Valutazione della disponibilità di minerali nei mangimi per pesci utilizzando metodi complementari dimostrati con l'esempio di zinco nel salmone atlantico

Abbiamo studiato la disponibilità di solubilità di micro-metalli come il selenio di zinco con diverse forme o fonti chimiche, come lo chiamiamo, nel contesto del cambiamento della composizione del mangime. In una suite di radionuclidi, pesare circa 0,2 grammi di campioni di mangime per salmone atlantico macinato e mescolarlo con un radiotracciante di zinco di attività specifica nota in una provetta di cinque millilitri di volume. Preparare altre sei aliquote del tampone e aggiungere uno degli amminoacidi mostrati qui a ciascuno per raggiungere una concentrazione molare finale di cinque millimolari.

Aggiungere un tampone luminale intestinale d'acqua dolce per nutrire il campione. Quindi, aggiungere il tampone luminale intestinale d'acqua dolce alle aliquote tampone contenenti gli amminoacidi. Chiudere i tubi e farli girare su uno spinner rotante a 25 RPM per 30 minuti.

Quindi, centrifugare a 1.157 x g per 10 minuti, per separare le frazioni solubili e non solubili. Utilizzare un cassiere gamma per misurare i conteggi al minuto del radiotracciante di zinco nelle frazioni solubili e non solubili. Lavare due volte la linea cellulare intestinale derivata dalla trota iridea con un millilitro di soluzione di EDTA e sifonare la soluzione dopo ogni lavaggio usando una pipetta.

Trattare le cellule lavate con una soluzione di tripsina allo 0,25%. Ruotare delicatamente il matraccio ad angoli acuti per due minuti. Quindi aggiungere 10 millilitri di L-15 medio contenente il 5% di FBS per neutralizzare la tripsina.

Utilizzando una pipetta sterile, decantare la sospensione cellulare risultante in un tubo centrifugo conico inferiore. Centrifugare a 130 x G per tre minuti. Quindi utilizzando un emocitometro, determinare la densità delle cellule raccolte mediante conteggio manuale.

Seminare le cellule su 24 piastre di pozzetto ad una densità cellulare di 50.000 cellule per millilitro, per pozzetto, e incubare le piastre a 19 gradi Celsius in un'atmosfera normale per 48 ore prima degli esperimenti. Dopo aver nutrito i pesci per 11 giorni e averli eutanasizzati, raccogliere un campione raggruppato delle feci del pesce spogliandolo dalla pinna ventrale all'ano e posizionarlo su un piatto. Utilizzare una spatola per trasferire le feci dalla piastra in un tubo conico da 50 millilitro.

Conservare immediatamente i campioni a 20 gradi Celsius. In questo studio, la disponibilità minerale di mangimi per pesci viene valutata utilizzando una serie di metodi complementari. L'analisi rappresentativa del mangime per salmone atlantico tramite il metodo di spettrometria di massa al plasma accoppiato induttivamente per cromatografia ad esclusione dimensionale, fornisce dati sulle specie chimiche di zinco presenti nella frazione solubile.

Cinque picchi contenenti zinco possono essere visti in questa frazione, ognuno con un diverso peso molecolare. Le specie chimiche di zinco presenti nella frazione solubile possono avere fonti diverse, perché il mangime utilizzato contiene sia ingredienti marini che vegetali ed è integrato. La gamma di peso molecolare di queste specie suggerisce che questi composti potrebbero essere metalloproteine.

Mentre la solubilità dello zinco 65 integrato aumenta la presenza di tutti gli amminoacidi testati, una maggiore solubilità si riscontra con istidina e lisina. L'assorbimento apicale di zinco nelle cellule Arteca GC è significativamente influenzato dalla presenza di L-Met o DL-Met a due concentrazioni millimolari. Inoltre, l'impatto della metionina sull'assorbimento di zinco è influenzato negativamente dalla presenza di BCH.

Il vantaggio principale di questo protocollo è che abbiamo cercato di combinare diversi approcci in studi visivi, analitici e invivo, per confrontarci e complimentarci a vicenda quando si tratta di studiare la disponibilità di minerali.