Name: Un semplice metodo di sessatura a secco per ottenere una sezione di resina di dimensioni intere e le sue applicazioni (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-01-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: Impara un semplice metodo di sezionamento a secco per ottenere sezioni di resina di dimensioni intere di semi. Questa tecnica con resina LR White permette di analizzare la morfologia di cellule, granuli di amido e corpi proteici nei semi di mais.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

I finanziamenti sono stati forniti dalla National Natural Science Foundation of China (32071927), dal Talent Project dell'Università di Yangzhou e dallo sviluppo del programma accademico prioritario degli istituti di istruzione superiore di Jiangsu.

1. Preparazione di sementi incorporate in resina (figura 1)
<ol><li>Fissare sei chicchi maturi di mais in 10 mL del 2,5% di glutaraldeide tamponata da fosfati (0,1 M, pH7,2) a 4 °C per 48 h. I ricercatori possono scegliere altre miscele fissive, concentrazioni fissive e condizioni di fissazione in base ai loro obiettivi di ricerca e tipi di tessuto.</li>
	<li>Esettare i chicchi e tagliarli longitudinalmente o trasversalmente a 2-3 mm di spessore utilizzando una lama affilata a doppia lato, e fissarli in 10 mL di glutaraldeide tamponata da fosfati al 2,5% (0,1 M, pH 7,2) di nuovo per 48 ore.</li>
	<li>Lavare i campioni tre volte con 10 mL di tampone fosfato da 0,1 M (pH 7,2) per 30 minuti ogni volta.</li>
	<li>Disidratare i campioni in gradi crescenti di soluzione acquosa di etanolo (10 mL) dal 30% al 50%, 70%, 90% una volta e 100% tre volte per 30 minuti ogni volta.</li>
	<li>Infiltrarsi nei campioni in gradi crescenti di 10 mL di soluzione di resina bianca LR diluita con etanolo dal 25% al 50%, 75% una volta e 100% due volte a 4 °C per 12 h ogni volta.</li>
	<li>Preparare i piedistalli per i campioni prima dell'incorporamento. Aggiungere 0,25 ml di resina bianca 100% LR in un tubo di centrifuga da 2 ml e polimerizzarlo a 60 °C per 48 ore.</li>
	<li>Aggiungere successivamente la resina LR White pura (0,5 mL) e il campione infiltrato nel tubo di centrifuga con un piedistallo. Raddrizzare i campioni con l'ago anatomico e polimerizzarli a 60 °C in forno per 48 ore.</li>
</ol>2. Sessatura a secco per la preparazione di una sezione di dimensioni intere(figura 1)
<ol><li>Eserti i chicchi incorporati dal tubo di centrifuga e tagliare la resina in eccesso intorno al campione usando una lama affilata.</li>
	<li>Bloccare il blocco di resina nel portacampioni dell'ultramicrotoma (EM UC7) e tagliare la resina superflua sulla superficie del campione e intorno al campione con una lama.</li>
	<li>Lucidare finemente la superficie del campione con un coltello di vetro fino a formare una sezione completa.</li>
	<li>Mettere un piccolo gancio di rame circa 2 mm sopra il bordo della lama prima di tagliare e tagliare il campione in una sezione di 2 μm. Il ruolo del gancio è quello di evitare il curling verso l'alto della sezione.</li>
	<li>Metti il gancio sotto la sezione per sostenerlo quando la sezione diventa lunga.</li>
	<li>Aggiungere 100 μL di acqua su uno scivolo non pretrattato e trasferire con cura la sezione completa e ininterrotta nell'acqua con le pinzette.</li>
	<li>Per levigare la sezione rugosa, scaldare e asciugare il campione sul tavolo appiattito a 50 °C durante la notte.<ol>
<li>Se la sezione si sbriciola o si strappa, prolungare il tempo per ogni infiltrazione di resina del campione da 12 h a 24 h o 48 h.</li>
		<li>Se la sezione ha alcune linee parallele al coltello, bloccare saldamente il blocco del campione. Se la sezione ha alcune linee verticali al coltello, si prega di utilizzare un nuovo coltello.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Colorazione e osservazione della sezione
NOTA: Al fine di osservare la struttura tissutale e la morfologia di cellule, granuli di amido e corpi proteici, macchiare le sezioni con macchie specifiche in base allo scopo della ricerca. Qui, usiamo il illuminante fluorescente 28, soluzione di iodio e Coomassie blu brillante R250 per macchiare le pareti cellulari, i granuli di amido e i corpi proteici, rispettivamente.
<ol><li>Per osservare la morfologia delle cellule, dentare la sezione con 40 mL dello 0,1% (w/v) illuminante fluorescente 28 soluzione acquosa in un barattolo di colorazione in vetro compatto da 70 mL a 45 °C per 10 minuti, quindi sciacquarlo con acqua corrente per 5 minuti. Osservare e fotografare la sezione al microscopio a fluorescenza dotato di telecamera CCD.</li>
	<li>Per osservare la morfologia dei granuli di amido, macchiare la sezione con 40 μL di soluzione di iodio (0,07% (w/v) I2 e 0,14% (w/v) KI nel 25% (v/v) glicerolo) per 1 min e coprire il campione contenente soluzione di iodio con un coverslip. Visualizza e fotografa il campione al microscopio luminoso dotato di una fotocamera CCD.</li>
	<li>Per osservare la morfologia dei corpi proteici, immergere la sezione con 40 mL di acido acetico 10% (v/v) in un barattolo di colorazione in vetro compatto da 70 mL per 10 min a 45 °C, e poi macchiarlo in 40 mL di 1% (w/v) Coomassie blu brillante R250 nel 25% (v/v) isopropanolo e 10% (v/v) acido acetico per 15 min a 45 °C. Lavare le sezioni macchiate con acqua corrente per 5 minuti e asciugarla. Osservare e fotografare la sezione al microscopio luminoso dotato di una telecamera CCD.</li>
</ol>4. Analisi quantitativa dei parametri morfologici
<ol><li>Elaborare e analizzare quantitativamente le immagini fotografate per area, asse lungo /corto e rotondità di cellule, granuli di amido e corpi proteici in diverse regioni di seme utilizzando software di analisi morfologica (software Image-Pro Plus 6.0) seguendo esattamente le procedure di Zhao etal.</li>
</ol>

