Name: Microelettrodi in fibra di carbonio modificati con nanoparticle doro per una migliore rilevazione neurochimica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-05-13T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: Scopri come modificare microelettrodi in fibra di carbonio con nanoparticelle d'oro per migliorare la rilevazione neurochimica. Questo metodo rapido e riproducibile aumenta sensibilità e risoluzione temporale per studi in vivo.

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Ringraziamo l'American University, il Faculty Research Support Grant, la NASA DC Space Grant, e la NSF-MRI-1625977.

1. Costruzione di microelettrodi in fibra di carbonio
<ol><li>
Preparazione delle fibre di carbonio
	<ol>
<li>Per creare microelettrodi in fibra di carbonio, separare prima le fibre di carbonio (fibra di carbonio,7 mm di diametro) una ad una con mani, guanti e spatole.</li>
		<li>Tirare o strappare una fibra dal filo attorcigliato.</li>
		<li>Aspirare una fibra di carbonio isolata in un capillare di vetro (vetro capillare a canna singola senza microfilamento, diametro esterno di 1,2 mm, diametro interno di 0,68 mm).</li>
		<li>Creare un supporto per elettrodi tagliando un pezzo di cartone di circa 10 cm di lunghezza per 25 cm di larghezza.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Tirare gli elettrodi utilizzando un tirante capillare verticale.</li>
	<li>Aprire la porta scorrevole dell'etraina capillare verticale.</li>
	<li>Allenta e rimuovi l'asta metallica, ruotando il trapano-chuck in senso antiorario con spazio sufficiente per inserire il capillare di vetro.</li>
	<li>Inserire il vetro capillare nel supporto dell'elettrodo. Sollevare manualmente il capillare di vetro fino alla parte superiore del capillare verticale.</li>
	<li>Stringere il vetro capillare con i trapano-chucks in senso orario senza rompere o distruggere i capillari di vetro.</li>
	<li>Regolare le impostazioni di Heater 1, Heater 2 e Magnete ai livelli suggeriti dal produttore per tirare i capillari di vetro a un cono fine per i materiali elettrodi.</li>
	<li>Premere il pulsante di avvio rosso per riscaldare la bobina a bobina per estrarre gli elettrodi attraverso la pressione, la gravità e il riscaldamento.</li>
	<li>Lasciare raffreddare la bobina rincantale dal suo stato caldo rosso. Tagliare la fibra di carbonio con le forbici che collegano i due elettrodi tirati dall'alto verso il basso. Utilizzare il metodo drill-chuck per rimuovere il capillare di vetro dall'estrattore capillare verticale ruotando in senso antiorario.</li>
</ol>2. Preparazione del microelettrodo in fibra di carbonio
<ol><li>Sotto uno stereoscopio o un microscopio, tagliare la fibra di carbonio sporgente dalla superficie del vetro capillare con forbici chirurgiche o una lama affilata del rasoio a circa 100 –150 m di lunghezza.</li>
	<li>Preparare una soluzione di resina epossidica mescolando 10 g di resina epossidica con 0,2 mL di indurimento in una fiala da 25 mL utilizzando un tampone di cotone.</li>
	<li>Immergere solo la punta di ogni elettrodo nella soluzione epossidica e indurimento per circa 15 s.</li>
