Name: Isolamento dellistono dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione della spettrometria di massa dallalto verso il basso dei potenziali marcatori epigenetici (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-04T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 10 s
Description: Scopri l'isolamento degli istoni dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione epigenetica mediante spettrometria di massa. Questo metodo consente di identificare marcatori di resistenza alla siccità nelle colture.

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Ringraziamo Ronald Moore e Thomas Fillmore per aver aiutato con gli esperimenti di spettrometria di massa e Matthew Monroe per la deposizione dei dati. Questa ricerca è stata finanziata da sovvenzioni del Dipartimento dell'Energia degli Stati Uniti (DOE) Biological and Environmental Research attraverso il progetto Epigenetic Control of Drought Response in Sorghum (EPICON) con il numero di premio DE-SC0014081, del Dipartimento dell'Agricoltura degli Stati Uniti (USDA; CRIS 2030-21430-008-00D), e attraverso il Joint BioEnergy Institute (JBEI), una struttura sponsorizzata da DOE (Contract DE-AC02-05CH11231) tra Lawrence Berkeley National Laboratory e DOE. La ricerca è stata eseguita utilizzando l'Environmental Molecular Sciences Laboratory (EMSL) (grid.436923.9), un DOE Office of Science User Facility sponsorizzato dall'Office of Biological and Environmental Research.

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Il protocollo presentato descrive come estrarre gli istoni da campioni di foglie di sorgo (o più in generale foglie vegetali). La resa media dell'istone dovrebbe essere di 2-20 μg per 4-5 g di materiale fogliare di sorgo. I materiali sono sufficientemente puri per l'analisi dell'istone a valle da parte di LC-MS (per lo più istoni con contaminazione da proteine ribosomiali ~20%). È possibile ottenere una resa inferiore a causa di variazioni del campione o potenziali errori di gestione/guasti in tutto il protocollo. Manten...