<ol><li>Cai, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterogeneous+structure+and+spatial+distribution+in+endosperm+of+high-amylose+rice+starch+granules+with+different+morphologies%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Agricultural+and+Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Heterogeneous structure and spatial distribution in endosperm of high-amylose rice starch granules with different morphologies.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (41), 10143-10152 (2014).</li>
<li>He, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+defective+effect+of+starch+branching+enzyme+IIb+from+weak+to+strong+induces+the+formation+of+biphasic+starch+granules+in+amylose-extender+maize+endosperm%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">The defective effect of starch branching enzyme IIb from weak to strong induces the formation of biphasic starch granules in amylose-extender maize endosperm.</a> Plant Molecular Biology. 103 (3), 355-371 (2020).</li>
<li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gradually+decreasing+starch+branching+enzyme+expression+is+responsible+for+the+formation+of+heterogeneous+starch+granules%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Physiol%22%5BJournal%5D)">Gradually decreasing starch branching enzyme expression is responsible for the formation of heterogeneous starch granules.</a> Plant Physiol. 176 (1), 582-595 (2018).</li>
<li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dek35+encodes+a+PPR+protein+that+affects+cis-splicing+of+mitochondrial+nad4+intron+1+and+seed+development+in+maize%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Plant%22%5BJournal%5D)">Dek35 encodes a PPR protein that affects cis-splicing of mitochondrial nad4 intron 1 and seed development in maize.</a> Molecular Plant. 10 (3), 427-441 (2017).</li>
<li>Hu, Z. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+structure+characteristics+to+form+ultrahigh+oil+content+in+rapeseed%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Seed structure characteristics to form ultrahigh oil content in rapeseed.</a> PLoS One. 8 (4), 62099(2013).</li>
<li>Huang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maize+VKS1+regulates+mitosis+and+cytokinesis+during+early+endosperm+development%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Maize VKS1 regulates mitosis and cytokinesis during early endosperm development.</a> Plant Cell. 31 (6), 1238-1256 (2019).</li>
<li>Xu, A., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+comparison+and+applications+of+different+sections+in+investigating+the+microstructure+and+histochemistry+of+cereal+kernels%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Comprehensive comparison and applications of different sections in investigating the microstructure and histochemistry of cereal kernels.</a> Plant Methods. 16, 8(2020).</li>
<li>Zhao, L., Pan, T., Cai, C., Wang, J., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+whole+sections+of+mature+cereal+seeds+to+visualize+the+morphology+of+endosperm+cell+and+starch+and+the+distribution+of+storage+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cereal+Science%22%5BJournal%5D)">Application of whole sections of mature cereal seeds to visualize the morphology of endosperm cell and starch and the distribution of storage protein.</a> Journal of Cereal Science. 71, 19-27 (2016).</li>
<li>Zhao, L., Cai, C., Wei, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+image+processing+method+for+investigating+the+morphology+of+cereal+endosperm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+%26+Histochemistry%22%5BJournal%5D)">An image processing method for investigating the morphology of cereal endosperm cells.</a> Biotech & Histochemistry. 95 (4), 249-261 (2020).</li>
<li>Borisjuk, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Seed+architecture+shapes+embryo+metabolism+in+oilseed+rape%5BTitle%5D)+AND+%22The+Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Seed architecture shapes embryo metabolism in oilseed rape.</a> The Plant Cell. 25 (5), 1625-1640 (2013).</li>
<li>Lott, J. N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+bodies+in+seeds%5BTitle%5D)+AND+%22Nordic+Journal+of+Botany%22%5BJournal%5D)">Protein bodies in seeds.</a> Nordic Journal of Botany. 1, 421-432 (1981).</li>
<li>Jing, Y. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+endosperm+cells+and+starch+granules+in+common+wheat%5BTitle%5D)+AND+%22Cereal+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Development of endosperm cells and starch granules in common wheat.</a> Cereal Research Communications. 42 (3), 514-524 (2014).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Le sementi sono la risorsa rinnovabile più importante per alimenti, foraggi e materie prime industriali e sono ricche di materiali di stoccaggio come amido e proteine. La morfologia e la quantità delle cellule e il contenuto e la configurazione dei materiali di stoccaggio influiscono sul peso e sulla qualità deisemi 7,12. Sebbene la tecnologia di stereologia e analisi delle immagini possa misurare le dimensioni e la quantità delle cellule in una regione tissutale...

