Name: Estrazione e dissezione del cervello di maiale addomesticato (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-04-25T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 16 s
Description: Impara l'estrazione e la dissezione del cervello di maiale per studi di neuroanatomia comparata. Questo protocollo dettagliato permette di isolare regioni cerebrali specifiche preservando l'integrità tissutale per analisi successive.

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Gli autori vorrebbero ringraziare Jim Knoblauch e Martin-Booth Hodges del College of Agricultural, Consumer and Environmental Sciences Information Technology and Communication Services per la loro esperienza nelle riprese, nella registrazione e nell'editing di audio e video.

Le procedure riguardanti materie animali sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università dell'Illinois a Urbana-Champaign
NOTA: Prima dell'eutanasia, il maiale è stato anestetizzato mediante iniezione intramuscolare con una combinazione di telazolo:ketamina:xiazina (50,0 mg di tiletamina HCl più 50,0 mg di zolazepam HCl ricostituiti con 2,50 mL di ketamina HCl (100 g/L) e 2,50 mL di xiloazina (100 g/L) e somministrati a 0,06 mg/kg di BW). Una volta anestetizzato, il maiale è stato eutanasiato mediante somministrazione intracardiaca di pentobarbital di sodio (390 mg/mL somministrato a 1 mL/5 kg pc). Per la dissezione cerebrale, si raccomanda di scegliere il metodo di eutanasia in base alla procedura analitica desiderata del tessuto. Il metodo di eutanasia dovrebbe causare il meno danno possibile al cervello.
1. Estrazione del cervello di maiale
<ol><li>A seguito dell'eutanasia umana, decapitare il maiale tagliando sopra la nuca, tra la prima e la seconda vertebra (rispettivamente atlante e asse).</li>
	<li>Fissare la testa in una morsa del banco immobilizzata modificata per includere punte. Assicurarsi che la testa sia completamente immobilizzata prima di procedere.<ol>
<li>Usando un bisturi, fai un taglio sagittale lungo la linea mediana del cranio che continua fino alla parte posteriore della testa.</li>
		<li>Fare un secondo taglio (trasversale) sul posteriore della testa.</li>
		<li>Fare un terzo taglio (trasversale) sull'estremità posteriore del muso e in linea con gli occhi. Tagliare la pelle il più lontano possibile dal cranio per garantire un facile accesso al cranio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando una sega ossea, fare due tagli anteriore-posteriore laterali alla linea mediana, che si estendono dagli occhi all'apice della curvatura del cranio. Smussare la sega verso la linea mediana e tagliare abbastanza in profondità da penetrare nel cranio.<ol>
<li>Ripeti il processo di cui sopra sui lati perpendicolari, creando una "finestra" rettangolare nel cranio.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Usando un gancio di carne, indiscrere la sezione rettangolare del cranio. Iniziare posizionando il gancio in uno degli angoli della sezione e applicare la pressione verso l'alto per allentare il pezzo del cranio. Fare attenzione a posizionare il gancio di carne solo a livello del cranio per evitare di penetrare inavvertitamente nel tessuto cerebrale.</li>
	<li>Se alcuni strati meningei rimangono sul cervello, utilizzare forcep e forbici smussate (o in alternativa, un bisturi) per rimuovere delicatamente gli strati senza tagliare nel cervello.</li>
	<li>Usa un bisturi per tagliare muscoli e grasso nella parte posteriore della testa, esponendo la porzione posteriore del cranio.<ol>
<li>Fai due tagli trasversali lungo la parte posteriore del cranio. Assicurati di non tagliare il tessuto cerebrale.</li>
		<li>Fissare la testa posizionando una mano ferma sul muso e applicare una pressione all'indietro per estrarre la porzione posteriore del cranio, esponendo il cervelletto.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Rimuovere la testa dalla morsa della panca e posizionarsi su un tappetino chirurgico.</li>
