Name: Modello di impatto corticale controllato di lesioni cerebrali del topo con trapianto terapeutico di cellule neurali derivate da cellule staminali indotte dalluomo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-07-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Scopri un modello di impatto corticale controllato nel topo per studiare lesioni cerebrali e trapianti terapeutici con cellule staminali pluripotenti indotte umane. Questo metodo offre versatilità e riproducibilità per la ricerca preclinica.

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Questo lavoro è stato sostenuto da una sovvenzione del Center for Neuroscience and Regenerative Medicine (CNRM, numero di sovvenzione G170244014). Apprezziamo l'assistenza di Mahima Dewan e Clara Selbrede negli studi pilota di rimozione adesiva. Kryslaine Radomski ha eseguito interventi chirurgici preliminari per il trapianto di cervello e trapianto di cellule. Amanda Fu e Laura Tucker del laboratorio centrale USU CNRM Preclinical Studies hanno fornito preziosi consigli rispettivamente su interventi chirurgici e test di comportamento per animali.

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<li>Tong, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+interneuron+progenitor+transplantation+restores+normal+learning+and+memory+in+ApoE4+knock-in+mice+without+or+with+Abeta+accumulation%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%3A+The+Official+Journal+of+the+Society+for+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Inhibitory interneuron progenitor transplantation restores normal learning and memory in ApoE4 knock-in mice without or with Abeta accumulation.</a> The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 34, 9506-9515 (2014).</li>
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Gli autori non hanno conflitti di interesse da divulgare.

CCI mite come sistema modello per testare la terapia rigenerativa sperimentale Il modello CCI è uno strumento prezioso per studiare i meccanismi di disfunzione tissutale dopo lesioni meccaniche alla corteccia. La sintonabilità dei parametri di lesione è una caratteristica interessante di questo modello. Alterare la profondità di impatto, la velocità o il tempo di dimora può aumentare o diminuire la gravità della lesione come desiderato dall'investigatore10,<sup class...

Lesione cerebrale traumatica (TBI) è un termine generale per la lesione acquisita al cervello a causa di forze meccaniche indirette (accelerazione/decelerazione rotazionale o contro-colpo) da colpi alla testa o danni diretti da oggetti o onde di scoppio. La TBI è stata stimata essere la causa di circa il 9% dei decessi a livello mondiale e osservata in circa 50 milioni di casi all'anno1,2. Un rapporto del 2017 dei Centers for Disease Control and Prevention ha stimato che nel 2013 ci sono stati 2,8 milioni di visite ospedaliere e decessi dovuti a TBI negli Stati Uniti3. Molti TBI più lievi non vengono segnalati ogni anno. La TBI grave può portare a una compromissione permanente della cognizione, della funzione motoria e della qualità generale della vita. Le conseguenze del lieve TBI, in particolare il TBI sportivo ripetitivo, sono state apprezzate solo di recente per i loro insidiosi effetti sulla salute4,5.
La modellazione preclinica è una componente vitale dello sviluppo di nuove intuizioni meccanicistiche e di una potenziale terapia rigenerativa per la TBI. Il modello a impatto corticale controllato (CCI) di TBI è un modello a testa aperta di lesioni da contusione meccanica alla corteccia. I parametri di impatto possono essere modificati per produrre lesioni CCI che vanno da lievi a6. Le lesioni CCI sono focali piuttosto che diffuse, come si è visto con altri modelli a testa chiusa di TBI. CCI può essere eseguito per indurre una lesione unilaterale, in modo tale che la corteccia contralaterale può servire come un comparatore interno. Questo protocollo dimostra le caratteristiche di un CCI lieve a una porzione della corteccia che comprende le regioni somatosensoriali e motorie primarie. Questa zona corticale è stata scelta per il suo coinvolgimento nei comportamenti sensomotori per i quali numerosi test di comportamento possono rilevare deficit indotti da lesioni7. Miglioramenti comportamentali dovuti a interventi terapeutici per la TBI possono essere rilevati, pure.
Un segno distintivo della TBI è diffusa disfunzione neurale nella regione ferita. I neuroni feriti subiscono la morte cellulare, e la connettività della rete neuronale viene interrotta8,9. La TBI interrompe il reclutamento di cellule staminali endogene, il che porta a ulteriori deficit di comportamento a valle10,11.  Il trapianto di cellule staminali neurali e cellule derivate da cellule staminali è stato esplorato come una possibilità per ripristinare la funzione nel cervello ferito. Oltre al potenziale per ripristinare i circuiti neurali danneggiati, le cellule trapiantate esercitano effetti paracrini che promuovono la sopravvivenza neuronale e il recupero funzionale da TBI12. Una varietà di tipi di cellule sono stati trapiantati preclinicamente per valutare il loro potenziale rigenerativo in modelli di disturbi neurologici13,14,15. La recente divulgazione della tecnologia delle cellule staminali pluripotenti indotta16 ha facilitato lo sviluppo di numerose linee di cellule staminali umane per uso sperimentale. Il test preclinico con cellule derivate da hiPSC è un primo passo importante per caratterizzare la potenziale efficacia terapeutica di una data linea cellulare contro le malattie umane. Questo laboratorio ha sviluppato protocolli per differenziare gli hiPSC ai fenotipi neurali17 alla ricerca di cellule trapiantate per aiutare il recupero da lesioni cerebrali traumatiche.
Gli esperimenti in questo protocollo utilizzano un CCI unilaterale per indurre la TBI alla corteccia somatosensoriale e motoria sinistra dei topi adulti. Una lieve lesione CCI si traduce in un deficit funzionale sostenuto nella pedina destra che viene utilizzato per monitorare gli effetti dell'innesto di cellule neurali derivato da hiPSC sul recupero funzionale. Il forepaw sensorimotor testing in questo protocollo è stato adattato dalla metodologia stabilita da Bouet e colleghi18 e dimostrato in precedenza da Fleming e colleghi19.  Questo protocollo delinea un flusso di lavoro completo per l'esecuzione di una lesione cerebrale sperimentale, il trapianto terapeutico di cellule hiPS e l'analisi comportamentale e istologica delle misure di esito sperimentale.

