Name: Un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare liperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-15T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 2 s
Description: Scopri un modello di interposizione venosa nel coniglio per studiare l'iperplasia intima sotto pressione arteriosa. Questo protocollo riproduce la chirurgia di rivascolarizzazione con innesti di vena per sviluppare nuove strategie terapeutiche nelle malattie cardiovascolari.

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Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni per la ricerca del Ministero dell'Istruzione, della Cultura, dello Sport, della Scienza e della Tecnologia, del Giappone (25462136).

NOTA: Tutte le procedure chirurgiche eseguite sugli animali devono essere eseguite in conformità con la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (www.nap.edu/catalog/5140.html) o altre linee guida etiche appropriate. I protocolli devono essere approvati dal comitato per il benessere degli animali presso l'istituto competente prima di procedere.
1. Preparazione degli animali
<ol><li>Acquistare conigli bianchi giapponesi maschi (o conigli con dimensioni corporee equivalenti) del peso di 2,7–3,0 kg.</li>
	<li>Acclimatare i conigli per 1 settimana in un ciclo di 12 ore luce-scuro e nutrire una dieta di chow coniglio regolare prima della procedura.</li>
</ol>2. Anestesia e ambiente animale
NOTA: tutte le procedure successive devono essere eseguite in condizioni asettiche. Il campo chirurgico e i dispositivi devono essere disinfettati con 10% soluzione povidone-iodio, 70% alcol, o un composto di ammonio quaternario prima dell'uso.
<ol><li>Anestesizzare un coniglio con somministrazione endovenosa di sodio pentobarbitale (25 mg/kg) attraverso la vena auricolare.</li>
	<li>Dopo aver assicurato che il coniglio ha perso la sua forza, trasferirlo in un tavolo operatorio, e metterlo in posizione supina. Coprire il naso e la bocca con una maschera anestetica. Iniziare la somministrazione di anestesia generale con l'inalazione di 0.7–1.0% miscela di isoflurane-ossigeno. NOTA: Se il coniglio inizia a muoversi, un aumento temporale dell'isoflurane fino al 2% sarà efficace.</li>
	<li>Tagliare la pelliccia sul collo e sulla spalla utilizzando un tagliacapelli elettrico. Dopo aver disinfettato la superficie spruzzando 70% etanolo o un'altra soluzione antisettica, radere il resto dei capelli nella regione cervicale con un rasoio. Disinfettare il campo chirurgico con il 10% di povidone-iodio e somministrare l'idrocloruro lidocaino (3 mg/kg) sottocutaneamente come anestesia locale. NOTA: Esaminare il movimento ripetitivo della trachea. Osservare la pulsazione della vena giugulare e l'arteria carotidea. Quando i tassi respiratori e pulsatili diminuiscono, considerare una riduzione temporanea della somministrazione di anestesia. Anche il monitoraggio della saturazione percutanea dell'ossigeno e della frequenza cardiaca. NOTA: il protocollo può essere messo in pausa qui.</li>
</ol>3. Raccolta della vena giugulare
NOTA: Gli anestetici locali (come la lidocaina) devono essere utilizzati prima di effettuare l'incisione cutanea.
<ol><li>Prima dell'incisione cutanea, somministrare l'enrofloxacina profilattica (5 mg/kg) sottocutaneamente. Per l'analgesia, somministrare 0,05 mg/kg di buprenorphine sottocutaneamente due volte al giorno per 3 giorni. NOTA: Per evitare un calo della temperatura corporea, è possibile utilizzare uno scrub chirurgico del sito di incisione invece di spruzzare il corpo dell'animale con il 70% di etanolo.</li>
	<li>Incise 50-60 mm della regione cervicale con bisturi chirurgico longitudinalmente. Sezionano con franchezza i tessuti sottocutanei e la fascia per esporre un segmento di 20-30 mm della vena giugulare. Ligate tutti i rami della vena esposta con suture di seta 4-0.</li>
	<li>Posizionare una sutura di seta 2-0 intorno alle vene giugulare interne ed esterne per eseguire la legatura subito dopo aver incitato la vena giugulare nella fase successiva.</li>
	<li>Incise la parete venosa (circa 1 mm) del lato disfattore della vena. Inserire un catetere a palloncino 2-francese dal taglio verso il lato prossimale della vena. Ligate la sutura di seta 2-0 nei siti disaldi delle vene giugulare.</li>