	<li>Immergere la parte superiore di cui sopra del microelettrodo in fibra di carbonio in acetone per circa 3 s per lavare via qualsiasi epossidica in eccesso dalla canna del microelettrodo in fibra di carbonio.</li>
</ol>3. Elettrodeposizione
<ol><li>Posizionare l'elettrodo funzionante (microelettrodo in fibra di carbonio) nella soluzione di 0,5 mM HAuCl4 in aggiunta all'elettrodo di riferimento, cloruro argento-argento (Ag/AgCl) utilizzando il micromanipolatore.</li>
	<li>Collegare l'elettrodo di lavoro e l'elettrodo di riferimento al potenziatore e al headstage.</li>
	<li>Aprire il software HDCV UNC. Modificare le impostazioni del software per applicare la forma d'onda. Inserite la seguente forma d'onda nelle impostazioni del computer: scansione da 0,2 V a 1,0 V in soluzione KCl da 0,1 M contenente 0,5 mM HAuCl4 ad una velocità di scansione di 50 mV/s per 10 cicli. Premere la freccia verde per applicare la forma d'onda. Quindi, premere il pulsante di avvio per iniziare la registrazione delle misurazioni.</li>
</ol>4. Microscopia elettronica a scansione
NOTA: i microelettrodi in fibra di carbonio modificati in fibra di carbonio sono stati modificati utilizzando lo strumento di microscopia elettronica a scansione (SEM). Caricare il campione su nastro conduttivo nero e seguendo le istruzioni fornite dal produttore.
<ol><li>
Accensione dello strumento
	<ol>
<li>Ruotare il tasto su START e rilasciare.</li>
		<li>Aprire il software InTouchScope facendo doppio clic su di esso.</li>
		<li>Rilasciare il tasto. Dovrebbe atterrare sul simbolo I da solo.</li>
		<li>Attendere che il pulsante EVAC smetta di lampeggiare.</li>
		<li>Quando il pulsante EVAC smette di lampeggiare, premere il pulsante VENT.</li>
		<li>Attendere che il pulsante VENT smetta di lampeggiare.</li>
		<li>Assicurarsi che la distanza di lavoro (WD) sia di 20 mm – 30 mm.</li>
		<li>In attesa, preparare i campioni.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Scansione
	<ol>
<li>Quando il pulsante VENT smette di lampeggiare, caricare i campioni nello strumento.</li>
		<li>Assicurarsi che la parte curva del portacampione sia rivolta verso lo strumento durante il caricamento dei campioni.</li>
		<li>Premere il pulsante EVAC una volta caricati i campioni.</li>
		<li>Regolare la distanza di lavoro a 10 mm.</li>
		<li>Quando il pulsante EVAC smette di lampeggiare, accendere il computer.</li>
		<li>Fare clic sul software In Touch Scope, che si trova sul desktop. Ci sono due software In Touch Scope, fare clic su quello senza il cerchio verde e giallo.</li>
		<li>Una volta aperto il software, fare clic su OBSERVE (in alto a destra dello schermo), per accendere la trave. Assicurarsi che il pulsante EVAC abbia smesso di lampeggiare prima di fare clic su OBSERVE.</li>
		<li>Iniziare ad analizzare i campioni.</li>
		<li>Assicurarsi che le impostazioni di tensione, distanza di lavoro (WD) e corrente sonda (PC) siano accettabili.</li>
		<li>Eseguire lo zoom indietro (50X) per ottenere un'impostazione più alta e ingrandire per ottenere un'impostazione inferiore.</li>
		<li>Impostare la distanza di lavoro a 10 mm.</li>
		<li>Prima di scattare una foto dei campioni, assicurarsi che l'immagine verrà salvata nella cartella di destinazione desiderata.</li>