<table><tbody><tr><td>Siringhe da 1 ml</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>&nbsp; </td><td></td>309659</tr><tr><td>1,7 ml provette flip top</td><td>Denville</td><td>C2170</td><td></td></tr><tr><td>siringa da 10 microlitri</td><td>Hamilton</td><td>7635-01</td><td></td></tr><tr><td>25G Precision Glide aghi per siringa</td><td>Becton Dickinson (BD)</td><td>&nbsp; </td><td></td>305122</tr><tr><td>70% di etanolo</td><td></td><td></td><td>Prodotto a scelta; varia a seconda della regione</td></tr><tr><td>paracetamolo sospensione orale</td><td>Tylenol (per bambini)</td><td></td><td>Diluire a 1 mg/ml in acqua</td></tr><tr><td>vaporizzatore per anestesia</td><td>Vetland</td><td>521-11-22</td><td></td></tr><tr><td>panno</td><td></td><td></td> per la manipolazione degli animali <td>Acquisto dai grandi magazzini</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue Prodotti</td><td>NDC-67618-151-32</td><td></td></tr><tr><td>ossigeno</td><td></td><td></td> compresso <td>Prodotto a scelta; varia in base alla regione</td></tr><tr><td>ciclosporina A</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>30024-100mg</td><td></td></tr><tr><td>Kit di colorazione DAB</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>dimetil solfossido (DMSO)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8418-500ml</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen (ThermoFisher)</td><td>A14430-01</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo IgG anti-topo asino, HRP coniugato</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-035-151</td><td></td></tr><tr><td>nastro isolante</td><td>3M Corporation</td><td></td><td>Acquisto da grandi magazzini</td></tr><tr><td>pinzette fini</td><td>Fine Science Tools</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td>pinze</td><td>Fine Science Tools</td><td>91106-12</td><td></td></tr><tr><td>pipette capillari in vetro, diametro esterno 1 mm, ID</td> <td>0,58 mmWorld Precision Instruments</td><td>1B100F-3</td><td></td></tr><tr><td>Kit micromotore rotativo ad alta velocità</td><td>Foredom Electric Co.</td><td>K.1070 - K.107018</td><td></td></tr><tr><td>Ideal Micro Drill Fresa Set Di 5</td><td>Punte Cellulari Scientific&nbsp;</td><td>60-1000</td><td></td></tr><tr><td>Impact One Stereotaxic Impactor per CCI&nbsp;</td><td>Leica Biosystems</td><td>39463920</td><td></td></tr><tr><td>isoflurano</td><td>Baxter</td><td>NDC-10019-360-60</td><td></td></tr><tr><td>timer da banco da laboratorio</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-649-17</td><td></td></tr><tr><td>Estrattore per micropipette</td><td>MicroData Instruments, Inc.</td><td>PMP-102</td><td>Qualsiasi estrattore sarà sufficiente</td></tr><tr><td>Vetrini coprimicroscopio</td><td>Fisherbrand</td><td>12-545-E</td><td></td></tr><tr><td>Supporto di montaggio</td><td></td><td></td> per vetrini per microscopio <td>Prodotto di scelta</td></tr><tr><td>specchio</td><td></td><td></td><td>Acquisto dal grande magazzino</td></tr><tr><td>Topo anticorpo antigene nucleare umano</td><td>Anticorpo Millipore</td><td>MAB1281</td><td></td></tr><tr><td>Mouse on Mouse Kit di blocco</td><td>Vector Laboratories</td><td>BMK-2202</td><td></td></tr><tr><td>porta-aghi emostatico</td><td>Fine Science Tools</td><td>12002-12</td><td></td></tr><tr><td>unguento oftalmico</td><td>Falcon Pharmaceuticals</td><td>NDC-61314-631-36</td><td></td></tr><tr><td>forbici a molla oftalmica</td><td>Fine Science Tools</td><td>15018-10</td><td></td></tr><tr><td>scatola</td><td></td><td></td> di plastica <td>Acquista dal cilindro</td></tr> <tr><td></td><td>di plastica</td> del grande magazzino<td></td><td>Acquisto dal grande magazzino</td></tr><tr><td>Pompa a siringa motorizzata QSI</td><td>Stoelting</td><td>53311</td><td></td></tr><tr><td>Raccordo a compressione con ago rimovibile</td><td>Hamilton</td><td>55750-01</td><td></td></tr><tr><td>piccolo telaio stereotassico per roditori</td><td>Stoelting</td><td>51925</td><td></td></tr><tr><td>piccole forbici</td><td>Fine Science Tools</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>StemPro Accutase</td><td>Invitrogen (ThermoFisher)</td><td></td><td></td>A1110501</tr><tr><td>Tamponi sterili per la preparazione dell'alcol</td><td>Fisherbrand</td><td>06-669-62</td><td></td></tr><tr><td>tamponi di cotone sterili/Kendall Q-tips</td><td>Tyco Healthcare</td><td>540500</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina sterile</td><td>Hospira</td><td>NDC-0409-1966-07</td><td></td></tr><tr><td>Cronometri (2)</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-662-56</td><td></td></tr><tr><td>Superfrost Plus Gold vetrini per microscopio</td><td>Fisherbrand</td><td>15-188-48</td><td></td></tr><tr><td>suture - seta 5.0 con ago curvo</td><td>Oasis</td><td>MV-682</td><td></td></tr></tbody></table>