	<li>Gonfiare il palloncino con 0,2 mL d'aria. Denude l'intima della vena utilizzando tre passaggi del catetere per l'esfoliazione endoteliale. NOTA: Questa procedura è considerata equivalente alla distensione di un innesto vena saphenous negli interventi chirurgici di vascolarizzazione umana, che provoca esfoliazione endoteliale.</li>
	<li>Ridurre l'estremità prossimale della vena. Tagliare la vena per raccogliere. NOTA: distinguere con attenzione l'estremità distale e prossimale della vena raccolta, poiché l'anastomosi all'arteria deve essere eseguita in modo invertito (cioè, l'estremità distale della vena deve essere anastomosed all'estremità prossimale dell'arteria). Ad esempio, l'inserimento di un catetere per via endovenosa da un determinato lato funzionerebbe come marcatore.</li>
	<li>Per le manipolazioni terapeutiche per la vena giugulare raccolta, trattare la vena raccolta con metodi progettati per ogni domanda di ricerca (ad esempio, elettroporazione26 o immersione diretta con soluzioni27 per trasduzione di microRNA nelle vene). NOTA: per questo protocollo, gli innesti di vene sono stati immersi in salina tamponata di fosfati, microRNA di controllo e microRNA-145. Il protocollo può essere messo in pausa qui.</li>
</ol>4. Interposizione dell'arteria carotide dalla vena giugulare raccolta
<ol><li>Esporre un segmento di 20-30 mm dell'arteria carotide ipsilaterale. Separare l'arteria con attenzione dalla vena e dal nervo nelle vicinanze. Ligate tutti i rami della vena esposta con sutura di seta 4-0.</li>
	<li>Somministrato l'eparina di sodio per via endovenosa (200 IU/kg). Attendere 3-4 min.</li>
	<li>Bloccare le estremità prossimali e discrepanze dell'arteria con morsetti chirurgici. Tagliare l'arteria nel mezzo, tra i morsetti. Iniettare normale salina nell'arteria carotide incisa prossimiae e distally per distendere l'arteria. NOTA: Un'arteria carotide del coniglio tende a ridursi. Scegli un sito ben disteso come sito di anastomosi.</li>
	<li>Anastomose la vena raccolta per l'arteria in modo invertito end-to-end.<ol>
<li>Inserire un catetere intravenoso da 20 G nella vena raccolta dal distale alla direzione prossimale per mantenere aperto il lumen venoso durante gli anastomosi distale.</li>
		<li>Anastomosi l'estremità prossimale della vena all'estremità dissalare dell'arteria utilizzando 8-0 suture interrotte in polipropilene. Posizionare due stiches di ancoraggio sul sito e sul sito opposto. Aggiungere stiches la parte superiore della linea anastomosis tra gli stiches di ancoraggio.</li>
		<li>Capovolgere l'arteria e l'innesto venoso a testa in giù. Aggiungere stiches sulla parte restante della linea anastomosis.</li>
		<li>Rimuovere il catetere per via endovenosa dalla vena. Bloccare la vena innesto proximally e declampadare l'arteria carotide distay. Assicurarsi che l'innesto venosi si stia espandendo gradualmente.</li>
		<li>Anastomose l'estremità dissalare della vena all'estremità prossimale dell'arteria utilizzando 8-0 suture interrotte in polipropilene. Decasiamo l'arteria per controllare l'emorragia dai siti di anastomosi. Aggiungere suture per l'emostasis, se necessario. NOTA: Una leggera compressione del sito sanguinante con garza e attesa può essere sufficiente per l'emostasi. Controllare l'espansione immediata e la forte pulsazione dell'innesto venoso dopo il declamping prossimale. Se ciò non viene osservato, è consigliabile ripetere i passaggi 4.4.2– 4.4.3</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ligate l'arteria carotide interna con una sutura di seta 4-0 per simulare una condizione di deflusso scadente e per facilitare l'iperplasia intima.</li>
	<li>Pulire la ferita con la salina. Chiudere la ferita utilizzando 3-0 polyglactin 910, strato dopo strato.</li>
</ol>5. Procedure postoperatorie
<ol><li>Terminare l'anestesia e rimuovere la maschera di anestesia dopo aver controllato la respirazione spontanea dell'animale. Controllare frequentemente le condizioni dell'animale fino a quando non si riprende dall'anestesia.</li>
	<li>Tenere l'animale separato dagli altri animali fino a quando la funzione respiratoria non è completamente ripristinata. Supportare la respirazione manualmente, se necessario. Non riportare l'animale a un gruppo più grande fino al pieno recupero.</li>
	<li>Controllare l'assunzione di cibo e acqua dopo il recupero dall'anestesia e fornire un adeguato supporto nutrizionale. Somministrare analgesici (ad esempio, buprenorfina 0,05–0,2 mg/kg sottocutaneamente 2 volte al giorno per 3 giorni) e verificare la presenza di segni di disagio o dolore.</li>
</ol>

