Name: Instillazione intratracheale delle cellule staminali nei ratti neooatali (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-05-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 27 s
Description: Impara l'instillazione intratracheale di cellule staminali mesenchimali nei ratti neonatali per valutare l'efficacia terapeutica polmonare. Questo metodo offre un approccio mirato e conveniente per studiare nuove terapie neonatali.

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Questo studio è stato in parte sostenuto da una sovvenzione di Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan (A-109-008).

Questa procedura è stata approvata dal comitato per la cura e l'uso degli animali presso l'Università di Medicina di Taipei.
NOTA: le MSC umane sono state equamente trascate da proteine fluorescenti verdi (GFP) e geni di luciferasi delle lucciole (Fluc) ottenuti da un'azienda commerciale (Tabella dei materiali).
1. Caratterizzazione di MSC umani con luciferasi della lucciola e proteina fluorescente verde
<ol><li>Mantenere le MSC umane trascate con GFP e Fluc in supporti completi (modifica minima essenziale dell'aquila-alfa media-alfa,, completata con 10-15% siero bovino fetale [FBS], 2 mM L-glutamine, 1 ng/mL base FGF e PSF) a 37 gradi centigradi con umidità satura e 5% di CO2. Passare le celle a confluenza di 70-90 %.</li>
	<li>Osservare le MSC in un microscopio a contrasto di fase di fluorescenza (Figura 1A) e analizzare i livelli di espressione di Fluc e GFP14.</li>
	<li>Caratterizzare gli MSC analizzando l'espressione dei marcatori CD, tra cui CD44, CD73, CD90, CD105 utilizzando la citometria di flusso (Figura 1B). Indurre la differenziazione della trilina delle cellule staminali a adipociti, condrociti e osteociti, e confermare la differenziazione del trilineage (Figura 1C) di von Kossa, oltra tolmo rosso o Alcian colorazione a seguito di un protocollo commerciale15,16.</li>
</ol>2. Anestesizzazione dei cuccioli di ratto
<ol><li>Consentire ai ratti Sprague-Dawley incinte datati nel tempo di consegnare vaginalmente a termine.</li>
	<li>Togliere i cuccioli di topo dalla gabbia il giorno postnatale 5.</li>
	<li>Anestesizzare i cuccioli di ratto utilizzando l'anestesia del gas (cioè il 2% di isoflurane) in una camera di anestesia.</li>
	<li>Confermare l'anestesia adeguata controllando la respirazione e i riflessi. NOTA: La respirazione dovrebbe diventare superficiale e i riflessi dovrebbero diminuire. I cuccioli di ratto rimangono incoscienti per almeno 10 dollari con questa concentrazione di isoflurane.</li>
</ol>3. Instillazione intratracheale
<ol><li>Una volta anestesizzati, trattenete i cuccioli di ratto su un supporto di intubazione inclinati a 60 gradi e tenete i cuccioli in posizione con del nastro di etichettatura di laboratorio su tutti e quattro gli arti.</li>
	<li>Applicare il nastro sotto il naso per fissare la testa e individuare il collo per la tracheotomia di foratura.</li>
	<li>Disinfettare l'area di incisione (cioè il collo) con un cuscinetto di preparazione alcolica del 75%.</li>
	<li>Fare un'incisione collo verticale di 0,3 cm sopra la trachea con microscissors per evitare di danneggiare le arterie carotidee.</li>
	<li>Dissezionare gli strati di grasso e muscoli per individuare la trachea con una pinzetta affitta a punta curva senza gancio.</li>
	<li>Tenere la trachea con le pinzette affido punta curva.</li>
	<li>Tenere una siringa di 100 l e iniettare lentamente 30 l di normale salina (cioè, controllo) o 30 L di MSC fluc-GFP etichettati (1 x 105 celle) nella trachea attraverso una siringa ad ago da 30 G durante la fase di inspir.</li>
	<li>Chiudere l'incisione con un punto di seta 6-0, legare il nodo il più piccolo possibile e tagliare le estremità il più corto possibile.</li>
	<li>Posizionare i ratti sotto la luce infrarossa o su una piastra di riscaldamento per tenere al caldo e consentire loro di recuperare dall'anestesia.</li>
	<li>Verificare che i ratti siano caldi, rosa e in grado di movimento spontaneo prima di restituire i ratti alla gabbia.</li>
</ol>4. Monitoraggio della distribuzione polmonare delle MSC
<ol><li>Per monitorare le MSC umane trapiantate, iniettare intraperitonenamente i ratti con sale di potassio luciferina in fosfato tamponato salina (PBS) ad una dose di 125 mg/kg di peso corporeo 15 min dopo l'iniezione MSC.</li>
	<li>Anestesizzare i ratti utilizzando 2% isoflurane attraverso i coni nasali.</li>
	<li>Acquisire immagini sequenziali a intervalli di 5-15 s 10 min dopo la somministrazione di luciferina con binning medio, 1 f/stop e un campo visivo di 26 cm utilizzando un sistema di imaging di piccoli animali (Tabella dei materiali).</li>
	<li>Quantificare l'attività di luminescenza dai polmoni in base alle regioni automatiche di interesse utilizzando il software di imaging (Tabella dei materiali)17.</li>
</ol>