modello di impatto corticale controllato di lesioni cerebrali del topo con trapianto terapeutico di cellule neurali derivate da cellule staminali indotte dall'uomo

Controlled Cortical Impact Model of Mouse Brain Injury with Therapeutic Transplantation of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Neural Cells

La lesione cerebrale traumatica (TBI) è una delle principali cause di morbilità e mortalità in tutto il mondo. Patologia della malattia a causa di TBI progredisce dall'insulto meccanico primario ai processi di lesioni secondarie, tra cui apoptosi e infiammazione. La modellazione animale è stata preziosa nella ricerca di svelare i meccanismi di lesione e valutare potenziali terapie neuroprotettive. Questo protocollo descrive il modello di impatto corticale controllato (CCI) del TBI focale e a testa aperta. In particolare, vengono descritti i parametri per produrre una lieve lesione corticale unilaterale. Le conseguenze comportamentali del CCI vengono analizzate utilizzando il test di rimozione del nastro adesivo dell'integrazione sensoriale-continua bilaterale. Per quanto riguarda la terapia sperimentale per la patologia TBI, questo protocollo illustra anche un processo per il trapianto di cellule coltivate nel cervello. Le colture di cellule neurali derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo (hiPSC) sono state scelte per il loro potenziale per mostrare un ripristino funzionale superiore nei pazienti con TBI umana. La sopravvivenza cronica degli hiPSC nel tessuto cerebrale del topo ospite viene rilevata utilizzando un processo immunohistochimico DAB modificato.