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<li>Zou, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+venous+bypass+graft+arteriosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Mouse model of venous bypass graft arteriosclerosis.</a> American Journal of Pathology. 153 (4), 1301-1310 (1998).</li>
<li>de Vries, M. R., Simons, K. H., Jukema, J. W., Braun, J., Quax, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vein+graft+failure%3A+from+pathophysiology+to+clinical+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cardiology%22%5BJournal%5D)">Vein graft failure: from pathophysiology to clinical outcomes.</a> Nature Reviews Cardiology. 13 (8), 451-470 (2016).</li>
<li>Dietrich, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+development+of+vein+graft+atheroma+in+ApoE-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Rapid development of vein graft atheroma in ApoE-deficient mice.</a> American Journal of Pathology. 157 (2), 659-669 (2000).</li>
<li>Kumar, A., Lindner, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodeling+with+neointima+formation+in+the+mouse+carotid+artery+after+cessation+of+blood+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 17 (10), 2238-2244 (1997).</li>
<li>Lindner, V., Fingerie, J., Reidy, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+model+of+arterial+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Mouse model of arterial injury.</a> Circulation Research. 73 (5), 792-796 (1993).</li>
<li>Moroi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+genetic+deficiency+of+endothelial+nitric+oxide%2C+gender%2C+and+pregnancy+in+vascular+response+to+injury+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 101 (6), 1225-1232 (1998).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il protocollo attuale è progettato per fornire una piattaforma sperimentale per testare vari interventi molecolari o genetici per le VSMC per controllare il fenotipo dal proliferare allo stato contrattile e successivamente attenuare la progressione dell'iperplasia intima venosa in vivo. Utilizzando questo modello, abbiamo preparato con successo l'iperplasia intima a 2 settimane dopo l'intervento chirurgico (Figura 1A) e indicato il potenziale terapeutico del microRNA-145 per controllare il f...