<ol><li>Ramanathan, R., Bhatia, J. J., Sekar, K., Ernst, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mortality+in+preterm+infants+with+respiratory+distress+syndrome+treated+with+poractant+alfa%2C+calfactant+or+beractant%3A+a+retrospective+study%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Perinatology%22%5BJournal%5D)">Mortality in preterm infants with respiratory distress syndrome treated with poractant alfa, calfactant or beractant: a retrospective study.</a> Journal of Perinatology. 33, 119-125 (2013).</li>
<li>Gien, J., Kinsella, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of bronchopulmonary dysplasia.</a> Current Opinion in Pediatrics. 23, 305-313 (2011).</li>
<li>Pasha, A. B., Chen, X. Q., Zhou, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bronchopulmonary+dysplasia%3A+Pathogenesis+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Therapeutic%22%5BJournal%5D)">Bronchopulmonary dysplasia: Pathogenesis and treatment.</a> Experimental and Therapeutic. 16, 4315-4321 (2018).</li>
<li>Committee on Fetus and Newborn. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+corticosteroids+to+treat+or+prevent+chronic+lung+disease+in+preterm+infants%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">Postnatal corticosteroids to treat or prevent chronic lung disease in preterm infants.</a> Pediatrics. 109, 330-338 (2002).</li>
<li>Watterberg, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Academy+of+Pediatrics%3B+Committee+on+Fetus+and+Newborn.+Policy+statement-postnatal+corticosteroids+to+prevent+or+treat+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatrics%22%5BJournal%5D)">American Academy of Pediatrics; Committee on Fetus and Newborn. Policy statement-postnatal corticosteroids to prevent or treat bronchopulmonary dysplasia.</a> Pediatrics. 126, 800-808 (2010).</li>
<li>Prockop, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marrow+stromal+cells+as+stem+cells+for+nonhematopoietic+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Marrow stromal cells as stem cells for nonhematopoietic tissues.</a> Science. 276, 71-74 (1997).</li>
<li>Nemeth, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bone+marrow+stromal+cells+attenuate+sepsis+via+prostaglandin+E%282%29-+dependent+reprogramming+of+host+macrophages+to+increase+their+interleukin-10+production%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bone marrow stromal cells attenuate sepsis via prostaglandin E(2)- dependent reprogramming of host macrophages to increase their interleukin-10 production.</a> Nature Medicine. 15 (2), 42-49 (2009).</li>
<li>Chou, H. C., Li, Y. T., Chen, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+mesenchymal+stem+cells+attenuate+experimental+bronchopulmonary+dysplasia+induced+by+perinatal+inflammation+and+hyperoxia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">Human mesenchymal stem cells attenuate experimental bronchopulmonary dysplasia induced by perinatal inflammation and hyperoxia.</a> American Journal of Translational Research. 8, 342-353 (2016).</li>
<li>Chen, C. M., Chou, H. C., Lin, W., Tseng, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surfactant+effects+on+the+viability+and+function+of+human+mesenchymal+stem+cells%3A+in+vitro+and+in+vivo+assessment%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">Surfactant effects on the viability and function of human mesenchymal stem cells: in vitro and in vivo assessment.</a> Stem Cell Research & Therapy. 8, 180(2017).</li>
<li>Kim, Y. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+transplantation+of+mesenchymal+stem+cells+simultaneously+attenuates+both+lung+and+brain+injuries+in+hyperoxic+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+Research%22%5BJournal%5D)">Intratracheal transplantation of mesenchymal stem cells simultaneously attenuates both lung and brain injuries in hyperoxic newborn rats.</a> Pediatric Research. 80, 415-424 (2016).</li>