La chirurgia della craniectomia facilita la lesione cerebrale sperimentale e il trapianto di cellule terapeutiche: il modello di impatto corticale controllato della lesione cerebrale e la successiva terapia per il trapianto di cellule richiedono un'attenta rimozione del cranio sovrastante. La craniectomia può essere eseguita su qualsiasi superficie dorsale del cranio per consentire manipolazioni alla regione di interesse del cervello. Il diagramma in Figura 1 illustra uno sc...

Questo protocollo dimostra le metodologie per un modello murino di lesioni cerebrali traumatiche a cranio aperto e il trapianto di cellule derivate da cellule staminali pluripotenti indotte umane coltivate nel sito della lesione. Test comportamentali e istologici dei risultati di queste procedure sono descritti anche in breve.

Modello di impatto corticale controllato di lesioni cerebrali del topo con trapianto terapeutico di cellule neurali derivate da cellule staminali indotte dall'uomo

Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Disease pathology due to TBI progresses from the primary mechanical ...

Il nostro protocollo dimostra un flusso di lavoro preclinico completo per testare l'efficacia terapeutica delle cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo dopo una lesione cerebrale. Questo modello di lesione cerebrale traumatica fornisce un alto grado di versatilità e riproducibilità controllando strettamente i parametri della forza meccanica e fornendo quindi una lesione ben definita. Queste procedure possono essere utilizzate per studiare i processi di lesione e recupero in altre regioni cerebrali e il metodo di trapianto è suscettibile di utilizzo con molti tipi di cellule.La perforazione craniciale è impegnativa in quanto la tecnica richiede destrezza manuale per padroneggiare la pressione, la velocità, la profondità e i movimenti fluidi appropriati. Documenta tutti gli eventi e pratica ampiamente. Per eseguire una craniectomia unilaterale, confermare la mancanza di risposta al dito del piedi nel mouse anestetizzato e fissare il mouse in un telaio stereotassico.Applicare un unguento oftalmico antibiotico agli occhi con un batuffolo di cotone sterile e una soluzione a base di iodio sulla zona del cuoio capelluto rasato. Rimuovere lo iodio con il 70% di etanolo e coprire l'animale con un drappo chirurgico fenestrato. Fare un'incisione della linea mediana da 1,5 a due centimetri sul cuoio capelluto e utilizzare tamponi di cotone sterili per pulire la ferita e cancellare la fascia sinistra della linea mediana al bregma.Utilizzate una sonda di impatto per identificare il sito di craniectomia e impostate la x uguale a zero, y è uguale a zero punto di riferimento stereotassico a bregma. Regolare la sonda lateralmente a due millimetri a sinistra della linea mediana. Utilizzare un pennarello finemente sicuro chirurgicamente per indire un cerchio di diametro di cinque millimetri intorno all'area di impatto presuntiva.Sollevare e ruotare il riflettore fuori posizione e completare il cerchio di cinque millimetri. Riportare brevemente il riflettore in posizione per verificare la precisione del cerchio di cinque millimetri. Quindi sollevare e ruotare il riflettore fuori posizione e utilizzare uno strumento a mano a micromotore rotante ad alta velocità dotato di una punta rotonda da 0,6 o 0,8 millimetri per fare un foro aperto nel cranio a una velocità massima dal 70 all'80%.Applicare una leggera pressione sul cranio durante la perforazione lungo il contorno circonferenziale di cinque millimetri all'interno di questo bordo e utilizzare le forcep per sollevare il lembo osseo risultante. La perforazione attraverso le linee di sutura può presentare ulteriori difficoltà in quanto l'osso viene interrotto e richiede ulteriore pressione. I vasi sanguigni possono essere in stretta associazione e quindi sono probabili eventi sanguinanti.Per indurre una lieve lesione da impatto corticale controllato, pulire la sonda del dispositivo di impatto con un tampone sterile per la preparazione dell'alcol e spostare la sonda del dispositivo di impatto in posizione sopra la corteccia esposta. Abbassare la sonda fino a tocchi la superficie dura mater e contrassegnare questa posizione come z uguale a zero. Ritirare il pistone e passare a z è uguale a meno un millimetro e scaricare il pistone per influire sulla corteccia.Sollevare immediatamente il pistone e spostare il braccio fuori posizione e irrigare la corteccia con un generoso volume di salina e utilizzare semplici punti interrotti e sutura di seta 5-0 per chiudere l'incisione del cuoio capelluto. Quindi consegnare 10 milligrammi per chilogrammo di ciclosporina A per iniezione sottocutanea nel collotto e posizionare il mouse in una gabbia post-operatoria pulita pre-riscaldata con monitoraggio fino al pieno recupero. Circa 24 ore dopo la craniectomia, riposizionare il mouse nel telaio stereotassico.Coprire il mouse con il drappo chirurgico fenestrato. Lavare il sito di incisione con soluzione salina sterile per pulire il sito e allentare le suture. Utilizzare un batuffolo di cotone imbevuto di etanolo al 70% per sterilizzare delicatamente il sito di incisione e utilizzare pinzette sottili e forbici oftalmiche