Il numero di pazienti affetti da malattie ischemiche a causa dell'aterosclerosi è in aumento in tutto il mondo1. Nonostante gli attuali progressi nelle terapie mediche e chirurgiche per le malattie cardiovascolari, le malattie cardiache ischemiche, come l'infarto miocardico, rimangono una delle principali cause di morbilità e mortalità2. Inoltre, le malattie arteriose periferiche caratterizzate da un ridotto flusso sanguigno agli arti provocano un'ischemia critica degli arti, in cui circa il 40% dei pazienti perde le gambe entro 6 mesi dalla diagnosi e il tasso di mortalità è fino al 20%3.
Gli interventi chirurgici di rivascolarizzazione, come l'innesto di bypass coronarico (CABG) e la chirurgia di bypass per le arterie periferiche, sono le principali opzioni terapeutiche per le malattie ischemiche. Lo scopo di questi interventi chirurgici è quello di fornire un nuovo percorso sanguigno per fornire sufficiente flusso sanguigno verso il sito distale delle lesioni stenotiche o occluse delle arterie aterosclerotiche. Anche se negli innesti arteriosi situ, come le arterie toraciche interne per CABG, sono preferiti come gli innesti di bypass a causa della patenza più lunga prevista, gli innesti di vene, come le vene sapheno autologhe, sono comunemente utilizzati a causa della maggiore accessibilità e disponibilità4. Il punto debole degli innesti venosi è il tasso di patenza povero rispetto a quello degli innesti delle arterie5 a causa dell'iperplasia intimale accelerata quando sottoposta a pressione arteriosa, che porta alla malattia dell'innesto delle vene6.
La malattia dell'innesto di vena si sviluppa attraverso i seguenti tre passaggi: 1) trombosi; 2) iperplasia intima; e 3) aterosclerosi7. Al fine di affrontare la malattia dell'innesto della vena, sono state condotte molte ricerche di base8. Finora, nessuna strategia farmacologica diversa dalle terapie antiplatletine e lipidi-abbassamento sono raccomandate per la prevenzione secondaria dopo interventi chirurgici di vascolarizzazione coronarica o periferica nelle recenti linee guida9,10,11,12. Pertanto, per superare la malattia dell'innesto venoso, in particolare l'iperplasia intima, è necessaria la creazione di una piattaforma sperimentale rilevante per ulteriori studi.
L'iperplasia intima è un fenomeno adattivo che si verifica in risposta al cambiamento nell'ambiente circostante, dove le cellule muscolari limpiche (VSMC) proliferano, accumulano e generano matrice extracellulare nell'intima. Di conseguenza, presenta una base per l'innesto atheroma7. Nell'intimaica iperplastica, le VSMC sorregono la proliferazione, e la produzione piuttosto che la contrazione, definita "cambiamento fenotipico"8. Si tratta di un obiettivo chiave di ricerca per controllare il fenotipo dei VSMC degli innesti vena per prevenire la malattia di innesto vena, e numerosi studi di base sono stati condotti su questo argomento8. Tuttavia, uno studio clinico controllato randomizzato che mirava a ottenere il controllo farmacologico del fenotipo VSMC ha mostrato risultati limitati13. Inoltre, non ci sono terapie standardizzate per prevenire l'iperplasia intima. Sono necessarie ulteriori ricerche di base, compresi gli studi sui modelli animali.
Per promuovere la ricerca in questo campo, è fondamentale stabilire un modello animale che riassume gli innesti vena sotto la pressione arteriosa, consentendo un'osservazione postoperatoria a lungo termine. Carrel et al. ha stabilito un modello canino di impianto della vena giugulare esterna nell'arteria carotide14. Inseguito, una varietà di innesti vena sono stati impiegati per studiare gli effetti fisiologici e patologici delle alterazioni della pressione arteriosa, tra cui la vena cava inferiore innestata nell'aorta toracica o addominale, o la vena sapiente innestata nell'arte sia artemorale15,16,17. Questi modelli sono stati costruiti in animali più grandi, come maiali o cani, che sono adatti per imitare una malattia di innesto venoso in un caso clinico. Tuttavia, la creazione di un modello animale che può essere preparato senza tecniche chirurgiche speciali e a un costo inferiore sarebbe l'ideale per i ricercatori che cercano di sviluppare una nuova strategia terapeutica per attenuare l'iperplasia intima attraverso il controllo del fenotipo VSMC in vivo. Inizialmente, l'interposizione della vena giugulare nell'arteria carotide in un coniglio è stata introdotta nel campo della neurochirurgia18,19. Successivamente, è stato applicato alla ricerca sull'iperplasia intima20,21. Il modello iniziale è costituito da un'interposizione venosa da solo, risparmiando così tempo. Inoltre, uno studio successivo ha dimostrato che la preparazione di un innesto veno sopitto ha interessato anche l'iperplasia intima22. Ha valutato l'effetto della lesione del catetere a palloncino sull'iperplasia intima in un coniglio venoso modello di interposizione23,24. Anche se la lesione del catetere a palloncino oltre all'interposizione della vena era più rilevante per un ambiente clinico, era anche desiderato un modello più riproducibile. Così, Jiang e altri hanno esaminato l'impatto degli ambienti di flusso differenziale sull'iperplasia intima e hanno stabilito una procedura di legatura dirami distale come modello riproducibile25. Tuttavia, hanno impiegato una tecnica di polsino al momento dell'interposizione dell'innesto venoso che sembra diverso dagli anastomosi cuciti a mano nell'ambiente clinico. Nel presente protocollo, riportiamo una procedura riproducibile, clinicamente rilevante e ampiamente disponibile per la preparazione di un modello di interposizione venosa del coniglio per valutare l'iperplasia intima sotto pressione arteriosa.