	<li>Utilizzare uno strumento lungo e sottile, come l'estremità smussata di un bisturi, per rimuovere il cervello. Invertire la testa e usare un delicato movimento di scooping per convincere il cervello fuori dalla cavità cranica senza danneggiare la superficie del cervello. NOTA: Sarà necessario sever nervi cranici per rimuovere il cervello. Fallo delicatamente e non tentare di estrarre con forza il cervello. Il cervello cadrà da solo quando è correttamente e completamente staccato dal cranio e dalla colonna vertebrale.</li>
</ol>2. Dissezione del cervello dei suini
NOTA: Può essere utile utilizzare un atlante cerebrale o una guida alla dissezione delle fibre14 come rappresentazione visiva durante le procedure di dissezione. Assicurarsi che i campioni di tessuto sezionati siano conservati correttamente in base alle esigenze specifiche del progetto al momento della rimozione di ciascun campione (descritto più dettagliatamente di seguito). Inoltre, si prega di notare che ai fini di questo video, tutte le regioni cerebrali mostrate sono state sezionate dall'emisfero destro, ma questo può differire per laboratorio in base agli obiettivi sperimentali.
<ol><li>Per rimuovere il tronco encefalico (prevalentemente il midollo), fare un taglio coronale caudale al cervelletto.</li>
	<li>Per rimuovere il cervelletto, fare un taglio coronale posteriore alla corteccia. Isolare le regioni desiderate (ad esempio, vermi, flocculo, ecc.) del cervelletto da questo campione. Assicurati di non includere parti del tronco encefalico in questo campione.</li>
	<li>Separare i due emisferi del cervello facendo un taglio medio-sagittale lungo la fessura longitudinale. Fai questo taglio come movimento continuo per evitare di causare danni alla corteccia.</li>
	<li>Per rimuovere il midbrain, sezionare una quantità desiderata di tessuto appena ventrale ai collicoli superiori e inferiori.</li>
	<li>Per rimuovere l'ippocampo, posizionare l'estremità smussata di un bisturi nella parte posteriore del corpo calloso e far rotolare delicatamente fuori l'ippocampo, usando un movimento "J" a partire dalla porzione posteriore del corpo calloso; un intero corno ippocampale è "a forma di fagiolo".</li>
	<li>Lo striato (il nucleo caudato è mostrato principalmente) è una regione a strisce di materia grigia e bianca appena sotto il corpo calloso e anteriore all'ippocampo. Smussare il bisturi e rimuovere questa regione, rivelando il tessuto striato al momento della rimozione.</li>
	<li>Per rimuovere la corteccia prefrontale mediale, sezionare il tessuto dal giro frontale al corpo calloso, rimuovendo la porzione più mediale di quella sezione. La corteccia destra dovrebbe rimanere dopo la rimozione della corteccia prefrontale mediale.</li>
	<li>Per rimuovere il talamo, rimuovere la struttura simile a un bulbo al centro della superficie medio-agittale del cervello e rostrale al midbrain. Il talamo ha una forma sferica e avrà un aspetto leggermente più scuro del tessuto circostante.</li>
</ol>3. Post-dissezione
<ol><li>Al termine della dissezione, conservare correttamente i campioni di tessuto per le analisi successive. L'omissione di questo passaggio comporterà un'autolisi significativa e una degradazione entro soli 20 minuti.</li>
	<li>Lasciare intatta ogni regione cerebrale al momento della dissezione se verranno eseguite analisi strutturali o tritare i tessuti per creare un campione di tessuto omogeneo prima della conservazione. I metodi comuni di conservazione dei campioni per i tessuti cerebrali includono la crioconservazione e la fissazione chimica mediante agenti retiche15.</li>
	<li>Per i test di laboratorio standard (ad esempio, espressione genica o proteica), immergersi nell'azoto liquido o nelle soluzioni che stabilizzano il materiale genetico prima della conservazione a lungo termine a -80 °C per fornire metodi di conservazione convenienti ed economici.</li>
	<li>Se mantenere la struttura tissutale è una priorità, preservare i tessuti cerebrali attraverso i metodi di fissazione tradizionali (ad esempio, utilizzando fissanti a base di aldeide per collegare le proteine), senza o con perfusione dell'animale o dell'organo di interesse prima della dissezione tissutale.</li>
</ol>