<li>Fleurence, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+efficacy+of+intratracheal+adeno-associated+virus+administration+to+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Comparative efficacy of intratracheal adeno-associated virus administration to newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 16, 1298-1306 (2005).</li>
<li>Waszak, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+intratracheal+adenoviral+vector+administration+on+lung+development+in+newborn+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Gene+Therapy%22%5BJournal%5D)">Effect of intratracheal adenoviral vector administration on lung development in newborn rats.</a> Human Gene Therapy. 13, 1873-1885 (2002).</li>
<li>O'Reilly, M., Thébaud, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+bronchopulmonary+dysplasia.+The+term+rat+models%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of bronchopulmonary dysplasia. The term rat models.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 307, 948(2014).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GFP+labeling+and+hepatic+differentiation+potential+of+human+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Physiology+and+Biochemistry%22%5BJournal%5D)">GFP labeling and hepatic differentiation potential of human placenta-derived mesenchymal stem cells.</a> Cellular Physiology and Biochemistry. 35, 2299-2308 (2015).</li>
<li>Dominici, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimal+criteria+for+defining+multipotent+mesenchymal+stromal+cells.+The+International+Society+for+Cellular+Therapy+position+statement%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotherapy%22%5BJournal%5D)">Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement.</a> Cytotherapy. 8, 315-317 (2006).</li>
<li>Zhang, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Superior+osteogenic+capacity+for+bone+tissue+engineering+of+fetal+compared+with+perinatal+and+adult+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Superior osteogenic capacity for bone tissue engineering of fetal compared with perinatal and adult mesenchymal stem cells.</a> Stem Cells. 27, 126-137 (2009).</li>
<li>Huang, L. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+surfactant+and+budesonide+on+pulmonary+distribution+of+fluorescent+dye+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+and+Neonatology%22%5BJournal%5D)">Effect of surfactant and budesonide on pulmonary distribution of fluorescent dye in mice.</a> Pediatric and Neonatology. 56, 19-24 (2015).</li>
<li>Keyaerts, M., Caveliers, V., Lahoutte, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging%3A+looking+beyond+the+light%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging: looking beyond the light.</a> Trends in Molecular Medicine. 18, 164-172 (2012).</li>
<li>Yeh, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-tracheal+administration+of+budesonide%2Fsurfactant+to+prevent+bronchopulmonary+dysplasia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Intra-tracheal administration of budesonide/surfactant to prevent bronchopulmonary dysplasia.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 193, 86-95 (2016).</li>
<li>Nguyen, J. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratracheal+inoculation+of+Fischer+344+rats+with+Francisella+tularensis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Intratracheal inoculation of Fischer 344 rats with Francisella tularensis.</a> Journal of Visualized Experiments. (127), e56123(2017).</li>
<li>de Almeida, P. E., van Rappard, J. R., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+bioluminescence+for+tracking+cell+fate+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">In vivo bioluminescence for tracking cell fate and function.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301, 663-671 (2011).</li>
<li>Kim, J. E., Kalimuthu, S., Ahn, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cell+tracking+with+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nuclear+Medicine+and+Molecular+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo cell tracking with bioluminescence imaging.</a> Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 49, 3-10 (2011).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