<table><tbody><tr><td>Soluzione di iodio povidone al 10%</td><td>Nakakita</td><td>872612</td><td>Consumabili chirurgici</td></tr><tr><td>2-0 VICRYL Plus</td><td>Johnson and Johnson</td><td>VCP316H</td><td>Consumabili chirurgici</td></tr><tr><td>4-0 Sutura di seta</td><td>Alfresa pharma</td><td>GA04SB</td><td>Consumabili chirurgici</td></tr><tr><td>8-0 sutura in polipropilene</td><td>Ethicon</td><td>8741H</td><td>Consumabili chirurgici</td></tr><tr><td>Cefazorin sodico</td><td>Nichi-Iko Pharmaceutical</td><td>6132401D3196</td><td></td></tr><tr><td>Catetere di Fogarty per antibiotici (2Fr)</td><td>Edwards Lifesciences LLC</td><td>E-060-2F</td><td>Consumabili chirurgici</td></tr><tr><td>Eparina</td><td>Nipro</td><td>873334</td><td>Catetere endovenoso anticoagulante</td></tr><tr><td>(20G)</td><td>Terumo</td><td>SR-OT2051C</td><td>Consumabili chirurgici</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Fujifilm</td><td>095-06573</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Lidocaina cloridrato</td><td>MP Biomedicals</td><td>193917</td><td>Anestesia</td></tr><tr><td>Pentobarbital sodico</td><td>Tokyo Chemical Industry</td><td>P0776</td><td>Anestesia</td></tr></tbody></table>

un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare l'iperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa

A Rabbit Venous Interposition Model Mimicking Revascularization Surgery using Vein Grafts to Assess Intimal Hyperplasia under Arterial Blood Pressure

Anche se gli innesti venosi sono stati comunemente utilizzati come innesti autologi in interventi chirurgici di rivascolarizzazione per malattie ischemiche, la patenza a lungo termine rimane scarsa a causa dell'accelerazione dell'iperplasia intimale a causa dell'esposizione alla pressione arteriosa. Il presente protocollo è progettato per la creazione di iperplasia intima venosa sperimentale interponendo le vene giugulare del coniglio alle arterie carotidee ipsilaterali. Il protocollo non richiede procedure chirurgiche in profondità nel tronco del corpo e l'estensione dell'incisione è limitata, il che è meno invasivo per gli animali, consentendo l'osservazione a lungo termine dopo l'impianto. Questa semplice procedura consente ai ricercatori di studiare strategie per attenuare la progressione dell'iperplasia intima degli innesti vena impiantati. Utilizzando questo protocollo, abbiamo segnalato gli effetti di trasduzione del microRNA-145 (miR-145), che è noto per controllare il fenotipo delle cellule muscolari lisce vascolari (VSMC) dalla proliferazione allo stato contrattile, in innesti di vena raccolti. Abbiamo confermato l'attenuazione dell'iperplasia intima degli innesti venosi trasducendo miR-145 prima dell'intervento di impianto attraverso il cambiamento del fenotipo delle VSMC. Qui segnaliamo una piattaforma sperimentale meno invasiva per studiare le strategie che possono essere utilizzate per attenuare l'iperplasia intima di innesti venosi negli interventi chirurgici di vascolarizzazione.