<ol><li>Hughes, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Swine+in+cardiovascular+research%5BTitle%5D)+AND+%22Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Swine in cardiovascular research.</a> Laboratory Animal Science. 36 (4), 348-350 (1986).</li>
<li>Yen, J. Anatomy of the Digestive System and Nutritional Physiology. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYen%2C+J+%22Biology+of+the+Domestic+Pig%22">Biology of the Domestic Pig</a>. , 31-63 (2001).</li>
<li>Pond, W. G. Of Pigs and People. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPond%2C+WG+%22Swine+Nutrition%22">Swine Nutrition</a>. , 3-24 (2001).</li>
<li>Odle, J., Lin, X., Jacobi, S. K., Kim, S. W., Stahl, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Suckling+Piglet+as+an+Agrimedical+Model+for+the+Study+of+Pediatric+Nutrition+and+Metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Animal+Biosciences%22%5BJournal%5D)">The Suckling Piglet as an Agrimedical Model for the Study of Pediatric Nutrition and Metabolism.</a> Annual Review of Animal Biosciences. 2 (1), 419-444 (2014).</li>
<li>Larsen, M. O., Rolin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+G%C3%B6ttingen+minipig+as+a+model+of+diabetes%2C+with+special+focus+on+type+1+diabetes+research%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Use of the Göttingen minipig as a model of diabetes, with special focus on type 1 diabetes research.</a> ILAR Journal. 45 (3), 303-313 (2004).</li>
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<li>Richer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sacrococcygeal+and+transsacral+epidural+anesthesia+in+the+laboratory+pig%5BTitle%5D)+AND+%22Surgical+Radiologic+Anatomy%22%5BJournal%5D)">Sacrococcygeal and transsacral epidural anesthesia in the laboratory pig.</a> Surgical Radiologic Anatomy. 20, 431-435 (1998).</li>
<li>Lind, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+pigs+in+neuroscience%3A+Modeling+brain+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+and+Biobehavioral+Reviews%22%5BJournal%5D)">The use of pigs in neuroscience: Modeling brain disorders.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 31 (5), 728-751 (2007).</li>
<li>Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. -H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pig+model+in+brain+imaging+and+neurosurgery%5BTitle%5D)+AND+%22Animal%22%5BJournal%5D)">The pig model in brain imaging and neurosurgery.</a> Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).</li>
<li>Dobbing, J., Sands, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+aspects+of+the+brain+growth+spurt%5BTitle%5D)+AND+%22Early+Human+Development%22%5BJournal%5D)">Comparative aspects of the brain growth spurt.</a> Early Human Development. 311, 79-83 (1979).</li>
<li>Aurich, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microsurgical+training+model+with+nonliving+swine+head.+Alternative+for+neurosurgical+education%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Cirurgica+Brasileira%22%5BJournal%5D)">Microsurgical training model with nonliving swine head. Alternative for neurosurgical education.</a> Acta Cirurgica Brasileira. 29 (6), 405-409 (2014).</li>
<li>Bassi, T., Rohrs, E., Fernandez, K., Ornowska, M., Reynolds, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+brain+excision%3A+An+easier+method+to+harvest+the+pig%27s+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Interdisciplinary+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Direct brain excision: An easier method to harvest the pig's brain.</a> Interdisciplinary Neurosurgery. 14, 37-38 (2018).</li>
<li>Bjarkam, C. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exposure+of+the+pig+CNS+for+histological+analysis%3A+A+manual+for+decapitation%2C+skull+opening%2C+and+brain+removal%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Exposure of the pig CNS for histological analysis: A manual for decapitation, skull opening, and brain removal.</a> Journal of Visualized Experiments. 122, e55511(2017).</li>
<li>Pascalau, R., Szabo, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibre+dissection+and+sectional+study+of+the+major+porcine+cerebral+white+matter+tracts%5BTitle%5D)+AND+%22Anatomia%2C+Histologia%2C+Embryologia%22%5BJournal%5D)">Fibre dissection and sectional study of the major porcine cerebral white matter tracts.</a> Anatomia, Histologia, Embryologia. 46, 378-390 (2017).</li>
<li>McFadden, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perfusion+fixation+in+brain+banking%3A+a+systematic+review%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica+Communications%22%5BJournal%5D)">Perfusion fixation in brain banking: a systematic review.</a> Acta Neuropathologica Communications. 7, 146(2019).</li>
<li>Félix, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stereotaxic+atlas+of+the+pig+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research+Bulletin%22%5BJournal%5D)">Stereotaxic atlas of the pig brain.</a> Brain Research Bulletin. 49, 1(1999).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