I neonati con difficoltà respiratorie richiedono comunemente un surfactant intratracheale e/o trattamento corticosteroide19. Gli studi clinici sulla fase i umana hanno dimostrato la sicurezza delle comunicazioni e le comunicazioni amoanzi intratracheali nei neonati pretermine8. Questi studi suggeriscono che la somministrazione intratracheale dei farmaci è un'opzione importante per i neonati con difficoltà respiratorie. Gli studi sui modelli animali s...

L'ossigeno supplementare è spesso necessario per trattare i neonati con difficoltà respiratorie1. Tuttavia, la terapia iperossia nei neonati ha effetti negativi a lungo termine. L'esposizione prolungata ad alte concentrazioni di ossigeno porta a infiammazione e lesioni polmonari acute, che è simile alla displasia broncopolmonare umana (BPD)2. La BPD è una delle principali complicanze del trattamento con iperossia che può verificarsi nonostante la terapia precoce, le procedure di ventilazione ottimali e l'aumento dell'uso della ventilazione a pressione positiva non invasiva nei neonati prematuri. Mentre molte strategie di trattamento sono state segnalate per BPD3, nessuna terapia nota può ridurre questa complicazione.
L'uso di corticosteroidi è un potenziale trattamento per prevenire la BPD, perché l'infiammazione polmonare svolge un ruolo cruciale nella sua patogenesi. Tuttavia, la terapia sistemica corticosteroide non è solitamente raccomandata per i neonati pretermine a causa di effetti avversi a lungo termine4,5.
Le cellule stromali mesenchymal (MSC) hanno caratteristiche pluripotenti e possono differenziarsi in vari tipi di cellule, tra cui osso, cartilagine, tessuto adiposo, muscolo e tendini6. Le MSC hanno effetti immunomodulatori, antinfiammatori e rigenerativi7, e gli studi sugli animali mostrano i benefici terapeutici delle MSC e dei loro componenti secreti in lesioni polmonari indotte da iperossia nei roditori8,9. Il trapianto intratracheale e intravenoso di MSC ha dimostrato di proteggere contro lesioni polmonari iperossiche neoatali. Pertanto, la somministrazione intratracheale delle cellule staminali e la terapia combinata di surfactant e corticosteroidi potrebbero essere una potenziale strategia di trattamento per il trattamento dei neonati con disturbi respiratori. Studi preclinici hanno utilizzato la somministrazione intratracheale delle cellule staminali e del virus adeno-associato nei ratti neonati10,11,12. Tuttavia, non è disponibile una presentazione passo-passo della tecnica e il monitoraggio in vivo delle cellule staminali trapiantate. Il ratto appena nato è adatto per studiare gli effetti della somministrazione intratracheale sui neonati con difficoltà respiratorie perché lo stadio saccolare del polmone del ratto alla nascita è equivalente a quello del polmone umano a 26-28 settimane di gestazione13. Un metodo efficace per la somministrazione nella trachea del ratto è fondamentale per una distribuzione polmonare di successo. La tecnica qui presentata consente lo studio della somministrazione intratracheale di cellule e/o farmaci per il trattamento di malattie polmonari neomotorie utilizzando ratti come modello per gli esseri umani.

<table><tbody><tr><td>6-0 silk</td><td>Ethicon</td><td>1916G</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol Prep Pad</td><td>CSD</td><td>3032</td><td></td></tr><tr><td>BD Kit di analisi hMSC Stemflow</td><td>BD Biosciences</td><td>562245</td><td>marcatori CD</td></tr><tr><td>CMV-Luciferasi-EF1&alpha;-copGFP BLIV 2.0 Lentivettore per imaging in vivo</td><td>SBI</td><td>BLIV511PA-1</td><td></td></tr><tr><td>CryoStor10</td><td>BioLife Solutions</td><td>640222</td><td></td></tr><tr><td>MSC umane</td><td>Meridigen Biotech Co., Ltd. Taipei, Taiwan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luce infrarossa</td><td>JING SHANG</td><td>JS300T</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Alocarbonio</td><td>26675-46-7</td><td></td></tr><tr><td>IVIS-200 sistema di imaging per piccoli animali</td><td>Calibro LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Luciferin sale di potassio</td><td>Promega, Madison, WI</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microforbici, dritta</td><td>Vannas</td><td>H4240</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina normale</td><td>TAIWAN BIOTECH CO., LTD.</td><td>113531</td><td>Soluzione isotonica di cloruro di sodio</td></tr><tr><td>Ago RN per mozzo piccolo, calibro 30</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>7799-06</td><td></td></tr><tr><td>Siringa (100 &; l)</td><td>Hamilton Company, Reno, NV</td><td>81065</td><td></td></tr><tr><td>Xenogen Living Image 2.5 software</td><td>Caliper LifeSciences, Hopkinton, MA</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

