 0,02% (w/v) l'acqua di ammoniaca (reagente di muso).</li>
		<li>Nel cofano del fume, aggiungere 1,43 mL di 1 N idrossido di ammonio a 250 mL di acqua distillata in un cilindro graduato o in un altro contenitore. Sigillare il cilindro con pellicola di paraffina. Mescolare bene il suo contenuto per 3x-5x. NOTA: Per la quantificazione di analisi, è fondamentale utilizzare idrossido di ammonio. I reagenti possono essere preparati in anticipo. Assicurarsi che tutti i contenitori rimangano coperti.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Preparazione del reagente di recupero destinazione 1x
	<ol>
<li>In un grande becher, aggiungere 70 mL di 10x reagente di recupero bersaglio (vedere la Tabella dei materiali) a 630 mL di acqua distillata.</li>
		<li>Posizionare il becher su una piastra di riscaldamento con un agitatore magnetico. Coprirlo con un foglio di alluminio.</li>
		<li>Far bollire il suo contenuto a 100 gradi centigradi per 10-15 min. NOTA: Non far bollire per più di 30 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Equilibratore reagente
	<ol>
<li>Assicurarsi che il forno di ibridazione sia acceso e a 40 gradi centigradi. Posizionare la carta umidificante umidante bagnata nella parte inferiore del vassoio. NOTA: per i passaggi da 3.4 a 4.2 è necessario un forno di ibridazione (vedere la tabella deimateriali).</li>
		<li>Togliere i reagenti di amplificazione (AMP1–AMP6, consultare la Tabella deiMateriali) dal frigorifero e tenerli a temperatura ambiente, almeno 30 min prima della relativa fase di incubazione.</li>
		<li>Prima di ogni utilizzo, scaldare il bersaglio e/o le sonde di controllo per almeno 10 min a 40 gradi centigradi in forno o in un bagno d'acqua o incubatrice.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. Miglioramento dell'adeno e deparaffinazione nella cappa del fumi
NOTA: Avviare il protocollo con campioni istologici spessi 3-5 m montati su vetrini non macchiati.
<ol><li>Al fine di migliorare l'adesione, cuocere i vetrini a 60 gradi per 1 h o a 40 gradi durante la notte in forno.</li>
	<li>Caricare il rack di diapositive con diapositive istologiche non macchiate. Immergere il portadiapositive per 5 min in xilene fresco contenuto in un piatto di colorazione, con agitazione occasionale. ripetere con xilene fresco.</li>
	<li>Immergere la griglia scorrevole per 3 min in etanolo fresco al 100% contenuto in una teglia di colorazione, con agitazione costante. Ripetere con etanolo fresco al 100%.</li>
	<li>Lasciare asciugare i vetrini per 2 min a temperatura ambiente. NOTA: Non riutilizzare i reagenti di deparaffinazione per disidratare i vetrini dopo il test.</li>
</ol>3. Pretrattamento dei tessuti
NOTA: Questi passaggi seguono la raccomandazione di pretrattamento "standard" in base alle istruzioni del produttore per i campioni di testa e collo. Potrebbe essere necessario regolare la tempistica delle sezioni 3.1 e 3.2 a seconda del tessuto manipolato.
<ol><li>
Blocco dell'attività perossidasi
	<ol>
<li>Aggiungere 4-6 gocce di perossido di idrogeno (si veda la Tabella deiMateriali) ad ogni vetrino e incubarle per 10 min a temperatura ambiente.</li>
		<li>Lavare i vetrini 2x per 2 min in acqua distillata a temperatura ambiente.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Rottura dei limiti di RNA/tessuto
	<ol>
<li>Con un artiglio, rimuovere la lamina di alluminio dal reagente di recupero bersaglio 1x (TTR1x) dalla sezione 1.3 e smettere di mescolare. Immergere il portasci lentamente e con molta attenzione per 15 min. Coprire nuovamente il becher con la lamina di alluminio. NOTA: il sobbollimento deve persistere durante questo passaggio. AVVISO: Utilizzare l'artiglio per manipolare la lamina di alluminio e il rack scorrevole in modo da evitare lesioni da ustione. Assicurati di indossare attrezzature protettive personali adeguate, come guanti e un camice da laboratorio.</li>
		<li>Con l'artiglio, trasferire immediatamente il rack hot slide in un bagno d'acqua distillato e lavarlo per 2 min. NOTA: Assicurarsi che i campioni non si raffreddino nel TTR1x.</li>
		<li>Lavare i vetrini in etanolo fresco al 100% per 2 min.</li>
		<li>Lasciare asciugare i vetrini a temperatura ambiente per 2 min.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Creazione di barriere
	<ol>
<li>Con una penna barriera idrofobica (vedere la tabella deimateriali), disegnare una barriera intorno al campione. Lasciare asciugare per almeno 5 min. NOTA: Lasciare asciugare davvero la barriera. Se si consuma durante la procedura, non esitare a disegnarlo di nuovo. Evitare di toccare il tessuto con la penna. Il protocollo può essere sospeso qui durante la notte.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Digestione proteasi
	<ol>
<li>Posizionate le diapositive sul rack delle diapositive e aggiungete 4 gocce di Protease Plus per campione (consultate la tabella dei materiali).</li>
		<li>Coprire il vassoio di controllo dell'umidità con un coperchio e inserirlo nel forno di ibridazione per 30 min a 40 gradi centigradi. NOTA: Per evitare l'evaporazione, assicurarsi che la manopola di svolta sia completamente ruotata in posizione di blocco.</li>
		<li>Togliere il vassoio dal forno e rimuovere il rack scorrevole.</li>
		<li>Una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e mettere il vetrino in una cremagliera sommersa in un piatto di colorazione riempito con acqua distillata.</li>
		<li>Lavare i vetrini 2x per 2 min in acqua distillata a temperatura ambiente. Agitare costantemente.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Esecuzione del saggio
NOTA: Non lasciare asciugare le sezioni tra le fasi di incubazione.
<ol><li>
Ibridazione della sonda HPV NOTA: Assicurarsi che le sonde siano preriscaldate per sciogliere eventuali precipitazioni prima dell'uso. Per questo passaggio, invece di sonda HPV, può essere utilizzato anche l'isomeresi B peptidil-prolyl per il controllo positivo o la riduttrice diidipicolata (DAPB) per il controllo negativo (vedere la Tabella dei materiali).<ol>
<li>Toccare e/o scorrere i vetrini per rimuovere il liquido in eccesso e inserirli nel rack diapositive. Aggiungere gocce di sonda HPV per coprire interamente ogni sezione.</li>
		<li>Coprire il vassoio con un coperchio e inserirlo in forno per 2 h a 40 gradi centigradi. NOTA: Per evitare l'evaporazione, assicurarsi che il nob di svolta sia completamente ruotato in posizione di blocco.</li>