Si prevede che la crescente gravità e frequenza della siccità influirà sulla produttività delle colturecerealicole 1,2. Il sorgo è una coltura alimentare ed energetica di cereali nota per la sua eccezionale capacità di resistere alle condizioni di limitazionedell'acqua 3,4. Stiamo perseguendo la comprensione meccanicistica dell'interazione tra stress da siccità, sviluppo delle piante ed epigenetica delle piante disorgo [Sorgo bicolore (L.) Moench]. Il nostro precedente lavoro ha dimostrato forti connessioni tra microbioma vegetale e rizosfera nell'acclimatazione della siccità e risposte alivello molecolare 5,6,7. Questa ricerca spianerà la strada all'utilizzo dell'ingegneria epigenetica per adattare le colture ai futuri scenari climatici. Come parte degli sforzi per comprendere l'epigenetica, miriamo a studiare marcatori proteici che hanno un impatto sull'espressione genica all'interno dell'organismo vegetale.
Gli istoni appartengono a una famiglia altamente conservata di proteine negli eucarioti che confezionano il DNA in nucleosomi come unità fondamentali di cromatina. Le modifiche post-tras traslazione (PTM) degli istoni sono regolate dinamicamente per controllare la struttura della cromatina e influenzare l'espressione genica. Come altri fattori epigenetici, tra cui la metilazione del DNA, le PTM istono svolgono ruoli importanti in molti processibiologici 8,9. Test a base di anticorpi come le macchie occidentali sono stati ampiamente utilizzati per identificare e quantificare le PTT istonali. Inoltre, l'interazione delle PTM istonali e del DNA può essere efficacemente sondata dall'immunoprecipitazione della cromatina - sequenziamento (ChIP-seq)10. In ChIP-seq, la cromatina con PTM istonale mirato specifico è arricchita da anticorpi contro quel PTM specifico. Quindi, i frammenti di DNA possono essere rilasciati dalla cromatina arricchita e sequenziati. Vengono rivelate regioni di geni che interagiscono con la PTM istono mirata. Tuttavia, tutti questi esperimenti si basano fortemente su anticorpi di alta qualità. Per alcune varianti/omologhi istoni o combinazioni di PTM, lo sviluppo di anticorpi robusti può essere estremamente impegnativo (specialmente per più PTM). Inoltre, gli anticorpi possono essere sviluppati solo se è noto il PTM istonale mirato. 11 Pertanto, sono necessari metodi alternativi per una profilazione globale non mirata delle PTM istone.
La spettrometria di massa (SM) è un metodo complementare per caratterizzare le PTT istonali, comprese le PTM sconosciute per lequali non sono disponibili anticorpi 11,12. Il consolidato flusso di lavoro MS "bottom-up" utilizza le proteasi per digerire le proteine in piccoli peptidi prima della separazione della cromatografia liquida (LC) e del rilevamento della SM. Poiché gli istoni hanno un gran numero di residui di base (lisina e arginina), la digestione della tripsina (proteasi specifica della lisina e dell'arginina) nel flusso di lavoro standard dal basso verso l'alto taglia le proteine in peptidi molto brevi. I peptidi brevi sono tecnicamente difficili da analizzare per standard LC-MS e non conservano le informazioni sulla connettività e la stechiometria di più PTM. L'uso di altri enzimi o etichettatura chimica per bloccare le lisina genera peptidi più lunghi che sono più adatti per la caratterizzazione delle PTT istono13,14.
In alternativa, il passaggio di digestione può essere completamente omesso. In questo approccio "top-down", gli ioni proteici intatti vengono introdotti nella SM mediante ionizzazione elettrospray (ESI) dopo la separazione LC online, producendo ioni delle proteoforme istone intatte. Inoltre, gli ioni (cioè le proteoforme) di interesse possono essere isolati e frammentati nello spettrometro di massa per produrre gli ioni di sequenza per l'identificazione e la localizzazione della PTM. Pertanto, l'MS dall'alto verso il basso ha il vantaggio di preservare le informazioni a livello di proteoforma e acquisire la connettività di più PTM e troncazioni terminali sullo stesso proteoforma15,16. Gli esperimenti dall'alto verso il basso possono anche fornire informazioni quantitative e offrire approfondimenti sui biomarcatori al livello proteicointatto 17. Nel presente documento, descriviamo un protocollo per estrarre l'istono dalla foglia di sorgo e analizzare gli istoni intatti dall'alto verso il basso LC-MS.
I dati di esempio riportati nella figura 1 e nella figura 2 provengono dalla foglia di sorgo raccolta alla settimana 2 dopo la semina. Sebbene sia prevista una variazione della resa, questo protocollo è generalmente indipendente da specifiche condizioni di campionamento. Lo stesso protocollo è stato utilizzato con successo per il tessuto fogliare vegetale di sorgo raccolto da 2, 3, 5, 8, 9 e 10 settimane dopo la semina.