per rimuovere le suture.Quindi irrigare l'intervento chirurgico e il sito di craniectomia con abbondante soluzione salina sterile. In una cappa di biosicurezza in coltura cellulare, ruotare delicatamente o toccare il tubo delle cellule per garantire una sospensione cellulare omogenea. Utilizzare una micropipetta per caricare circa 7,5 microlitri di cellule in una siringa Hamilton attraverso l'estremità dello stantuffo.Tenendo la siringa con un angolo di 120 gradi con l'estremità dello stantuffo rivolta verso il basso, inserire lo stantuffo facendo attenzione a non introdurre una bolla d'aria tra la sospensione e la punta dello stantuffo. Attaccare l'assieme della guarnizione all'ago della pipetta e attaccare l'ago alla siringa. Spingere lo stantuffo per spostare la sospensione cellulare nell'ago della pipetta e attaccare la siringa alla pompa della siringa stereotassica.Far avanzare lo stantuffo per assicurarsi che l'assemblaggio della pompa della siringa funzioni correttamente e spostare l'ago nelle coordinate per l'iniezione. Allineare la punta dell'ago al bregma e impostare le coordinate x e y su zero. Spostare la punta dell'ago sulla craniectomia a due millimetri laterali e meno un millimetro posteriore a bregma e toccare la punta dell'ago sulla superficie dura mater.Sollevare leggermente l'ago, quindi fare una piccola incisione nella dura mater nel punto in cui l'ago ha preso contatto. Impostare la coordinata stereotassica su z uguale a zero e spingere lo stantuffo per confermare che la sospensione cellulare scorre adeguatamente prima di introdurre l'ago nel cervello. Introdurre l'ago nel cervello a una profondità di z uguale a meno 1,4 millimetri per posizionare l'innesto al bordo della materia grigia / materia bianca della corteccia profonda.Avviare la pompa della siringa per infondere la sospensione cellulare per un periodo di 15 minuti. Utilizzare un microscopio a lunga distanza di lavoro per monitorare il deflusso delle sospensioni cellulari che irriga il sito chirurgico con soluzione salina sterile durante l'iniezione per mantenere l'idratazione dei tessuti. Quando tutte le cellule sono state consegnate, ritirare lentamente l'ago del trapianto e irrigare il sito di intervento chirurgico con soluzione salina aggiuntiva prima di chiudere l'incisione con nuove suture.Quindi fornire assistenza post-operatoria come dimostrato. Per un test di rimozione del nastro adesivo, utilizzare prima un piccolo coltello da barba per tagliare pezzi gialli e rossi di nastro elettrico in tre strisce di cinque millimetri su una superficie di vetro liscia. Portare i topi nella sala prove comportamentale per almeno 30 minuti prima del test e utilizzare un panno di manipolazione per trattenere il mouse per la collotta del collo e della schiena in modo che il mouse trattiene le sopracciglia lontano dal corpo e dalla testa.Utilizzare una pinzetta per posizionare una striscia adesiva sulla superficie plantare di ogni zampa anteriore e utilizzare una pressione delicata e costante delle dita per fissare le strisce alle zampe. Posizionare rapidamente il mouse in un cilindro di plastica e iniziare due cronometri quando il mouse ha tutte e quattro le zampe sulla scatola di prova in plastica. Quindi usa i due cronometri per registrare le latenze per l'avviso della zampa sinistra, la rimozione della zampa sinistra, l'avviso della zampa destra e la rimozione della zampa destra.In questo esperimento pilota, la funzione dell'avanzino è stata confrontata solo nella craniectomia, nella lesione da impatto corticale controllato e nei topi ingenui. I topi sottoposti a intervento chirurgico hanno mostrato latenze transitori aumentate per notare stimoli adesivi per uno o tre giorni immediatamente dopo l'intervento chirurgico e deficit post-operatori transitori nella rimozione dell'adesivo dalla forepaw ipsilaterale. I topi che hanno subito un impatto corticale controllato, tuttavia, hanno mostrato notevoli deficit nelle prestazioni motorie nel contralaterale della forepaw alla lesione rispetto ai topi ingenui del giorno post-operatorio 28.L'immunostaining delle sezioni cerebrali del topo per l'antigene nucleare umano rivela che gli innesti cellulari umani possono essere chiaramente distinti dai tessuti ospiti nelle lesioni SHAM e nei cervelli ad impatto corticale controllato. È necessario osservare le procedure standard di sicurezza di laboratorio quando si maneggiano cellule umane coltivate e quando si maneggiano aghi per siringhe che entrano in contatto con roditori o farmaci immunosoppressivi. Le sezioni del tessuto cerebrale possono essere analizzate per l'espressione di marcatori neuroinfiammatori in quanto è prezioso sapere come l'innesto influisce sulla risposta alle lesioni del tessuto ospite e viceversa.Siamo rimasti sorpresi di trovare sottili differenze di sesso negli esiti del comportamento post-infortunio. Ora stiamo studiando se il sesso gioca un ruolo nella risposta neuroimmune alle lesioni cerebrali. Mani ferme, pazienza e pratica sono cruciali per sviluppare una buona tecnica di craniectomia.I danni collaterali causati da una craniectomia impropria possono compromettere l'area che si desidera prendere di mira per il trapianto di cellule.