		<li>Togliere il vassoio dal forno e rimuovere il rack scorrevole.</li>
		<li>Una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e posizionare il vetrino in un rack di scorrimento immerso in un piatto di colorazione riempito con 1x tampone di lavaggio.</li>
		<li>Lavare i vetrini in 1x lavaggio tampone per 2 min a temperatura ambiente con agitazione costante. Ripetere l'operazione con il tamponi di lavaggio 1x fresco.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ibridazione di AMP1, AMP2, AMP3 e AMP4 NOTA: questi passaggi includono l'ibridazione nel forno di ibridazione e AMP1–AMP4 dal kit acquistato (vedere la Tabella dei materiali).<ol>
<li>Toccare e/o scorrere per rimuovere il liquido in eccesso dai vetrini e inserirli nel rack diapositive. Aggiungere 4 gocce di AMP1 per coprire interamente ogni sezione.</li>
		<li>Coprire il vassoio con un coperchio e inserirlo in forno per 30 min a 40 gradi centigradi.</li>
		<li>Togliere il vassoio dal forno e rimuovere il rack scorrevole.</li>
		<li>Una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e posizionare il vetrino in un rack di scorrimento immerso in un piatto di colorazione riempito con 1x tampone di lavaggio.</li>
		<li>Lavare i vetrini in 1x lavaggio tampone per 2 min a temperatura ambiente con agitazione costante. Ripetere l'operazione con il tamponi di lavaggio 1x fresco.</li>
		<li>Ripetere i passaggi da 4,2,1 a 4,2,5, ma utilizzare 4 gocce di AMP2 invece di AMP1 e incubare per 15 min a 40 gradi centigradi. Lavare i vetrini 2x per 2 min, entrambe le volte in tampone di lavaggio fresco.</li>
		<li>Ripetere i passaggi da 4,2,1 a 4,2,5, ma utilizzare 4 gocce di AMP3 invece di AMP1 e incubare per 30 min a 40 gradi centigradi. Lavare i vetrini 2x per 2 min, entrambe le volte in tampone di lavaggio fresco.</li>
		<li>Ripetere i passaggi da 4,2,1 a 4,2,5, ma utilizzare 4 gocce di AMP4 invece di AMP1 e incubare per 15 min a 40 gradi centigradi. Lavare i vetrini 2x per 2 min, entrambe le volte in tampone di lavaggio fresco.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ibridazione di AMP5 e AMP6 NOTA: questi passaggi non includono l'ibridazione nel forno, ma l'ibridazione a temperatura ambiente. AMP5 e AMP6 provengono dal kit acquistato (vedere la Tabella deiMateriali).<ol>
<li>Toccare e/o scorrere i vetrini per rimuovere il liquido in eccesso e inserirli nel rack diapositive. Aggiungere 4 gocce di AMP5 per coprire interamente ogni sezione.</li>
		<li>Coprire il vassoio con un coperchio e incubare per 30 min a temperatura ambiente.</li>
		<li>Una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e metterlo in un rack di scorrimento immerso in un piatto di colorazione riempito con 1x tampone di lavaggio.</li>
		<li>Lavare i vetrini in 1x lavaggio tampone per 2 min a temperatura ambiente con agitazione costante. Ripetere l'operazione con il tamponi di lavaggio 1x fresco.</li>
		<li>Ripetere i passaggi da 4,3,1 a 4,3,4, ma utilizzare 4 gocce di AMP6 invece di AMP5 e incubare per 15 min a temperatura ambiente. Lavare i vetrini 2x per 2 min, entrambe le volte in tampone di lavaggio fresco.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Rilevamento del segnale con 3,3'-diaminobenzidina
AVVISO: La diaminobenzidina (DAB) è tossica. Seguire le precauzioni appropriate e le linee guida di sicurezza durante lo smaltimento e la manipolazione di questa sostanza chimica.
<ol><li>Mescolare volumi uguali di DAB-A e DAB-B (vedere la tabella dei materiali) in un tubo di dimensioni appropriate erogando lo stesso numero di gocce di ogni soluzione. Fare 120 dollari di DAB substrato per sezione (2 gocce di ogni reagente/totale di 4). Mescolare bene per 3x-5x.</li>
	<li>Prendere ogni diapositiva, una alla volta, dal rack di scorrimento e toccare e/ o scorrere per rimuovere il liquido in eccesso prima di metterlo nel rack di scorrimento.</li>
	<li>Pipetta 120 dollari di DAB su ogni sezione di tessuto. Assicurarsi che le sezioni siano coperte e incubare per 10 min a temperatura ambiente.</li>
	<li>Smaltire il RESTANTe DAB secondo la normativa locale e inserire il vetrino in un rack scorrevole immerso in un piatto di colorazione riempito con acqua del rubinetto.</li>
</ol>6. Contrastare
<ol><li>Spostare il portasci su una teglia di colorazione contenente il 50% di soluzione di colorazione dell'ematossilina lasciate riposare per 30 s a temperatura ambiente. Si noti che le diapositive diventeranno viola.</li>
	<li>Trasferire immediatamente il rack scorrevole in una teglia di colorazione contenente acqua del rubinetto e lavare i vetrini 3x-5x spostando il rack su e giù.</li>
	<li>Continuare a ripetere la fase di lavaggio con acqua fresca del rubinetto fino a quando gli scivoli sono limpidi, mentre le sezioni rimangono viola.</li>
	<li>Sostituire l'acqua del rubinetto nella teglia di colorazione con 0,02% di acqua ammoniaca. Spostare il rack su e giù 2x-3x. Si noti che la sezione del tessuto dovrebbe diventare blu.</li>
	<li>Sostituire l'acqua di ammoniaca con acqua di rubinetto. Lavare i vetrini 3x–5x.</li>
</ol>7. Disidratazione
<ol><li>Spostare il portasci su una teglia di colorazione contenente il 70% di etanolo nella cappa del fumi e lasciarlo riposare per 2 min con agitazione occasionale.</li>
	<li>Spostare il portasci su una prima teglia con 100% di etanolo e lasciarlo riposare per 2 min con agitazione occasionale.</li>
	<li>Spostare il portasci su una seconda teglia con 100% di etanolo e lasciarlo riposare per 2 min con agitazione occasionale.</li>
	<li>Spostare il portadiapositive in un piatto di colorazione contenente lo xilene e lasciarlo riposare per 5 min con agitazione occasionale.</li>
</ol>8. Montaggio a scorrimento
<ol><li>Rimuovere i vetrini dal rack diapositive e disporli piatti con le sezioni rivolte verso l'alto nel cofano del fume.</li>
	<li>Montare una diapositiva alla volta aggiungendo 1 goccia di un supporto di montaggio basato su xilene ad ogni diapositiva e posizionando con attenzione una vestra da 24 mm x 50 mm sulla sezione. Evitare di intrappolare eventuali bolle d'aria.</li>
	<li>Asciugare all'aria i vetrini per 5 min.</li>
</ol>9. Valutazione dei campioni
<ol><li>Esaminare le sezioni di tessuto sotto un microscopio standard del campo luminoso con ingrandimento 20x-40x.</li>
</ol>

