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DOI: 10.3791/61105-v
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This study presents a protocol for monitoring the complete life cycle of the predatory bacterium Bdellovibrio bacteriovorus using time-lapse fluorescence microscopy. The approach allows for real-time observation of the bacterium's complex life cycle, potentially adaptable to various bacterial strains.
Qui è presentato un protocollo che descrive il monitoraggio dell'intero ciclo di vita del batterio predatorio Bdellovibrio bacteriovorus utilizzando la microscopia a fluorescenza time-lapse in combinazione con un cuscinetto di agarose e piatti di imaging cellulare.
L'imaging batteriovoro Bdellovibrio a cellule vive è stato impegnativo a causa del complesso ciclo di vita di questi batteri predatori. Il nostro protocollo consente il monitoraggio delle fasi del ciclo di vita completo in tempo reale. Sebbene il nostro protocollo si basi su uno specifico ceppi di equalizzazione, può essere facilmente adattato a una varietà di ceppi batterici tra cui ceppi patogeni.
Per impostare una coltura di B.bacteriovorus, combinare un millilitro di batteri freschi coltivati 24 ore su 24 con tre millilitri di coltura di prede durante la notte in un matraccio da 250 millilitri contenente 50 millilitri di tampone di hippy di calcio integrati con antibiotici se necessario. Dopo un'incubazione di 24 ore a 30 gradi Celsius e 200 giri al minuto, verificare che le cellule preda siano state completamente lisci dalla microscopia a contrasto facciale montata sul liquido. Devono essere presenti numerose cellule B.bacteriovorus in fase multi-attacco e nessuna cellula E.coli o bdelloplast dovrebbe essere visibile.
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