instillazione intratracheale delle cellule staminali nei " ratti neooatali

Intratracheal Instillation of Stem Cells in Term Neonatal Rats

L'esposizione prolungata ad alte concentrazioni di ossigeno porta a infiammazione e lesioni polmonari acute, che è simile alla displasia broncopolmonare umana (BPD). Nei neonati prematuri, la BPD è una complicazione importante nonostante l'uso precoce della terapia surfactant, le strategie di ventilazione ottimali e la ventilazione a pressione positiva non invasiva. Poiché l'infiammazione polmonare svolge un ruolo cruciale nella patogenesi della BPD, l'uso di corticosteroidi è un potenziale trattamento per prevenirlo. Tuttavia, il trattamento corticosteroide sistemico non è solitamente raccomandato per i neonati pretermine a causa di effetti avversi a lungo termine. Studi preclinici e studi clinici di fase io hanno dimostrato che l'uso di cellule stromali mesenchymale (MSC) in lesioni polmonari indotte da iperossia e nei neonati pretermine è sicuro e fattibile. Il trapianto intratracheale e intravenoso di MSC ha dimostrato di proteggere contro lesioni polmonari iperossiche neoatali. Pertanto, la somministrazione intratracheale delle cellule staminali e il trattamento combinato di surfactant e glucocorticoide è emerso come una nuova strategia per il trattamento dei neonati con disturbi respiratori. Lo stadio di sviluppo dei polmoni di ratto alla nascita è equivalente a quello dei polmoni umani a 26-28 settimane di gestazione. Quindi, i ratti appena nati sono appropriati per studiare la somministrazione intratracheale ai neonati pretermine con difficoltà respiratorie per valutarne l'efficacia. Questa tecnica di instillazione intratracheale è un'opzione clinicamente praticabile per la consegna di cellule staminali e farmaci nei polmoni.

La distribuzione polmonare dell'instillazione intratracheale delle cellule staminali nei ratti neo-neoanati è stata determinata dalle cellule staminali con etichettatura della lucciola luciferasi (Fluc). Le MSC sono state etichettate con Fluc e etichettate con proteine fluorescenti verdi attraverso la trasduzione lentivirale. La figura 1A mostra un alto livello di espressione GFP nelle MSC umane e il 93,7% della popolazione ha mostrato che l'espressione positiva di GFP rilevata dalla citomet...

Descritto è un protocollo per eseguire il trapianto intratracheale di cellule stromali mesenchymale (MSC) attraverso l'iniezione intratracheale in ratti neonatici. Questa tecnica è un'opzione clinicamente praticabile per la somministrazione di cellule staminali e farmaci nei polmoni di ratto neoatale per valutarne l'efficacia.

Instillazione intratracheale delle cellule staminali nei " ratti neooatali

Prolonged exposure to high concentrations of oxygen leads to inflammation and acute lung injury, which is similar to human bronchopulmonary dysplasia ...

L'instillazione intratracheale è una biotecnologia clinica per la somministrazione di cellule staminali e farmaci in un polmone neonatale per valutare l'efficacia di Chilman. Questa tecnica può essere in buona fede per l'uso con una varietà di applicazione primaria in un ratto neonatale ed è una misura relativamente facile ed economica per il trattamento delle malattie polmonari. Il quinto giorno postnatale, trattenete i cuccioli di ratto Sprague-Dawley anestetizzati, su un supporto di intubazione angolato di 60 gradi.E apporre nastro adesivo da laboratorio a tutti e quattro gli arti di ogni cucciolo per fissarli in posizione. Applicare il nastro sotto ogni naso per fissare le teste. E individuare il primo collo per la tracheotomia delle forature.Utilizzare un tampone di preparazione alcolico al 75% per disinfettare l'area di incisione. E fare un'incisione verticale della linea mediana di 3 centimetri sopra la trachea per evitare di danneggiare le arterie carotidee. Utilizzare pinzette affusolata curve senza gancio per dissociare gli strati di grasso e muscoli per localizzare la trachea.Quando la trachea può essere osservata, utilizzare le pinzette per afferrare la trachea e utiliz

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Scoperte significative per l'identificazione delle cellule staminali sono continuamente in corso. Per tradurre queste scoperte, però, nuovi metodi per la consegna cellulare deve essere concepito. Qui di seguito riporto che le vie aeree di fornire una via sicura per il trapianto di cellule staminali per i polmoni.