<ol><li>Lowy, D. R., Schiller, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reducing+HPV-associated+cancer+globally%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Prevention+Research.%28Philadelphia%2C+PA%29%22%5BJournal%5D)">Reducing HPV-associated cancer globally.</a> Cancer Prevention Research.(Philadelphia, PA). 5 (1), 18-23 (2012).</li>
<li>Laban, S., Hoffmann, T. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Papillomavirus+Immunity+in+Oropharyngeal+Cancer%3A+Time+to+Change+the+Game%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Human Papillomavirus Immunity in Oropharyngeal Cancer: Time to Change the Game?</a> Clinical Cancer Research. 24 (3), 505-507 (2018).</li>
<li>Wiest, T., Schwarz, E., Enders, C., Flechtenmacher, C., Bosch, F. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+intact+HPV16+E6%2FE7+gene+expression+in+head+and+neck+cancers+with+unaltered+p53+status+and+perturbed+pRb+cell+cycle+control%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Involvement of intact HPV16 E6/E7 gene expression in head and neck cancers with unaltered p53 status and perturbed pRb cell cycle control.</a> Oncogene. 21 (10), 1510-1517 (2002).</li>
<li>Ndiaye, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HPV+DNA%2C+E6%2FE7+mRNA%2C+and+p16INK4a+detection+in+head+and+neck+cancers%3A+a+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet+Oncology%22%5BJournal%5D)">HPV DNA, E6/E7 mRNA, and p16INK4a detection in head and neck cancers: a systematic review and meta-analysis.</a> The Lancet Oncology. 15 (12), 1319-1331 (2014).</li>
<li>Mills, A. M., Dirks, D. C., Poulter, M. D., Mills, S. E., Stoler, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HR-HPV+E6%2FE7+mRNA+In+Situ+Hybridization%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">HR-HPV E6/E7 mRNA In Situ Hybridization.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 41 (5), 607-615 (2017).</li>
<li>Mendez-Pena, J. E., Sadow, P. M., Nose, V., Hoang, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNA+chromogenic+in+situ+hybridization+assay+with+clinical+automated+platform+is+a+sensitive+method+in+detecting+high-risk+human+papillomavirus+in+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">RNA chromogenic in situ hybridization assay with clinical automated platform is a sensitive method in detecting high-risk human papillomavirus in squamous cell carcinoma.</a> Human Pathology. 63, 184-189 (2017).</li>
<li>Mirghani, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+HPV+driven+oropharyngeal+cancers%3A+Comparing+p16+based+algorithms+with+the+RNAscope+HPV-test%5BTitle%5D)+AND+%22Oral+Oncology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of HPV driven oropharyngeal cancers: Comparing p16 based algorithms with the RNAscope HPV-test.</a> Oral Oncology. 62, 101-108 (2016).</li>
<li>Lewis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Papillomavirus+Testing+in+Head+and+Neck+Carcinomas%3A+Guideline+From+the+College+of+American+Pathologists%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Pathology+%26+Laboratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human Papillomavirus Testing in Head and Neck Carcinomas: Guideline From the College of American Pathologists.</a> Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 142 (5), 559-597 (2018).</li>
<li>Mills, A. M., Coppock, J. D., Willis, B. C., Stoler, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HPV+E6%2FE7+mRNA+In+Situ+Hybridization+in+the+Diagnosis+of+Cervical+Low-grade+Squamous+Intraepithelial+Lesions+%28LSIL%29%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">HPV E6/E7 mRNA In Situ Hybridization in the Diagnosis of Cervical Low-grade Squamous Intraepithelial Lesions (LSIL).</a> The American Journal of Surgical Pathology. 42 (2), 192-200 (2018).</li>
<li>El-Naggar, A., Chan, J. K. C., Grandis, J. R., Takata, T., Slootweg, P. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEl-Naggar%2C+A+%22WHO+Classification+of+Head+and+Neck+Tumours%22">WHO Classification of Head and Neck Tumours</a>. , International Agency for Research on Cancer. Lyon, France. (2017).</li>
<li>Ang, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+papillomavirus+and+survival+of+patients+with+oropharyngeal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human papillomavirus and survival of patients with oropharyngeal cancer.</a> The New England Journal of Medicine. 363 (1), 24-35 (2010).</li>
<li>Badoual, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PD-1-expressing+tumor-infiltrating+T+cells+are+a+favorable+prognostic+biomarker+in+HPV-associated+head+and+neck+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">PD-1-expressing tumor-infiltrating T cells are a favorable prognostic biomarker in HPV-associated head and neck cancer.</a> Cancer Research. 73 (1), 128-138 (2013).</li>
<li>Outh-Gauer, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunotherapy+in+head+and+neck+cancers%3A+a+new+challenge+for+immunologists%2C+pathologists+and+clinicians%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Treatment+Reviews%22%5BJournal%5D)">Immunotherapy in head and neck cancers: a new challenge for immunologists, pathologists and clinicians.</a> Cancer Treatment Reviews. 65, 54-64 (2018).</li>