		<li>Per scegliere la cartella desiderata, fare clic sulle impostazioni (in alto a sinistra dello schermo).</li>
		<li>Esportare le immagini dal computer tramite un'unità flash.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Spegnere
	<ol>
<li>Fare clic su OBSERVE per disattivare la trave.</li>
		<li>Premere il tasto VENT e attendere che smetta di lampeggiare.</li>
		<li>In attesa che il pulsante VENT smetta di lampeggiare, regolare la distanza di lavoro a 20 mm – 30 mm.</li>
		<li>Quando il pulsante VENT smette di lampeggiare, scaricare i campioni dallo strumento.</li>
		<li>Premere il pulsante EVAC e attendere che smetta di lampeggiare.</li>
		<li>Quando il pulsante EVAC smette di lampeggiare, uscire dal software e spegnere il computer.</li>
		<li>Girare il tasto sul simbolo O per spegnere completamente lo strumento.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. Test di voltammetria ciclica a scansione rapida
<ol><li>Collegare il microelettrodo in fibra di carbonio al potentiostat e alla fase di headstage insieme all'elettrodo di riferimento Ag/AgCl.</li>
	<li>Utilizzando il micromanipolatore, abbassare il microelettrodo in fibra di carbonio nel pozzo della cella di flusso regolando manualmente le manopole di misura X, Y e .</li>
	<li>Preparare la soluzione buffer in acqua DI (131,5 mM NaCl, 3,25 mM KCl, 1,2 mM CaCl2, 1,25 mM NaH2PO4, 1,2 mM MgCl2e 2,0 mM Na2 SO4 con il pH regolato a 7.4).</li>
	<li>Riempire la cella di flusso con buffer salina con buffer salofo fosfato (PBS) buffer (pH - 7,4).</li>
	<li>Utilizzando una siringa buffer da 60 mL riempita, iniettare il buffer PBS nella cella di flusso a circa 1 mL/min.</li>
	<li>Posizionare l'elettrodo nella cella di flusso e applicare la forma d'onda premendo il pulsante verde. Osservare l'oscilloscopio e tagliare l'elettrodo o regolare il guadagno per evitare il sovraccarico. Lasciare per circa 10 min di equilibratione tra ogni corsa elettrodo.</li>
	<li>Impostare la forma d'onda predefinita sulla forma d'onda della dopamina. Scansione da – da 0,4 V a 1,3 V a 10 Hz e 400 V/s.</li>
	<li>Preparare la soluzione stock di 10 mM di dopamina, serotonina, noradrenalina, e altri in acido perclorico. Diluire le sostanze neurochimiche alla concentrazione finale di 1 M nel buffer con il pipettaggio di 1 M della soluzione di stock di dopamina in 10 mL di buffer PBS utilizzando una pipetta.</li>
	<li>Per iniziare le misurazioni, premere il pulsante di registrazione. Dopo 10 s, iniettare 0,2 mL di 1 dopamina M nella cella di flusso o qualsiasi altra concentrazione di neurotrasmettitore. Regolare la concentrazione, il tasso di scansione, la forma d'onda (potenziale di mantenimento o potenziale di commutazione) di conseguenza. Impostare il tempo di esecuzione totale per 30 s.</li>
	<li>Analizzare la corsa utilizzando il software di analisi HDCV. Modificare i parametri in base alle esigenze.</li>
	<li>Al termine dell'esperimento, pulire la cella di flusso iniettando 3 mL di acqua e quindi aria nelle porte tampone e iniezione della cella di flusso tre volte ciascuna.</li>
	<li>Spegnere la forma d'onda e lo strumento.</li>
</ol>