I semi vegetali contengono materiali di stoccaggio come amido e proteine e forniscono energia e nutrizione alle persone. La forma, le dimensioni e la quantità di materiali cellulari e di stoccaggio determinano il peso e la qualità dei semi. Le cellule e i materiali di stoccaggio in diverse regioni di seme hanno morfologie significativamente diverse, specialmente per alcune colture di cereali ad alto amilosio con inibizione dell'enzima di ramificazionedell'amidoIIb 1,2,3. Pertanto, è molto importante indagare le morfologie delle cellule e dei materiali di stoccaggio in diverse regioni di seme.
La sessatura della paraffina è un buon metodo per preparare la sezione di dimensioni di semi interi e può mostrare la struttura tissutale del seme e l'accumulo di materiale di stoccaggio indiverse regioni di seme 4,5,6. Tuttavia, le sezioni di paraffina di solito hanno uno spessore di 6-8 μm con bassa risoluzione; pertanto, è molto difficile osservare e analizzare quantitativamente la morfologia delle cellule e dei materiali di stoccaggio. Le sezioni in resina hanno solitamente uno spessore di 1-2 μm e un'alta risoluzione e sono molto adatte ad osservare e analizzare la morfologia dei materiali cellulari e distoccaggio 7. Tuttavia, il metodo di sessatura della resina di routine ha difficoltà a preparare l'intera sezione delle dimensioni di un seme, specialmente per i semi con un grande volume e un alto contenuto di amido; pertanto, non c'è modo di osservare e analizzare la morfologia delle cellule e dei materiali di stoccaggio in diverse regioni del seme. La resina LR White è una resina acrilica e presenta bassa viscosità e forte permeabilità, portando alle sue buone applicazioni nella preparazione della sezione di resina dei semi, in particolare per chicchi maturi di cereali ad alto volume e alto contenuto di amido. Inoltre, il campione incorporato nella resina LR White può essere colorato facilmente con molti coloranti chimici per mostrare chiaramente la morfologia delle cellule e dei materiali di stoccaggio al microscopio leggero o fluorescente7. Nel nostro precedente articolo, abbiamo segnalato un metodo di sessatura a secco per preparare le sezioni di cereali maturi delle dimensioni di semi interi incorporate nella resina LR White. Il metodo può anche preparare l'intera sezione delle dimensioni di semi di nocciolo di cereali in via di sviluppo, germinato e cotto8. La sezione ottenuta di dimensioni intere di semi ha molte applicazioni nell'osservazione e nell'analisi della micromorfologia, specialmente per visualizzare e analizzare quantitativamente chiaramente le differenze morfologiche delle cellule e dei materiali di stoccaggio in diverseregioni del seme 8,9.
Questa tecnica è appropriata per i ricercatori che vogliono osservare la microstruttura del tessuto e la forma e le dimensioni delle cellule, dei granuli di amido e dei corpi proteici in diverse regioni del seme utilizzando il microscopio leggero. Le immagini di sezioni di dimensioni intere macchiate appositamente per l'esposizione di cellule, granuli di amido e corpi proteici possono essere analizzate da software di analisi morfologica per misurare quantitativamente i parametri morfologici di cellule, granuli di amido e corpi proteici in diverse regioni di seme. Al fine di dimostrare l'applicabilità tecnica e le applicazioni di sezioni di dimensioni intere, abbiamo studiato i semi maturi di mais e colza e i chicchi di riso in via di sviluppo, germinati e cotti in questo studio. Il protocollo contiene quattro processi. Qui, usiamo il chicchi di mais maturo, che è il più difficile nella preparazione delle sezioni di dimensioni di semi interi a causa del grande volume e dell'alto contenuto di amido, come campione per mostrare i processi passo dopo passo.