<li>Mirghani, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+of+HPV-driven+head+and+neck+cancer+with+a+single+test+in+routine+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis of HPV-driven head and neck cancer with a single test in routine clinical practice.</a> Modern Pathology. 28 (12), 1518-1527 (2015).</li>
<li>Bishop, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Transcriptionally+Active+High-risk+HPV+in+Patients+With+Head+and+Neck+Squamous+Cell+Carcinoma+as+Visualized+by+a+Novel+E6%2FE7+mRNA+In+Situ+Hybridization+Method%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">Detection of Transcriptionally Active High-risk HPV in Patients With Head and Neck Squamous Cell Carcinoma as Visualized by a Novel E6/E7 mRNA In Situ Hybridization Method.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 36 (12), 1874-1882 (2012).</li>
<li>Hsieh, M. -S., Lee, Y. -H., Jin, Y. -T., Huang, W. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Strong+SOX10+expression+in+human+papillomavirus-related+multiphenotypic+sinonasal+carcinoma%3A+report+of+6+new+cases+validated+by+high-risk+human+papillomavirus+mRNA+in+situ+hybridization+test%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Strong SOX10 expression in human papillomavirus-related multiphenotypic sinonasal carcinoma: report of 6 new cases validated by high-risk human papillomavirus mRNA in situ hybridization test.</a> Human Pathology. 82, 264-272 (2018).</li>
<li>Shi, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+Prognostic+Value+of+HPV16+E6+mRNA+Compared+With+In+Situ+Hybridization+for+Human+Oropharyngeal+Squamous+Carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Comparative Prognostic Value of HPV16 E6 mRNA Compared With In Situ Hybridization for Human Oropharyngeal Squamous Carcinoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 27 (36), 6213-6221 (2009).</li>
<li>Kuo, K. -T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biomarkers+of+human+papillomavirus+infection+in+tonsillar+squamous+cell+carcinoma%E2%80%94molecular+basis+and+predicting+favorable+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">The biomarkers of human papillomavirus infection in tonsillar squamous cell carcinoma—molecular basis and predicting favorable outcome.</a> Modern Pathology. 21 (4), 376-386 (2008).</li>
<li>Augustin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+efficacy+of+the+four+tests+%28p16+immunochemistry%2C+PCR%2C+DNA+and+RNA+In+situ+Hybridization%29+to+evaluate+a+Human+Papillomavirus+infection+in+head+and+neck+cancers%3A+a+cohort+of+348+French+squamous+cell+carcinomas%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Pathology%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the efficacy of the four tests (p16 immunochemistry, PCR, DNA and RNA In situ Hybridization) to evaluate a Human Papillomavirus infection in head and neck cancers: a cohort of 348 French squamous cell carcinomas.</a> Human Pathology. , (2018).</li>
<li>Jung, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+and+clinical+relevance+of+transcriptionally+active+human+papillomavirus+%28HPV%29+infection+in+oropharynx+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Biological and clinical relevance of transcriptionally active human papillomavirus (HPV) infection in oropharynx squamous cell carcinoma.</a> International Journal of Cancer. 126 (8), 1882-1894 (2009).</li>
<li>Augustin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HPV+RNA+CISH+score+identifies+two+prognostic+groups+in+a+p16+positive+oropharyngeal+squamous+cell+carcinoma+population%5BTitle%5D)+AND+%22Modern+Pathology%22%5BJournal%5D)">HPV RNA CISH score identifies two prognostic groups in a p16 positive oropharyngeal squamous cell carcinoma population.</a> Modern Pathology. , (2018).</li>
<li>Evans, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HPV+E6%2FE7+RNA+In+Situ+Hybridization+Signal+Patterns+as+Biomarkers+of+Three-Tier+Cervical+Intraepithelial+Neoplasia+Grade%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">HPV E6/E7 RNA In Situ Hybridization Signal Patterns as Biomarkers of Three-Tier Cervical Intraepithelial Neoplasia Grade.</a> PLOS ONE. 9 (3), e91142(2014).</li>
<li>Dreyer, J. H., Hauck, F., Oliveira-Silva, M., Barros, M. H. M., Niedobitek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+HPV+infection+in+head+and+neck+squamous+cell+carcinoma%3A+a+practical+proposal%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv%22%5BJournal%5D)">Detection of HPV infection in head and neck squamous cell carcinoma: a practical proposal.</a> Virchows Archiv. 462 (4), 381-389 (2013).</li>
<li>Bingham, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RNAscope+in+situ+hybridization+confirms+mRNA+integrity+in+formalin-fixed%2C+paraffin-embedded+cancer+tissue+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Oncotarget%22%5BJournal%5D)">RNAscope in situ hybridization confirms mRNA integrity in formalin-fixed, paraffin-embedded cancer tissue samples.</a> Oncotarget. , (2017).</li>
</ol>