<table><tbody><tr><td>Acetonitrile</td><td>Fisher Chemical</td><td>A955-4L</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitolo (DTT)</td><td>Sigma</td><td>43815-5G</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, 500mM Soluzione, pH 8.0</td><td>EMD Millipore Corp</td><td>324504-500mL</td><td></td></tr><tr><td>Acido formico</td><td>Thermo Scientific</td><td>28905</td><td></td></tr><tr><td>Guanidina cloridrato</td><td>Sigma</td><td>G3272-100G</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma</td><td>M8266-100G</td><td></td></tr><tr><td>Fosfato di potassio, bibasico</td><td>Sigma</td><td>P3786-100G</td><td></td></tr><tr><td>Cocktail di inibitori della proteasi, compresse complete</td><td>Roche</td><td>5892791001</td><td></td></tr><tr><td>Butirrato di sodio</td><td>Sigma</td><td>303410-5G</td><td>Utilizzato per l'inibitore dell'istone deacetilasi</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio (NaCl)</td><td>Sigma</td><td>S1888</td><td></td></tr><tr><td>Sodio Fluoruro</td><td>Sigma</td><td>S7020-100G</td><td>Utilizzato per l'inibitore della fosfatasi</td></tr><tr><td>Ortovanadato di sodio</td><td>Sigma</td><td>450243-10G</td><td>Utilizzato per l'inibitore della fosfatasi</td></tr><tr><td>Saccarosio</td><td>Sigma</td><td>S7903-5KG</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP153-500 g</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>T9284-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Resina a scambio cationico debole, maglia 100-200 analitico (BioRex70)</td><td>Bio-Rad</td><td>142-5842</td><td></td></tr><tr><td>Monouso</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Colonna cromatografica (Bio-Spin)</td><td>BIO-RAD</td><td>732-6008</td><td></td></tr><tr><td>Tessuto filtrante Mesh 100</td><td>Millipore Sigma</td><td>NY1H09000</td><td>Fa parte del kit Sigma (catalogo # CELLYTPN1) per l'estrazione di nuclei vegetali. È possibile utilizzare filtri simili con la stessa dimensione della maglia.</td></tr><tr><td>Puntali per micropipette (P20, P200, P1000)</td><td>Bilancia Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>, 50mL/15mL, Centrifuga, Provetta conica</td><td>Genesee Scientific</td><td>28-103</td><td></td></tr><tr><td>, Microcentrifuga, 1,5/2 mL</td><td>Sigma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bilancia analitica</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-912-401</td><td></td></tr><tr><td>Becher ( 50 ml &ndash; 2L)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microcentrifuga con raffreddamento</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-690-006</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Centrifuga a secchiello oscillante con raffreddamento</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vortex</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-728-002</td><td></td></tr><tr><td>Sonicatore a bagnomaria</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-336-120</td><td></td></tr></tbody></table>

isolamento dell'istono dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione della spettrometria di massa dall'alto verso il basso dei potenziali marcatori epigenetici

Isolation of Histone from Sorghum Leaf Tissue for Top Down Mass Spectrometry Profiling of Potential Epigenetic Markers

Gli istoni appartengono a una famiglia di proteine altamente conservate negli eucarioti. Impacchettano il DNA in nucleosomi come unità funzionali di cromatina. Le modifiche post-trascizionali (PTM) degli istoni, che sono altamente dinamiche e possono essere aggiunte o rimosse dagli enzimi, svolgono un ruolo fondamentale nella regolazione dell'espressione genica. Nelle piante, i fattori epigenetici, comprese le PTT istono, sono correlati alle loro risposte adattive all'ambiente. Comprendere i meccanismi molecolari del controllo epigenetico può portare opportunità senza precedenti per soluzioni innovative di bioingegneria. Qui descriviamo un protocollo per isolare i nuclei e purificare gli istoni dal tessuto fogliare di sorgo. Gli istone estratti possono essere analizzati nelle loro forme intatte mediante spettrometria di massa dall'alto verso il basso (MS) accoppiata con cromatografia liquida in fase inversa (RP) online (LC). Le combinazioni e la stechiometria di più PTM sullo stesso proteoforma istono possono essere facilmente identificate. Inoltre, il ritaglio della coda istonale può essere rilevato utilizzando il flusso di lavoro LC-MS dall'alto verso il basso, producendo così il profilo PTM globale degli istoni principali (H4, H2A, H2B, H3). Abbiamo applicato questo protocollo in precedenza per profilare le PLOM istone dal tessuto fogliare di sorgo raccolte da uno studio sul campo su larga scala, volto a identificare marcatori epigenetici di resistenza alla siccità. Il protocollo potrebbe potenzialmente essere adattato e ottimizzato per il sequenziamento dell'immunoprecipitazione della cromatina (ChIP-seq), o per lo studio delle PTM istonali in piante simili.

Seguendo il protocollo, gli istoni possono essere estratti e identificati utilizzando l'analisi LC-MS. I dati grezzi e i risultati elaborati sono disponibili presso MassIVE (https://massive.ucsd.edu/) tramite l'adesione: MSV000085770. Sulla base dei risultati TopPIC del campione rappresentativo (disponibile anche da MassIVE), abbiamo identificato 303 proteoforme istone (106 proteoforme H2A, 72 H2B, 103 H3 e 22 proteoforme H4). Sono state rilevate anche proteoforme ribosomiali co-purificate, tipicamente eluizzanti all'ini...