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JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia dello sviluppo

Fonte: Furmanski, O., et al. Modello di impatto corticale controllato di lesione cerebrale di topo con trapianto terapeutico di cellule neurali derivate da cellule staminali pluripotenti indotte umane. J. Vis. Exp. (2019)In questo video, le cellule neurali derivate da cellule staminali pluripotenti indotte dall'uomo vengono iniettate stereotassicamente nel confine tra materia grigia e materia bianca della corteccia profonda in un modello murino di lesione cerebrale traumatica. Le cellule...

Trapianto stereotassico di sospensione di cellule neurali in un topo con lesione cerebrale traumatica

Questo video mostra la procedura per indurre una lesione cerebrale traumatica a cranio aperto in un topo praticando un'incisione del cranio sulla linea mediana, perforando il cranio e rimuovendo il lembo osseo per esporre la corteccia cerebrale e applicando un'alta pressione per indurre un trauma. La ferita viene quindi suturata per preparare il modello murino per gli esperimenti successivi.

Generazione di un modello murino di lesione cerebrale traumatica utilizzando una sonda impattante

Fonte: Shahror, R. A. et. al., Monitoraggio delle cellule staminali mesenchimali marcate con ossido di ferro superparamagnetico utilizzando la risonanza magnetica dopo la consegna intranasale in un modello murino di lesione cerebrale traumatica. J. Vis. Exp. (2019)Questo video mostra la somministrazione intranasale di cellule staminali mesenchimali (MSC) in un modello murino. Le MSC vengono assorbite nel tessuto nasale, migrano verso il cervello attraverso i segnali delle citochine e secernono...