CB: consigli di amministrazione, seminari: MSD, BMS, Astrazeneca, Roche

HPV RNA CISH eseguito con un kit acquistato è un potente strumento per il rilevamento di trascrizioni virali e indica l'infezione da HPV attivo. Eseguito manualmente, i passaggi del protocollo sono nel complesso facili da seguire e il kit acquistato è conveniente. Questa tecnica permette la colorazione di 19 campioni istologici più una diapositiva di controllo in una sola volta, e il saggio dura circa 8 h. È fondamentale non lasciare che i campioni si asciughino tra i passaggi, salvo diversamente specificato. La condizio...

HPV RNA CISH è un potente strumento per il rilevamento dell'infezione da HPV attivo, che può rivelarsi cruciale nelle lesioni benigne o maligne in varie posizioni come l'oropharynx o la cervice uterina. La rilevazione di un'infezione da HPV attiva può supportare la diagnosi di una lesione indotta da HPV e, di seguito, influenzarne il trattamento e la prognosi.
L'HPV è l'infezione trasmessa sessualmente più frequente e oltre 100 genotipi virali sono stati descritti1. Schematicamente, i genotipi a basso rischio come i genotipi 6 e 11 sono noti per indurre verruche genitali, papillomatosi respiratoria ricorrente e altre lesioni benigne, mentre i genotipi ad alto rischio come i genotipi 16 e 18 sono responsabili della maggior parte dei tumori cervicali e tumori anali e svolgono un ruolo nell'oncogenesi HNSCC in proporzioni variabili, come rappresentato dai dati epidemiologici regionali2.
Sono disponibili diversi strumenti per il rilevamento dell'infezione da HPV. Come un'infezione da HPV ad alto rischio porta all'espressione di proteine oncogeniche virali E6 ed E73, la rilevazione delle trascrizioni E6 ed E7 è ampiamente vista come il gold standard per l'identificazione dell'infezione da HPV attiva4. HPV RNA CISH può essere eseguito su campioni di FFPE che sono abbastanza facilmente ottenuti da pazienti affetti da varie malattie correlate all'HPV. Le sue prestazioni sono state valutate nella neoplasia intraelicale squamosa nella cervice, nell'ano e nella vagina, e nel carcinoma a cellule squamose invasive nella cervice, nell'ano e nel tratto aerodigestivo superiore5: raggiunge una sensibilità di oltre il 98% tra i casi positivi alla reazione a catena della polimerasi del DNA HPV (PCR). Questo è leggermente meglio di p16 immunostaining (93%) e l'ibridazione situ del DNA In situ (DNA ISH: 97%), che sono più comunemente utilizzati. In un'altra coorte di 57 pazienti con carcinoma a cellule squamose (SCC) derivante dalla regione della testa e del collo, dalla regione genitale, dalla pelle e dal tratto urinario, rispetto all'HPV DNA ISH, hPV RNA CISH ha ottenuto una migliore sensibilità (100% contro 88%) specificità (87% contro 74%)6.
L'immunostaining P16 è un marcatore indiretto che riflette l'interruzione del ciclo cellulare che può essere causata (ma non esclusivamente) dall'infezione da HPV4,7. Questo test economico possiede una buona sensibilità e un valore predittivo negativo ed è raccomandato come marcatore surrogato di infezione da HPV ad alto rischio nel cancro dell'orofarye (OPC) dal College of American Pathologists (CAP) e dall'Unione per l'Internazionale Controllo del cancro (UICC)8.
Anche se questo documento si concentra esclusivamente sulla rilevazione dell'HPV in HNSCC, HPV RNA CISH è clinicamente rilevante in varie altre condizioni che coinvolgono l'infezione da HPV. Per esempio, questa tecnica può migliorare l'accuratezza della diagnosi di lesioni intrapetali di basso grado della cervice (LSIL, precedentemente nota come neoplasia intraelilicale cervicale, grado 1 [CIN1]) per casi morfologicamente ambigui9. Per quanto riguarda l'Oropharyngeal SCC, HPV RNA CISH consente l'identificazione di SCC correlati all'HPV, etichettato come distinto dalla SCC orofaziale non correlata all'HPV nella recente ottava edizione della classificazione TNM del cancro alla testa e al collo (dell'Unione per il cancro internazionale Controllo [UICC])10. Dal momento che la SCC correlata all'HPV presenta una prognosi migliore con una maggiore sopravvivenza e una maggiore sensibilità alla radioterapia e alla chemioterapia rispetto all'HPV11,12,13, il rilevamento dell'infezione da HPV può avere un impatto gestione del paziente14,15. Inoltre, HPV RNA CISH può essere utilizzato per la diagnosi di carcinoma sinonasal multifenotico correlato all'HPV con un segnale superiore a HPV DNA CISH16. Diverse analisi multivariate suggeriscono che il rilevamento delle trascrizioni E6 ed E7 è correlato con una prognosi migliore in SCC oroferesia complessivamente7,15,17,18 e nel sottogruppo di p16-positivo orofaleale SCC19,20.
Qui presentiamo il protocollo per il manuale HPV RNA CISH eseguito su vetrini FFPE con un kit ottenuto dal produttore.