Le tecniche descritte nel presente documento sono state progettate per i suini di circa 4 settimane di età. È fondamentale eseguire questi passaggi immediatamente dopo che il maiale è stato eutanasiato umanamente per garantire che l'integrità della struttura del tessuto cerebrale sia mantenuta, specialmente quando si considerano i successivi test biochimici. È utile utilizzare un atlante o guide alla dissezionein fibra 16 quando si imparano per la prima volta le tecniche. Si raccomanda allo sperim...

Il maiale è stato ben documentato e accettato come modello animale traducibile per la ricerca nei sistemicardiovascolari 1,sistemigastrointestinali 2,nutrizione 3,4,diabete5,tossicologia 6e tecniche chirurgiche7. L'uso del maiale nelle neuroscienze sta iniziando ad aumentare, poiché PubMed cerca le parole chiave "modello animale cerebrale suino" si traduce in risultati quattro volte superiori dal 1996 al 2005 rispetto al precedente periodo di 10anni 8e ancora più risultati al momento. Una ragione principale per cui la popolarità del modello di maiale si sta espandendo è dovuta alle sue somiglianze nella crescita, nella struttura e nella funzione del cervello rispetto agli esseri umani. Rispetto al cervello umano, il cervello dei maiali mostra modelli ginerali simili, vascolarizzazione e distribuzione della materia grigia e bianca9. Inoltre, il cervello dei suini è stato utilizzato nelle procedure di neuroimaging, ha evocato una potenziale registrazione e nella definizione di tecniche di neurochirurgia8,9. A differenza di altri modelli animali, tuttavia, il maiale e l'esperienza umana sperimentano spinte perinatale di crescita cerebrale, al contrario degli spurt di crescita pre o post-natale. Alla nascita, il cervello umano e suino pesa circa il 27 e il 25% del loro peso cerebrale adulto, rispettivamente, rispetto al cervello del topo che pesa il 12% del suo peso cerebrale adulto e al cervello della scimmia rhesus al 76% del peso adulto10.
Uno dei motivi per cui il maiale è stato adottato solo lentamente come modello animale per le neuroscienze è perché molti ricercatori non hanno familiarità con l'animale in questo contesto. I ricercatori potrebbero non essere consapevoli dei suoi potenziali usi sul campo o potrebbero non conoscere le tecniche appropriate necessarie per utilizzare tale modello. Poiché l'uso del maiale come modello biomedico e preclinico guadagna attenzione e uso nelle neuroscienze, è necessario stabilire procedure standardizzate di rimozione dei tessuti per garantire un confronto accurato dei dati tra gli studi. Sebbene la dissezione e le tecniche chirurgiche che coinvolgono il cervello dei suini siano state pubblicate altrove11,12,13, c'è bisogno di protocolli semplici e standardizzati per raccogliere il tessuto cerebrale dei suini, specialmente per l'uso in saggi biochimici. Come tale, lo scopo di questo video è quello di fornire le conoscenze necessarie per consentire ai ricercatori di eseguire un'estrazione e una dissezione del cervello standardizzate. Questo video illustra una tecnica corretta per rimuovere il cervello dei suini mantenendo intatta la corteccia e il tronco encefalico, e successivamente rivedere i metodi per sezionare diverse regioni cerebrali chiave.