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</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

In questo studio, dimostriamo un nuovo metodo per costruire microelettrodi in fibra di carbonio modificati oro-nanoparticle per il rilevamento di neurotrasmettitori come la dopamina utilizzando la voltamemetria ciclica a scansione rapida. Il metodo è un approccio efficiente, verde e relativamente poco costoso per migliorare la sensibilità del rilevamento di biomolecole. Lo spessore dell'oro depositato sulla superficie della fibra di carbonio può essere controllato dal momento dell'elettrodeposizione e dalla concentrazion...

Microelectrodi in fibra di carbonio (CFME)1 sono meglio utilizzati come biosensori per rilevare l'ossidazione di diversi neurotrasmettitori cruciali2, tra cui dopamina3, noradrenalina4, serotonina5, adenosina6, istamina7, e altri8. La biocompatibilità e le dimensioni delle fibre di carbonio le rendono ottimali per l'impianto in quanto vi è un danno tissutale mitigato rispetto agli elettrodi standard più grandi. 9 I CFME sono noti per possedere proprietà elettrochimiche utili e sono in grado di effettuare misurazioni rapide se utilizzate con tecniche elettrochimiche veloci, più comunemente tensionemiche ciclica a scansione rapida (FSCV)10,11. FSCV è una tecnica che scansiona rapidamente il potenziale applicato e fornisce un voltammogramma ciclico specifico per analiti specifici12,13. La grande corrente di ricarica prodotta dalla scansione veloce è stabile sulle fibre di carbonio e può essere sottratta in background per produrre voltammogrammi ciclici specifici.
Grazie alla sua elettrochimica ottimale e importanza neurobiologica, dopamina è stato ampiamente studiato. La dopamina catecholamina è un messaggero chimico essenziale che svolge un ruolo fondamentale nel controllo del movimento, memoria, cognizione, ed emozione all'interno del sistema nervoso. Un surplus o carenza di dopamina può causare numerose interferenze neurologiche e psicologiche; tra questi ci sono il morbo di Parkinson, la schizofrenia e il comportamento di dipendenza. Oggi, Il morbo di Parkinson continua ad essere un disturbo prevalente a causa della degenerazione dei neuroni midbrain coinvolti nella sintesi della dopamina14. Sintomi di malattia di Parkinson includono tremore, lentezza del movimento, rigidità, e problemi nel mantenimento dell'equilibrio. D'altra parte, stimolanti come la cocaina15 e l'anfetamina16,17 promuovono l'overflow della dopamina. L'abuso di droghe alla fine sostituisce il flusso regolare della dopamina e condiziona il cervello per richiedere un surplus di dopamina, che alla fine porta a comportamenti di dipendenza.
Negli ultimi anni, c'è stata un'enfasi sul miglioramento della funzionalità degli elettrodi nel rilevamento del neurotrasmettitore18. Il metodo più diffuso per migliorare la sensibilità degli elettrodi è rivestire la superficie della fibra. Sorprendentemente, c'è stata una ricerca limitata fatta sull'elettrodeposizione delle nanoparticelle metalliche sulle fibre di carbonio19. Nobili nanoparticelle metalliche come l'oro, possono essere elettrodepositate sulla superficie della fibra con altri materiali funzionali20. Per esempio, aumentando la superficie elettroattiva per l'adsorption neurotrasmettitore a verificarsi. Nanoparticelle metalliche elettrodepositate si formano rapidamente, possono essere purificate e aderire alla fibra di carbonio. L'elettrochimica continua ad essere significativa sia per la deposizione di nanoparticelle metalliche nobili che per il miglioramento superficiale delle fibre di carbonio, in quanto consente il controllo della nucleazione e della crescita di queste nanoparticelle. Infine, l'aumento delle caratteristiche catalitiche e conduttive e il miglioramento del trasporto di massa sono tra gli altri vantaggi dell'utilizzo di nanoparticelle metalliche per l'elettroanalisi.
Il corso di sequenza Advanced Laboratory dell'American Biological Chemistry I e II CHEM 471/671-472/672) è una combinazione di laboratori analitici, fisici e di biochimica. Il primo semestre è una panoramica delle tecniche di laboratorio. Il secondo semestre è un progetto diricerca 21 guidato da studenti e guidato. Per questi progetti, gli studenti hanno precedentemente esaminato il meccanismo di biomolecola, proteina, peptide e sintesi di nanoparticelle d'oro22,23. Un lavoro più recente si è concentrato sulla formazione della produzione di nanoparticelle d'oro (AuNP) sulle superfici degli elettrodi e sulla valutazione degli effetti AuNP sulla capacità delle CME di rilevare i neurotrasmettitori. Nel lavoro attuale, il laboratorio ha applicato questa tecnica per dimostrare che la sensibilità dei CFME nel rilevare l'ossidazione della dopamina è migliorata attraverso l'elettrodeposizione di AuNP sulla superficie della fibra. Ogni bare-CFME è caratterizzato da varia scan-rate, stabilità e concentrazione di dopamina quando si rilevano correnti ossidative dopamina-ossidativo per misurare l'ossidazione della dopamina sulla superficie del CFME. Au3 è stato poi elettroridotto a Au0 e contemporaneamente elettrodepositato sulla superficie della fibra come nanoparticelle, seguito da una serie di esperimenti di caratterizzazione. Dopo un confronto diretto, gli AuNP-CFME sono stati trovati a possedere una maggiore sensibilità del rilevamento della dopamina. Il rivestimento uniforme di AuNP sulla superficie della fibra tramite elettrodeposizione rende più alta la superficie elettroattiva; quindi, aumentando l'adsorbente della dopamina sulla superficie dell'elettrodo modificato. Questo ha portato a più elevate correnti ossidative della dopamina. Anche la potenziale separazione dell'ossidazione edella riduzione della dopamina (EP ) di AuNP-CFME era più piccola, suggerendo una cinetica di trasferimento di elettroni più veloce. Le opere future di questo studio includono il test in vivo di entrambi i Nue- e AuNP-CFME per il rilevamento della dopamina.