<table><tbody><tr><td>Soluzione di ematossilina, Gill No. 1</td><td>Merck</td><td>GHS132</td><td></td></tr><tr><td>HybEZ Oven (110v)</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>321710</td><td></td></tr><tr><td>Rack per vetrini HybEZ</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td></td><td></td>300104</tr><tr><td>ImmEdge Penna barriera idrofobica</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td></td><td></td>310018</tr><tr><td>RNAscope 2.5 HD Reagenti di rilevamento-BROWN</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>322310</td><td>Questo kit include i reagenti di amplificazione AMP1, AMP2, AMP3, AMP4, AMP5 e AMP6 e i reagenti di rilevamento DAB-A e DAB-B</td></tr><tr><td>RNAscope 3-Plex Negative Control Probe</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>320871</td><td>DAPB</td></tr><tr><td>RNAscope 3-Plex Sonda di controllo positivo</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>320861</td><td></td></tr><tr><td>PPIB RNAscope H202 & Reagente Protease Plus</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>322330</td><td>Perossido di idrogeno x2 e proteasi Plus x 1</td></tr><tr><td>Sonda RNAscope - HPV16/18</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td></td><td></td>311121</tr><tr><td>RNAscope Reagenti per il recupero del bersaglio</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>322000</td><td></td></tr><tr><td>Reagenti tampone per lavaggio RNAscope</td><td>Advanced Cell Diagnostics Inc.</td><td>310091</td><td>Tampone di lavaggio 50X x4</td></tr></tbody></table>

chromogenic in situ hybridization è uno strumento per la diagnosi del cancro della testa e del collo correlate all'hpv

Chromogenic In Situ Hybridization as a Tool for HPV-Related Head and Neck Cancer Diagnosis

L'infezione da papillomavirus umano (HPV) è un importante fattore di rischio per un sottotipo di carcinoma a cellule squamose orofangeali (OPSCC), che tende ad essere associato a un risultato migliore rispetto all'OPSCC relativo all'alcol e al tabacco. L'ibridazione cromogenica in situ (CISH) dell'RNA virale dell'HPV potrebbe consentire la valutazione semiquantitativa delle trascrizioni virali delle proteine oncogeniche E6 ed E7 e una visualizzazione in situ con una buona risoluzione spaziale. Questa tecnica consente la diagnosi di un'infezione attiva con la visualizzazione della trascrizione HPV nelle cellule tumorali infettate da HPV. Un vantaggio di questa tecnica è l'evitare la contaminazione da cellule non neoplastiche infettate da HPV adiacenti al tumore. Nel complesso, le sue buone prestazioni diagnostiche sono considerate il gold standard per l'identificazione attiva dell'infezione da HPV. Poiché l'interazione delle proteine virali E6 ed E7 con le proteine cellulari pRb e p53 è obbligatoria per la trasformazione cellulare, HPV RNA CISH è funzionalmente rilevante e riflette acutamente l'infezione attiva oncogenica hPV. Questa tecnica è clinicamente rilevante anche dal momento che i livelli di trascrizione "bassa" o "alta" di HPV hanno aiutato l'identificazione di due gruppi di prognosi tra i pazienti affetti da cancro alla testa e al collo "bassi" o "alti". Qui presentiamo il protocollo per i vetrini manuali HPV RNA CISH eseguiti su diapositive in paraffina (FFPE) fissate in formalina con un kit ottenuto dal produttore. Invece della rivelazione cromogenica, l'ibridazione dell'RNA in situ può essere eseguita anche con rivelazione fluorescente (RNA FISH). Può anche essere combinato con l'immunostaining convenzionale.

Come descritto qui, nel cancro delle cellule squamose della testa e del collo, un caso può essere considerato positivo in presenza di colorazione punctiforme marrone nel citoplasma o nei nuclei delle cellule tumorali. Nella maggior parte degli studi, il segnale è considerato come "positivo" o "non rilevato"14. Sono stati riportati metodi di semiquantificazione del segnale, ma mancano di standardizzazione tra le squadre. Ad esempio, in alcuni studi, i segnali sono stati segnati come 1-3 punti per c...

L'ibridazione dell'RNA cromogenica in situ del papillomavirus umano (HPV) è considerata uno degli standard d'oro per il rilevamento dell'infezione da papillomavirus umano attivo all'interno dei tumori. Permette la visualizzazione dell'espressione mRNA HPV E6-E7 con la localizzazione e la valutazione semiquantitativa del suo segnale.