<table><tbody><tr><td>#22 Lame per bisturi #4 Maniglie</td><td>Ted Pella, inc.</td><td>549-4S-22</td><td></td></tr><tr><td>11 1/2" Satterlee Bone Saw</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI13425</td><td></td></tr><tr><td>5 1/2" Skull Breaker con estremità a scalpello (gancio per carne)</td><td>Leica Biosystems</td><td>38DI37636</td><td></td></tr><tr><td>Morsa da banco da officina per impieghi gravosi da 5 pollici</td><td>Pony</td><td>29050</td><td></td></tr><tr><td>Coltello da macellaio 25 cm</td><td>Victorinox</td><td>5.7403.25</td><td>Affilare prima dell'uso</td></tr><tr><td>CM40 Light Duty Drop Forgiato C Morsetti</td><td>Bessey</td><td>00655BC3120</td><td></td></tr><tr><td>Diamante Hone Coltello Shaper</td><td>Chef ' s Choice</td><td>436-3</td><td></td></tr><tr><td>Shandon Manico a lama di bisturi in acciaio inossidabile #4</td><td>ThermoScientific</td><td>5334</td><td></td></tr><tr><td>Pinze per tessuti</td><td>Henry Schein</td><td>101-5132</td><td></td></tr><tr><td>Tampone da dissezione in vinile</td><td>Carolina</td><td>629006</td><td></td></tr></tbody></table>

estrazione e dissezione del cervello di maiale addomesticato

Extraction and Dissection of the Domesticated Pig Brain

L'uso del maiale come modello animale preclinico e traducibile è stato ben documentato e accettato dai campi di ricerca che studiano i sistemi cardiovascolari, i sistemi gastrointestinali e l'alimentazione, e il maiale viene sempre più utilizzato come un grande modello animale nelle neuroscienze. Inoltre, il maiale è un modello accettato per studiare il neurosviluppo in quanto mostra modelli di crescita e sviluppo cerebrali simili a quelli che si verificano negli esseri umani. Come modello animale meno comune nelle neuroscienze, le procedure chirurgiche e di dissezione sui suini potrebbero non essere così familiari o ben praticate tra i ricercatori. Pertanto, un protocollo visivo standardizzato che dettaglia metodi di estrazione e dissezione coerenti può rivelarsi prezioso per i ricercatori che lavorano con il maiale. Il seguente video mostra una tecnica per rimuovere il cervello del maiale mantenendo intatta la corteccia e il tronco encefalico e esamina i metodi per sezionare diverse regioni cerebrali comunemente studiate tra cui tronco encefalico, cervelletto, mesencefalo, ippocampo, striato, talamo e corteccia prefrontale mediale. Lo scopo di questo video è quello di fornire ai ricercatori gli strumenti e le conoscenze necessarie per eseguire costantemente un'estrazione e dissezione cerebrale sul maiale di quattro settimane.

Questa sezione descrive esempi di risultati ottenuti dopo la corretta estrazione e dissezione di un cervello di maiale di 4 settimane. La figura 1 delinea la forma di ciascuna regione cerebrale da utilizzare come guida durante la dissezione. Parte del tronco encefalico può rimanere nel cranio dopo la rimozione del cervelletto (Figura 1B). Questo può essere rimosso isolando la regione desiderata del cervelletto. La tabella 1 mostra il peso medio ...

Questo protocollo descrive in dettaglio la tecnica per la rimozione del cervello dei suini nella sua interezza e la dissezione di diverse regioni cerebrali comunemente studiate nelle neuroscienze.

Estrazione e dissezione del cervello di maiale addomesticato

Use of the pig as a preclinical and translatable animal model has been well-documented and accepted by research fields investigating cardiovascular ...