<table><tbody><tr><td>Acido acetico</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A501931</tr><tr><td>Barattolo colorante in vetro compatto (5 posti)</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>E678013</tr><tr><td>Coomassie blu brillante R-250</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A100472</tr><tr><td>Vetrino coprioggetti</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F518211</tr><tr><td>Lama a doppia faccia</td><td>Gillette Shanghai Co., Ltd.</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>Etanolo assoluto</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500737</tr><tr><td>Tavolo di appiattimento</td><td>Leica</td><td>HI1220</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza</td><td>Olympus</td><td>BX60</td><td></td></tr><tr><td>Sbiancante fluorescente 28</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>910090</td><td></td></tr><tr><td>Strisce di vetro</td><td>Leica</td><td>840031</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di glutaraldeide al 50% in acqua</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600875</tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A600232</tr><tr><td>Iodine</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A500538</tr><tr>Fornitore verificato -<td>Isopropanolo</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A507048</tr><tr><td>Microscopio ottico</td><td>Olympus</td><td>BX53</td><td></td></tr><tr><td>LR Resina bianca</td><td>Agar Scientific</td><td>AGR1281A</td><td></td></tr><tr><td>Forno</td><td>Shanghai Jing Hong Laboratory Instrument Co., Ltd.</td><td>9023A</td><td></td></tr><tr><td>Ioduro di potassio</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td>Fornitore verificato A100512</td></tr><tr><td>Slide</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F518101</tr><tr><td>Pinzette</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>F519022</tr><tr><td>Sodio fosfato bibasico dodecaidrato</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A607793</tr><tr><td>Sodio fosfato monobasico diidrato</td><td>Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.</td><td></td><td></td>A502805</tr><tr><td>Ultramicrotomo</td><td>Leica</td><td>EM UC7</td><td></td></tr></tbody></table>

un semplice metodo di sessatura a secco per ottenere una sezione di resina di dimensioni intere e le sue applicazioni