Il protocollo è stato sviluppato per estrarre efficacemente istoni intatti dai materiali fogliari di sorgo per la profilazione di modifiche post-tras trasunzionali istone che possono servire come potenziali marcatori epigenetici per aiutare le colture resistenti alla siccità ingegneristica.

Isolamento dell'istono dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione della spettrometria di massa dall'alto verso il basso dei potenziali marcatori epigenetici

Histones belong to a family of highly conserved proteins in eukaryotes. They pack DNA into nucleosomes as functional units of chromatin. ...

Il nostro protocollo scopre marcatori epigenetici per lo sviluppo di piante di sorgo e la resistenza alla siccità. Tale comprensione molecolare aiuterà a sviluppare soluzioni migliori per adattare le colture ai climi estremi in futuro. Questo protocollo genera istoni ad alta purezza dal tessuto fogliare di sorgo adatto per la profilazione non mirata di modifiche post-tras tras trasutzionali mediante spettrometria di massa.A dimostrare la procedura saranno Shadan Abdali e Tanya Winkler, research associate post-bachelor di EMSL. Per iniziare, macinare alcune foglie di sorgo con azoto liquido e conservarle in un tubo di centrifuga da 50 millilitri a meno 80 gradi Celsius. Utilizzare circa quattro grammi della polvere fogliare per l'analisi istono di ciascun campione.Preparare i buffer di estrazione 1, 2A e 2B come descritto nel manoscritto testuale e aggiungere una compressa di inibitore della proteasi al tampone di estrazione uno per effettuare una concentrazione finale di 0,2X. Quindi aggiungere 20 millilitri del tampone di estrazione preparato uno alla polvere di foglie macinate e mescolare delicatamente o vortice per 10 minuti. Utilizzando la rete 100, sciacquare il materiale filtrato due volte con due millilitri di tampone di estrazione uno ogni volta.Successivamente, centrifugare il filtrato a 3.000 volte G per 10 minuti a quattro gradi Celsius in un rotore a secchio oscillante per pellettizzare i detriti cellulari e i grandi organelli subcellulari. Contemporaneamente, preparare il buffer di estrazione 2A aggiungendo l'inibitore della proteasi a una concentrazione finale di 0,4X. Scartare il supernatante senza disturbare il pellet.Quindi rimostrare il pellet in cinque millilitri del tampone di estrazione preparato 2A. Incubarlo sul ghiaccio per 10 minuti con miscelazione delicata. Centrifugare la soluzione a 2.100 volte G per 15 minuti a quattro gradi Celsius in un rotore a secchio oscillante per pellettare detriti e nuclei.Decantare attentamente il supernatante senza disturbare il pellet. Preparare il buffer di estrazione 2B aggiungendo gli inibitori della proteasi a una concentrazione finale di 1X. Aggiungere cinque millilitri di questo tampone preparato al pellet ottenuto dopo la centrifugazione.Centrifuga a 2.100 volte G per 15 minuti a quattro gradi Celsius nel rotore della benna oscillante per pellet detriti e nuclei. Contemporaneamente, preparare il tampone di lysis dei nuclei aggiungendo una compressa inibitore della proteasi. Decantare con cura il supernatante senza disturbare il pellet e rimescolare il pellet in 250 microlitri del tampone dilisi.Vortice la soluzione per 15 secondi alla massima velocità per omogeneizzarla e rimorsi il materiale. Quindi sonicalo per cinque minuti a quattro gradi Celsius e conservalo a meno 80 gradi Celsius. Scongelare il campione di nuclei congelati e aggiungere 750 microlitri di tampone di guanidina al 5%.Quindi sonicare per 15 minuti a quattro gradi Celsius. Trasferire il campione su un tubo a due millilitri e ruotarlo a 10.000 volte G per 10 minuti a quattro gradi Celsius. Contemporaneamente, preparare una colonna di cromatografia a scambio ionico risciacquarla con due millilitri di acetonitrile e quattro millilitri di acqua per ridurre al minimo la contaminazione sulla superficie.Caricare circa 200-300 microlitri di resina debole di scambio di cationi sulla colonna cromatografica e lasciare depositare la resina. Lavare la resina quattro volte con tampone di guanidina e posizionare il tubo e la colonna sul ghiaccio. Mettere la colonna su un tubo di raccolta di due millilitri e caricare lentamente il supernatante dal campione preparato sul letto di resina senza interrompere la resina.Mentre la soluzione scorre, caricare l'eluente verso la parte superiore della colonna da sei a otto volte per consentire il massimo legame con la resina. Quindi caricare due millilitri di tampone di guanidina al 5% per lavare le proteine non istonici dalla colonna. Eluire le proteine istonici con un millilitro di tampone di guanidina al 5% e raccogliere l'eluente.Pulire un filtro di spin cutoff da tre kilodalton con 500 microlitri di solvente di lavaggio, quindi disalt l'eluente rimanente utilizzando il filtro di rotazione pre-pulito. Le principali proteine istono sono state osservate in regioni specifiche della mappa caratteristica LC-MS che indicano il successo dell'esperimento. Questa mappa rappresentativa mostra istoni intatti a figura intera in scatole tratteggiate.La mappa delle caratteristiche LC-MS dei proteoformi H2B e 16 kilodalton H2A mostra che entrambi hanno più omologhi con sequenze simili come notato dai numeri di sessione del prodotto unici. Si può vedere un altro gruppo di istoni H2A senza le code estese. L'acetilazione N-terminale, le acetilazioni di lisina aggiuntive e le ossidazioni di meionina nelle proteine istono H4 possono essere osservate esaminando le differenze di massa nella mappa caratteristica LC-MS mostrata qui.Sono state identificate due sequenze proteiche per le proteine istono H3, H3.3 e H3.2. La frammentazione della dissociazione da trasferimento elettronico è stata utilizzata per generare lo spettro di frammentazione del proteoforma H3.2 identificato. Gli ioni precursori e gli spettri Ms1 precedenti e successivi sono mostrati qui con i loro picchi isotopici abbinati evidenziati in viola.Le modifiche post-traslazione possono essere localizzate utilizzando la mappa di copertura della sequenza. Confrontando l'abbondanza relativa delle proteoforme, sono stati scoperti cambiamenti di proteoforme istono troncate specifiche delle condizioni del campione. Il troncamento C-terminale dell'H4 è stato osservato solo nelle settimane tre e nove per alcuni campioni.Per H3.2, le proteoforme troncate N-terminale erano generalmente più abbondanti nella settimana 10. Al contrario, il terminale C troncato H3.2 è stato visto nei punti di tempo precedenti. Le proteoforme troncate H4 C-terminale erano significativamente più abbondanti in BTx642 che in RTx430.Quando si tenta questo protocollo, prestare molta attenzione ai colori del supernatante e del pellet. Il cambiamento di colore aiuta a identificare potenziali problemi nella macinazione o lisi del cloroplasto. Speriamo che questo solido protocollo per l'isolamento istono dalle foglie di sorgo consenta la ricerca epigenetica per altre piante simili.