Tracheotomia: Un metodo per il trapianto di cellule staminali al polmone

Instillazioni intratracheale soluti consegnare direttamente nei polmoni. Questa procedura obiettivi la consegna del instillate nelle regioni distali del polmone, ed è quindi spesso incorporati in studi volti a studiare alveoli. Forniamo un protocollo dettagliato di sopravvivenza per l'esecuzione di instillazioni intratracheale nei topi.

Diretta instillazione tracheale di soluti in polmone mouse

Abbiamo sviluppato un nuovo approccio chirurgico per somministrazione endotracheale di agenti bioattivi nel feto mouse. Il percorso di consegna è più efficiente in termini di orientamento dei polmoni fetali del mouse rispetto al comunemente usato intra-amniotico iniezione. Questa procedura deve momento non è stata descritta in un modello murino.

Un nuovo approccio chirurgico per somministrazione endotracheale di agenti bioattivi in ​​un modello murino fetale

Questo video dimostra l'instaurazione di un'infezione polmonare in un modello di roditore immunocompetente tramite intubazione e installazione di sospensioni batteriche nei lobi polmonari. Questo modello consente studi di efficacia antibatterica in animali immunocompetenti.

Instillazione intrabronchiale di Streptococcus pneumoniae in modelli di roditori immunocompetenti

Un metodo per la fornitura di cellule staminali neurali, adattabile per l'iniezione di soluzioni o sospensioni, attraverso l'arteria carotide comune (mouse) o l'arteria carotide esterna (ratto) dopo ictus ischemico è segnalato. Le cellule iniettate sono distribuite ampiamente in tutto il parenchyma cerebrale e possono essere rilevate fino a 30 d dopo la consegna.

Consegna intra-arteriosa di cellule staminali neurali al cervello di ratto e topo: applicazione all'ischemia cerebrale

Questa tecnica di instillare farmaci direttamente nella trachea dei roditori neonatali è importante per studiare l'impatto di farmaci o biologici somministrati localmente sulle malattie polmonari neonatali. Inoltre, questo metodo può essere utilizzato anche per indurre lesioni polmonari in modelli animali.

Un metodo minimamente invasivo per l'instillazione intratracheale di farmaci nei roditori neonatali per il trattamento delle malattie polmonari

Questo metodo elimina qualsiasi invasione importante durante le iniezioni cellulari causata dalla soluzione di sospensione cellulare.

Un nuovo metodo di iniezione cellulare con un'invasione minima

Un metodo per l'isolamento di cellule staminali neurali e cellule progenitrici di oligodendrociti dal cervello di ratti vivi è presentato qui in dettaglio sperimentale. Permette di raccogliere più cellule dagli stessi animali senza comprometterne il benessere.

Il metodo di "mungitura del cervello" per l'isolamento di cellule staminali neurali e cellule progenitrici di oligodendrociti da ratti vivi

Questo lavoro presenta un modello animale di fibrosi indotta da transizione endoteliale a mesenchimale, come si vede nei difetti cardiaci congeniti come la stenosi aortica critica o la sindrome del cuore sinistro ipoplasico, che consente una valutazione istologica dettagliata del tessuto, l'identificazione delle vie di segnalazione regolatorie e la verifica delle opzioni di trattamento.

Un modello di trapianto di cuore di ratto eterotopico neonatale per lo studio della transizione da endoteliale a mesenchimale

La terapia cellulare offre un intervento promettente per la fibrosi polmonare utilizzando cellule progenitrici per riparare i tessuti danneggiati e migliorare la funzione polmonare. Poiché l'imaging svolge un ruolo fondamentale nel tracciamento dell'integrazione cellulare, in questo articolo descriviamo il tracciamento in vivo guidato dall'imaging con particelle magnetiche della terapia cellulare per la fibrosi polmonare in un modello murino.

Tracciamento in vivo guidato da immagini di cellule progenitrici epiteliali polmonari distali trapiantate per la fibrosi polmonare mediante imaging con particelle magnetiche

Impara l'instillazione intratracheale di cellule staminali mesenchimali nei ratti neonatali per valutare l'efficacia terapeutica polmonare. Questo metodo offre un approccio mirato e conveniente per studiare nuove terapie neonatali.

Instillazione intratracheale delle cellule staminali nei " ratti neooatali

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