Il seguente video è una dimostrazione di rimozione e dissezione del cervello dei suini. Può essere utile fare riferimento a un atlante o a una guida alla dissezione delle fibre prima o durante la procedura. Un grande coltello da macellaio è il migliore per la decapitazione in quanto consentirà un taglio pulito tra l'atlante e l'asse.Assicurarsi che il coltello sia affilato prima di iniziare con un nuovo soggetto. Un gancio di carne viene utilizzato per rimuovere il cranio. Un lungo strumento sottile come un manico bisturi viene utilizzato per rimuovere il cervello dal cranio.Una morsa con viti o sporgenze è necessaria per fissare la testa durante il taglio del cranio. Una volta che l'animale è stato eutanasiato umanamente secondo i protocolli stabiliti procedere come segue. Tagliare appena sopra la nuca, tra le spalle e la parte superiore della testa.Fissare il maiale e spostare gli anni fuori strada durante la decapitazione. Usa un bisturi per fare incisioni per separare la pelle dal cranio. Fai un primo taglio al centro del cranio che continua fino alla parte posteriore della testa.Il secondo taglio trasversale dovrebbe essere sul posteriore della testa. Il terzo taglio anche trasversale inizierà dal posteriore di questo muso e in linea con gli occhi per garantire un facile accesso al cranio. Utilizzare una sega ossea per fare tagli anteriori a posteriori laterali alla linea mediana.Inizia contrassegnando leggermente l'area per il taglio con la sega, quindi inizia a segare fino a incontrare meno resistenza dal cranio. Smussa leggermente la sega verso la linea mediana durante il taglio in quanto ciò ti assicurerà di tagliare la parte più sottile del cranio. Se il taglio è troppo vicino all'orecchio sarà difficile rimuovere il cranio.Ma se il taglio è troppo vicino alla linea mediana, l'apertura sarà troppo piccola per rimuovere il cervello. Ripetete questo processo sui lati perpendicolari per creare una finestra rettangolare. Assicurati che ogni angolo della finestra sia completamente tagliato, in modo che parte del cranio possa essere rimossa per rivelare il cervello sottostante.Successivamente, utilizzare un gancio di carne o uno strumento curvo per indiscrere la sezione rettangolare del cranio fuori posizione. Inizia posizionando il gancio in uno degli angoli e applicando pressione per far scoppiare la calotta cranica. In alcuni casi, le meningi rimarranno sul cervello.E se ciò si verifica con attenzione utilizzare forcep e forbici smussate, o in alternativa un bisturi per rimuovere le meningi senza tagliare il cervello. Per riferimento il cervello dovrebbe guardare come segue prima e dopo che gli strati meningei sono stati rimossi. Tagliare il muscolo e il grasso sul posteriore della testa per prepararsi all'esposizione del cervelletto.Per esporre il cervelletto fare due tagli trasversali lungo la parte posteriore del cranio. Quando si fanno questi tagli fare attenzione a non tagliare nel cervello esposto. Una volta che i tagli sono stati fatti posizionare una mano sul muso, e una sul cranio, e applicare la pressione all'indietro per tirare la parte posteriore del cranio lontano dal resto della testa.Come evidenziato qui, il cervelletto è nascosto dietro i restanti strati meningei. Usa la fine di uno strumento smussato come un manico di bisturi per separare attentamente il cervello dal cranio, facendo attenzione a evitare di danneggiare il cervello nel processo. Invertire leggermente la testa per aiutare a