Chromogenic In Situ Hybridization è uno strumento per la diagnosi del cancro della testa e del collo correlate all'HPV

Human papillomavirus (HPV) infection is a major risk factor for a subtype of oropharyngeal squamous cell carcinoma (OPSCC), which tends to be associated ...

HPV RNA CISH consente il rilevamento di un'infezione attiva del papilloma virus umano. Poiché l'ibridazione in situ prende di mira l'RNA HPV, questa tecnica consente la visualizzazione di una trascrizione attiva del virus. Ha una risoluzione spaziale precisa e buone prestazioni diagnostiche.Il rilevamento dell'HPV può supportare la diagnosi di diverse lesioni correlate all'HPV, come il carcinoma a cellule squamose orofaringee o la neoplasia cervicale. Può anche avere un'influenza sulla prognosi. Dopo aver preparato tamponi e reagenti contro-colorazione, preparare un reagente di recupero del bersaglio x in un grande becher aggiungendo 70 millilitri di reagente di recupero bersaglio 10x a 630 millilitri di acqua distillata.Posizionare il becher su una piastra riscaldante con agitatore magnetico e coprirlo con un foglio di alluminio. Far bollire il suo contenuto a 100 gradi Celsius per 10-15 minuti assicurandosi di non bollirlo per più di 30 minuti. Per bloccare l'attività della perossidasi su diapositive con sezioni tissutali precedentemente deparaffinizzate e posizionate nel rack scorrevole, aggiungere da quattro a sei gocce, quanto basta per coprire il campione, di perossido di idrogeno ad ogni diapositiva e incubarle per 10 minuti a temperatura ambiente.Lavare gli scivoli due volte per due minuti in acqua distillata a temperatura ambiente. Per rompere i limiti del tessuto dell'RNA nelle sezioni del tessuto dell'RNA, rimuovere prima il foglio di alluminio da quello bollente x TRR usando un artiglio e smettere di mescolare. Immergere il porta scorrevole lentamente e con molta attenzione.Coprire di nuovo il becher con il foglio di alluminio e incubare per 15 minuti. Utilizzare l'artiglio per trasferire immediatamente il portapacchi caldo in un bagno d'acqua distillato e lavarlo per due minuti. Lavare i vetrini quindi in etanolo fresco al 100% per due minuti e lasciarli asciugare a temperatura ambiente per due minuti.Quindi, utilizzare una penna barriera idrofobica per disegnare una barriera intorno a ciascun campione e lasciarla asciugare per almeno cinque minuti. Per la digestione proteasi, posizionare le diapositive nel vassoio controllato dall'umidità e aggiungere circa quattro gocce di Protease Plus per campione. Coprire il vassoio con un coperchio e inserirlo nel forno di ibridazione per 30 minuti a 40 gradi Celsius.Rimuovere il vassoio dal forno e rimuovere il portascivole. Lavorare una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e posizionare lo scivolo nel rack dello scivolo immerso in un piatto di colorazione riempito con acqua distillata. Lavare gli scivoli due volte per due minuti in acqua distillata a temperatura ambiente con agitazione costante.Per avviare l'ibridazione, toccare e scorrere le diapositive per rimuovere il liquido in eccesso e posizionarle di nuovo nel rack scorrevole. Rimuovere la sonda HPV preriscaldata dal forno e aggiungere circa quattro gocce per coprire interamente ogni sezione. Coprire il vassoio con il coperchio e inserirlo nel forno per due ore a 40 gradi Celsius.Dopo aver completato l'incubazione, rimuovere il vassoio dal forno e rimuovere la griglia. Una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e posizionare lo scivolo nel rack di scorrimento immerso in un piatto di colorazione riempito con un tampone di lavaggio x, lavare le diapositive per due minuti a temperatura ambiente con agitazione costante e ripetere con un tampone di lavaggio fresco di una x. Toccare e scorrere per rimuovere il liquido in eccesso dalle diapositive e posizionarlo nuovamente nel rack scorrevole.Aggiungere circa quattro gocce di AMP1 a temperatura ambiente per sezione per coprire interamente ogni sezione. Coprire il vassoio con il coperchio e inserirlo nel forno per 30 minuti a 40 gradi Celsius. Dopo aver rimosso il vassoio dal forno, rimuovere la griglia.Lavorare una diapositiva alla volta, rimuovere rapidamente il liquido in eccesso e posizionare lo scivolo nel rack di scorrimento immerso in una piastra di colorazione riempita con un tampone di lavaggio x, lavarsi per due minuti a temperatura ambiente con agitazione costante e ripetere con un tampone di lavaggio fresco di una x. Erogare lo stesso numero di gocce di ogni soluzione DAB-A e DAB-B in un tubo di dimensioni appropriato per realizzare circa 120 microlitri di substrato DAB per sezione e vortice. Prendere ogni diapositiva, una alla volta, dal rack scorrevole, toccare e scorrere per rimuovere il liquido in eccesso e posizionarlo di nuovo nel rack scorrevole.Pipetta circa 120 microlitri di miscela DAB su ogni sezione tissutale, assicurandosi che le sezioni siano coperte. Incubare per 10 minuti a temperatura ambiente e procedere con la controsottenzione. Posizionare una goccia di mezzo di montaggio per la lamelle di vetro, quindi posizionare le doghe sugli scivoli e lasciarle asciugare all'aria.Dopo alcune ore, procedere con la valutazione utilizzando un microscopio ottico come descritto nel manoscritto. Come descritto qui nel carcinoma a cellule squamose della testa e del collo, la presenza di colorazione punctiforme marrone nel citoplasma o nei nuclei delle cellule tumorali ha definito un caso positivo. I risultati sono stati divisi in due punteggi, RNA CISH punteggio alto e basso come osservato con un obiettivo 20x.La colorazione del punteggio CISH dell'RNA è considerata bassa se osservata in meno del 50% delle cellule tumorali e copre meno dell'80% della superficie cellulare. D'altra parte, il punteggio CISH dell'RNA è alto se osservato in oltre il 50% delle cellule tumorali macchiate o con la superficie di colorazione superiore all'80% in oltre il 30% delle cellule tumorali. Non si dovrebbe mai lasciare asciugare le diapositive per l'ibridazione.Non dimenticare di preriscaldare la sonda. Per ogni campione, eseguire un controllo positivo e negativo al fine di valutare la qualità dell'RNA.