<table><tbody><tr><td>Cloridrato di dopamina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H8502-5G</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>Pine WaveNeuro Potenziostat</td><td>Pine Instruments</td><td>NEC-WN-BASIC</td><td>Questo ordine viene fornito all'ingrosso con tutti gli altri accessori come headstage, adattatori, cavi e altri dispositivi elettronici</td></tr><tr><td>Cella di flusso in pino e micromanipolatore</td><td>Strumenti in pino</td><td>NEC-FLOW-1</td><td>Questo è anche un altro ordine all'ingrosso che include il micromanipolatore, la cella di flusso, le manopole, i tubi, i connettori, ecc.</td></tr><tr><td>Sistemi A-M</td> <td>vetro-capillari</td><td>602500</td><td></td></tr><tr><td>T-650 Fibra di carbonio</td><td>Goodfellow</td><td>C 005711</td><td></td></tr><tr><td>Epon 828 Epossidico</td><td>Miller-Stephenson</td><td>EPON 828 TDS</td><td></td></tr><tr><td>Dietelinetriamina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D93856-5ML</td><td></td></tr><tr><td>Cloruro d'oro (III)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>254169</td><td>Viene fornito come misuratore di pH HAuCl4 o AuCl3</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>S90528</td><td></td></tr><tr><td>Farraday Cage</td><td>AMETEK TMC</td><td>81-334-03</td><td></td></tr><tr><td>Pompa a siringa</td><td>POMPA NEW ERA</td><td>NE-1000</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Pipette e puntali</td><td>Eppendorf</td><td>2231000222</td><td>Questo è anche un ordine all'ingrosso contenente più pipette e puntali</td></tr><tr><td>Becher da 10 -1.000 ml</td><td>VWR</td><td>10536-390</td><td></td></tr><tr><td>Fibra di carbonio</td><td>Goodfellow</td><td>C 005711</td><td></td></tr><tr><td>SEM</td><td>JEOL</td><td>JSM-IT100</td><td></td></tr></tbody></table>

microelettrodi in fibra di carbonio modificati con nanoparticle d'oro per una migliore rilevazione neurochimica

Gold Nanoparticle Modified Carbon Fiber Microelectrodes for Enhanced Neurochemical Detection

Per oltre 30 anni, i microelettrodi in fibra di carbonio (CFME) sono stati lo standard per il rilevamento dei neurotrasmettitori. Generalmente, le fibre di carbonio vengono aspirate in capillari di vetro, tirate a un cono fine e poi sigillate utilizzando un resina resina epossidica per creare materiali elettrodi che vengono utilizzati per test di voltammetria ciclica a scansione rapida. L'uso di CFME nudi ha diverse limitazioni, però. In primo luogo, la fibra di carbonio contiene per lo più carbonio piano basale, che ha una superficie relativamente bassa e produce sensibilità inferiore rispetto ad altri nanomateriali. Inoltre, il carbonio grafitico è limitato dalla sua risoluzione temporale e dalla sua conduttività relativamente bassa. Infine, neurochimici e macromolecole sono stati conosciuti per fallo sulla superficie di elettrodi di carbonio dove formano polimeri non conduttivi che bloccano ulteriori annunci neurotrasmettitori. Per questo studio, modifichiamo i CFME con nanoparticelle d'oro per migliorare i test neurochimici con la voltammetria ciclica a scansione rapida. L'Au3 è stato elettrodepositato o sofposto da una soluzione colloidale sulla superficie dei CFME. Poiché l'oro è un metallo stabile e relativamente inerte, è un materiale elettrodo ideale per misurazioni analitiche di sostanze neurochimiche. La nanoparticella d'oro modificata (AuNP-CFME) ha avuto una stabilità alla risposta della dopamina per oltre 4 h. Inoltre, AuNP-CFME s'intitola inoltre una maggiore sensibilità (corrente ossidativa di picco più alta dei voltammogrammi ciclici) e cinedi di trasferimento elettronico più veloci(EP o separazione del picco) più in basso rispetto ai CFME non modificati. Lo sviluppo di AuNP-CFME fornisce la creazione di nuovi sensori elettrochimici per rilevare i cambiamenti rapidi nella concentrazione di dopamina e altre sostanze neurochimiche a limiti inferiori di rilevamento. Questo lavoro ha vaste applicazioni per il miglioramento delle misurazioni neurochimiche. La generazione di CFME modificate con nanoparticelle d'oro sarà di vitale importanza per lo sviluppo di nuovi sensori di elettrodi per rilevare i neurotrasmettitori in vivo nei roditori e in altri modelli per studiare gli effetti neurochimici dell'abuso di droga, depressione, ictus, ischemia, e altri stati comportamentali e di malattia.