A Simple Dry Sectioning Method for Obtaining Whole-Seed-Sized Resin Section and Its Applications

La morfologia, le dimensioni e la quantità di cellule, granuli di amido e corpi proteici nei semi determinano il peso e la qualità dei semi. Sono significativamente diversi tra le diverse regioni di seme. Per visualizzare chiaramente le morfologie delle cellule, dei granuli di amido e dei corpi proteici e analizzare quantitativamente i loro parametri morfologici con precisione, è necessaria la sezione delle dimensioni di un seme intero. Sebbene la sezione di paraffina delle dimensioni di un seme intero possa studiare l'accumulo di materiali di stoccaggio nei semi, è molto difficile analizzare quantitativamente i parametri morfologici delle cellule e dei materiali di stoccaggio a causa della bassa risoluzione della sezione spessa. La sottile sezione in resina ha un'alta risoluzione, ma il metodo di sessatura della resina di routine non è adatto a preparare l'intera sezione di semi maturi delle dimensioni di semi con un grande volume e un alto contenuto di amido. In questo studio, presentiamo un semplice metodo di sessatura a secco per preparare l'intera sezione di resina delle dimensioni di un seme. La tecnica può preparare le sezioni trasversali e longitudinali di semi interi di semi in via di sviluppo, maturi, germinati e cotti incorporati nella resina LR White, anche per semi di grandi dimensioni ad alto contenuto di amido. La sezione di dimensioni di semi interi può essere macchiata con illuminante fluorescente 28, iodio e Coomassie blu brillante R250 per mostrare specificamente la morfologia di cellule, granuli di amido e corpi proteici chiaramente, rispettivamente. L'immagine ottenuta può anche essere analizzata quantitativamente per mostrare i parametri morfologici di cellule, granuli di amido e corpi proteici in diverse regioni di seme.

Semplice metodo di sessatura a secco per ottenere una sezione di dimensioni di semi interi Stabiliamo un semplice metodo di sessatura a secco per preparare una sezione di semi di dimensioni intere incorporata nella resina LR-bianca (Figura 1). Il metodo è in grado di preparare sezioni trasversali e longitudinali di dimensioni intere con spessore di 2 μm(Figura 2-5, Figura supplementare 1-4). Ad e...

Questa tecnica consente la preparazione rapida e semplice di una sezione di resina delle dimensioni di semi interi per l'osservazione e l'analisi di cellule, granuli di amido e corpi proteici in diverse regioni del seme.

Un semplice metodo di sessatura a secco per ottenere una sezione di resina di dimensioni intere e le sue applicazioni

The morphology, size and quantity of cells, starch granules&#160;and protein bodies in seed determine the weight and quality of seed. They are ...

