Single-Molecule Dwell-Time Analysis of Restriction Endonuclease-Mediated DNA Cleavage

Candice  M. Etson; Petar Todorov; Nooshin Shatery Nejad; Nirmala Shrestha; David R. Walt

doi:10.3791/62112

Rivista

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Biochimica

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Analisi del tempo di permanenza di una singola molecola della scissione del DNA mediata da endonucleasi di restrizione

Single-Molecule Dwell-Time Analysis of Restriction Endonuclease-Mediated DNA Cleavage

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Single-Molecule Dwell-Time Analysis of Restriction Endonuclease-Mediated DNA Cleavage

Analisi del tempo di permanenza di una singola molecola della scissione del DNA mediata da endonucleasi di restrizione

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09:53 min

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February 07, 2021

DOI:

10.3791/62112-v

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10.3791/62112-v

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09:53 min

February 07, 2021

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Candice M. Etson^1,2, Petar Todorov¹, Nooshin Shatery Nejad², Nirmala Shrestha², David R. Walt^1,3

¹Department of Chemistry,Tufts University ²Department of Physics,Wesleyan University ³Wyss Institute at Harvard University

Summary

Utilizzando il DNA marcato con punti quantici e la microscopia a fluorescenza a riflessione interna totale, possiamo studiare il meccanismo di reazione delle endonucleasi di restrizione utilizzando proteine non marcate. Questa tecnica a singola molecola consente l'osservazione massicciamente multiplexata delle singole interazioni proteina-DNA e i dati possono essere raggruppati per generare distribuzioni del tempo di permanenza ben popolate.