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Genetica

Chromosomics: Rilevamento delle alterazioni numeriche e strutturali in tutti i 24 cromosomi umani simultaneamente utilizzando un nuovo metodo di analisi FISH OctoChrome

Un metodo per l'analisi quantitativa di temporizzazione cromosoma replica è descritto. Il metodo utilizza incorporazione di BrdU in combinazione con...

Cromosoma Timing Replica combinazione con fluorescente<em&gt; In situ</em&gt; Ibridazione

In questo video, le cellule infettate da virioni MCPyV sono state sottoposte a reazione a catena di ibridazione in situ per rilevare genomi specifici di MCPyV. Inoltre, la tecnica DNA-HCR è stata combinata con la FISH per visualizzare il DNA MCPyV nelle cellule della pelle umana infetta.

HCR-DNA FISH: Una tecnica di ibridazione in situ a fluorescenza per rilevare il DNA virale nelle cellule infette

Questo video mostra le fasi coinvolte nel pretrattamento di campioni di tessuto FFPE per l'ibridazione cromogenica in situ dell'RNA. Il processo di pretrattamento aiuta a mantenere l'integrità dell'acido nucleico all'interno delle cellule e la morfologia complessiva dei tessuti.

Pretrattamento tissutale FFPE per RNA CISH: una procedura per elaborare sezioni di tessuto incluse in paraffina fissate in formalina per l'ibridazione in situ cromogenica a RNA

Questo video descrive una strategia di ibridazione sequenziale che prevede l'ibridazione di sonde di mRNA su mRNA target specifici. Dopo l'ibridazione della sonda, viene eseguita l'amplificazione del segnale per migliorare la risoluzione attraverso la riduzione del rapporto segnale/rumore durante l'RNA-CISH dei campioni istologici.

Ibridazione con sonda e amplificazione del segnale nell'ibridazione in situ dell'RNA: una tecnica per rilevare specifiche sequenze di RNA in sezioni di tessuto

Questo video presenta il protocollo per la rilevazione del segnale durante l'ibridazione in situ cromogenica dell'RNA. Questa tecnica può essere utilizzata per diagnosticare visivamente un'infezione oncogena attiva in un campione di tessuto intatto.

Rilevamento del segnale RNA CISH: una tecnica per rilevare i segnali cromogenici durante l'ibridazione in situ dell'RNA in campioni di tessuto intatto

Abbiamo stabilito un protocollo di ibridazione fluorescente in situ per la rilevazione di un genoma del virus DNA persistente all'interno di sezioni tissutali di modelli animali. Questo protocollo permette studiando processo di infezione da codetection del genoma virale, i suoi prodotti di RNA e proteine ​​virali o cellulari all'interno delle cellule singole.

La rilevazione del genoma e Trascrizioni di un virus DNA persistente in tessuti neuronali da fluorescente In situ Ibridazione In combinazione con Immunostaining

La presenza di HPV ad alto rischio in testa e del collo tessuto tumorale è associata a esiti favorevoli. L'RNA recentemente sviluppato nella tecnica di ibridazione in situ chiamata RNAscope permette la visualizzazione diretta di HPV E6/E7 mRNA in sezioni di tessuto FFPE.

RNAscope per<em&gt; In situ</em&gt; Rilevamento di trascrizionale attivo Papillomavirus Umano in Cervico Carcinoma a cellule squamose

L'immunohistochemistry di fluorescenza multiparametrica può essere utilizzato per valutare il numero, la distribuzione relativa e la localizzazione delle popolazioni di cellule immunitarie nel microambiente del tumore. Questo manoscritto descrive l'uso di questa tecnica per analizzare le sottopopolazioni delle cellule T nel cancro orofaringeo.

Immunohistochemia di fluorescenza a quattro colori delle sottopopolazioni delle cellule T in campioni di carcinoma a cellule squamose orofaringe umane incorporate in paraffina

Descriviamo un protocollo che utilizza la fluorescenza nell'ibridazione situ (FISH) per visualizzare più RNA herpesvirali all'interno di cellule umane lytically infette, sia in sospensione che aderenti. Questo protocollo include la quantificazione della fluorescenza producendo un rapporto nucleocitoplasmatica e può essere esteso per la visualizzazione simultanea di proteine ospite e virali con immunofluorescenza (IF).

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) e Immunofluorescence (IF) di prodotti genici specifici nelle cellule infette da KSHV

Scopri la tecnica CISH per rilevare infezioni attive da HPV nei tumori della testa e del collo. Questo metodo visualizza l'mRNA E6-E7 con alta sensibilità e specificità, supportando la diagnosi e la gestione del paziente.

Chromogenic In Situ Hybridization è uno strumento per la diagnosi del cancro della testa e del collo correlate all'HPV

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