La scienza morfologica e la qualità delle cellule, dei granuli di amido e dei corpi proteici nel nocciolo determinano il peso e la qualità dei semi. In questo studio, presentiamo come una semplice popolazione di un intero nocciolo incorporato nella resina LR White e stabiliamo un semplice metodo di aspirazione a secco di interi chicchi. Scegliamo la resina LR White come mezzo incorporato per due motivi principali.In primo luogo, è bassa viscosità e forte permeabilità, portando alle sue buone applicazioni nella preparazione di queste porsi sezioni di semi, specialmente per i chicchi maturi di cereali con un grande volume e un alto contenuto di amido. In secondo luogo, il campione incorporato nella resina LR White può essere colorato facilmente con molti coloranti chimici per mostrare chiaramente la morfologia dei campioni alla luce con microscopio fluorescente. Le sezioni preparate possono essere specificamente macchiate per mostrare le cellule, i granuli di amido e i corpi proteici chiaramente in comparsa di tutto il nocciolo, e i parametri morfologici possono anche essere analizzati quantitativamente.Il metodo contiene studi. Qui, usiamo chicchi di mais maturi con volume maggiore e alto contenuto di amido come campione per mostrare i processi passo dopo passo. Per iniziare, aggancia i kernel in una semplice bottiglia.Aggiungere circa 10 millimetri di glutaraldeide tamponata con fosfato al 2,5%. un altro pH 7.2 e posizionarlo a 4 gradi centigradi per 48 ore per ripararli entrambi. Quindi eserti questi chicchi e tagliarli longitudinalmente o trasversalmente, con uno spessore da due a tre millimetri.Hai bisogno di una lama affilata a doppia lato. E aggiustarli per altre 48 ore. Quindi, lavare i campioni tre volte con circa 10 millimetri, quindi tampone fosfato da 0,1 M, pH 7,2 per 30 minuti ogni volta.Per idratare i campioni passo dopo passo, immergerli in circa 10 millimetri di soluzione acquosa al 30% di etanolo per 30 minuti prima e immergerli successivamente in 10 millimetri, quindi 50%70%90% una volta e 100%tre volte. Per infiltrarsi passo dopo passo in un campione, recuperarli successivamente con 10 millimetri di soluzione di resina LR White diluita con etanolo del 25%50%75% una volta e del 100% due volte a quattro gradi centigradi per 12 ore ogni volta. Prima di incorporare, dobbiamo preparare i piedistalli per i campioni.Aggiungere 250 microlitri di pura resina LR White in un tubo di centrifuga da due millimetri e polimerizzarlo a sei gradi centigradi per 48 ore. Successivamente, aggiungere successivamente 500 microlitri di pura resina LR White e infiltrarsi nel campione nel tubo di centrifuga con un piedistallo. Dopo aver raddrizzare i campioni con ago anatomico, mettere la resina a sei gradi centigradi in forno per 48 ore.Eseni quei chicchi incorporati dal tubo di centrifuga e ritaglia la resina in eccesso attorno a un campione usando una lama affilata. Posizionare il blocco di resina nel portacampioni di microtono e tagliare la resina superflua sulla superficie del campione e intorno al campione con la lama. Lucidare ulteriormente la superficie del campione infine con un coltello di vetro fino a formare una sezione completa.Ora è il momento di preparare questa straordinaria sezione con due micron di spessore. Prima dell'affettamento, mettere un piccolo rame parlava di due millimetri sopra il bordo della lama per evitare che una sezione si arricciasse. Man mano che la sezione si allunga, metti un parlato sotto la sezione per sostenerlo.Successivamente, aggiungere i 100 microlitri di acqua sullo scivolo non sporgente e trasferire con cura la sezione completa e ininterrotta in acqua con i trattati. Scaldarli e asciugarli a 50 gradi centigradi per levigare la sezione rugosa. Infine, due consigli importanti hanno bisogno di attenzione.In primo luogo, se la sezione si sbriciola o si strappa, prolungare il tempo per ogni infiltrazione di resina del campione. In secondo luogo, se la sezione ha alcune linee parallele al coltello, bloccare saldamente il blocco del campione. Se la sezione ha alcune linee verticali al coltello, si prega di utilizzare un nuovo coltello.Per osservare la morfologia di cellule, granuli di amido e corpi proteici, possiamo macchiare le sezioni