Figura 1A mostra un'immagine rappresentativa di iperplasia intima di successo a 2 settimane dopo la chirurgia di interposizione venosa (pannello superiore). Il pannello inferiore mostra gli effetti terapeutici delle nanoparticelle poliscientifiche caricate a microRNA-145 (acido lattico-co-colico) che attenuavano l'iperplasia intima (pannello inferiore). La figura 1B mostra il confronto tra l'iperplasia intima tra il gruppo di controllo utilizzando il controllo s...

Il presente protocollo mira a creare sperimentalmente iperplasia intima venosa sottoponendo le vene alla pressione arteriosa per lo sviluppo di strategie per attenuare l'iperplasia intimave venosa a seguito di chirurgia di rivascolazione utilizzando innesti vena.

Un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare l'iperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa

Although vein grafts have been commonly used as autologous grafts in revascularization surgeries for ischemic diseases, the long-term patency remains poor ...

Il nostro protocollo fornisce un modello semplice, economico, riproducibile e clinico rilevante per i ricercatori nel campo dell'iperplasia intimale venosa. Il nostro protocollo è economicamente, clinicamente e tecnicamente equilibrato. Pertanto, è altamente raccomandato per i ricercatori che desiderano applicare i loro risultati in vitro a un ambiente in vivo.Crediamo che il nostro protocollo possa essere applicato a un modello animale più ampio per lo sviluppo di nuove strategie di trattamento nelle malattie ischemiche del cuore e degli arti inferiori. Il nostro protocollo è principalmente rilevante per il campo della chirurgia cardiovascolare. Tuttavia, può anche essere usato per affrontare i cambiamenti degenerativi nelle fistole arteriovenose in pazienti con malattia renale allo stadio finale.Dopo somministrazione analgesica di antibiotici anestetici locali e profilattici, disinfettare il sito chirurgico con il 10%povidone-iodio. E fare un'incisione da 50 a 60 millimetri con un bisturi chirurgico nella regione cervicale del coniglio bianco giapponese maschio anestetizzato. Sezionare senza mezzi termini i tessuti sottocutanei e la fascia per esporre un segmento da 20 a 30 millimetri della vena giugulare.E usa 4-0 suture di seta per legare tutti i rami della vena esposta. Posizionare una sutura di seta 2-0 intorno alle vene giugulare interne ed esterne e fare un'incisione di un millimetro nella parete venosa del lato distale della vena. Inserire un catetere a palloncino a 2 francesi dal taglio verso il lato prossimale della vena.E legare la sutura di seta 2-0 nei siti distali delle vene giugulare. Gonfiare il pallone con 200 microlitri d'aria. E usa il palloncino per denudare l'intima della vena tre volte per l'esfoliazione endoteliale.Dopo il terzo passaggio, legare l'estremità prossimale della vena e tagliare la vena nel sito distale. Quindi inserire un catetere endovenoso calibro 20 nella vena raccolta dalla direzione prossimale alla direzione prossimale e tagliare la vena nel sito prossimale. Per interporre l'arteria carotide con la vena giugulare di raccolta, esporre un segmento da 20 a 30 millimetri dell'arteria carotide ipsilaterale.E separare attentamente l'arteria dalla vena e dal nervo vicini. Legare tutti i rami della vena esposta con sutura di seta 4-0. E somministrazione endovenosa di 200 unità internazionali per chilogrammo di sodio eparina.Bloccare le estremità prossimali e distali dell'arteria con morsetti chirurgici in gomma. E tagliare l'arteria tra i morsetti. Iniettare la soluzione salina normale nell'arteria carotide incisa prossimamente e distally per distesa l'arteria.E posizionare la vena di raccolta vicino all'arteria per anastomose il vaso in modo invertito end-to-end. Per anastonosio l'estremità prossimale della vena fino all'estremità distale dell'arteria, posizionare due punti di ancoraggio di 8-0 polipropilene nel sito e nel sito opposto. Aggiungere punti sul lato superiore della linea di anastomosi tra i punti di ancoraggio.Capovolgere l'arteria e l'innesto venale a testa in giù. E aggiungere punti sulla parte rimanente della linea di anastomosi. Quindi, rimuovere il catetere endovenoso dalla vena e bloccare l'innesto venoso prossimale.Declamp l'arteria carotide distally. E osserva se l'innesto venale si espande gradualmente. Utilizzo dell'8-0 suture interrotte in polipropilene, anastonosio l'estremità distale della vena fino all'estremità prossimale dell'arteria.E sganciare l'arteria per verificare la presenza di sanguinamento dai siti di anastomosi. Infine, ligate l'arteria carotide interna con una sutura di seta 4-0 per simulare una cattiva condizione di deflusso e facilitare l'iperplasia intimale. Quindi pulire la ferita con soluzione salina.Chiudere l'incisione con 3-0 poliglatina 910 a strati. E consentire al coniglio di riprendersi completamente con il monitoraggio prima di riportare l'animale nella sua gabbia domestica. In questa immagine rappresentativa, è possibile osservare un'iperplasia intimale di successo a 2 settimane dopo un intervento di interposizione venosa.Qui, si possono osservare gli effetti terapeutici delle nanoparticelle poli(acido lattico-co-glicolico) cariche di microRNA-145 sulla morfologia intimale dell'iperplasia. Infatti, il trattamento con microRNA carichi di nanoparticelle poli(acido lattico-co-glicolico)si traduce in una significativa attenuazione dell'iperplasia intimale. Inoltre, l'immunostaining per Ki-67, un marcatore proliferatore cellulare, rivela meno cellule Ki-67-positive all'interno del gruppo trattato con microRNA-145 che indica un cambiamento fenotipo nelle cellule muscolari lisce vascolari dallo stato proliferativo immaturo allo stato contrattile maturo.L'obiettivo principale del nostro protocollo è raggiungere la persistenza dell'innesto impiantato. È anche importante confermare che l'innesto si espande dopo aver declamato l'arteria carotide.