Per figura 1, mostriamo uno schema in cui viene utilizzato il test FSCV per misurare la concentrazione di neurotrasmettitori in vitro. Figura 1 Mostra la forma d'onda della dopamina applicata. La forma d'onda del triangolo viene scansionata da -0,4 V a 1,3 V a 400 V/s. Nella seconda parte della figura a sinistra, mostra l'ossidazione della dopamina alla dopamina-orto-quinone (DOQ), un processo di trasferimento di due elettroni si...

In questo studio, modifichiamo i microelettrodi in fibra di carbonio con nanoparticelle d'oro per migliorare la sensibilità del rilevamento del neurotrasmettitore.

Microelettrodi in fibra di carbonio modificati con nanoparticle d'oro per una migliore rilevazione neurochimica

For over 30 years, carbon-fiber microelectrodes (CFMEs) have been the standard for neurotransmitter detection. Generally, carbon fibers are aspirated into ...

Il metodo è significativo perché consente il rilevamento neurochimico ad alta risoluzione spaziale e temporale che può potenzialmente migliorare i metodi in vivo di rilevamento neurochimico. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è un metodo rapido, facile e riproducibile per migliorare la sensibilità e la risoluzione temporale del rilevamento del neurotrasmettitore. A dimostrare la procedura saranno Sanuja Mohanaraj e Pauline Wonnenberg, studenti laureati del mio laboratorio.Per iniziare, separare il materiale in fibra di carbonio in singoli filamenti e estrarre una singola fibra di carbonio di sette micrometri di diametro da un trefolo. Collegare una linea di vuoto a un capillare di vetro borosilicato e aspirare la fibra di carbonio nel capillare. Quindi tagliare un pezzo di cartone di 10 centimetri per 25 centimetri per fungere da supporto per elettrodi.Nastro un tovagliolo di carta intorno al cartone come supporto, quindi inserire il capillare nel supporto dell'elettrodo e fissarlo con cura in un estrattore capillare verticale. Configurare l'estrattore capillare per tirare il capillare di vetro su un cono fine per i materiali degli elettrodi e avviarlo. Una volta che la trazione termina e la bobina di riscaldamento si è raffreddata, tagliare la fibra di carbonio collegando gli elettrodi tirati a tubo.Rimuovere con cura i microelettrodi dall'estrattore capillare. Guidati da uno stereoscopio o da un microscopio, utilizzare una lama affilata o forbici chirurgiche per tagliare la fibra di carbonio sporgente su ogni elettrodo a circa 100-150 micrometri di lunghezza. Successivamente, in una fiala da 25 millilitri, utilizzare un batuffolo di cotone per mescolare 10 grammi di epossidico con 0,2 millilitri di indurente.Riempire un'altra fiala con acetone. Per ogni elettrodo, immergere la punta in fibra di carbonio in epossidica per 15 secondi e quindi immergerla in acetone per tre secondi per rimuovere l'epossidico in eccesso. Dopo l'epossidico, gli elettrodi epossidi vengono polimerizzati in forno per tre ore a 125 gradi Celsius.Successivamente, utilizzare un micromanipolatore per posizionare un microelettrodo in fibra di carbonio in un elettrodo di riferimento in cloruro d'argento-argento in una soluzione di 0,5 millimolare di acido cloroaurico in cloruro di potassio acquoso molare 0,1. Collegare gli elettrodi a un potenziostato con un microelettrodo in fibra di carbonio come elettrodo di lavoro. Scansionare l'elettrodo da 0,2 volt a meno un volt a 50 millivolt al secondo per 10 cicli per eseguire la deposizione dell'elettrodo.