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Un approccio affidabile e utile per rilevare modificazioni degli istoni sui geni impianto specifico è descritto. L'approccio combina immunoprecipitazione della cromatina (ChIP) e real-time PCR quantitativa. Esso consente il rilevamento di modifiche degli istoni su specifici geni con un ruolo in diversi processi fisiologici.

Rilevamento di modifiche Histone in foglie delle piante

Combinando nativa e reticolazione cromatina immunoprecipitazione con alta risoluzione di Spettrometria di Massa, l'approccio ChroP permette di sezionare il composito dell'architettura proteomica delle modificazioni degli istoni, le varianti e le proteine ​​non istoniche Synergizing a domini di cromatina funzionalmente distinte.

L&#39;approccio ChroP Combina ChIP e Spettrometria di Massa a sezionare Locus-specifiche proteomica Paesaggi della cromatina

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro completamente integrato per la caratterizzazione di istone modificazioni post-traslazionali utilizzando la spettrometria di massa (MS). Il flusso di lavoro prevede la purificazione istone da colture di cellule o tessuti, istone derivatizzazione e la digestione, analisi MS utilizzando nano-flusso cromatografia liquida e le istruzioni per l'analisi dei dati. Il protocollo è stato progettato per il completamento entro 2 - 3 giorni.