rispettivamente con illuminante fluorescente 28, soluzione di iodio e R250 blu brillante Coomassie. Per altre macchie specifiche, basarlo sulla ricerca proposta. Qui usiamo la soluzione di iodio per macchiare i granuli di amido come esempio.Aggiungere 40 microlitri di soluzione di iodio per immergere la sezione. E tienilo nel barattolo per un minuto. E poi coprire il campione con un manicotto di copertura.E cancellare la soluzione di agente in eccesso intorno ad esso. Osservare e fotografare immediatamente il campione al microscopio illuminato dotato di telecamera CCTV. Possiamo elaborare e analizzare quantitativamente le immagini fotografate per area, accesso lungo o breve e rotondità di cellule, granuli di amido e corpi proteici in diverse regioni per kernel utilizzando un software di analisi morfologica.Stabiliamo un semplice metodo di sessatura a secco per trattenere intere sezioni di dimensioni del nocciolo in resina LR White. Il metodo può preparare sezioni trasversali e longitudinali dell'intero kernel con due micron. o esempi, l'intero seme maturo di colza può essere sessato trasversalmente e longitudinalmente.Anche le sezioni di un intero nocciolo maturo di mais con un volume maggiore possono essere preparate con successo. Inoltre, il kernel in via di sviluppo, il nocciolo cotto e il kernel germinato possono anche essere studiati usando il metodo. Le sezioni preparate di interi kernel hanno le seguenti applicazioni.In primo luogo, le sezioni dell'intero nocciolo possono essere utilizzate per osservare la struttura tissutale dei semi. Ad esempio, le sezioni di intero embrione di colza macchiato di safranina possono chiaramente mostrare che è radicale, iper casual, interno ed esterno Le sezioni di tutto il nocciolo possono essere utilizzate per osservare e analizzare la morfologia delle cellule. Ad esempio, le sezioni trasversali dell'intero embrione di colza sono macchiate con illuminante fluorescente 28 e gli oli cellulari sono macchiati specificamente.La micro-morfologia delle cellule in qualsiasi regione dell'intero embrione può essere visualizzata ad alto ingrandimento. I parametri morfologici delle cellule parenchimali, possono essere analizzati quantitativamente utilizzando software di analisi morfologica e mostrano alcune differenze in diverse regioni dell'embrione. Le sezioni trasversali di tutto il nocciolo di mais macchiate con illuminante fluorescente 28 possono anche esibirsi come morfologia delle cellule, e i parametri morfologici delle cellule sono diversi in diverse regioni di endosperma.sezioni di intero nocciolo possono essere macchiate con soluzione di iodio per mostrare la sua morfologia dei granuli di amido, ad esempio, le sezioni trasversali e longitudinali dei chicchi di mais macchiati di iodio possono mostrare chiaramente la sua morfologia dei granuli di amido. I granuli di amido in diverse regioni mostrano morfologia, dimensioni e quantità significativamente diverse nelle cellule dell'endosperma. Quindi l'analisi quantitativa dei parametri morfologici dei granuli di amido mostra che sono significativamente diversi in diverse regioni per l'endosperma.Le sezioni possono essere utilizzate per osservare e analizzare la morfologia dei corpi proteici. Ad esempio, la proteina dell'amido è macchiata di blu usando Coomassie blu brillante R250. La distribuzione spaziale della proteina dell'amido nell'intero embrione di colza può essere osservata in un basso ingrandimento, e la microstruttura può essere mostrata chiaramente ad alto ingrandimento.Inoltre, i numeri dell'indice di errore e i parametri morfologici dei corpi proteici nelle regioni scelte possono anche essere analizzati quantitativamente. Questa tecnica fornisce la prima e semplice preparazione di sezioni di resina di interi chicchi da semi in via di sviluppo e maturi. Le applicazioni sezionali nella struttura tissutale dell'intero kernel e quindi studiando la morfologia delle cellule, dei granuli di amido e dei corpi proteici in diverse regioni di un intero kernel.Le immagini acquisite possono essere analizzate quantitativamente per mostrare i parametri morfologici delle cellule, dei granuli di amido e dei corpi proteici e confrontarle ulteriormente in diverse regioni dell'intero kernel.