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Una tecnica ottimizzata per la creazione microchirurgico di aneurismi arteriosi biforcazione imitando biforcazione aneurismi cerebrale umana è descritta. Un sacchetto venoso viene suturata in una biforcazione creata artificialmente vero di entrambe le arterie carotidi comuni. Tecniche microchirurgiche facilitato ed aggressiva terapia anticoagulante ed analgesia postoperatoria portare a tassi di morbilità ridotta al minimo e alti tassi di pervietà aneurisma.

Microchirurgia arteriosa, venosa Pouch biforcazione aneurismi nel modello Rabbit: Aspetti Tecnici

Iperplasia neointimale è la causa primaria di stenosi nelle vene arterializzato. Proponiamo un nuovo protocollo per cui si innesta la vena giugulare esterna destra con la tecnica bracciale in carotide comune di ratti Sprague Dawley. Il tasso di sopravvivenza è stata del 100% per il punto temporale di sacrificio.

La formazione di una sofisticata tecnica microchirurgica: Interposizione della vena giugulare esterna innesto nella carotide comune in Rats

In questo video, dimostriamo una procedura per prelevare chirurgicamente un segmento della vena giugulare da un modello di coniglio. Il segmento resecato può essere utilizzato come innesto di vena autologa per studiare l'iperplasia intimale che si sviluppa a causa della pressione arteriosa.

Prelievo di innesto della vena giugulare da un modello di coniglio: una procedura chirurgica per asportare un segmento della vena giugulare di coniglio per studi ex vivo

Questo video dimostra l'interposizione dell'arteria carotide del coniglio con la vena giugulare per indurre l'iperplasia intimale venosa sottoponendo le vene a pressione arteriosa. Questo modello aiuterà a studiare interventi molecolari e genetici per attenuare la progressione dell'iperplasia intimale dopo interventi di rivascolarizzazione.