Flusso di lavoro completo per l&#39;analisi dell&#39;istone modificazioni post-traduzionali Utilizzando Bottom-up Spettrometria di Massa: Da istone estrazione all&#39;analisi dei dati

Qui, presentiamo un protocollo per analizzare la distribuzione a livello di genoma delle modifiche istoniche, che può identificare nuovi geni bersaglio nella patogenesi di M. oryzae e altri funghi filamentosi.

Analisi a livello di genoma della distribuzione delle modificazioni isoniche utilizzando il metodo di sequenziamento dell'immunoprecipitazione della cromatina in Magnaporthe oryzae

La scissione sotto bersagli e tagmentazione (CUT&amp;Tag) è un'efficiente strategia di profilazione epigenomica della cromatina. Questo protocollo presenta una raffinata strategia CUT&amp;Tag per la profilazione delle modificazioni istoniche negli impianti.

Profilazione della modifica H3K4me3 negli impianti utilizzando la scissione sotto target e tagmentazione

Un flusso di lavoro analitico basato sulla cromatografia liquida, sulla spettrometria di mobilità ionica intrappolata e sulla spettrometria di massa a tempo di volo (LC-TIMS-TOF MS/MS) per un'analisi "bottom-up" ad alta affidabilità e altamente riproducibile delle modificazioni istoniche e l'identificazione in base ai parametri principali (tempo di ritenzione [RT], sezione d'urto di collisione [CCS] e rapporto massa-carica [m/z] accurato).

Screening della modificazione degli istoni mediante cromatografia liquida, spettrometria di mobilità ionica intrappolata e spettrometria di massa a tempo di volo

Questo protocollo consente un'estrazione efficiente degli istoni da vari campioni clinici per una successiva analisi di modifiche post-traduzionali tramite LC-MS/MS. Facilitando una rilevazione robusta delle principali modifiche agli istoni, rappresenta uno strumento prezioso per un profiling epigenetico completo in grandi coorti cliniche.

Estrazione degli istoni da campioni clinici per profilazione epigenetica tramite spettrometria di massa

Qui presentiamo un protocollo per automatizzare l'analisi post-traduzionale delle modifiche degli istoni a singola cellula utilizzando una strategia di marcatura isotopica a due plex e la digestione ArgC. Questo flusso di lavoro consente un profiling quantitativo, riproducibile e ad alta sensibilità dell'eterogeneità della cromatina e delle risposte epigenetiche a risoluzione di singola cellula.

Preparazione automatica del campione per l'analisi multiplexata delle modifiche post-traduzionali delle istane a singola (sc-hPTM2)

Un protocollo per profili metabolici di campioni biologici da elettroforesi capillare-spettrometria di massa con un design di interfaccia punta porosa guaina è presentato.

Guaina elettroforesi capillare-spettrometria di massa per metaboliche Profiling di campioni biologici

flessibilità conformazionale gioca un ruolo critico nella funzione delle proteine. Qui, si descrive l'utilizzo di spettrometria di massa elettrospray ionizzazione tempo risolto accoppiato a scambio idrogeno-deuterio per sondare i rapidi cambiamenti strutturali che guidano funzione di proteine ​​ordinate e disordinate.

Scambio risolta in tempo ionizzazione elettrospray idrogeno-deuterio Spettrometria di Massa per lo studio delle proteine ​​Struttura e dinamica

Scopri l'isolamento degli istoni dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione epigenetica mediante spettrometria di massa. Questo metodo consente di identificare marcatori di resistenza alla siccità nelle colture.

Isolamento dellistono dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione della spettrometria di massa dallalto verso il basso dei potenziali marcatori epigenetici (Video) | JoVE Journal

Isolamento dell'istono dal tessuto fogliare di sorgo per la profilazione della spettrometria di massa dall'alto verso il basso dei potenziali marcatori epigenetici

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