convincere il cervello a uscire dal cranio e usare un delicato movimento di scoop per ertare i nervi cranici e rimuovere il cervello.Questo processo richiede pazienza e pratica per eliminare tutte le connessioni rimanenti tra il cervello e la cavità cranica. Invertire la testa del maiale può essere utile durante questo processo. Continuare a usare movimenti radicali con lo strumento smussato per liberare il cervello.Come evidenziato qui, il cervelletto e il tronco encefalico possono essere difficili da rimuovere in quanto sono infilati nella cavità cranica. Fare attenzione quando si rimuove il cervelletto e il midollo o il tronco encefalico. Il cervello dovrebbe cadere da solo quando è completamente staccato dal cranio.La cavità cranica dovrebbe apparire come mostrato dopo la rimozione del cervello. In preparazione per la dissezione della regione cerebrale assicurarsi che i contenitori pre-etichettati siano organizzati e nelle immediate vicinanze. I metodi di conservazione di esempio includono campioni di congelamento a scatto in azoto liquido o immersioni in una soluzione conservante.Una volta estratto dalla cavità cranica, l'intero cervello dovrebbe apparire come segue. Per rimuovere il midollo o il tronco encefalico, fare un taglio coronale caudale al cervelletto. Per rimuovere il cervelletto, fare un taglio coronale posteriore alla corteccia.Per separare gli emisferi effettuare un taglio medio-agittale lungo la fessura longitudinale utilizzando un movimento continuo per prevenire danni. Ai fini di questo video mostreremo solo le dissezioni dall'emisfero destro. Per rimuovere il midbrain cercare i collicoli superiori e inferiori che sono due dossi sulla porzione posteriore del cervello.Rimuovere la quantità desiderata di tessuto cerebrale appena ventrale in queste regioni. Per rimuovere l'ippocampo posizionare la maniglia del bisturi sul posteriore del corpo calloso e stendere delicatamente l'ippocampo. L'intero corno di ippocampo sarà a forma di fagiolo.L'ippocampo dovrebbe facilmente srotolare quando si raccoglie il dito in un movimento j, a partire dal corpo calloso posteriore. Per rimuovere lo striato o il nucleo caudato cancellare la porzione anteriore del corpo calloso. Il nucleo caudato è la regione striata o a strisce che è colorata di grigio e bianco e si trova appena sotto il corpo calloso.Con la maniglia del bisturi angolata rimuovere questa regione che include prevalentemente il nucleo caudato. Dopo aver rimosso questo tessuto dovresti essere in grado di vedere un modello striato in cui si trovava la regione cerebrale. Per rimuovere la corteccia prefrontale mediale sezionata dal giro frontale al corpo calloso prendendo la porzione più mediale di quella sezione.La corteccia destra dovrebbe rimanere dopo la rimozione della corteccia prefrontale mediale. Per rimuovere il talamo, rimuovere la struttura simile a una lampadina al centro della superficie medio-agittale. Il talamo ha un'evidente forma sferica e sarà leggermente più scuro del tessuto circostante.Al termine della dissezione i campioni di tessuto devono essere conservati correttamente sulla base di risultati sperimentali specifici. Qui sono mostrate le regioni cerebrali sezionate, comprese le dimensioni e la forma relative previste quando si lavora con i giovani maiali. Dopo aver padroneggiato queste tecniche, l'intera estrazione cerebrale e la procedura di dissezione richiederanno meno di 15 minuti per soggetto e produrranno risultati coerenti.