Interposizione dell'arteria carotide e della vena giugulare: una tecnica per indurre l'iperplasia intimale venosa nel modello di coniglio

Fonte: Wanderer, S., et al. Modello di aneurisma della biforcazione microchirurgica della sacca arteriosa nel coniglio. J. Vis. Exp. (2020)Questo video mostra la creazione di un modello sperimentale di aneurisma in un coniglio utilizzando una sacca vascolare trattata con elastasi. Dopo aver asportato un segmento del CCA destro, la sacca viene trattata con elastasi, quindi suturata al CCA sinistro per ripristinare il flusso sanguigno. Lo stress risultante sulle pareti indebolite della sacca...

Sviluppo di un modello sperimentale di aneurisma in un coniglio utilizzando una sacca vascolare trattata con elastasi

Questo video mostra un modello per studiare lo sviluppo dell'iperplasia miointimale dopo un intervento chirurgico di interposizione venosa nei ratti.

Vena interposizione Modello: un modello adatto per studiare Bypass Graft pervietà

Questo metodo descrive il posizionamento degli innesti della vena di interposizione in conigli, la trasduzione degli innesti e il raggiungimento dell'espressione del transgene durevole. Questo permette l'indagine su ruoli fisiologici e patologici di transgeni e loro prodotti proteici nelle vene innestate e il test di terapie geniche per la malattia dell'innesto della vena.

Un modello del coniglio di espressione del Transgene durevole nella vena giugulare di innesti di interposizione dell'arteria carotica comune

Descriviamo una procedura chirurgica utilizzata per indurre l'ischemia periferica nei conigli con iperlipidemia e diabete. Questo intervento chirurgico agisce come un modello preclinico per le condizioni sperimentate nella malattia dell'arteria periferica nei pazienti. L'angiografia è anche descritta come un mezzo per misurare l'entità dell'ischemia introdotta e il recupero della perfusione.

Modello preclinico di ischemia degli arti posteriori nei conigli diabetici

Lo sviluppo e la sperimentazione di dispositivi endovascolari per il trattamento dell'aneurisma intracranico è ancora di grande importanza. La maggior parte dei modelli di aneurisma utilizzati oggi mancano delle importanti caratteristiche di una parete degenerata arteriosa o dell'emodinamica di una vera biforcazione. Pertanto, abbiamo mirato a progettare un nuovo modello di biforcazione della sacca arteriosa nei conigli.

Sacchetto arterioso Modello di aneurisma di biforcazione microchirurgica nel coniglio

In questo protocollo, il nuovo innesto di bypass venoso del maiale è stato eseguito attraverso una piccola incisione nella parete toracica sinistra senza bypass cardiopolmonare. È stato condotto uno studio di patologia postoperatoria, che ha mostrato ispessimento intimale.

Istituzione e valutazione di un modello di malattia da trapianto di vena suina

È necessario un modello animale appropriato per comprendere i meccanismi patologici alla base della stenosi della valvola aortica (AVS) e per valutare l'efficacia degli interventi terapeutici. Il presente protocollo descrive una nuova procedura per lo sviluppo del modello di coniglio AVS tramite una lesione diretta con palloncino in vivo.

Un modello di stenosi della valvola aortica di coniglio indotta da lesione diretta del palloncino

Scopri un modello di interposizione venosa nel coniglio per studiare l'iperplasia intima sotto pressione arteriosa. Questo protocollo riproduce la chirurgia di rivascolarizzazione con innesti di vena per sviluppare nuove strategie terapeutiche nelle malattie cardiovascolari.

Un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare liperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa (Video) | JoVE Journal

Un modello di interposizione venosa di coniglio che imita la chirurgia di rivascolarizzazione usando grafts di venina per valutare l'iperplasia intima sotto la pressione sanguigna arteriosa

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