a-simple-dry-sectioning-method-for-obtaining-whole-seed-sized-resin

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Questo protocollo descrive come il tessuto cerebrale resina incorporati possono essere preparati e ripreso nelle tre dimensioni del fascio di ioni focalizzato, microscopio elettronico a scansione.

Ion Beam concentrato di fresatura e Microscopia Elettronica a Scansione di tessuto cerebrale

Qui presentiamo un protocollo che delinea come campionare esemplari di legno per la valutazione complessiva delle loro strutture di crescita. Vengono descritte le tecniche di preparazione e visualizzazione macro e microscopiche necessarie per generare set di dati anatomici e dendroecologici del legno ben replicati e altamente risolti.

Un punto di vista tecnico in Modern Tree-Ring Research - Come superare Dendroecological e legno anatomiche sfide

La cellulosa cristallina è un importante costituente della parete cellulare delle piante. Tuttavia, la sua quantificazione a una risoluzione cellulare è tecnicamente impegnativa.  Qui, riportiamo l'uso della tecnologia della luce polarizzata e delle sezioni trasversali delle radici per ottenere informazioni sulla composizione della parete cellulare con una risoluzione spazio-temporale.

Risoluzione Quantificazione alta del cristallino cellulosa accumulo in<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Roots a Monitor tessuto-specifica delle cellule parete Modifiche

Questo protocollo descrive un semplice metodo di sezionamento dei tessuti a taglio ibrido utile per i tessuti vegetali recalcitranti. Le sezioni di tessuto di buona qualità consentono studi anatomici e altri studi biologici, inclusa l'ibridazione in situ (ISH).

Hybrid-Cut: Un metodo sezionamento migliorato per Recalcitrante tessuti vegetali Campioni

Qui, forniamo un semplice, a basso costo, e in tempi rapidi protocollo fissiamo chimicamente tessuto cerebrale dei primati con acroleina fissativo, consentendo per la conservazione a lungo termine che è compatibile con pre-embedding immunoistochimica per microscopia elettronica a trasmissione.

Preparazione del tessuto cerebrale Primate non umano per la pre-embedding immunoistochimica e microscopia elettronica

Questo studio presenta procedure affidabili e facili per ottenere sezioni ultrasottili seriale di un microorganismo senza costose attrezzature in microscopia elettronica di trasmissione.

Un metodo per ottenere il seriale sezioni ultrasottili di microrganismi in microscopia elettronica a trasmissione

Qui, presentiamo un protocollo per migliorare la paraffina sezionamento. Questo metodo combina taglio e mobile utilizzando una semplice camera termostatica per evitare il processo di trasferimento richiesto secondo il metodo convenzionale. Di conseguenza, l'efficienza e il numero di sezioni della paraffina intatti furono notevolmente migliorate.

Il taglio e il metodo di galleggiamento per tessuto paraffina-incastonato per il sezionamento

Questo protocollo consente la preparazione di sezioni trasversali di semi di cereali (ad esempio, riso) per l'analisi della morfologia dell'endosperma e del granulo di amido utilizzando la microscopia elettronica a scansione.

Sezionamento trasversale di riso maturo (Oryza sativa L.) Kernel per la scansione di immagini al microscopio elettronico utilizzando le punte delle pipette come supporto per l'immobilizzazione

Questo protocollo mira a fornire procedure dettagliate per la raccolta, la fissazione e il mantenimento di campioni di piante micoeterotrofiche, applicando diverse tecniche di microscopia come la microscopia elettronica a scansione e trasmissione, la microscopia ottica, confocale e a fluorescenza per studiare la colonizzazione fungina nei tessuti delle piante e nei semi germinati con funghi micorrizici.

Tecniche di microscopia per l'interpretazione della colonizzazione fungina nei tessuti delle piante micoeterotrofiche e della germinazione simbiotica dei semi

La valutazione delle differenze anatomiche tra le sezioni trasversali delle foglie C3 e C4 aiuta a comprendere l'efficienza della fotosintesi. Questo articolo descrive la preparazione e l'esame delle sezioni trasversali delle foglie a mano libera e semisottili, insieme alle avvertenze nella preparazione per le specie di colture Triticum aestivum e Zea mays.

Valutazione dei tratti strutturali in Triticum aestivum e Zea mays per la differenziazione fotosintetica C3 e C4 utilizzando sezioni a mano libera e semisottili

Impara un semplice metodo di sezionamento a secco per ottenere sezioni di resina di dimensioni intere di semi. Questa tecnica con resina LR White permette di analizzare la morfologia di cellule, granuli di amido e corpi proteici nei semi di mais.

Un semplice metodo di sessatura a secco per ottenere una sezione di resina di dimensioni intere e le sue applicazioni

Esplora altri video