È fondamentale ottimizzare i parametri per il deposito del rivestimento in oro. Un troppo rivestimento causerà rumore e sovraccarico del segnale, mentre un rivestimento troppo piccolo non migliorerà il rilevamento neurochimico. Prima del test, preparare una soluzione di 10 millimolare di dopamina nell'acido perclorico e circa un litro di tampone a base di PH 7.4 PBS in acqua deionizzata.Pipettare un microlitro della soluzione di stock di dopamina in 10 millilitri di tampone per fare una soluzione di dopamina micromolare circa. Quindi collegare un microelettrodo in fibra di carbonio e un elettrodo di riferimento in cloruro argento-argento a un potenziostato. Fissare l'elettrodo in fibra di carbonio e l'elettrodo di riferimento nella fase della testa dell'apparato della cella di flusso e utilizzare il micromanipolatore per abbassarli nella cella di flusso.Disegnare 60 millilitri del tampone PBS in una siringa. Riempire la cella di flusso con il tampone e montare la siringa in una pompa per siringhe. Iniziare a scorrere il buffer attraverso la cella di flusso a una velocità di un millilitro al minuto.Quindi configurare il potentiostato per la scansione per meno 0,4 volt a 1,3 volt a 10 hertz e 400 volt al secondo. Applicare brevemente la forma d'onda al microelettrodo, osservare l'oscilloscopio e regolare il guadagno per evitare il sovraccarico. Lasciare equilibrare il microelettrode per 10 minuti nel buffer.Quindi disegnare la soluzione diluita di dopamina in una siringa e collegarla alla porta di iniezione della cellula di flusso. Impostare il tempo di esecuzione totale sul potenziostato su 30 secondi. Iniziare a registrare le misurazioni, attendere 10 secondi, quindi iniettare 0,2 millilitri di soluzione di dopamina nella cellula di flusso.Al termine dell'esecuzione, elaborare i dati con un software di analisi della voltammetria ciclica ad alta definizione. Lasciare che il microelettrodo si ri-equilibra per 10 minuti prima di eseguire un altro test. Al termine delle prove, pulire la cella di flusso iniettando tre millilitri di acqua e tre millilitri di aria nel tampone e nelle porte di iniezione tre volte.Le fibre di carbonio rivestite sono state immagini con microscopia elettronica a scansione. Lo spessore e la dimensione delle particelle dei rivestimenti delle nanoparticelle d'oro possono essere controllati dal tempo di deposizione dell'elettrodo. 20 minuti di deposizione di elettrodi hanno prodotto uno spesso rivestimento in oro con creste affilate mentre cinque minuti hanno prodotto un sottile rivestimento in oro uniforme.I microelettrodi rivestiti di nanoparticelle d'oro in fibra di carbonio avevano correnti ossidatrici di picco significativamente più elevate e una cinetica di trasferimento degli elettroni più veloce rispetto agli elettrodi non modificati. Il rivestimento della nanoparticella d'oro non ha avuto alcun effetto significativo sulla stabilità delle risposte degli elettrodi come dimostrato qui in una soluzione di dopamina. Sia gli elettrodi rivestiti di nanoparticelle nude che d'oro hanno risposto linearmente ai cambiamenti della velocità di scansione con una grandezza molto maggiore del cambiamento negli elettrodi rivestiti in oro.Ciò indicava che l'assorbimento della dopamina poteva essere controllato attraverso la velocità di scansione. Elettrodi rivestiti di nanoparticelle sia bare che oro hanno risposto linearmente tra concentrazioni di dopamina da 100 nanomolari a 10 micromolari. Una curva asintotica è stata osservata a concentrazioni più elevate, indicando che la dopamina è supersatura sulla superficie dell'elettrodo.La capacità di rilevare i cambiamenti neurochimici su una scala di tempo più veloce e a sensibilità più elevate aiuterà a rispondere a domande complesse nelle neuroscienze. Questo metodo ha anche usi in chimica analitica, metabolomica e scienze ambientali. Sebbene sia facile da imparare, la dimostrazione visiva è fondamentale per imparare a creare, modificare e testare i microelettrodi.Le direzioni future per questo metodo includono la regolazione della deposizione di oro e altri rivestimenti per tenere conto dello spessore, delle dimensioni, della forma e della morfologia per ottimizzare il rilevamento di neurotrasmettitori specifici. I ricercatori dovrebbero esercitarsi a maneggiare piccole fibre al microscopio prima di provare questa tecnica. Inoltre, la soluzione di stock di neurotrasmettitori deve essere preparata in una cappa aspirante perché utilizza 1 acido perclorico molare.

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