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Neuroscienze

Descriviamo un modello murino del disturbo post traumatico da stress (PTSD) che rivela le alterazioni persistenti della funzione neuroendocrina e del ritardato a lungo termine, di risposta paura esagerata, caratteristici dei pazienti con PTSD. Il modello animale e metodi descritti qui sono utili per correlare biomarcatori nei nuclei del cervello, che sono meccanicistica ma non possono essere misurati nei pazienti, con biomarcatori nelle periferie globuli bianchi, che può.

Biomarcatori in un modello animale per Rivelare correlati neurali, ematologiche, e comportamentali di PTSD

Questo video mostra un metodo per preparare colture organotipiche di fette di ippocampo dal cervello di un cucciolo di ratto. Delinea le fasi coinvolte nella dissezione dell'ippocampo, nel taglio e nelle condizioni di coltura necessarie per promuovere la vitalità cellulare e la crescita nelle fette dell'ippocampo, generando infine colture di fette organotipiche.

Preparazione di colture organotipiche di fette dall'ippocampo di un cucciolo di ratto

Questo video dimostra il processo di formazione delle neurosfere e la loro espansione dal tessuto ippocampale. Le cellule staminali neurali e le cellule progenitrici del tessuto del giro dentato postnatale del topo proliferano e formano neurosfere primarie, che vengono poi riseminate per formare neurosfere secondarie.

Formazione ed espansione di neurosfere da un tessuto ippocampale

La ricerca sulla neurotossicità dello sviluppo sviluppata da anestesia (AIDN) si è concentrata sui roditori, che non sono generalmente applicabili agli esseri umani. I modelli primati non umani sono più rilevanti, ma sono proibitivi e difficili da utilizzare per la sperimentazione. Il maiale, al contrario, è un modello animale clinicamente rilevante e pratico ideale per lo studio della neurotossicità anestetica.

Uso di un modello di maiale per lo studio della neurotossicità dello sviluppo sviluppato da anestetici (AIDN): un approccio di neuroscienza transazionale

L'obiettivo di questo documento e video didattico è quello di descrivere come esporre e rimuovere il post-mortem del cervello di maiale e ghiandola pituitaria in uno stato integro, adatto per la successiva analisi macroscopica e istologica.

L&#39;esposizione del Maiale CNS per l&#39;analisi istologica: Un manuale per la decapitazione, Teschio di apertura, e Cervello di rimozione

Questo articolo descrive una metodologia dettagliata per ottenere sezioni appiattite tangenziale da cortecce dei mammiferi e visualizzare moduli corticali usando istochimiche e immunohistochemical metodi.

Visualizzazione dei moduli corticali nelle cortecce dei mammiferi appiattite

Presentiamo un protocollo pratico, passo-passo, rapido per la rimozione del cervello del topo e la dissezione di regioni discrete dal tessuto cerebrale fresco. Ottenere regioni cerebrali per l'analisi molecolare è diventato routine in molti laboratori di neuroscienze. Queste regioni cerebrali vengono immediatamente congelate per ottenere dati trascrittomici di alta qualità per l'analisi a livello di sistema.

Microdissezione del cervello di topo in regioni funzionalmente e anatomicamente diverse

Questo articolo presenta un protocollo passo-passo per l'impianto diretto della cannula nella cisterna magna dei maiali.<br...

Impianto diretto di cannule nella Cisterna Magna dei Suini

Qui, presentiamo un metodo per la valutazione delle prestazioni e della sicurezza a lungo termine di array di elettrodi subdurali morbidi in un modello di minipig, descrivendo il metodo e gli strumenti chirurgici, la risonanza magnetica postoperatoria, l'elettrofisiologia della corteccia uditiva, le proprietà elettrochimiche dell'impianto e l'immunochimica post-mortem.

Impianto di array di elettrocorticografia morbida subdurale (ECoG) e registrazione corticale a lungo termine nei minipig

Questo protocollo descrive l'esecuzione di una craniectomia utilizzando un trapano pneumatico ad alta velocità su un maiale Landrace danese di 3 mesi. L'accesso avviene attraverso l'osso frontale e rivela la dura madre ventrale e gli emisferi cerebrali sottostanti. Questa procedura consente l'accesso a gran parte del cervello del maiale.

Accesso al cervello suino tramite craniectomia pneumatica ad alta velocità

Un metodo innovativo per costruire matrici cerebrali espandibili in grado di tagliare le fette coronali o sagittali è descritto per l'applicazione ai maialini neonatali. Questo approccio economico utilizza lastre acriliche scolpite utilizzando modelli provenienti da modellatura cerebrale in gel di agarosio, si applica a più specie e consente l'espansione per consentire la crescita cerebrale.

Fabbricazione di una matrice cerebrale espandibile personalizzabile in tutte le fasi dello sviluppo

Impara l'estrazione e la dissezione del cervello di maiale per studi di neuroanatomia comparata. Questo protocollo dettagliato permette di isolare regioni cerebrali specifiche preservando l'integrità tissutale per analisi successive.

Estrazione e dissezione del cervello di maiale addomesticato

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