Consegna intranasale di cellule staminali mesenchimali in un modello murino di lesione cerebrale traumatica

Fonte: Parajuli, B., et.al. Trapianto di microglia derivate da cellule staminali pluripotenti indotte umane in cervello di topi immunocompetenti per via transnasale non invasiva. J. Vis. Exp. (2022).Questo video mostra il trapianto transnasale di cellule di microglia umana derivate da cellule staminali pluripotenti indotte (iPSMG) in un cervello di topo. La ialuronidasi viene applicata alle narici di un topo impoverito di microglia per migliorare la permeabilità. La sospensione di iPSMG viene...

Trapianto transnasale di cellule microgliali umane derivate da cellule staminali pluripotenti indotte nel cervello di topo

Lesioni del midollo spinale è una condizione traumatica che provoca grave morbilità e mortalità elevata. In questo lavoro descriviamo in dettaglio un modello contusione di lesioni del midollo spinale nei topi seguita da un trapianto di cellule staminali neurali.

Neural Stem Cell Transplantation in Sperimentale Contusivi Model of Spinal Cord Injury

Qui presentiamo un protocollo, progettato per utilizzare strumenti chemiogenetici per manipolare l'attività dei progenitori interneuroni corticali trapiantati nella corteccia dei primi topi postnatali.

Trapianto di progenitori interneuroni corticali chemiogeneticamente ingegnerizzati nei primi cervelli dei topi postnatali

Descriviamo il trapianto intraparenchimale di cellule progenitrici neurali umane trasdotte con un doppio vettore reporter che esprime la proteina fluorescente verde luciferasi (GFP) nel cervello del topo. Dopo il trapianto, il segnale della luciferasi viene ripetutamente misurato utilizzando bioluminescenza in vivo e cellule innestate che esprimono GFP identificate in sezioni cerebrali utilizzando la microscopia a fluorescenza.

Trapianto intracerebrale e monitoraggio della bioluminescenza in vivo delle cellule progenitrici neurali umane nel cervello del topo

Il protocollo qui presentato consente il trapianto di microglia umana derivata da cellule staminali pluripotenti indotte (iPSMG) nel cervello attraverso una via transnasale in topi immunocompetenti. Viene mostrato il metodo per la preparazione e il trapianto transnasale di cellule e la somministrazione di miscela di citochine per il mantenimento di iPSMG.

Trapianto di microglia derivata da cellule staminali pluripotenti indotte umane nel cervello di topi immunocompetenti tramite via transnasale non invasiva

Questo protocollo descrive colture organotipiche a lungo termine di corteccia umana adulta combinate con trapianto intracorticale ex vivo di progenitori corticali derivati da cellule staminali pluripotenti indotte, che presentano una nuova metodologia per testare ulteriormente terapie basate su cellule staminali per malattie neurodegenerative umane.

Colture organotipiche della corteccia umana adulta come modello ex vivo per il trapianto e la validazione di cellule staminali umane

Il trapianto di neuroni GABAergici derivati da cellule staminali pluripotenti umane generati dalla programmazione neuronale potrebbe essere un potenziale approccio terapeutico per i disturbi dello sviluppo neurologico. Questo protocollo descrive la generazione e il trapianto di precursori neuronali GABAergici derivati da cellule staminali umane nel cervello di topi neonatali, consentendo l'indagine a lungo termine dei neuroni innestati e la valutazione del loro potenziale terapeutico.

Trapianto di neuroni GABAergici derivati da cellule staminali umane nell'ippocampo di topo postnatale precoce per mitigare i disturbi dello sviluppo neurologico

Qui, descriviamo un protocollo per il trapianto e il tracciamento di cellule neurali marcate in organoidi cerebrali umani.

Un modello di organoide cerebrale umano di trapianto di cellule neurali

Scopri un modello di impatto corticale controllato nel topo per studiare lesioni cerebrali e trapianti terapeutici con cellule staminali pluripotenti indotte umane. Questo metodo offre versatilità e riproducibilità per la ricerca preclinica.

Modello di impatto corticale controllato di lesioni cerebrali del topo con trapianto terapeutico di cellule neurali derivate da cellule staminali indotte dalluomo (Video) | JoVE Journal

Modello di impatto corticale controllato di lesioni cerebrali del topo con trapianto terapeutico di cellule neurali derivate da cellule staminali indotte dall'uomo

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